CN114460245A - 一种开心散的质量标志物群 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种开心散的质量标志物群，其成分包括：西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志
Figure DDA0003410173060000011
酮Ⅲ、3,6'‑二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、β‑细辛醚、α‑细辛醚。本发明还公开了一种组合物在等效替代开心散制备治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，该组合物的成分与上述开心散的质量标志物群的成分相同，且各成分的含量比例与其在开心散中的含量相同。本发明从“传递与溯源、特有性、有效性、可测性及复方配伍环境”五方面对开心散进行分析；最后确定了开心散的质量标志物群。

Description

一种开心散的质量标志物群
技术领域
本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种开心散的质量标志物群。
背景技术
中药及其制剂是一个多组分的复杂***，药效物质基础不明确已成为中医药发展进程的瓶颈和亟待解决的难题。近年来，随着分析技术的迅速发展和各学科的交叉融合，中药药效物质基础研究水平有了全方位的进步：从单个指标成分的测定到基于指纹图谱的多指标成分测定，从基于对照品的含量测定到一测多评等方法，从孤立地构建化学药物指标成分的定性、定量质控模式到刘昌孝院士提出既反映中药治疗疾病的本质特征又具有专属性、针对性的中药质量标志物(Q-markers)【刘昌孝，陈士林，肖小河，等.中药质量标志物(Q-Marker)：中药产品质量控制的新概念.中草药，2016，47(9)：1443-1457.】。
中药质量标志物是一个具有整合性和开放性的概念，与有效性、安全性相关联，在中药材和中药产品(如中药饮片、中药煎剂、中药提取物、中成药制剂)中固有的或加工制备过程中形成的、与中药的功能属性密切相关的化学物质，是反映中药安全性和有效性的标志性物质【郑荣蕾，戴静，何勇志，刘涛，徐玉玲.质量标志物(Q-Marker)预测分析途径研究进展.中草药，2021,52(09)：2566-2574】。通过对中药质量标志物的研究，可以有效寻找出能够反映中药复方安全性、有效性和专属性的标示性物质，建立能够体现中药复方质量特点的质量标准。
经典名方“开心散”最早记载于唐代医药学家孙思邈所著的《备急千金要方》。“开心散”由人参、远志、菖蒲、茯苓四味中药组成，该方药简而力宏，按中医基础理论对其组方进行分析，方中人参大补元气、安神益智；茯苓健脾宁心、利水渗湿；石菖蒲化痰开窍、醒神明；远志宁心安神，祛痰开窍，既可合石菖蒲加强化痰开窍之效，又可合茯苓加强交通心肾之功【简文轩,张钊.开心散补益作用的研究进展[J].神经药理学报,2018,8(06):38.】。现代研究表明“开心散”具有多种药理活性，具有抗痴呆、改善学习记忆、抗氧化、抗抑郁、抗衰老、抗疲劳、促进神经细胞分化和再生等作用，对老年痴呆、抑郁、焦虑等疾病有显著疗效【王海霞,姜宁,吕静薇,刘思思,刘新民.开心散抗抑郁、改善学习记忆作用及机制研究进展[J].中草药,2020,51(14):3802-3813.】。目前有关“开心散”的药理作用研究较多，而对其发挥药理作用的物质不明确，其质量标志物预测研究尚属空白。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种开心散的质量标志物群，本发明从“传递与溯源、特有性、有效性、可测性及复方配伍环境”五要素方面对“开心散”的质量标志物群进行分析；最后确定了开心散的质量标志物群，实现基于药效成分的质量控制。
由于经典名方“开心散”中的成分众多，因此需要对多种成分进行分析，才能确定经典名方“开心散”治疗阿尔茨海默病的质量标志物群。具体分析包括如下步骤：
S1、通过数据库搜集开心散中各中药含有的所有已知化学成分；
S2、通过数据库搜集S1得到的所有已知化学成分的作用靶点；
S3、通过数据库搜集开心散药效对应阿尔茨海默病的靶点；
S4、将S2得到的作用靶点和S3得到的靶点进行比较，保留共有靶点；
S5、通过数据库搜集开心散中进入血液的所有已知化学成分；
S6、将S1得到的所有已知化学成分和S5得到的所有已知化学成分进行比较，保留共有成分；
S7、保留S6共有成分中作用于S4共有靶点的化学成分群；
S8、鉴定S7得到的化学成分群是否确实存在于开心散中，并将确实存在于开心散中的化学成分群作为开心散的质量标志物群。
上述数据库可以为CAS、Informix、Microsoft SQL Server等。
最终本发明提出了一种开心散的质量标志物群，其成分包括：西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志
Figure BDA0003410173040000031
酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、β-细辛醚、α-细辛醚。
优选地，所述质量标志物群为开心散治疗阿尔茨海默病的质量标志物群。
优选地，各成分的含量比例与其在开心散中的含量相同。
本发明还提出了一种组合物在等效替代开心散制备治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，该组合物的成分与上述开心散的质量标志物群的成分相同，且各成分的含量比例与其在开心散中的含量相同。
从“特有性”分析开心散：
人参为五加科(Araliaceae)植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根及根茎。相关文献表明，人参中主要含有皂苷类、多糖类、挥发油类成分，还包括蛋白质、多肽、维生素、有机酸、微量元素等化学成分。皂苷类被广泛认为是人参最主要的生物活性成分，多糖类是人参的主要有效成分【翟兵中,曲雪峰,胡文力,等.人参不定根生产、生物活性成分及应用现状[J].食品安全质量检测学报,2021,12(15):6097-6104.】，其中皂苷类成分含量较高，较具特征性。
茯苓为多孔科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf菌核的干燥菌核，被《神农本草经》列为上品，主要含有多糖类、三萜类、甾体类、挥发油类、蛋白质和氨基酸类、微量元素等化学成分【杜晓妍,吴娇.茯苓的化学成分和药理作用研究进展[J].新乡医学院学报,2021,38(05):496-500.】。多糖类和三萜类是主要有效成分，具有多种药理作用，较具特征性。
远志为远志科植物远志(Polygalatenuifolia Willd.)或卵叶远志(Polygalasibirica L.)的干燥根，主要化学成分为三萜皂苷类、糖和糖酯苷类、黄酮类、生物碱类等，还含有生物碱类、香豆素、木质素等。其中三萜皂苷类、口山酮类以及寡糖酯类是最主要的化学成分【王小雨,刘传鑫,周佳丽,等.中药远志的化学成分和药理作用研究进展及其潜在质量标志物预测分析[J].国际药学研究杂志,2020,47(07):483-495+513.】，较具特征性。
石菖蒲为天南星科植物石菖蒲(Acortw tatarin owii Schott)的干燥根茎，含有挥发油类、有机酸类、黄酮类、萜类等多种化学成分，挥发油是其主要药效成分【朱平,刘效栓,王红丽,等.三种菖蒲的比较研究进展[J].中国民族民间医药,2021,30(02):59-62.】，其中α-细辛醚和β-细辛醚含量较高，较具特征性。
从“有效性”分析开心散：
把控好中药的有效性是确定质量标志物的关键性因素。两对药物，人参和远志，茯苓和石菖蒲在刺激神经元的分化中具有协同作用。方中人参大补元气、安神益智；茯苓健脾宁心、利水渗湿；石菖蒲化痰开窍、醒神明；远志宁心安神，祛痰开窍，既可合石菖蒲加强化痰开窍之效，又可合茯苓加强交通心肾之功【简文轩,张钊.开心散补益作用的研究进展[J].神经药理学报,2018,8(06):38.】。相关研究表明,开心散可以通过调节单胺类神经递质含量的不平衡状态，减少脑组织神经元坏死并促进PC12细胞中Aβ的降解,进而改善AD模型小鼠的行为和精神症状，开心散具有良好的抗AD功效。
从“可测性”分析开心散
《中国药典》2020年版规定人参中人参皂苷Rg1、Re的总量不得少于0.27％，人参皂苷Rb1的总量不得少于0.18％；远志中的细叶远志皂苷的总量不得少于2.0％，口山酮Ⅲ的总量不得少于0.15％，6′-二芥子酰基蔗糖的总量不得少于0.50％；石菖蒲中挥发油的成分不得少于1.0％(mL/g)【国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社，2020.】。开心散血清HPLC特征图谱研究从大鼠开心散含药血清中显示出24个入血成分，其中14个为原型成分，10个为代谢产物，15个峰来源于远志，7个峰来源于石菖蒲，2个峰来源于远志和石菖蒲，其中原型成分有来源于远志的西伯利亚远志糖A5，西伯利亚远志糖A6，远志酮Ⅲ和3，6’-二芥子酰基蔗糖及来源于石菖蒲的β-细辛醚。
从“复方配伍环境”分析开心散
该方药简而力宏，按中医基础理论对其组方进行分析，君药为远志，宁心安神、交通心肾、祛痰开窍；臣药为人参，大补元气，生津养血，安神益智；辅以茯苓，利水渗湿、健脾宁心；佐以石菖蒲，开窍化痰、醒神益智【王伟.中药复方开心散和香丹注射液的制剂基础研究[D].北京:中国协和医科大学,2010.】；远志既可合石菖蒲加强化痰开窍之效，又可合茯苓加强交通心肾之功【简文轩,张钊.开心散补益作用的研究进展[J].神经药理学报,2018,8(06):38.】。
本发明的优点：
本发明从“传递与溯源、特有性、有效性、可测性及复方配伍环境”五要素方面对“开心散”的质量标志物群进行分析；最后确定了开心散的质量标志物群，其成分包括：西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志
Figure BDA0003410173040000051
酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、β-细辛醚、α-细辛醚。上述成分可以用作开心散治疗阿尔茨海默病的质量标志物用于质量控制，实现基于药效成分的质量控制。且该质量标志物群可以用于制备替代开心散的药物组合物用于治疗阿尔茨海默病。
附图说明
图1为开心散的超高液相色谱图，其中，1为西伯利亚远志糖A5、2为西伯利亚远志糖A6、3为远志
Figure BDA0003410173040000061
酮Ⅲ、4为3,6'-二芥子酰基蔗糖、5为细叶远志苷A、6为人参皂苷Rg1、7为人参皂苷Re、8为β-细辛醚、9为α-细辛醚。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
一种开心散治疗阿尔茨海默病的质量标志物群，其成分包括：西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志
Figure BDA0003410173040000062
酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、β-细辛醚、α-细辛醚。
上述开心散的质量标志物群通过如下步骤分析获得：
S1、从“传递与溯源、可测性、特有性”的角度出发，从CAS、Informix、MicrosoftSQL Server数据库中搜集开心散中四味中药材含有的所有已知化学成分，共鉴定了77个化学成分，其中，包括26个皂苷、13个三萜酸、20个寡糖酯、5个
Figure BDA0003410173040000063
酮和13个其他类成分；25个来自远志，主要为寡糖酯和
Figure BDA0003410173040000064
酮类化合物；28个来自人参，主要为皂苷类化合物；17个来自茯苓，主要为三萜酸类化合物；5个来自菖蒲，主要为其他类化合物；根据文献记载GC-MS分析石菖蒲的化学成分，共得到56个挥发性成分，主要特征成分有β-细辛醚、γ-细辛醚、醚甲基丁香酚、顺式-甲基异丁香酚，水中特有成分41个，油中特有成分4个，油水共有成分11个；
S2、从“传递与溯源、可测性、有效性、复方配伍环境”的角度出发，基于网络药理学构建了“成分-靶点-通路”网络模型，从CAS、Informix、Microsoft SQL Server数据库中搜集S1得到的所有已知化学成分的作用靶点；从开心散中得到47种活性化学成分，经过筛选后共得到443个药物潜在靶点；
S3、从“传递与溯源、可测性、有效性、复方配伍环境”的角度出发，基于“活性成分-靶标-通路”的网络药理学研究模式，从CAS、Informix、Microsoft SQL Server数据库中搜集开心散药效对应阿尔茨海默病的靶点；
S4、将S2得到的作用靶点和S3得到的靶点进行比较，保留共有靶点；发现开心散中潜在25个药物活性成分，其中人参的主要成分人参皂苷能改善慢性应激所致的大鼠抑郁行为，该方可能主要通过人参发挥疗效且其中的皂苷类可能是主要发挥疗效的成分；
S5、从“传递与溯源、可测性、特有性”的角度出发，从CAS、Informix、MicrosoftSQL Server数据库中搜集开心散中进入血液的所有已知化学成分发现：刘洋等利用血清HPLC特征指纹图谱分析鉴定开心散体内入血成分，在含药血清中出现了24个入血成分，14个成分为体外成分直接入血,包括远志中的西伯利亚远志糖类、
Figure BDA0003410173040000071
酮类、寡糖酯类和3,6’-二芥子酰基蔗糖以及石菖蒲中的β-细辛醚，另外10个为新生代谢产物。血清药物化学研究表明，远志的原型入血成分主要为寡糖酯类和远志皂苷类。刘学伟等在研究开心散的血中移行成分时发现，在血中发现6个远志皂苷类原型成分及3个远志皂苷代谢产物。巴寅颖等大鼠开心散含药血清研究发现其中显示出24个入血成分，其中14个为原型成分，10个为代谢产物，15个峰来源于远志，7个峰来源于石菖蒲，2个峰来源于远志和石菖蒲，其中原型成分有来源于远志的西伯利亚远志糖A5，西伯利亚远志糖A6，远志酮Ⅲ和3,6’-二芥子酰基蔗糖及来源于石菖蒲的β-细辛醚；
S6、将S1得到的所有已知化学成分和S5得到的所有已知化学成分进行比较，保留共有成分；
S7、保留S6共有成分中作用于S4共有靶点的化学成分群；最终确定了9种成分，其成分包括：西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志
Figure BDA0003410173040000081
酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、β-细辛醚、α-细辛醚；
S8、鉴定S7得到的9种成分是否确实存在于开心散中，并将确实存在于开心散中的化学成分群作为开心散治疗阿尔茨海默病的质量标志物群；
其中，S8的鉴定过程如下：
开心散样品制备：将远志、石菖蒲、人参、茯苓(远志13.8g、人参13.8g、石菖蒲13.8g、茯苓37.6g)分别粉碎成细粉；取各细粉按照倍增套色法逐步混匀得到开心散；其中，开心散细粉能全部通过80目筛，通过100目筛的细粉重量均≥95％。
开心散样品前处理：取200mg开心散粉末，加入2～4ml纯水置于80℃～100℃热水中静置10分钟，取上清液1～2ml加入甲醇至甲醇体积分数为75％作为待测溶液。
用超高液相***对待测溶液进行检测，并采用上述9种成分的对照品进行定位和对照，具体色谱条件为：赛默飞Ultimate 3000rs；色谱柱为ACQUITY UPLC BEHC18柱(2.1×100mm,1.7μm)；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05％的磷酸水溶液；进行梯度洗脱，
梯度洗脱的具体程序为：0～9min，流动相A的体积分数为7％～14％；9～13min，流动相A的体积分数为14％～16％；13～19min，流动相A的体积分数为16％～19％；19～23min，流动相A的体积分数为19％～23％；23～32min，流动相A的体积分数为23％～36％；32～37min，流动相A的体积分数为36％～38％；37～41min，流动相A的体积分数为38％～42％；
梯度洗脱程序结束后，以流动相A的体积分数为7％，继续运行10min，再进行下一次的检测；
体积流量0.3mL/min；柱温为30℃；进样体积为2μL；检测波长为203nm。
结果如图1和表1所示。图1为开心散的超高液相色谱图，其中，1为西伯利亚远志糖A5、2为西伯利亚远志糖A6、3为远志
Figure BDA0003410173040000092
酮Ⅲ、4为3,6'-二芥子酰基蔗糖、5为细叶远志苷A、6为人参皂苷Rg1、7为人参皂苷Re、8为β-细辛醚、9为α-细辛醚。
表1图1中质量标志物群中各成分的保留时间
Figure BDA0003410173040000091
由图1和表1可以看出，开心散中含有上述9种物质，因此开心散治疗阿尔茨海默病的质量标志物群的成分包括西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志
Figure BDA0003410173040000101
酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、β-细辛醚和α-细辛醚。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种开心散的质量标志物群，其特征在于，其成分包括：西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志
Figure FDA0003410173030000011
酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、β-细辛醚、α-细辛醚。
2.根据权利要求1所述开心散的质量标志物群，其特征在于，所述质量标志物群为开心散治疗阿尔茨海默病的质量标志物群。
3.根据权利要求1或2所述开心散的质量标志物群，其特征在于，各成分的含量比例与其在开心散中的含量相同。
4.一种组合物在等效替代开心散制备治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，其特征在于，该组合物的成分与权利要求1所述开心散的质量标志物群的成分相同，且各成分的含量比例与其在开心散中的含量相同。
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CN115267005B (zh) * 2022-08-09 2023-12-26 上海和黄药业有限公司 一种开心散中多指标成分含量的检测方法

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