CN114452273B

CN114452273B - 碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗cvb3病毒药物中的应用

Info

Publication number: CN114452273B
Application number: CN202210049240.5A
Authority: CN
Inventors: 魏艳红; 王龙胜; 胡达; 胡康洪; 李涵泺; 郭超; 董宇嘉
Original assignee: Hubei University of Technology
Current assignee: Hubei University of Technology
Priority date: 2022-01-17
Filing date: 2022-01-17
Publication date: 2023-09-08
Anticipated expiration: 2042-01-17
Also published as: CN114452273A

Abstract

本发明提供了碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用，所述碘代酰肼包括对碘代酰肼和2,3,5‑碘代酰肼中的至少一种；所述碘代酰肼多酸衍生物包括POM‑0、POM‑1和POM‑2；本申请发现碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物具有抗CVB3病毒的活性。具体表现为可以抑制CVB3病毒引起的细胞病变效应，增强感染细胞的存活率，抑制CVB3病毒在细胞内的复制增殖，降低子代病毒产量。由此表明这种化合物有潜力制备抗CVB3感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

Description

碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用。

背景技术

柯萨奇病毒(Coxsaekievirus)是小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)成员，其感染可引起多种疾病，如手足口病、无菌性脑膜炎、脑炎、心肌炎、流行性肌炎痛、疱疹性咽峡炎等。已报道的CV共有29个血清型，根据其对乳鼠的致病特点及对细胞敏感性的不同，可将其分为A和B两组，即CVA(CVA1-22,24)和CVB(CVB1-6)。以CVBs的感染最为常见，其中CVB3是CVB六个血清型中致病性最强的一型，是病毒性心肌炎最主要的致病原因。目前对于柯萨奇病毒感染无特效药物，临床尚无有针对性的治疗手段。很多研究者找到了众多在体内外具有抑制CVB3活性的化合物，但是这些基本还处于实验室试验的初级阶段，距离在临床上的实际应用还比较遥远。因此开发特异有效的抗CVB3药物势在必行。

因此，有必要开发一种新的抗CVB3病毒感染性疾病的药物。

发明内容

本发明目的是提供碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用，本申请发现碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物具有抗CVB3病毒的活性。具体表现为可以强烈抑制CVB3病毒引起的细胞病变效应，增强感染细胞的存活率。降低子代病毒产量，从而起到抗CVB3病毒的活性。由此表明这些化合物有潜力制备抗CVB3感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用，所述碘代酰肼包括对碘代酰肼和2,3,5-碘代酰肼中的至少一种；所述碘代酰肼多酸衍生物包括POM-0、POM-1和POM-2，结构式分别如下：

进一步地，所述2,3,5-碘代酰肼在25μg/mL对CVB3的抑制率为98％；所述对碘代酰肼在25μg/mL对CVB3的抑制率为95％；

所述POM-0在25μg/mL对CVB3的抑制率为75％；所述POM-1在25μg/mL对CVB3的抑制率为95％；所述POM-2在25μg/mL对CVB3的抑制率为98％。

进一步地，所述抗CVB3病毒药物还包括药学上可接受的辅料和载体。

更进一步地，所述辅料包括填充剂、崩解剂、粘合剂、赋形剂、稀释剂、润滑剂、甜味剂或着色剂中的至少一种。

进一步地，所述抗CVB3病毒药物的剂型包括颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂中的至少一种。

进一步地，所述抗CVB3病毒药物的抗病毒的方式包括：抑制CVB3病毒在细胞内核酸复制、病毒蛋白的表达和感染。

本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

本发明提供的碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用，本申请人通过大量的生物学实验，发现碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物具有抗CVB3病毒的活性。具体表现为可以抑制CVB3病毒引起的细胞病变效应，增强感染细胞的存活率，抑制CVB3病毒在细胞内的复制增殖，降低子代病毒产量。由此表明这种化合物有潜力制备抗CVB3感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1是L1(对碘代酰肼)、L2(2,3,5-碘代酰肼)、POM-0、POM-1和POM-2对于CVB3作用的Hep-2细胞存活率的影响；

图2是L2(2,3,5-碘代酰肼)和POM-2对于CVB3引起的Hep-2细胞CPE的抑制效应；

图3是L2(2,3,5-碘代酰肼)和POM-2对于CVB3子代病毒产量的抑制作用。

具体实施方式

下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。

在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。

除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。

本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：

本发明的系列碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物L1、L2、POM-0、POM-1、POM-2有以下的化学结构式：

本发明L1、L2、POM-0、POM-1、POM-2作为抗CVB3病毒的应用，包括该类化合物强烈抑制CVB3在宿主细胞Hep-2产生的细胞病变效应(CPE)，增强细胞存活率，降低子代病毒产量。表明这些化合物有潜力发展成为有效治疗CVB3感染的药物。

本发明提供碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用，所述应用是指碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物添加药剂学可接受的辅料和载体，用于制备抗CVB3病毒的制剂，辅料包括填充剂、崩解剂、粘合剂、赋形剂、稀释剂、润滑剂、甜味剂或着色剂中的至少一种，根据药物剂型的需要选择不同的辅料。所述制剂是颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂。

下面将结合实施例及实验数据对本申请的碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用进行详细说明。在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

实施例1、碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物抑制CVB3抗病毒活性检测

1、试验内容：

化合物抗CVB3活性分析：本发明将结合细胞病变效应分析和MTT测定细胞存活率检测方法，对具有新型结构的系列碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物的抗CVB3活性进行评估。

2、试验方法：

2.1化合物对于宿主Hep-2细胞的毒性

将Hep-2细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO₂培养箱培养长满单层后，弃去细胞培养液，分别加含不同浓度测试化合物的细胞维持液继续培养，48h后显微镜目测并分别记录其细胞毒性，MTT法测定细胞存活率。SPSS 11.5软件计算药物对于细胞的半数中毒浓度(Median cyctoxic concentration，CC50)。细胞存活率＝(药物组平均OD₄₉₂值/细胞对照组平均OD₄₉₂值)×100％。

2.2化合物对于CVB3的抑制活性

将Hep-2细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO₂培养箱培养长满单层后，弃去培养液，100TCID50的CVB3病毒液感染细胞1h，加入不同浓度的测试化合物(利巴韦林作为阳性对照药物)孵育细胞。待继续培养约48h，病毒对照孔出现90％左右的CPE病变时，显微镜下观察细胞病变效应(CPE)。CPE的观察记录方法：无细胞病变记做-，25％以下细胞病变记做+，25％-50％细胞病变记做++，50％-75％细胞病变记做+++，75％以上细胞病变记为++++。

CPE观察完毕后，利用MTT方法检测药物对CVB3的抑制率。具体步骤为：每孔加入MTT 50μL(5mg·mL^-1)，孵育3-4h后去掉上清液，加入等体积的DMSO溶解沉淀。用酶标仪在492nm处读取所对应的吸光度(OD₄₉₂值)。利用如下公式计算药物对CVB3的抑制率。用SPSS11.5软件计算药物的半数有效浓度(Concentration for 50％of maximal effect，EC50)。

2.3药物的治疗指数(SI)

SI＝CC50/EC50。治疗指数越高，说明抗病毒潜力越大。

3、试验结果

(1)化合物细胞毒性及抗CVB3活性测试结果如表1所示。

表1系列碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物细胞毒性及抗CVB3活性

(2)浓度依赖的化合物对于CVB3作用的Hep-2细胞存活率的影响如图1所示。本发明检测到L1、L2、POM-0、POM-1、POM-2对于CVB3有强的抑制活性。其中L2、POM-2有最好的抑制效果。在浓度为25μg/mL，L2和POM-2对于CVB3引起的Hep-2细胞CPE的抑制率均可以达到98％。L1、POM-0和POM-1抑制效果略差，最大抑制率分别为95％、75％和95％。和阳性对照药物利巴韦林相比，这些化合物有着较高的EC50。L2、POM-2抑制CVB3引起的Hep-2细胞CPE效应如图2所示。CVB3感染的Hep-2细胞变圆，从细胞板壁脱离。25μg/mL,L2和POM-2处理对于其病变效应有强的抑制作用，减低CVB3病毒对于宿主细胞的损害。

实施例2、化合物对于CVB3子代病毒产量的抑制作用试验

1、试验内容

检测在CVB3感染Hep-2细胞后，化合物L2和POM-2对于CVB3子代病毒产量的抑制作用。

2、试验方法

对数生长期的Hep-2细胞铺板24孔板，长满单层后100TCID50 CVB3感染细胞，37℃孵育1.5h后移去病毒液，PBS洗涤三次，加入含25μg/mL L2和POM-2的细胞维持液。48h后收集细胞和上清培养液，-20℃和37℃三次冻融裂解后，TCID50方法测定CVB3病毒滴度。

3、试验结果

如图3所示，25μg/mL L2和POM-2处理的Hep-2细胞相对于病毒对照组，病毒滴度显著降低，呈现了大约3.6log和4.2log的降低。说明了化合物对于CVB3子代病毒产量强烈的抑制作用。

综上所述，具有新型结构的系列碘代酰肼及碘代酰肼多酸衍生物L1、L2、POM-0、POM-1、POM-2具有较强的抑制CVB3活性，其中L2和POM-2具有最好的抑制效果，强烈抑制CVB3病毒在细胞内的复制增殖，有潜力制备一种临床上有效对抗CVB3感染的药物。

最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims

1.碘代酰肼或碘代酰肼多酸衍生物在制备抗CVB3病毒药物中的应用，其特征在于，所述碘代酰肼为对碘代酰肼和2,3,5-碘代酰肼中的至少一种；所述碘代酰肼多酸衍生物为POM-0、POM-1或POM-2，结构式分别如下：

；

。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述2,3,5-碘代酰肼在25μg/mL对CVB3的抑制率为98%；所述对碘代酰肼在25μg/mL对CVB3的抑制率为95%；

所述POM-0在25μg/mL对CVB3的抑制率为75%；所述POM-1在25μg/mL对CVB3的抑制率为95%；所述POM-2在25μg/mL对CVB3的抑制率为98%。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗CVB3病毒药物还包括药学上可接受的辅料或载体。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述辅料为填充剂、崩解剂、粘合剂、稀释剂、润滑剂、甜味剂或着色剂中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗CVB3病毒药物的剂型为颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗CVB3病毒药物的抗病毒的方式包括：抑制CVB3病毒在细胞内核酸复制、病毒蛋白的表达和感染。