CN114437011B - 一种色原酮类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种色原酮类化合物及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114437011B
CN114437011B CN202210014193.0A CN202210014193A CN114437011B CN 114437011 B CN114437011 B CN 114437011B CN 202210014193 A CN202210014193 A CN 202210014193A CN 114437011 B CN114437011 B CN 114437011B
Authority
CN
China
Prior art keywords
gradient elution
tlc
chromone
chromone compound
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210014193.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114437011A (zh
Inventor
杨小龙
王文静
廖梁秀
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South Central Minzu University
Original Assignee
South Central University for Nationalities
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South Central University for Nationalities filed Critical South Central University for Nationalities
Priority to CN202210014193.0A priority Critical patent/CN114437011B/zh
Publication of CN114437011A publication Critical patent/CN114437011A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114437011B publication Critical patent/CN114437011B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种色原酮类化合物及其制备方法与应用，属于生物医学技术领域。该色原酮类化合物结构式如式（Ⅰ）所示；，式（Ⅰ）。本发明化合物从菌核青霉菌MPT‑250（Penicilliμm sclerotiorμm）中分离得到，其结构新颖，具有显著的抗临床耐药细菌活性，对耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度MIC为3.13μg/mL，可以成为开发新型抗临床耐药细菌药物的活性先导化合物。

Description

一种色原酮类化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种色原酮类化合物及其制备方法与应用，特别涉及从一株对菌核青霉菌（Penicilliμm sclerotiorμm MPT-250）中分离得到的一个具有抗临床耐药细菌活性的新型色原酮类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
临床耐药细菌是本世纪全球关注的热点问题，更是人类健康的严重危害者。细菌的耐药性可以直接导致患者治疗失败、医疗费用增加、死亡率上升等，更为严重的是，耐药细菌的发展可能使人类重新面临感染性疾病的威胁。针对细菌耐药这个全球化问题，2011年世界卫生组织将卫生日主题定为“遏制细菌耐药”，其呼吁的“今天不采取行动，明日无药可用”的口号即是在警示和号召世界所有国家加强对抗菌药物的使用和管理，遏制细菌耐药。2014年世界卫生组织发表其官方报告，再次向全球拉响了警报，并呼吁科学界加强研发新方法﹑新药物﹑新技术对抗目前严峻的细菌耐药形势。因此，寻找新的抗临床耐药菌药物显得十分迫切和必要，具有非常重要的社会和经济意义。
从历年来的研究可以发现，微生物次生代谢产物丰富，结构新颖，生物活性多样，从微生物天然产物中寻找新型的先导化合物，是目前抗菌药物研发最有效的方法之一。如临床上应用的青霉素、四环素、红霉素、万古霉素等抗菌药物均来源于微生物天然产物。植物内生真菌由于其生存环境特殊，在与宿主植物长期复杂的共生关系中协同进化，使其具有独特的代谢体系，不仅可以产生结构新颖、活性多样的次级代谢产物，有些还可以产生与宿主植物相似的生物活性物质。大量研究表明，大多数植物内生真菌次级代谢产物具有显著抗细菌活性，并从中分离得到许多抗细菌活性单体化合物，因此，从植物内生真菌中寻找新型抗细菌药物或先导化合物有非常大的研究空间。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种色原酮类化合物及其制备方法与应用，该色原酮类化合物4-(5,7-dimethoxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)butanoate在低浓度的情况下对耐碳青霉烯铜绿假单胞菌有很强的抑制作用（MIC，3.13 μg/mL)，继续下一步深入研究，有望开发成新型抗临床耐药性细菌的药物。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种色原酮类化合物，其特征在于，所述的色原酮类化合物结构式如式（Ⅰ）所示；
本发明同时提供上述色原酮类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），选择大米培养基对菌核青霉菌Penicilliμm sclerotiorμm MPT-250进行培养，得到发酵产物；
步骤（2），用无水乙醇提取步骤（1）得到的发酵产物，将所得到的提取液减压浓缩得到粗提物；
步骤（3），将步骤（2）得到的粗浸膏加水溶解后，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩，得到粗浸膏；
步骤（4），将步骤（3）得到的粗浸膏干法上样至正相硅胶柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到5个组分A–E；
步骤（5），将步骤（4）得到的组分D干法上样至反相ODS柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到6个亚组分D1–D6；
步骤（6），对步骤（5）得到的亚组分D4进行分离纯化，得到式（Ⅰ）所示的色原酮类化合物。
进一步，优选的是，步骤（1）中，培养的条件为28℃静置培养30天。
进一步，优选的是，步骤（2）中，所述的提取方式是加入等体积无水乙醇在室温条件下超声0.5h，然后室温条件下静置2h，取上清，减压浓缩。
进一步，优选的是，步骤（3）中，萃取所用的水和乙酸乙酯体积相同，萃取次数为3次。
进一步，优选的是，步骤（4）中，梯度洗脱采用的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，两者的体积比依次为100:0、100:1、80:1、50:1、20:1、10:1、5:1、3:1，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，TLC跟踪，合并相同部分，浓缩，得到A–E共5个组分。
进一步，优选的是，步骤（5）中，梯度洗脱采用的流动相为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比依次为20:80、40:60、80:20、100:0，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，TLC跟踪，合并相同部分，浓缩，得到D1–D6共6个亚组分。
进一步，优选的是，步骤（6）中，所述的分离纯化先采用经凝胶色谱纯化，再采用HPLC纯化；
凝胶色谱纯化采用的凝胶柱填料为Sephadex LH-20，以体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂作为流动相；
所述的HPLC色谱条件为流动相为体积比为11：9甲醇和水的混合溶剂，流速为2mL/min，保留时间为30min，采用Waters的C18色谱柱，规格为：10mmx250mm，5μm；柱温：30℃，每次进样量：50μL，采用紫外检测器，检测波长为210nm。
本发明还提供上述菌核青霉菌Penicilliμm sclerotiorμm MPT-250，已于2021年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC M 2021328。
本发明另外提供上述色原酮类化合物在制备抗临床耐药性细菌剂的应用。
本发明色原酮类化合物分子式为C16H18O6，结构式如式（Ⅰ）所示，命名为4-(5,7-dimethoxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)butanoate。
优选，本发明正相硅胶柱装柱硅胶填料采用200-300目硅胶；反相ODS柱填料采用填料为YMC ODS-A-HG，50μm。
本发明所涉及的植物内生真菌为菌核青霉菌，在PDA培养基上培养7天，直径6-16mm，质地绒状或带絮状；分生孢子面暗灰绿色；菌丝体由白色变为浅黄色；反面暗红。分生孢子与子囊孢子萌发的适温均为25～30℃。
本发明首次从菌核青霉次级代谢产物中发现了一个新的色原酮类化合物4-(5,7-dimethoxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)butanoate，并研究了其对临床耐药细菌的抑制活性。结果显示该化合物对耐碳青霉烯铜绿假单胞菌有很强的抑制作用（MIC，3.13 μg/mL)，由此可见，该化合物在抗临床耐药细菌药物的开发中具有非常大的潜能。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
1、本发明中报道色原酮类化合物（4-(5,7-dimethoxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)butanoate）系首次发现的新化合物（化合物结构请参见附图1）。
2、本发明提供了一个色原酮类化合物对耐碳青霉烯铜绿假单胞菌最小抑菌浓度为3.13 μg/mL，由此可见，所述的色原酮类化合物在临床耐药细菌上具有非常大的应用潜能。
3、本发明还提供了该化合物的制备方法，利用菌核青霉进行发酵培养，再通过提取分离，快速准确高效的从发酵产物中制备获得所述的色原酮类化合物。该制备方法成本低，分离过程较为简单，且重复性好，易于大规模制备所述色原酮类化合物。
附图说明
图1为本发明色原酮类化合物的结构式；
图2为本发明色原酮类化合物的高分辨质谱图；
图3为本发明色原酮类化合物的1H NMR谱图；
图4为本发明色原酮类化合物的13C NMR以及DEPT谱图；
图5为本发明色原酮类化合物的HSQC谱图；
图6为本发明色原酮类化合物的HMBC谱图。
菌核青霉菌（Penicilliμm sclerotiorμm）MPT-250，已于2021年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC M 2021328，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
本发明除非另有说明，否则百分号代表质量百分数。
实施例1
一种色原酮类化合物，其特征在于，所述的色原酮类化合物结构式如式（Ⅰ）所示；
实施例2
一种色原酮类化合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1），选择大米培养基对菌核青霉菌Penicilliμm sclerotiorμm MPT-250进行培养，得到发酵产物；
步骤（2），用无水乙醇提取步骤（1）得到的发酵产物，将所得到的提取液减压浓缩得到粗提物；
步骤（3），将步骤（2）得到的粗浸膏加水溶解后，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩，得到粗浸膏；
步骤（4），将步骤（3）得到的粗浸膏干法上样至正相硅胶柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到5个组分A–E；
步骤（5），将步骤（4）得到的组分D干法上样至反相ODS柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到6个亚组分D1–D6；
步骤（6），对步骤（5）得到的亚组分D4进行分离纯化，得到式（Ⅰ）所示的色原酮类化合物。
实施例3
一种色原酮类化合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1），选择大米培养基对菌核青霉菌Penicilliμm sclerotiorμm MPT-250进行培养，得到发酵产物；
步骤（2），用无水乙醇提取步骤（1）得到的发酵产物，将所得到的提取液减压浓缩得到粗提物；
步骤（3），将步骤（2）得到的粗浸膏加水溶解后，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩，得到粗浸膏；
步骤（4），将步骤（3）得到的粗浸膏干法上样至正相硅胶柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到5个组分A–E；
步骤（5），将步骤（4）得到的组分D干法上样至反相ODS柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到6个亚组分D1–D6；
步骤（6），对步骤（5）得到的亚组分D4进行分离纯化，得到式（Ⅰ）所示的色原酮类化合物。
步骤（1）中，培养的条件为28℃静置培养30天。
步骤（2）中，所述的提取方式是加入等体积无水乙醇在室温条件下超声0.5h，然后室温条件下静置2h，取上清，减压浓缩。
步骤（3）中，萃取所用的水和乙酸乙酯体积相同，萃取次数为3次。
步骤（4）中，梯度洗脱采用的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，两者的体积比依次为100:0、100:1、80:1、50:1、20:1、10:1、5:1、3:1，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，TLC跟踪，合并相同部分，浓缩，得到A–E共5个组分。
步骤（5）中，梯度洗脱采用的流动相为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比依次为20:80、40:60、80:20、100:0，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，TLC跟踪，合并相同部分，浓缩，得到D1–D6共6个亚组分。
步骤（6）中，所述的分离纯化先采用经凝胶色谱纯化，再采用HPLC纯化；
凝胶色谱纯化采用的凝胶柱填料为Sephadex LH-20，以体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂作为流动相；
所述的HPLC色谱条件为流动相为体积比为11：9甲醇和水的混合溶剂，流速为2mL/min，保留时间为30min，采用Waters的C18色谱柱，规格为：10mmx250mm，5μm；柱温：30℃，每次进样量：50μL，采用紫外检测器，检测波长为210nm。
应用实例
本发明中公开的一个新的色原酮类化合物是从菌核青霉菌（Penicilliμm sclerotiorμm）MPT-250的大米发酵产物中分离得到的，具体的制备步骤如下：
1、菌种的发酵培养
将保存的菌种取出，在PDA（马铃薯葡萄糖琼脂）平板上活化5天，待长出孢子后转接到已灭菌的大米培养基中（100g大米+80mL蒸馏水），共200瓶，于28℃静置培养30天。
2、发酵产物提取和萃取
发酵完成后，加入无水乙醇（40L）提取3次，提取液减压浓缩，得到粗提物0.5Kg，再加水进行分散，并用等体积的乙酸乙酯萃取三次，取乙酸乙酯层减压浓缩，得粗浸膏100g。
3、化合物的分离纯化
粗浸膏加10倍体积乙酸乙酯溶解，用质量为粗浸膏质量1.5倍的80-100目硅胶进行拌样，200-300目硅胶装柱，干法上样。二氯甲烷和甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，洗脱溶剂比例依次为100:1、80:1、50:1、20:1、10:1、5:1、3:1（权利要求是8个梯度），每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，TLC跟踪，合并相同部分，浓缩，得到A–E共5个组分。
组分D（3g）采用ODS反相色谱柱进行分离，洗脱剂为甲醇和水的混合溶剂，洗脱剂梯度依次为20:80、40:60、80:20、100:0，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，TLC跟踪，合并相同部分，浓缩，得到D1–D6共6个亚组分。
组分D4（75 mg）采用凝胶色谱柱进行纯化，填料为Sephadex LH-20，以体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂作为流动相，采用薄层色谱（TLC）进行监测，合并相同部分，浓缩，得到三个组分D4.1~D4.3。
组分D4.2（28 mg）采用半制备HPLC进行纯化，流动相为体积比为11：9甲醇和水的混合溶剂，采用Waters的C18色谱柱，规格为：10mmx250nm，5μm；柱温：30℃，流速为2mL/min，每次进样量50 μL，采用紫外检测器，检测波长为210 nm，收集保留时间为30 min的色谱峰，得到化合物4-(5,7-dimethoxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)butanoate（3.2 mg）。
4、化合物的理化性质以及结构解析
该化合物为浅黄色粉末，高分辨质谱给出其分子离子峰m/z 307.1175 [M+H]+（C16H19O6计算值为307.1184）（图2），确定分子式为C16H18O6。1H NMR谱中显示三个芳香质子信号（δ H 6.61，6.48，6.03），三个氧甲基质子信号（δ H 3.90，3.88，3.65）（图3）；13C NMR谱中显示16个碳信号（图4）。通过查阅文献，发现该化合物的核磁数据与4-(5,7-dimethoxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)butanoic acid相似，且多了一个氧甲基，说明两者结构类似，为同系物。进一步分析其2D NMR谱图发现，我们分离得到的化合物比是在4-(5,7-dimethoxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)butanoic acid的羧基部分形成了甲酯，由此，化合物的结构被确定。化合物结构解析所需的核磁数据请参见（图3-图6、表1）。
表1化合物的NMR数据（CD3OD，600 MHz）
No δ H δ C
2 168.7
3 6.03, s 111.6
4 179.9
5 109.1
6 162.1
7 6.43, d (2.3) 97.2
8 166.3
9 6.61, d (2.3) 94.1
10 161.7
11 2.65, t (7.6) 33.6
12 2.03, m 23.0
13 2.45, t (7.2) 33.6
14 175.0
15 3.88, s 56.5
16 3.65, s 56.5
17 3.65, s 52.1
5、化合物的抗临床耐药性细菌活性实验。
5.1 目标化合物以及环丙沙星（阳性对照）用DMSO溶解，配制成浓度为1mg/mL的溶液。
5.2将耐药性细菌——耐碳青霉烯铜绿假单胞菌（Carbapenems-resistantPseudomonas aeruginosa）、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicinllin-resistantStaphylococcus aureus）、多耐药性粪肠球菌（Multidrug-resistant Enterococcus faecalis）、多耐药性屎肠球菌（Multidrug-resistant Enterococcus faecium）、耐碳青霉烯大肠埃希菌（Carbapenems-resistant Escherichia coli）、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌（Carbapenems-resistant Acinetobacter baumannii）、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（Carbapenems-resistant Klebsiella pneumoniae）、多耐药性表皮葡萄球菌（Multidrug-resistant Staphylococcus epidermidis）在LB（溶菌肉汤）培养基中活化8h，活化好后取50μL菌液加入到50mL LB培养基中得到稀释菌液。
LB培养基配制：取25 g LB粉末（北京酷来搏公司），加入1000 mL蒸馏水，121℃高压灭菌20 min。（该培养基对pH无特殊要求，中性即可）
5.3 以环丙沙星为阳性对照，取2 μL目标化合物加入到198 μL的目标菌液里面，采用二倍稀释法测试目标化合物对以上八种临床耐药性细菌的拮抗活性。（活性结果见表2）
表2：化合物对八种临床耐药性细菌的抑制活性MIC (μg/mL)
环丙沙星 目标化合物
耐碳青霉烯铜绿假单胞菌 0.78 3.13
多耐药性屎肠球菌 12.5 ＞50
多耐药性粪肠球菌 0.78 ＞50
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 6.25 ＞50
耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌 12.5 ＞50
耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌 0.78 ＞50
多耐药性表皮葡萄球菌 25 ＞50
耐碳青霉烯大肠埃希菌 12.5 ＞50
6、结论
实验结果表明，本次实验中发现的色原酮类化合物4-(5,7-dimethoxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)butanoate系首次发现的新化合物，并且该化合物对耐碳青霉烯铜绿假单胞菌有很好的抑制活性（MIC，3.13 μg/mL)。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (6)

1.一种色原酮类化合物，其特征在于，所述的色原酮类化合物结构式如式（Ⅰ）所示；
，式（Ⅰ）。
2.权利要求1所述的色原酮类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），选择大米培养基对菌核青霉菌Penicillium sclerotiorum MPT-250进行培养，得到发酵产物；
所述的菌核青霉菌Penicillium sclerotiorum MPT-250，已于2021年10月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC M 20211328；
步骤（2），用无水乙醇提取步骤（1）得到的发酵产物，将所得到的提取液减压浓缩得到粗提物；
步骤（3），将步骤（2）得到的粗提物加水溶解后，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩，得到粗浸膏；
步骤（4），将步骤（3）得到的粗浸膏干法上样至正相硅胶柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液，经TLC监测，合并相同的部分，浓缩得到5个组分A–E；
步骤（5），将步骤（4）得到的组分D干法上样至反相ODS柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液，经TLC监测，合并相同的部分，浓缩得到6个亚组分D1–D6；
步骤（6），对步骤（5）得到的亚组分D4进行分离纯化，得到式（Ⅰ）所示的色原酮类化合物；
其中，步骤（4）中，梯度洗脱采用的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，两者的体积比依次为100:0、100:1、80:1、50:1、20:1、10:1、5:1、3:1，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，TLC跟踪，合并相同部分，浓缩，得到A–E共5个组分;
步骤（5）中，梯度洗脱采用的流动相为甲醇和水的混合溶剂，甲醇和水的体积比依次为20:80、40:60、80:20、100:0，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，TLC跟踪，合并相同部分，浓缩，得到D1–D6共6个亚组分;
步骤（6）中，所述的分离纯化先采用经凝胶色谱纯化，再采用HPLC纯化；
凝胶色谱纯化采用的凝胶柱填料为Sephadex LH-20，以体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂作为流动相；
所述的HPLC色谱条件为流动相为体积比为11：9甲醇和水的混合溶剂，流速为2mL/min，保留时间为30min，采用Waters的C18色谱柱，规格为：10mmx250mm，5μm；柱温：30℃，每次进样量：50μL，采用紫外检测器，检测波长为210nm。
3.根据权利要求2所述的色原酮类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，培养的条件为28℃静置培养30天。
4.根据权利要求2所述的色原酮类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，提取方式是加入等体积无水乙醇在室温条件下超声0.5h，然后室温条件下静置2h，取上清，减压浓缩。
5.根据权利要求2所述的色原酮类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，萃取所用的水和乙酸乙酯体积相同，萃取次数为3次。
6.权利要求1所述的色原酮类化合物在制备抗耐碳青霉烯铜绿假单胞菌药物中的应用。
CN202210014193.0A 2022-01-06 2022-01-06 一种色原酮类化合物及其制备方法与应用 Active CN114437011B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210014193.0A CN114437011B (zh) 2022-01-06 2022-01-06 一种色原酮类化合物及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210014193.0A CN114437011B (zh) 2022-01-06 2022-01-06 一种色原酮类化合物及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114437011A CN114437011A (zh) 2022-05-06
CN114437011B true CN114437011B (zh) 2023-11-03

Family

ID=81367072

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210014193.0A Active CN114437011B (zh) 2022-01-06 2022-01-06 一种色原酮类化合物及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114437011B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116813633B (zh) * 2023-06-29 2024-05-28 黑龙江中医药大学 一种色原酮类化合物及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0017332A1 (en) * 1979-03-20 1980-10-15 FISONS plc Pharmaceutical heterocyclic compounds, processes for their preparation and compositions containing them
CN106434783A (zh) * 2016-04-05 2017-02-22 广东工业大学 一种苯并吡喃酮化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0017332A1 (en) * 1979-03-20 1980-10-15 FISONS plc Pharmaceutical heterocyclic compounds, processes for their preparation and compositions containing them
CN106434783A (zh) * 2016-04-05 2017-02-22 广东工业大学 一种苯并吡喃酮化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Halogenated Metabolites Isolated from Penicillium citreonigrum;Wei-Hua Yuan Et al.;《CHEMISTRY & BIODIVERSITY》;第11卷;第1078-1087页 *
New chromone analog and pyrrole alkaloid produced by Penicillium sclerotiorum and their antibacterial activity;Liang-Xiu Liao et al.,;《JOURNAL OF ASIAN NATURAL PRODUCTS RESEARCH》;第25卷(第3期);第225–230页 *
耐碳青霉烯类药物的细菌种类分布及耐药特性分析;杨秋燕;邱烨;;《检验医学与临床》;第12卷(第04期);第486-488页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114437011A (zh) 2022-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Cytochalasans produced by the coculture of Aspergillus flavipes and Chaetomium globosum
CN102482188A (zh) 新的蒽醌衍生物
Yenn et al. Endophytic Diaporthe sp. ED2 produces a novel anti-candidal ketone derivative
CN104877910A (zh) 一种植物内生真菌布雷正青霉菌F4a及其应用
CN114437011B (zh) 一种色原酮类化合物及其制备方法与应用
CN106810601A (zh) 一种Destruxin类缩酚酸肽衍生物及其制备方法和应用
CN115536645B (zh) 化合物Phomolide B及其制备方法和在抗菌药物中的应用
CN106167495A (zh) 一种卤化ii型聚酮类抗生素化合物、制备方法及其应用
CN115806881A (zh) 一种青霉属真菌及其在制备抗菌药物中的应用
CN106167494B (zh) 卤化ii型聚酮类抗生素化合物、制备方法及其应用
CN111494364B (zh) 异戊烯基取代的苯酚类化合物抗金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的应用
CN109020991A (zh) 一类美达霉素类化合物及其制备方法和应用
CN114621092A (zh) 一种红树植物来源真菌中酚类化合物及其制备方法
CN108441427B (zh) 一种节菱孢属真菌及其生产的吡啶酮生物碱类化合物
CN107815473B (zh) 一种二苯醚类化合物及其制备方法和应用
CN107973803B (zh) 一种七元内酯并呋喃衍生物及其制备方法和应用
CN109260206A (zh) 一种土曲霉新次级代谢产物lw-1的用途
CN109956883A (zh) 一种乙酰化含氮环橙花烷型倍半萜衍生物及其制备和应用
CN111217878A (zh) 一类andrastone类化合物及其制备方法以及在制备抗过敏药物中的应用
CN108002998B (zh) 一种萘类化合物及其制备方法和应用
CN113173904B (zh) 新的抑菌化合物以及用于制备该化合物的曲霉
CN109593074B (zh) 真菌次生代谢产物中具有抗菌活性化合物的分离制备及用途
CN108002999B (zh) 一种萘类化合物及其制备方法和应用
CN112107602B (zh) 一对含双氮生物碱对映体及其制备和应用
CN114469908B (zh) 一种抗鲍曼不动杆菌化合物stemphol的制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant