CN114315579B

CN114315579B - 一种从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁的方法

Info

Publication number: CN114315579B
Application number: CN202111163336.6A
Authority: CN
Inventors: 张宝堂; 范斌; 谭家忠; 雷桂芳
Original assignee: HUNAN NUTRAMAX Inc
Current assignee: HUNAN NUTRAMAX Inc
Priority date: 2021-09-30
Filing date: 2021-09-30
Publication date: 2024-04-26
Anticipated expiration: 2041-09-30
Also published as: CN114315579A

Abstract

本发明公开了一种从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁的方法，该方法包括：1)提取浓缩：将加拿大一枝黄花、醇类化合物进行至少一次提取，单次提取依次包括热封处理、加压处理和过滤，后一次的提取底物为前一次提取得到的滤渣，将所有提取得到的滤液合并得到提取液；将所述提取液依次进行浓缩、加水稀释、离心，以得到上清液和沉淀；2)绿原酸的纯化；3)芦丁的纯化。该方法能够综合利用境外入侵杂草，通过简单操作能够高产率地得到绿原酸和芦丁。

Description

一种从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁的方法

技术领域

本发明涉及天然产物提取领域，具体地，涉及一种从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁的方法。

背景技术

加拿大一枝黄花(Solidago CanadensisLour)又名黄莺、麒麟草，为菊科(Compositae)一枝黄花属(Solidago)多年生草本植物；原产于北美，于20世纪30年代作为花卉引入我国，后逸生野外。由于加拿大一枝黄花以种子和地下根状茎繁殖，极易形成优势种，对我国生态环境造成了严重的危害，被公认为是一种入侵性很强的恶性杂草。

加拿大一枝黄花在欧洲已有700多年的药用历史，用于治疗尿结石、风湿、慢性肾炎、膀胱炎、糖尿病等疾病，是一种具有研究和实用价值的草药，而芦丁在加拿大一枝黄花中含量高，是其发挥功效的一种重要成分。

芦丁，化学名为5,7,3',4'-四羟基-3-芸香糖黄酮，在各大行业上应用广泛，在医药上，芦丁不仅具有调节毛细血管壁的渗透性和脆性、防止血管破裂、止血的作用，还有抗菌消炎、镇痛、抗辐射、抗氧化、抗心肌缺氧、缺血、抗心律失常、降低血清胆固醇、利尿、解痉、抑制血小板集聚等功效；作为一种天然化妆品原料，芦丁有防晒、抗炎和抗衰老等功效；芦丁还能作为一种抗氧化剂使用在食品中，延长食品的保质时间。

绿原酸也是加拿大一枝黄花中的一种成分，具有广泛的生物活性，现代科学对绿原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域。绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经***等作用。

用适宜的方法从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁纯品对其变废为宝和综合利用有着显著的意义。

植物中有效成分的提取方法除传统的浸渍法、渗漉法、回流法等提取方法外，还有近几年来新发展起来的新提取方法，如超临界CO₂萃取法、超声提取法、微波提取法、酶解法等。但这些方法仍具有一定的局限性，传统提取方法提取时间较长，工艺繁琐，收率不甚理想；超临界CO₂萃取法较适合萃取亲脂性的、分子量较小的物质，对极性偏大或分子质量偏大(一般大于500)的成分提取率较差，且一次性投资较大；微波提取技术只适用于对热稳定的产物，且微波泄漏对操作者影响很大；超声提取法噪声比较大，对容器壁的厚薄及容器放置位置要求较高，工业应用有一定的困难，而且在大规模提取时效率不高，故常作为一种强化或辅助手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁的方法，该方法能够综合利用境外入侵杂草，通过简单操作能够高产率地得到绿原酸和芦丁。

为了实现上述目的，本发明提供了一种从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁的方法，该方法包括：

1)提取浓缩：将加拿大一枝黄花、醇类化合物进行至少一次提取，单次提取依次包括热封处理、加压处理和过滤，后一次的提取底物为前一次提取得到的滤渣，将所有提取得到的滤液合并得到提取液；将所述提取液依次进行浓缩、加水稀释、离心，以得到上清液和沉淀；

2)绿原酸的纯化：将所述上清液通过超滤膜得到超滤液；将所述超滤液过大孔树脂柱，乙醇洗脱；将乙醇洗脱液浓缩干燥得到绿原酸粗品，将所述绿原酸粗品溶解后进行结晶；

3)芦丁的纯化：将所述沉淀、硼砂水溶液进行接触反应，将体系的pH调节为碱性后继续反应，反应结束后过滤取第一滤液；将所述第一滤液调节至酸性进行酸沉，静置后过滤得第一芦丁沉淀；将所述第一芦丁沉淀溶解，取芦丁上清液，将所述芦丁上清液、饱和醋酸铅溶液混合直至无沉淀生成，过滤得第二芦丁沉淀；将所述第二芦丁沉淀溶解后过阳离子交换树脂柱脱铅，水洗至洗脱液无醇味，收集流出液并且浓缩至干，得到芦丁粗品；将所述芦丁粗品溶解，取芦丁粗品上清液浓缩后进行结晶。

优选地，所述加拿大一枝黄花至少满足以下条件：全草粉末，在40℃～60℃温度下干燥至恒重，平均粒径为20～80目。

优选地，所述加拿大一枝黄花采集时间为7～8月。

优选地，所述热封处理至少满足以下条件：温度为70～90℃，在密封条件下进行。

优选地，所述加压处理至少满足以下条件：压力为200～500MPa，时间为3～5min，温度为70～90℃。

优选地，在单次所述提取中，料液比为1：1～100Kg/L。

优选地，所述提取的次数为2～3次。

优选地，所述醇类化合物采用20～90体积％的乙醇提供。

优选地，稀释后的体积为浓缩液体积的1.05～10倍。

优选地，在步骤2)中，所述超滤膜的截留分子量为1000～3000道尔顿。

优选地，所述大孔树脂柱中大孔树脂为60～80目的中极性和极性大孔树脂，所述大孔树脂柱优选ADS-17型大孔树脂柱、NKA-9型大孔树脂柱、NKA-2型大孔树脂柱。

优选地，所述大孔树脂柱的层析至少满足以下条件：上样量为2～8BV，上样流速为0.5～1.5BV/h。

优选地，所述乙醇洗脱包括：乙醇洗脱体积为4～8BV，洗脱流速为2～4BV/h，所述乙醇为40～60体积％的乙醇。

优选地，所述绿原酸粗品的溶解使用的溶剂选自甲醇、乙醇、水中的至少一种；单次溶解中，所述绿原酸粗品、溶剂的体积比为1：1～10。

优选地，在步骤3)中，结晶温度为2～10℃。

优选地，在步骤3)中，所述硼砂水溶液的浓度为0.1～5重量％，所述硼砂水溶液、沉淀的液固比为(5～20)：1。

优选地，所述接触反应至少满足以下条件：加热至沸腾。

优选地，在步骤3)中，体系的pH调节为碱性通过添加碱液调节至pH为8～9，所述碱液为石灰水。

优选地，所述酸沉至少满足以下条件：调节后的pH为3～5，静置时间为5～20h。

优选地，所述第一芦丁沉淀的溶解采用的溶剂选自乙醇和水中的至少一种。

优选地，在步骤3)中，所述阳离子交换树脂柱的层析至少满足以下条件：上柱流速为0.5～1.5BV/h，水洗的流速为1～4BV/h。

优选地，阳离子交换树脂与加拿大一枝黄花原料的体积质量比mL/g为(0.1～1.0)：1。

优选地，所述阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，优选为Amberlite IR-120阳离子交换树脂、Diaion SK-103阳离子交换树脂或D001型阳离子交换树脂。

优选地，所述第一芦丁沉淀、第二芦丁沉淀和芦丁粗品的溶解使用的溶剂各自独立地选自甲醇、乙醇、水中的至少一种；单次溶解中，待溶解固体、溶剂的体积比为1：10～100。

优选地，结晶温度为2～10℃。

优选地，所述浓缩采用减压浓缩，减压浓缩，温度为50～65℃，真空度为0.09MPa～0.10MPa。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

1)入侵植物加拿大一枝黄花具有高含量的绿原酸和芦丁，本发明首次提出在提取得到绿原酸同时，亦能得到含量超过95％芦丁，对其变废为宝和综合利用有着显著的意义。

2)超高压提取技术是在常温或较低温度(通常低于100℃)条件下，对原料液迅速施加100MPa～1000MPa的流体静压力，保压一定时间，溶剂在超高压作用下迅速渗透到固体原料内部，有效成分溶解在溶剂中，并在短时间内达到溶解平衡，然后迅速卸压，在超高渗透压差下，有效成分迅速扩散到组织周围的提取溶剂中；同时在超高压作用下，细胞的细胞壁、细胞膜以及细胞内液泡等结构发生变化，细胞内溶物和提取溶剂充分接触，从而达到快速、高效地提取目的。

本发明采用超高压提取技术进行提取，与其他提取技术相比，超高压提取技术具有提取温度低、提取时间大大缩短、提取效率高和能耗低等优点，非常适用于加拿大一枝黄花中绿原酸和芦丁的提取。

3)采用超滤膜、大孔树脂、阳离子交换树脂等对提取液进行分离纯化，能有效去除其他杂质，其中，膜操作过程简单，膜通量能长时间稳定，易于清洗、使用寿命长，易于实现工业化生产。

4)本发明提取渣可以在堆肥后作为药肥的一种成分使用，可以明显抑制作物生长环境中杂草的萌发和生长，使作物生长具备更充足的养分，对田间相关病虫害的防治亦有一定效果。

综上所述，该方法具有步骤简单、时间短且工艺易于控制的特点，对加拿大一枝黄花起到了变废为宝的作用，并增大了其综合利用价值。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明提供了一种从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁的方法，该方法包括：

2)绿原酸的纯化：将所述上清液通过超滤膜得到超滤液；将所述超滤液过大孔树脂柱，通过乙醇洗脱；将乙醇洗脱液浓缩干燥得到绿原酸粗品，将所述绿原酸粗品溶解后进行结晶；

3)芦丁的纯化：将所述沉淀、硼砂水溶液进行接触反应，反应结束后将体系的pH调节为碱性后继续反应，反应结束后过滤取第一滤液；将所述第一滤液调节至酸性进行酸沉，静置后过滤得第一芦丁沉淀；将所述第一芦丁沉淀溶解，取芦丁上清液，将所述芦丁上清液、饱和醋酸铅溶液混合直至无沉淀生成，过滤得第二芦丁沉淀；将所述第二芦丁沉淀溶解后过阳离子交换树脂柱脱铅，水洗至洗脱液无醇味，收集流出液并且浓缩至干，得到芦丁粗品；将所述芦丁粗品溶解，取芦丁粗品上清液浓缩后进行结晶。

在本发明中，所述加拿大一枝黄花的提取部位、含水率和粒径可以在宽泛的范围内选择，但是为了进一步提高绿原酸和芦丁的提取率和纯度，优选地，所述加拿大一枝黄花至少满足以下条件：全草粉末在40℃～60℃温度下干燥至恒重，平均粒径为20～80目。

此外，在本发明中，所述加拿大一枝黄花采集时间可以在宽泛的范围内选择，不同时节采集到的加拿大一枝黄花中绿原酸和芦丁的含量存在显著的差异，为了进一步提高所述加拿大一枝黄花中绿原酸和芦丁的提取率和纯度，优选地，所述加拿大一枝黄花采集时间为7～8月。

在本发明的步骤1)中，对所述热封处理的条件不作具体限定，但是为了提高绿原酸和芦丁的提取率和纯度，优选地，所述热封处理至少满足以下条件：温度为70～90℃，在密封条件下进行。

在上述实施方式中，所述加压处理的具体实施方式可以在宽的范围内选择，可以为超高压处理，为了进一步提高绿原酸和芦丁的提取率和纯度，优选地，所述加压处理至少满足以下条件：压力为200～500MPa，时间为3～5min，温度为70～90℃。

在上述实施方式中，在单次所述提取中料液比可以在宽的范围内选择，为了进一步提高绿原酸和芦丁的提取率和纯度，优选地，在单次所述提取中，料液比为1：1～100Kg/L，更优选为1：10-15Kg/L。

在在上述实施方式中，提取的总次数可以在宽的范围内选择，为了进一步提高绿原酸和芦丁的提取率和纯度，优选地，所述提取的次数为2～3次。

此外，在本发明中，所述醇类化合物的具体种类也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高绿原酸和芦丁的提取率和纯度，优选地，所述醇类化合物采用20～90体积％的乙醇提供。

在本发明中，加水稀释的稀释范围也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高提取浓缩的效果，优选地，稀释后的体积为浓缩液体积的1.05～10倍。

此外，在本发明的步骤2)中，超滤膜的规格也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高过滤效果，优选地，在步骤2)中，所述超滤膜的截留分子量为1000～3000道尔顿。

此外，在本发明中，所述大孔树脂柱的类型可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高绿原酸的提取率和纯度，优选地，所述大孔树脂柱中大孔树脂为60～80目的中极性或极性大孔树脂，所述大孔树脂柱优选NKA-9型大孔树脂柱、ADS-17型大孔树脂柱或NKA-2型大孔树脂柱。

此外，在绿原酸的纯化中，所述大孔树脂柱的层析条件也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高层析效果，优选地，所述大孔树脂柱的层析至少满足以下条件：上样量为2～8BV，上样流速为0.5～1.5BV/h。

在上述实施方式的基础上，优选地，所述乙醇洗脱包括：通过乙醇洗脱4～8BV，洗脱流速为2～4BV/h，所述乙醇为40～60体积％的乙醇。

在本发明的绿原酸的纯化中，结晶的方式可以在宽的范围内变化，但是为了进一步提高产品的纯度，优选地，结晶为重结晶，有利于进一步提高产品纯度；其中，所述绿原酸粗品的溶解中溶剂的种类和用量也可以在宽的范围内选择，但是为了提高产品的纯度，优选地，所述绿原酸粗品的溶解使用的溶剂选自甲醇、乙醇、水中的至少一种；单次溶解中，所述绿原酸粗品、溶剂的体积比为1：1～10。

此外，在绿原酸的结晶中，结晶温度也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产品纯度，优选地，结晶温度为2～10℃。

在本发明的步骤3)中，所述硼砂水溶液在芦丁的纯化起到的是保护芦丁的邻二酚羟基不被破坏；所述硼砂水溶液的浓度以及用量也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高芦丁的纯度，优选地，在步骤3)中，所述硼砂水溶液的浓度为0.1～5重量％，所述硼砂水溶液、沉淀的液固比为(5～20)：1，其中，液固比指的是所述硼砂水溶液的重量与沉淀的重量的比值。

在本发明的步骤3)中，所述接触反应的条件也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高芦丁的纯度，优选地，所述接触反应至少满足以下条件：加热至沸腾。

在本发明的芦丁的纯化中，体系的pH调节方式也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高芦丁的纯度，优选地，在步骤3)中，体系的pH调节为碱性通过添加碱液调节至pH为8～9，所述碱液为石灰水。

在本发明的芦丁的纯化中，所述酸沉的条件也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高芦丁的纯度，优选地，所述酸沉至少满足以下条件：调节后的pH为3～5，静置时间为5～20h，其中，pH的调节方式也可以在宽的范围内选择，如采用滴加盐酸的方式进行。

同时，在本发明的芦丁的纯化中，所述第一芦丁沉淀的溶解方式也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高芦丁的纯度，优选地，所述第一芦丁沉淀的溶解采用的溶剂选自和水中至少一种。

在本发明的步骤3)中，所述阳离子交换树脂柱的层析条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高层析效果，优选地，在步骤3)中，所述阳离子交换树脂柱的层析至少满足以下条件：上柱流速为0.5～1.5BV/h，水洗的流速为1～4BV/h。

在上述实施方式中，阳离子交换树脂的用量也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高芦丁的纯化效果，优选地，阳离子交换树脂与加拿大一枝黄花原料的体积质量比mL/g为(0.1～1.0)：1。

在上述实施方式中，所述阳离子交换树脂的种类也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高芦丁的纯化效果，优选地，所述阳离子交换树脂为强酸性阳离子交换树脂，优选为Amberlite IR-120阳离子交换树脂、Diaion SK-103阳离子交换树脂或D001型阳离子交换树脂。

在本发明的步骤3)中，所述芦丁粗品的溶解条件也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产品纯度，优选地，所述第一芦丁沉淀、第二芦丁沉淀和芦丁粗品的溶解使用的溶剂各自独立地选自甲醇、乙醇、水中的至少一种；单次溶解中，待溶解固体、溶剂的体积比为1：10～100。

在此基础上，结晶温度也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高纯化效果，优选地，在步骤3)中，结晶温度为2～10℃。

在本发明中，各个浓缩的条件也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高溶剂去除的效率，优选地，所述浓缩采用减压浓缩，温度为50～65℃，真空度为0.09MPa～0.10MPa。

此外，在本发明中，所述饱和醋酸铅水溶液可以是市售品，但是为了保证溶液的纯度，优选地，所述饱和醋酸铅水溶液为现用现配。

最后，本发明中所述干燥，没有特别的限定，可以举出的例子包括但不限于喷雾干燥、冷冻干燥、鼓风干燥、真空干燥、微波干燥中的任意一种；优选为真空干燥，控制温度在50～60℃之间，真空度为0.085MPa以上。

本发明所述过滤没有特别的限定，可以选自布氏漏斗抽滤、板框过滤、压滤、布袋离心中的任意一种。

以下将通过实例对本发明进行详细描述。在实例中，纯度指的是质量分数；加拿大一枝黄花全草采集时间为7月；阳离子交换树脂与加拿大一枝黄花原料的体积质量比mL/g为0.1：1。A％乙醇指的是体积分数为A％的乙醇水溶液，A为0-100。

实施例1

一种从加拿大一枝黄花全草中提取绿原酸和芦丁的方法，包括以下步骤：

1)提取浓缩：加拿大一枝黄花采集后清洗，将全草在50℃温度下干燥至恒重，粉碎后过40目筛，得到加拿大一枝黄花全草干燥粉末。

超高压提取：称取1000g加拿大一枝黄花粉末于聚丙烯塑料袋中，加入10L温度为80℃的70体积％乙醇后热封，提取温度为80℃，在500MPa的压力下进行超高压处理5min，然后泄压，过滤得目标提取液，对滤渣进行第二次提取；第二次提取使用的溶剂也是10L温度为80℃的70体积％乙醇，提取条件与第一次提取相同，合并两次的提取液。

将提取液浓缩(减压浓缩，温度为60℃，真空度为0.09MPa，时间为60min)，回收乙醇后浓缩液加入5倍的水稀释，离心，分离得到上清液和沉淀。

2)绿原酸的纯化：将离心后所得上清液液通过截留分子量为1000道尔顿的超滤膜得到超滤液。超滤液过NKA-9型大孔树脂柱，上样量为8BV，上样流速为1.5BV/h，用50％(v/v)乙醇洗脱(用量为5BV，流速为2.0BV/h)，收集乙醇洗脱液并浓缩干燥(真空干燥，温度50℃，真空度为0.085MPa)，得到绿原酸粗品。

将绿原酸粗品通过5倍体积的50体积％乙醇进行溶解，然后进行重结晶(结晶温度为4℃，结晶时间为12h)，抽滤干燥，得到精品绿原酸21.19g，HPLC检测纯度为97.56％。

5)芦丁的纯化：将离心后所得离心后的沉淀烘干，加入含1.0重量％硼砂的水溶液水煮沸后(硼砂水溶液、沉淀的液固比为10：1)，加入石灰水调节pH＝9，继续保持微沸20min，过滤，滤液加盐酸调节pH＝3后静置15h，过滤得第一沉淀。

第一沉淀用95体积％的乙醇溶解(第一沉淀、溶剂的体积比为1：10)，离心去除不溶物，上清液中加入饱和醋酸铅溶液，直至不再有沉淀生成为止，过滤，将得到的沉淀用水洗涤3次，弃去滤液和洗涤液，得到第二沉淀。

第二沉淀溶解(第二沉淀、溶剂的体积比为1：80，溶剂为20％乙醇)后以1BV/h的速度通过D001型阳离子交换树脂柱脱铅，用1BV的去离子水以2BV/h的流速水赶，收集流出液和水赶液并且减压浓缩至干(减压浓缩，温度为60℃，真空度为0.09MPa)。

所得芦丁粗品用体积浓度为95体积％的乙醇加热溶解(加热温度为100℃，芦丁粗品、溶剂的体积比为1：40)后离心，离心后上清液浓缩(减压浓缩，温度为65℃，真空度为0.09MPa，10min)，浓缩液置于4℃的冰箱中冷却结晶，将晶体过滤后干燥，得芦丁精品10.25g，经HPLC检测纯度为96.51％。

实施例2

1)提取浓缩：加拿大一枝黄花采集后清洗，将全草在50℃温度下干燥至恒重，粉碎后过50目筛，得到加拿大一枝黄花全草干燥粉末。

超高压提取：称取2kg加拿大一枝黄花粉末于聚丙烯塑料袋中，加入15L温度为80℃的75体积％乙醇后热封，提取温度为80℃，400MPa的压力下进行超高压处理4min，然后泄压，过滤得目标提取液，对滤渣进行第二次提取；第二次提取使用的溶剂也是15L温度为80℃的75体积％乙醇，提取条件与第一次提取相同，合并两次的提取液。

将提取液浓缩(减压浓缩，温度为60℃，真空度为0.09MPa)，回收乙醇后浓缩液加入4.5倍的水稀释，离心，分离得到上清液和沉淀。

2)绿原酸的纯化：将离心后所得上清液液通过截留分子量为1000道尔顿的超滤膜得到超滤液。超滤液过ADS-17型大孔树脂柱，上样量为7BV，上样流速为1BV/h，用55％(v/v)乙醇洗脱(用量为4.5BV，流速为2.5BV/h)，收集乙醇洗脱液并浓缩干燥(真空干燥，温度55℃，真空度为0.090MPa)，得到绿原酸粗品。

将绿原酸粗品通过4倍体积的60体积％乙醇进行溶解，然后进行重结晶(结晶温度为2℃，结晶时间为12h)，抽滤干燥，得到精品绿原酸40.90g，HPLC检测纯度为96.25％。

3)芦丁的纯化：将离心后所得离心后的沉淀烘干，加入含0.8重量％硼砂的水溶液水煮沸后(硼砂水溶液、沉淀的液固比为15：1)，加入石灰水调节pH＝8.5，继续保持微沸22min，过滤，滤液加盐酸调节pH＝3.5后静置18h，过滤得第一沉淀。

第一沉淀用95体积％的乙醇溶解(第一沉淀、溶剂的积比为1：15)，离心去除不溶物，上清液中加入饱和醋酸铅溶液，直至不再有沉淀生成为止，过滤，将得到的沉淀用水洗涤3次，弃去滤液和洗涤液，得到第二沉淀。

第二沉淀溶解(第二沉淀、溶剂的体积比为1：100，溶剂为15体积％乙醇)后以1BV/h的速度通过Diaion SK-103阳离子交换树脂柱脱铅，用1.2BV的去离子水以2.5BV/h的流速水赶，收集流出液和水赶液并且减压浓缩至干(减压浓缩，温度为65℃，真空度为0.09MPa)。

所得芦丁粗品用体积浓度为95体积％的乙醇加热溶解(加热温度为100℃，芦丁粗品、溶剂的体积比为1：50)，离心后上清液浓缩(减压浓缩，温度为65℃，真空度为0.09MPa，12min)，浓缩液置于4℃的冰箱中冷却结晶，将晶体过滤后干燥，得芦丁精品19.86g，经HPLC检测纯度为97.15％。

实施例3

1)提取浓缩：加拿大一枝黄花采集后清洗，将全草在60℃温度下干燥至恒重，粉碎后过20目筛，得到加拿大一枝黄花全草干燥粉末。

超高压提取：称取500g加拿大一枝黄花粉末适量于聚丙烯塑料袋中，加入6L温度为80℃的70体积％乙醇后热封，提取温度为80℃，400MPa的压力下进行超高压处理4.5min，然后泄压，过滤得目标提取液，提取两次，对滤渣进行第二次提取；第二次提取使用的溶剂也是6L温度为80℃的70体积％乙醇，提取条件与第一次提取相同，合并两次的提取液。

将提取液浓缩，回收乙醇后浓缩液加入4倍的水稀释，离心，分离得到上清液和沉淀。

2)绿原酸的纯化：将离心后所得上清液液通过截留分子量为1000道尔顿的超滤膜得到超滤液。超滤液过NKA-2型大孔树脂柱，上样量为6BV，上样流速为1.2BV/h，用53％(v/v)乙醇洗脱(用量为5.5BV，流速为2.5BV/h)，收集乙醇洗脱液并浓缩干燥(真空干燥，温度52℃，真空度为0.090MPa)，得到绿原酸粗品。

将绿原酸粗品通过3倍体积的55％乙醇进行溶解，然后进行重结晶(结晶温度为3℃，结晶时间为12h)，抽滤干燥，得到精品绿原酸11.03g，HPLC检测纯度为96.31％。

3)芦丁的纯化：将离心后所得离心后的沉淀烘干，加入含1.2重量％硼砂的水溶液水煮沸后(硼砂水溶液、沉淀的液固比为12：1)，加入石灰水调节pH＝8.3，继续保持微沸25min，过滤，滤液加盐酸调节pH＝4.0后静置20h，过滤得第一沉淀。

第一沉淀用95体积％的乙醇溶解(第一沉淀、溶剂的体积比为1：14)，离心去除不溶物，上清液中加入饱和醋酸铅溶液，直至不再有沉淀生成为止，过滤，将得到的沉淀用水洗涤3次，弃去滤液和洗涤液，得到第二沉淀。

第二沉淀溶解(第二沉淀、溶剂的体积比为1：100，溶剂为18％乙醇)后以1.5BV/h的速度通过Amberlite IR-120阳离子交换树脂柱脱铅，用去离子水以3BV/h的流速洗至无醇味，收集流出液并且减压浓缩至干(减压浓缩，温度60℃，真空度为0.090MPa)。

所得芦丁粗品用体积浓度为95体积％的乙醇加热溶解(加热温度为100℃，芦丁粗品、溶剂的体积比为1：80)，离心后上清液浓缩(减压浓缩，温度为65℃，真空度为0.09MPa，4min)，浓缩液置于2℃的冰箱中冷却结晶，将晶体过滤后干燥，得芦丁精品5.47g，经HPLC检测纯度为97.42％。

对比例1

按照实施例1的步骤进行，区别在于：将步骤1)中的超高压提取技术改为冷浸提取，提取溶剂为水，固液比(Kg/L)为1:20，在25℃下浸提48h，提取两次；第二次提取的条件与第一次相同，第二次的提取底物为第一次提取后得到的滤渣。

本实施例经提取纯化得到绿原酸16.43g，HPLC检测纯度为94.21％；芦丁9.26g，芦丁纯度HPLC测定为92.93％。

对比例2

按照实施例1的步骤进行，区别在于：将步骤1)中的超高压提取技术改为热回流提取，提取溶剂为水，固液比(Kg/L)为1:15，提取温度为100℃，时间为2h。

本实施例经提取纯化得到绿原酸35.63g，HPLC检测纯度为94.72％；芦丁14.47g，芦丁纯度HPLC测定为95.77％。

对比例3

按照实施例1的步骤进行，区别在于：将步骤1)中的超高压提取技术改为超声提取，提取溶剂为水，固液比(Kg/L)为1:10，超声频率为30KHz，提取时间为30min。

本实施例经提取纯化得到绿原酸8.12g，HPLC检测含量为92.18％；芦丁4.36g，芦丁纯度HPLC测定为93.93％。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims

1.一种从加拿大一枝黄花中提取绿原酸和芦丁的方法，其特征在于，所述方法包括：

1）提取浓缩：将加拿大一枝黄花、醇类化合物进行至少一次提取，单次提取依次包括热封处理、加压处理和过滤，后一次的提取底物为前一次提取得到的滤渣，将所有提取得到的滤液合并得到提取液；将所述提取液依次进行浓缩、加水稀释、离心，以得到上清液和沉淀；

2）绿原酸的纯化：将所述上清液通过超滤膜得到超滤液；将所述超滤液过大孔树脂柱，通过乙醇洗脱；将乙醇洗脱液浓缩干燥得到绿原酸粗品，将所述绿原酸粗品溶解后进行结晶；

3）芦丁的纯化：将所述沉淀、硼砂水溶液进行接触反应，将体系的pH调节为碱性后继续反应，反应结束后过滤取第一滤液；将所述第一滤液调节至酸性进行酸沉，静置后过滤得第一芦丁沉淀；将所述第一芦丁沉淀溶解，取芦丁上清液，将所述芦丁上清液、饱和醋酸铅溶液混合直至无沉淀生成，过滤得第二芦丁沉淀；将所述第二芦丁沉淀溶解后过阳离子交换树脂柱脱铅，水洗至洗脱液无醇味，收集流出液并且浓缩至干，得到芦丁粗品；将所述芦丁粗品溶解，取芦丁粗品上清液浓缩后进行结晶；

在步骤1）中，所述热封处理至少满足以下条件：温度为70~90℃，在密封条件下进行；

所述加压处理至少满足以下条件：压力为200~500MPa，时间为3~5min，温度为70~90℃；

在单次所述提取中，料液比为1：1～100Kg/L；

所述提取的次数为2~3次；

所述醇类化合物采用20~90体积%的乙醇提供；

稀释后的体积为浓缩液体积的1.05～10倍；

在步骤2）中，所述超滤膜的截留分子量为1000~3000道尔顿；

所述大孔树脂柱中大孔树脂为60～80目的中极性或极性大孔树脂，所述大孔树脂柱选自ADS-17型大孔树脂柱、NKA-9型大孔树脂柱或NKA-2型大孔树脂柱；

所述大孔树脂柱的层析至少满足以下条件：上样量为2~8BV，上样流速为0.5~1.5BV/h；

在步骤3）中，所述硼砂水溶液的浓度为0.1~5重量%，所述硼砂水溶液、沉淀的液固比为（5～20）：1；

所述接触反应至少满足以下条件：加热至沸腾；

在步骤3）中，体系的pH调节通过添加碱液调节至pH为8~9，所述碱液为石灰水；

所述酸沉至少满足以下条件：调节后的pH为3~5，静置时间为5~20h；

所述第一芦丁沉淀的溶解采用的溶剂选自乙醇和水中至少一种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加拿大一枝黄花至少满足以下条件：全草粉末，在40℃～60℃温度下干燥至恒重，平均粒径为20~80目；

所述加拿大一枝黄花采集时间为7~8月。

3.根据权利要求1-2中任意一项所述的方法，其特征在于，所述乙醇洗脱包括：乙醇洗脱体积为4~8BV，洗脱流速为2～4BV/h，所述乙醇为40~60体积%的乙醇。

4.根据权利要求1-2中任意一项所述的方法，其特征在于，所述绿原酸粗品的溶解使用的溶剂选自甲醇、乙醇、水中的至少一种；单次溶解中，所述绿原酸粗品、溶剂的体积比为1：1~10；

结晶温度为2~10℃。

5.根据权利要求1-2中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤3）中，所述阳离子交换树脂柱的层析至少满足以下条件：上柱流速为0.5～1.5BV/h，水洗的流速为1～4BV/h；

阳离子交换树脂与加拿大一枝黄花原料的体积质量比mL/g为（0.1～1.0）：1；

所述阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，选自为Amberlite IR-120阳离子交换树脂、Diaion SK-103阳离子交换树脂或D001型阳离子交换树脂；

所述第一芦丁沉淀、第二芦丁沉淀和芦丁粗品的溶解使用的溶剂各自独立地选自甲醇、乙醇、水中的至少一种；单次溶解中，待溶解固体、溶剂的体积比为1：10～100；

在步骤3）中，结晶温度为2～10℃。

6.根据权利要求1-2中任意一项所述的方法，其特征在于，所述浓缩采用减压浓缩，温度为50～65°C，真空度为0.09MPa～0.10MPa。