CN114236018B - 一种醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法 - Google Patents

一种醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法 Download PDF

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CN114236018B CN202210168920.9A CN202210168920A CN114236018B CN 114236018 B CN114236018 B CN 114236018B CN 202210168920 A CN202210168920 A CN 202210168920A CN 114236018 B CN114236018 B CN 114236018B
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Abstract

本申请属于色谱分析技术领域，尤其涉及一种醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法。本申请的检测方法，采用高效液相色谱对醋酸卡泊芬净及其异构体进行检测；高效液相色谱法检测过程中的流动相为流动相A和流动相B；流动相A为第一混合溶液，流动相B为乙腈或/和第二混合溶液；第一混合溶液为高氯酸和氯化钠水溶液，第二混合溶液为乙腈和四氢呋喃；采用等度洗脱的方式使流动相通过色谱柱；色谱柱为亲水作用的HILIC色谱柱；高效液相色谱检测过程中，供试品采用稀释剂稀释后在进行检测。本申请提供一种醋酸卡泊芬净及其异构体的高效液相分析方法，可有效同时检出醋酸卡泊芬及其净异构体，本申请的分析方法具有耐用性、灵敏度高，其专属性良好。

Description

一种醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法
技术领域
本申请属于色谱分析技术领域，尤其涉及一种醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法。
背景技术
醋酸卡泊芬净，属广谱抗真菌药物，对包括曲霉和念珠菌属在内的真菌均有良好的抗菌作用。醋酸卡泊芬净为肺念菌素B0的半合成衍生物，醋酸卡泊芬净异构体由起始物料中纽莫康定C0通过合成路线逐步传递到终产品醋酸卡泊芬净原料药中，并生成非药效成分类卡泊芬净（醋酸卡泊芬净异构体，简称杂质C），影响产品质量。对醋酸卡泊芬净异构体的控制是产品开发和质量控制的关键项目。目前，尚无药典收载醋酸卡泊芬净异构体的检测方法。
发明内容
为了填补现有技术的空白，本申请提供一种醋酸卡泊芬净及其异构体的高效液相分析方法，可有效同时检出醋酸卡泊芬及其净异构体，本申请的分析方法具有耐用性、灵敏度高，其专属性良好。
本申请第一方面提供了一种醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法，
采用高效液相色谱对醋酸卡泊芬净及其异构体进行检测；
所述高效液相色谱检测过程中的流动相为流动相A和流动相B；所述流动相A为第一混合溶液，所述流动相B为乙腈或/和第二混合溶液；所述第一混合溶液为高氯酸和氯化钠水溶液，所述第二混合溶液为乙腈和四氢呋喃；
所述流动相A在流动相中的体积分数为18%~28%，所述流动相B在流动相中的体积分数为72%~82%，等度洗脱的时间为0~40 min；
所述高效液相色谱检测过程中采用等度洗脱的方式使流动相通过色谱柱；所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱为亲水作用的HILIC色谱柱；
所述高效液相色谱检测过程中，供试品采用稀释剂稀释后再进行检测；
所述醋酸卡泊芬净具有式1所示结构式，所述醋酸卡泊芬净异构体具有式2所示结构式；
Figure 893716DEST_PATH_IMAGE002
式1；
Figure 622637DEST_PATH_IMAGE004
式2。
其中，所示供试品为含有醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体的样品。
另一实施例中，所述等度洗脱中，所述流动相A在流动相中的体积分数为18%~23%，所述流动相B在流动相中的体积分数为77%~82%。
另一实施例中，所述等度洗脱中，所述流动相A在流动相中的体积分数为24%~28%，所述流动相B在流动相中的体积分数为72%~76%。
另一实施例中，所述第一混合溶液中，所述氯化钠水溶液的质量分数为0.075%~0.15%，所述高氯酸与所述氯化钠水溶液的体积比为1:1000。
具体的，所述第一混合溶液的配制方法为取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g~1.5g加水溶解并稀释至1000mL；优选为：取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g加水溶解并稀释至1000mL。
另一实施例中，所述第二混合溶液中，所述乙腈与所述四氢呋喃的体积比为95:5。
另一实施例中，所述稀释剂包括第一混合溶液和乙腈；所述第一混合溶液与所述乙腈的体积比为(10~40):(60~90)。
具体的，所述稀释剂的第一混合溶液，所述氯化钠水溶液的质量分数为0.075%，所述高氯酸与所述氯化钠水溶液的体积比为1:1000；所述稀释剂的配制方法为取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g加水溶解并稀释至1000mL得到第一混合溶液，将该第一混合溶液与乙腈混合，制得稀释剂。
另一实施例中，所述高效液相色谱检测过程中的流动相流速为0.5~1.5mL/min；所述色谱柱的柱温为25~40℃。
另一实施例中，所述高效液相色谱采用的检测器为紫外检测器，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为200nm~230nm。
另一实施例中，所述色谱柱的粒径为3.0~5.0μm。
具体的，所述亲水作用的HILIC色谱柱为SeQuat®ZIC®-HILIC 150mm×4.6mm,3.5μm。
另一实施例中，所述醋酸卡泊芬净具有式1所示结构式，所述醋酸卡泊芬净异构体具有式2所示结构式；
本申请所述的醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体的结构如表1所示。
表1
Figure 636205DEST_PATH_IMAGE005
本申请公开的醋酸卡泊芬净及其异构体的高效液相色谱检测法，包括：（1）选用亲水作用色谱柱；采用流动相等度洗脱，流动相的A相为高氯酸和氯化钠的第一混合溶液，流动相B为乙腈和四氢呋喃的第二混合溶液；高效液相色谱法所采用的检测器为紫外检测器；（2）精密称定适量测试样品，加空白溶剂溶解后稀释成一定浓度的样品溶液，并在合适的流速与柱温下进行高效液相色谱检测，对样品溶液中的异构体进行分析。本申请方法可有效地同时检测出醋酸卡泊芬净及其异构体，本申请方法灵敏度高，专属性良好。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本申请对比例提供的***适用性溶液的高效液相色谱图；
图2为本申请实施例1提供的***适用性溶液的高效液相色谱图；
图3为本申请实施例2提供的***适用性溶液的高效液相色谱图；
图4为本申请实施例3提供的***适用性溶液的高效液相色谱图；
图5为本申请实施例4提供的***适用性溶液的高效液相色谱图；
图6为本申请实施例5提供的***适用性溶液的高效液相色谱图；
图7为本申请实施例6提供的***适用性溶液的高效液相色谱图；
图8为本申请实施例7提供的专属性验证比较的高效液相色谱图；
图9为本申请实施例7提供的***适用性溶液的高效液相色谱图；
图10为本申请检测方法的醋酸卡泊芬净线性曲线图；
图11为本申请检测方法的醋酸卡泊芬净残差图；
图12为本申请检测方法的醋酸卡泊芬净异构体（杂质C）线性曲线图；
图13为本申请测方法的醋酸卡泊芬净异构体（杂质C）残差图。
具体实施方式
本申请提供了一种醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法，可有效检出醋酸卡泊芬净异构体，填补了现有技术的空白。
下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
其中，以下实施例所用原料或试剂均为市售或自制。
以下实施例的检测方法符合《中国药典》2020版第二部附录高效液相色谱法的规定。
以下实施例的醋酸卡泊芬净异构体简称为杂质C。
对比例
本对比例提供了现有采用超高效液相色谱方法检测醋酸卡泊芬净及其异构体的试验，具体方法包括：
1、EP药典论坛标准（Pharmeuropa 34.1草案）使用超高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长为205nm，选用粒径为1.7μm的氨基色谱柱（Waters ACQUITY UPLCBEH Amide 150mm×2.1mm,1.7um）。流动相A是缓冲盐溶液[取2.88g磷酸二氢铵加水溶解并稀释至500ml，用磷酸调节pH值至3.2]，流动相B是乙腈。以流动相A：流动相B体积比为215：785进行等度洗脱，运行40分钟。
2、***适用性溶液的配制
按照下表2取杂质C置于相对应的容量瓶中，加入空白溶剂(超纯水)溶解并稀释至刻度线，摇匀配制杂质C的母液。再称取醋酸卡泊芬净对照品20mg，置100ml容量瓶中，后精密量取1.0ml杂质C母液置于该容量瓶中，以空白溶剂稀释至容量瓶的刻度，摇匀。
表2 对比例的各杂质母液配制表
Figure 71865DEST_PATH_IMAGE006
3、取***适用性溶液进行测试，进样量为5μL，流速为0.35ml/min，柱温为40℃。***适用性溶液的检测图谱见图1。从图1可知，本对比例可对醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体进行检测。
实施例1
本申请实施例提供了醋酸卡泊芬净及其异构体的检测，具体方法包括：
1、使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长为220nm，选用粒径为3.5μm的亲水作用色谱柱（Kromasil-HILIC-D 250mm×4.6mm, 5μm）。流动相A是高氯酸：0.075%氯化钠（1:1000）的第一混合溶液（取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g加水溶解并稀释至1000mL配制得第一混合溶液），流动相B是乙腈。以流动相A：流动相B体积比为18%：82%进行等度洗脱，运行30分钟。
2、***适用性溶液的配制
按照下表3取杂质C置于相对应的容量瓶中，加入空白溶剂[步骤1的流动相A：乙腈体积比为18%：82%的混合溶液]溶解并稀释至刻度线，摇匀配制杂质C的母液。再称取醋酸卡泊芬净对照品40mg，置20ml容量瓶中，后精密量取1.0ml杂质C母液置于20ml容量瓶中，以空白溶剂稀释至该容量瓶刻度，摇匀。
表3实施例1的各杂质母液配制表
Figure 843512DEST_PATH_IMAGE007
3、取***适用性溶液进行测试，进样量为20μL，流速为1.0ml/min，柱温为35℃。***适用性溶液的检测图谱见图2。从图2可知，本实施例可对醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体进行检测。
实施例2
本申请实施例提供了醋酸卡泊芬净及其异构体的检测，具体方法包括：
1、使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长为220nm，选用粒径为3.5μm的亲水作用色谱柱（SeQuat®ZIC®-HILIC 150mm×4.6mm, 3.5μm）。流动相A是高氯酸：0.075%氯化钠（1:1000）的第一混合溶液（取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g加水溶解并稀释至1000mL配制得第一混合溶液），流动相B是乙腈。以流动相A：流动相B体积比为18%：82%进行等度洗脱，运行40分钟。
2、***适用性溶液的配制：同实施例1。
3、取***适用性溶液进行测试，进样量为20μL，流速为1.0ml/min，柱温为35℃。***适用性溶液的检测图谱见图3。从图3可知，本实施例可对醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体进行检测。
实施例3
本申请实施例提供了醋酸卡泊芬净及其异构体的检测，具体方法包括：
1、使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长为220nm，选用粒径为3.5μm的亲水作用色谱柱（SeQuat®ZIC®-HILIC 150mm×4.6mm, 3.5μm）。流动相A是高氯酸：0.075%氯化钠（1:1000）的第一混合溶液（取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g加水溶解并稀释至1000mL配制得第一混合溶液），流动相B是乙腈：四氢呋喃（体积比为95:5）的第二混合溶液。以流动相A：流动相B体积比为18%：82%进行等度洗脱，运行40分钟。
2、***适用性溶液的配制：同实施例1。
3、取***适用性溶液进行测试，进样量为20μL，流速为1.0ml/min，柱温为35℃。***适用性溶液的检测图谱见图4。从图4可知，本实施例可对醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体进行检测。
实施例4
本申请实施例提供了醋酸卡泊芬净及其异构体的检测，具体方法包括：
1、使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长设为220nm，选用粒径为3.5μm的亲水作用色谱柱（SeQuat®ZIC®-HILIC 150mm×4.6mm, 3.5μm）。流动相A是高氯酸：0.075%氯化钠（1:1000）的第一混合溶液（取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g加水溶解并稀释至1000mL配制得第一混合溶液），流动相B是乙腈：四氢呋喃（体积比为95:5）的第二混合溶液。以流动相A：流动相B体积比为20%：80%进行等度洗脱，运行40分钟。
2、***适用性溶液的配制：同实施例1。
3、取***适用性溶液进行测试。进样量为20μL，流速为0.8ml/min，柱温为30℃。***适用性溶液的检测图谱见图5。从图5可知，本实施例可对醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体进行检测。
实施例5
本申请实施例提供了醋酸卡泊芬净及其异构体的检测，具体方法包括：
1、使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长设为220nm，选用粒径为3.5μm的亲水作用色谱柱（SeQuat®ZIC®-HILIC 150mm×4.6mm, 3.5μm）。流动相A是高氯酸：0.15%氯化钠（1:1000）的第一混合溶液（取高氯酸1.0ml和氯化钠1.5g加水溶解并稀释至1000mL配制得第一混合溶液），流动相B是乙腈：四氢呋喃（体积比为95:5）的第二混合溶液。以流动相A：流动相B体积比为24%：76%进行等度洗脱，运行40分钟。
2、***适用性溶液的配制：同实施例1。
3、取***适用性溶液进行测试。进样量为20μL，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。***适用性溶液的检测图谱见图6。从图6可知，本实施例可对醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体进行检测。
实施例6
本申请实施例提供了醋酸卡泊芬净及其异构体的检测，具体方法包括：
1、使用高效液相色谱仪紫外可见检测器，紫外检测器波长设为220nm，选用粒径为3.5μm的亲水作用色谱柱（SeQuat®ZIC®-HILIC 150mm×4.6mm, 3.5μm）。流动相A是高氯酸：0.075%氯化钠（1:1000）的第一混合溶液（取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g加水溶解并稀释至1000mL配制得第一混合溶液），流动相B是乙腈：四氢呋喃（95:5）（体积比为95:5）的第二混合溶液。以流动相A：流动相B体积比为24%：76%进行等度洗脱，运行40分钟。
2、***适用性溶液的配制：同实施例1。
3、取***适用性溶液进行测试。进样量为20μL，流速为1.0ml/min，柱温为35℃。***适用性溶液的检测图谱见图7。从图7可知，本实施例可对醋酸卡泊芬净和醋酸卡泊芬净异构体进行检测。
实施例7
本申请实施例对本申请的醋酸卡泊芬及其净异构体检测方法的方法学考察，具体方法包括：
（1）检测条件：使用高效液相色谱仪紫外可见检测器对，紫外检测器波长设为220nm，选用粒径为3.5μm的亲水作用色谱柱（SeQuat®ZIC®-HILIC 150mm×4.6mm, 3.5μm）。流动相A是高氯酸：0.075%氯化钠（1:1000）的第一混合溶液（取高氯酸1.0ml和氯化钠0.75g加水溶解并稀释至1000mL配制得第一混合溶液），流动相B是乙腈：四氢呋喃（体积比为95:5）的第二混合溶液。以该流动相A：乙腈体积比为24%：76%的混合溶液为稀释剂配制供试品。以流动相A：流动相B体积比为24%：76%进行等度洗脱，运行40分钟。进样量为20μL，流速为1.0ml/min，柱温为35℃。
（2）溶液的配制
a、杂质C（为醋酸卡泊芬净异构体）定位溶液的配制：
取杂质C约10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至容量瓶刻度，摇匀，作为杂质C储备液，精密量取1mL的杂质C储备液，置20ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为杂质C定位溶液。（10μg/ml），本实施例所用的稀释剂的配制方法为取步骤1的流动相A和乙腈混合配制得到，流动相A：乙腈的体积比为24%：76%。
b、***适用性溶液的配制：
称取醋酸卡泊芬净工作对照品约40mg，置20ml容量瓶中，加入1ml杂质C储备液，再加稀释剂溶解并稀释至容量瓶刻度，摇匀，作为***适用性溶液。
c、供试品溶液的配制：
取醋酸卡泊芬净约40mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得。
d、对照溶液配制：
精密移取步骤c的供试品溶液1ml，置100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得。
e、杂质C定量限溶液的配制：
精密量取杂质C定位溶液3.0ml，置10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得。
f、杂质C检测限溶液的配制溶液：
精密移取杂质C定量限溶液3.0ml，置10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得。
g、醋酸卡泊芬净定量限溶液的配制：
精密称取醋酸卡泊芬净工作对照品约10mg，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至容量瓶刻度，摇匀，作为对照品储备溶1，再精密量取上述溶液（对照品储备溶1）2ml，置20ml量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶刻度，作为对照品储备溶液2，再精密量取上述溶液（对照品储备溶2）3ml，置10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得。
h、醋酸卡泊芬净检测限溶液的配制：
精密移取步骤g的醋酸卡泊芬净定量限溶液3.0ml，置10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得。
i、醋酸卡泊芬净线性储备溶液配制：
取醋酸卡泊芬净工作对照品10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得。
j、杂质C线性储备液的配制：
取杂质C对照品约10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得。
k、杂质C的 LOQ准确度溶液的配制：
精密移取步骤j的杂质C线性储备液3ml，置10ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶刻度，作为LOQ对照品储备液；取醋酸卡泊芬净供试品约40mg，精密称定，置20ml容量瓶中，精密加入LOQ对照品储备液1ml，再加稀释剂溶解后稀释至刻度，摇匀，即得。（平行配制3份）
l、杂质C的100%准确度溶液的配制：
取醋酸卡泊芬净供试品约40mg，精密称定，置20ml容量瓶中，精密加入杂质C储备液1ml，再加稀释剂溶解后稀释至容量瓶刻度，摇匀，作为100%准确度溶液。（平行配制3份）。
m、杂质C的150%准确度溶液的配制：
取醋酸卡泊芬净供试品约40mg，精密称定，置20ml容量瓶中，精密加入杂质C储备液1.5ml，再加稀释剂溶解后稀释至容量瓶刻度，摇匀，作为150%准确度溶液。（平行配制3份）
n、供试品加标溶液的配制：
取醋酸卡泊芬净供试品约40mg，精密称定，置20ml容量瓶中，精密加入杂质C储备液1.0ml，再加稀释剂溶解后稀释至容量瓶刻度，摇匀，作为加标供试品溶液。
o、供试品加标对照溶液的配制：
精密移取步骤n的供试品加标溶液1.0ml，置100ml容量瓶中，加稀释剂稀释至容量瓶刻度，摇匀，即得
（3）按上述的色谱参数对建立的醋酸卡泊芬净及其异构体的高效液相色谱分析方法进行方法学验证。验证项目包括***适用性、专属性、定量限、检测限、线性、准确的、精密度（包括重复性及重现性）、溶液稳定性和耐用性。
（4）方法学验证结果
通过以上方法进行方法学验证，其验证结果如下所示：
1、本实施例检测方法的专属性结果：空白溶液对检测无干扰，***适用性溶液中醋酸卡泊芬净峰与杂质C峰（醋酸卡泊芬净异构体峰）的分离度为3.9。
2、本实施例检测方法的定量限结果如表4所示，表4结果显示，①醋酸卡泊芬净定量限浓度为3.1993μg/ml，相当于供试品浓度的0.160%，六针LOQ峰面积RSD为3.4%；②杂质C定量限浓度为2.9444μg/ml，相当于供试品浓度的0.147%，六针LOQ峰面积RSD为5.6%。
表4
Figure 731834DEST_PATH_IMAGE008
3、本实施例检测方法的检测限结果如表5、表6、表7和图10~图13所示，表5结果显示，①醋酸卡泊芬净检测限浓度为0.9598μg/ml，相当于供试品浓度的0.0480%；②杂质C检测限浓度为0.8833μg/ml，相当于供试品浓度的0.442%。醋酸卡泊芬净线性结果如表6、图10和图11所示，杂质C线性结果如表7、图12和图13所示。表6、表7和图10~图13的结果显示，①醋酸卡泊芬净相关系数为0.9998；响应因子的RSD为1.5%；线性公式截距与限度浓度线性结果比值为2%；残差平方和为0.05398，且残差图中残差点不都在同一侧；②杂质C相关系数为0.9999；响应因子的RSD为1.7%；线性公式截距与限度浓度线性结果比值为0%；残差平方和为4.73742，且残差图中残差点不都在同一侧，杂质C校正因子为0.91，上述结果均符合可接受标准，本实施例的方法线性良好。
表5
Figure 614339DEST_PATH_IMAGE009
表6
Figure 904506DEST_PATH_IMAGE010
表7
Figure 784738DEST_PATH_IMAGE011
4、本实施例检测方法的检测范围结果：①醋酸卡泊芬净检测范围为3.1306μg/mL~20.8709μg/mL，相当于供试品浓度的0.16%~1.04%；②杂质C检测范围为2.7707μg/mL~18.4710μg/mL，相当于限度浓度的27.71%~184.71%，相当于供试品浓度的0.14%~0.92%。
5、本实施例检测方法的准确度结果如表8所示，表8结果显示，LOQ浓度单个回收率在118.3%~124.0%之间，平均回收率为121.0%，回收率（n=3）RSD为2.4%；其它浓度单个回收率在111.8%~119.8%之间，平均回收率为116.5%，回收率（n=6）RSD为3.2%。上述实验结果均符合可接受标准，该方法准确度良好。
表8
Figure 222672DEST_PATH_IMAGE012
6、本实施例检测方法的精密度结果包括重复性和重现性，重复性结果如表9所示，重现性结果如表10和表11所示。表9结果显示，重复性实验结果中供试品溶液未检出C，加标供试品溶液中杂质C单个回收率为95.8%~103.2%，杂质C平均回收率为100.3%，杂质C回收率RSD为2.8%。上述实验结果均符合可接受标准，该方法重复性良好。
表10为不同实验室重现性结果，表11为12份重复性和重现性结果比较结果，表10和表11结果可知，重现性六份供试品溶液中检出杂质C为0.02%，6份加标供试品溶液中杂质C回收率为106.7%~114.8%，杂质C平均回收率为110.1%，杂质C回收率RSD为2.7%； 12份加标供试品溶液中杂质C单个回收率为95.8%~114.8%，杂质C平均回收率为105.2%，杂质C回收率RSD为5.5%。上述实验结果均符合可接受标准，该方法精密度良好。
表9
Figure 580972DEST_PATH_IMAGE013
表10
Figure 53542DEST_PATH_IMAGE014
表11
Figure 104675DEST_PATH_IMAGE015
7、本实施例检测方法的溶液稳定性结果包括供试品溶液的稳定性实验结果和供试品加标溶液的稳定性实验结果，结果如表12和表13所示，结果显示，供试品溶液中未检出杂质C，加标供试品溶液中杂质C峰面积于24小时内变化率最大值为5.93%，加标供试品对照溶液主峰面积在24小时内变化率最大值为9.45%，24h小时内杂质个数均为2个不变。综合以上分析，供试品加标溶液在5℃ 24h内稳定。
表12
Figure 967588DEST_PATH_IMAGE016
表13
Figure 191896DEST_PATH_IMAGE017
8、本实施例检测方法的耐用性结果包括***适用性结果和加标供试品溶液回收率结果，结果如表14和表15所示，结果显示，色谱条件微小变化（不同流速±0.1ml/min；柱温±2℃；不同色谱柱）时，实验结果中杂质C回收率结果与正常条件相比均符合可接受标准。说明方法耐用性良好。
表14
Figure 188147DEST_PATH_IMAGE018
表15
Figure 472498DEST_PATH_IMAGE019
本申请的实施例7的高效液相色谱图和EP药典论坛标准（Pharmeuropa 34.1草案）的高效液相色谱图如图8和图9所示，***适用性***适用性具体数据比较见表16，本申请的醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法的分离度优于EP药典论坛标准（Pharmeuropa 34.1草案）的分离度；同时对本申请方法的***适用性、专属性、检测限、定量限、线性、准确度、重复性、重现性、耐用性均能满足实验要求，符合规定。由此表明本申请检测方法能适用于醋酸卡泊芬净及其异构体的检测。
表16 ***适用性结果对比
Figure DEST_PATH_IMAGE020
以上所述仅是本申请的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。

Claims (6)

1.一种醋酸卡泊芬净及其异构体的检测方法，其特征在于，
采用高效液相色谱对醋酸卡泊芬净及其异构体进行检测；
所述高效液相色谱检测过程中的流动相为流动相A和流动相B；所述流动相A为第一混合溶液，所述流动相B为第二混合溶液；所述第一混合溶液为高氯酸和氯化钠水溶液，所述第二混合溶液为乙腈和四氢呋喃；
所述第二混合溶液中，所述乙腈与所述四氢呋喃的体积比为95:5；
所述流动相A在流动相中的体积分数为18％～24％，所述流动相B在流动相中的体积分数为76％～82％，等度洗脱的时间为0～40min；
所述高效液相色谱检测过程中采用等度洗脱的方式使流动相通过色谱柱；所述高效液相色谱检测过程中的色谱柱为亲水作用的HILIC色谱柱；
所述高效液相色谱检测过程中，供试品采用稀释剂稀释后再进行检测；
所述醋酸卡泊芬净具有式1所示结构式，所述醋酸卡泊芬净异构体具有式2所示结构式；
Figure FDA0003734736510000011
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述第一混合溶液中，所述氯化钠水溶液的质量分数为0.075％～0.15％，所述高氯酸与所述氯化钠水溶液的体积比为1:1000。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述稀释剂包括第一混合溶液和乙腈；所述第一混合溶液与所述乙腈的体积比为(10～40):(60～90)。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测过程中的流动相流速为0.5～1.5mL/min；所述色谱柱的柱温为25～40℃。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用的检测器为紫外检测器，所述高效液相色谱检测过程中的检测波长为200nm～230nm。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的粒径为3.0～5.0μm。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5537425B2 (ja) * 2007-06-26 2014-07-02 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション 凍結乾燥抗真菌組成物
WO2009142761A1 (en) * 2008-05-21 2009-11-26 Teva Gyogyszergyar Zartkoruen Mukodo Reszvenytarsasag Caspofungin bo free of caspofungin co
CN102481336B (zh) * 2009-08-14 2015-11-25 克塞里尔制药公司 从棘白菌素c0中分离和/或提纯棘白菌素b0
KR20120048012A (ko) * 2009-08-14 2012-05-14 셀리아 파마슈티칼즈 에이피에스 뉴모칸딘 화합물을 검출하는 방법
CN102488889B (zh) * 2011-09-26 2014-01-22 上海天伟生物制药有限公司 一种低杂质含量的卡泊芬净制剂及其制备方法和用途
CN103911422B (zh) * 2014-04-21 2015-06-17 北京市药品检验所 抗真菌药物制剂的无菌检测方法
WO2017185030A1 (en) * 2016-04-22 2017-10-26 Fresenius Kabi Usa, Llc Caspofungin formulation with low impurities
CN108250272A (zh) * 2016-12-28 2018-07-06 浙江华谱新创科技有限公司 卡泊芬净高效分离纯化方法
CN111380974A (zh) * 2018-12-30 2020-07-07 山东新时代药业有限公司 一种棘白菌素的检测方法

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