CN114214230A - 一株具有共聚幽门螺杆菌能力的北酸乳杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株具有共聚幽门螺杆菌能力的北酸乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明提供了一株北酸乳杆菌CCFM1207，此北酸乳杆菌CCFM1207可以特异性地与幽门螺杆菌形成共聚体，具体体现在：北酸乳杆菌CCFM1207与幽门螺杆菌的120min共聚率可达58.40％，可见，北酸乳杆菌CCFM1207在清除幽门螺杆菌(不以疾病的诊断和治疗为目的)以及制备幽门螺杆菌黏附清除剂方面具有巨大的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一株具有共聚幽门螺杆菌能力的北酸乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域以及医药技术领域。
背景技术
澳大利亚学者巴里·马歇尔和罗宾·沃伦在1982年发现了幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)，并证明该细菌会感染胃部并导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡。H.pylori呈螺旋形或是S形，是微需氧革兰氏阴性菌。当处于生长期的H.pylori大部分是杆状或是螺旋状，当老化或是死亡时呈球状。目前，世界各地人群均有感染H.pylori且感染率高，在发展中国家人群中的检出率为70-90％，发达国家中的检出率为25-50％。H.pylori感染率与卫生状况密切相关，一般儿童比较容易感染，并能在人体中长期存活，其发病率随着年龄的增加而上升，并与社会经济状况、种族等因素有关。
H.pylori具有粘附性，能够在胃中长期定植，不因胃的蠕动而与食物一起被驱除排出体外。这是由于H.pylori的表面蛋白含有多种粘附分子，能够牢牢粘附在胃上皮细胞上。因此幽门螺杆菌感染是一个长期且慢性的过程，感染后人体一般难以自发清除，除非进行根除治疗或人体胃黏膜发生严重肠化生时，幽门螺杆菌才会在人体自动消失。
目前，Maastricht-5共识及京都共识和中国2016年第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识均推荐铋剂四联(PPI+铋剂+2种抗菌药物)作为主要的经验治疗根除Hp方案。除此之外，某些化学组合物和中药成分对治疗幽门螺杆菌感染也具有相应的有益效果。
例如，公开号为CN111184867A的中国发明专利申请文件中公开发明了一种口服治疗成人幽门螺杆菌感染的化学药物组合物，组合物中至少包含成人常用剂量的磷霉素或其可药用盐、磷霉素氨丁三醇及一种氨基糖苷类药物。但是由于组合物由化学药物组成，对人体健康有相应不可消除的副作用。
又如，公开号为CN112641891A中国发明专利申请文件中公开了一种治疗幽门螺杆菌的大蒜素制剂，该大蒜素制剂的成分包括大蒜素、黄连、丁香叶、薄荷叶、蒲公英、黄芩、麦芽、甘草、茯苓、益生菌粉、党参和山药，该大蒜素制剂对幽门螺杆菌具有较高敏感度，可以有效地抑制幽门螺杆菌的繁殖，维护胃肠道菌群平衡。但是该专利制剂成分较多，且制作原理复杂，成本较高。
自动聚集和协同共聚集是乳杆菌常见的生物学特性，也是发挥益生作用的重要途径。乳杆菌与宿主原生菌或致病菌的共聚是实现致病菌控制或减少的重要策略。例如，公开号为CN102690768B的中国发明专利中公开发明了一株分离自口腔的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)BBE-Y52，这株短乳杆菌能够产生胞外多糖，在口腔环境中促进乳酸菌与其他微生物共聚集形成生物膜，从而抵制病原菌的定殖。例如，公开号为CN112662791A中国发明专利申请文件中公开了具有降胆固醇功能的屎肠球菌132和副干酪乳杆菌201对6种食源性致病菌防控的应用潜力，其中副干酪乳杆菌201与致病菌的共聚作用较强，其对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌和蜡样芽孢杆菌的共聚抑制率达20％-40％。
罗伊氏乳杆菌DSM17648(PylopassTM)是目前最广泛被使用的具有共聚集幽门螺杆菌的益生菌，临床试验表明灭活状态下的菌粉仍然可以降低患者体内的幽门螺杆菌的载量。紧接着专利文献CN103648511A公开发明了一种改进DSM17648与幽门螺杆菌共聚体形成的方法，使其共聚效果更优。
因此，我们可以利用乳杆菌识别幽门螺旋杆菌，附着在其表面，形成共聚合细菌体。共聚合细菌体最后被***掉，促使幽门螺杆菌在胃里的繁殖减少。因此可以显著抑制幽门螺旋杆菌活性，具有调节胃酸能力，帮助杀灭Hp，有效的胃部定植能力和优异的耐胃酸胆盐特性，肠胃通过率高。而这种共聚反应能显著改善慢性胃炎、胃肠溃疡引起的胃痛、胃酸、胃胀等现象，是恢复慢性胃炎和胃肠溃疡的关键环节。
因此，得到一种能够有效的与幽门螺旋杆菌形成共聚合细菌体的乳杆菌，成为研究的重点和难点。
发明内容
本发明提供了一株北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207，所述北酸乳杆菌CCFM1207保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62013，保藏日期为2021年10月25日。
所述北酸乳杆菌CCFM1207来源于健康人群新鲜粪便样品，该菌株经测序分析，其16SrDNA序列如SEQ ID NO.1所示，将测序得到的序列在GeneBank中进行核酸序列比对，与乳杆菌属的同源度为：98.95％；结果显示菌株为北酸乳杆菌，命名为北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207。所述北酸乳杆菌CCFM1207在MRS固体培养基上的菌落呈白色微透明、圆形或略不规则、凸起、表面粗糙。
本发明提供了一种产品，所述产品中含有上述北酸乳杆菌(Lactobacilluskitasatonis)CCFM1207。
在本发明的一种实施方式中，所述产品为食品、药品或保健品。
在本发明的一种实施方式中，所述产品中，北酸乳杆菌的含量至少为5×109CFU/mL或5×109CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述食品为保健食品；或所述食品为使用含有北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207的发酵剂生产得到的乳制品、豆制品或果蔬制品；或所述食品为含有北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207的饮料或零食。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵剂的制备方法为将上述北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207按照占培养基总质量2～4％(v/v)的接种量接种到培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用生理盐水清洗3次后用冻干保护剂重悬，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，得到发酵剂。
在本发明的一种实施方式中，所述冻干保护剂和菌体的质量比为2:1。
在在本发明的一种实施方式中，所述冻干保护剂包含130g/L的脱脂奶粉。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基包含占培养基总质量87.7％的水、占培养基总质量10％的脱脂乳、占培养基总质量0.5％的葡萄糖、占培养基总质量1.5％的胰蛋白胨以及占培养基总质量0.3％的酵母浸膏。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的pH为6.8。
在本发明的一种实施方式中，所述药品含有上述北酸乳杆菌CCFM1207、药物载体和/或药用辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。
在本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含赋形剂和/或附加剂。
在本发明的一种实施方式中，所述赋形剂包含黏合剂、填充剂、崩解剂和/或润滑剂。
在本发明的一种实施方式中，所述附加剂包含增溶剂、助溶剂、潜溶剂和/或防腐剂。
在本发明的一种实施方式中，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本发明还提供了一种含有上述北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207的微生物制剂。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物制剂中，北酸乳杆菌的含量至少为5×109CFU/mL或5×109CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物制剂为固态、液态或粉末状。
本发明还提供了一种利用上述北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207在制备预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的产品中的应用，所述应用不以疾病的诊断和治疗为目的。
在本发明的一种实施方式中，所述产品为食品、药品或保健品。
在本发明的一种实施方式中，所述产品中，北酸乳杆菌的含量至少为5×109CFU/mL或5×109CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述食品为保健食品；或所述食品为使用含有北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207的发酵剂生产得到的乳制品、豆制品或果蔬制品；或所述食品为含有北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207的饮料或零食。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵剂的制备方法为将上述北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207按照占培养基总质量2～4％(v/v)的接种量接种到培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用生理盐水清洗3次后用冻干保护剂重悬，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，得到发酵剂。
在本发明的一种实施方式中，所述冻干保护剂和菌体的质量比为2:1。
在在本发明的一种实施方式中，所述冻干保护剂包含130g/L的脱脂奶粉。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基包含占培养基总质量87.7％的水、占培养基总质量10％的脱脂乳、占培养基总质量0.5％的葡萄糖、占培养基总质量1.5％的胰蛋白胨以及占培养基总质量0.3％的酵母浸膏。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的pH为6.8。
在本发明的一种实施方式中，所述药品含有上述北酸乳杆菌CCFM1207、药物载体和/或药用辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。
在本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含赋形剂和/或附加剂。
在本发明的一种实施方式中，所述赋形剂包含黏合剂、填充剂、崩解剂和/或润滑剂。
在本发明的一种实施方式中，所述附加剂包含增溶剂、助溶剂、潜溶剂和/或防腐剂。
在本发明的一种实施方式中，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本发明还提供了上述北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207在共聚集幽门螺杆菌方面不以疾病的诊断和治疗为目的的应用。
本发明还提供了一种降低幽门螺杆菌载量的抑制剂，所述幽门螺杆菌抑制剂含有上述北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207。
有益效果
1、本发明提供了一株北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207，此北酸乳杆菌CCFM1207能够特异性地结合胃部已存在的幽门螺杆菌，阻止其继续生长形成定殖在胃部的致病菌生物膜。具体体现在：
北酸乳杆菌CCFM1207具有共聚集致病菌幽门螺杆菌的能力，120分钟共聚率可达58.40％，形成肉眼可见的絮状共聚体。
由此可见，北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207在降低幽门阳性患者体内幽门螺杆菌载量(不以疾病的诊断和治疗为目的)以及制备幽门螺杆菌特异性结合拮抗剂方面具有巨大的应用前景。
2、通过体外模拟人胃液环境进行共聚集试验，北酸乳杆菌(Lactobacilluskitasatonis)CCFM1207具有较强的耐酸性，可以有效地聚集幽门螺杆菌，在短时间内达到较高共聚率、形成絮状的共聚体。
同时，不同孵育转速试验测试共聚集作用的稳定性，该试验证明北酸乳杆菌CCFM1207能够在0-250r/min的孵育转速下发挥较好的共聚幽门的作用，这表明共聚集作用可以克服人在进食、消化等生理过程中形成的剪切力。
由此可见，北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207在制备预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的产品(如食品或药品等)中具有巨大的应用前景。
3、北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)2003年从嗜酸乳杆菌中分离得到，目前嗜酸乳杆菌已被纳入***下发的《可用于食品的菌种名单》，可见本发明的有效成分为北酸乳杆菌CCFM1207的产品不会使得幽门螺杆菌产生耐药性，同时，在治疗过程中不会导致患者产生不良反应。
生物材料保藏
一株北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207，分类学命名为Lactobacillus kitasatonis，已于2021年10月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62013，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1：北酸乳杆菌的生长曲线。
图2：与幽门螺杆菌共聚集的乳杆菌的筛选。
图3：超声对乳杆菌与幽门螺杆菌共聚作用的影响。
图4：孵育转速对乳杆菌与幽门螺杆菌共聚作用的影响。
图5：北酸乳杆菌与幽门螺杆菌共聚体的宏观视图。
图6：北酸乳杆菌与幽门螺杆菌共聚体的扫描电镜图；其中，图(a)和(b)分别代表微观电子显微镜不同拍摄倍数(5000×，12000×)下的北酸乳杆菌CCFM1207与幽门螺杆菌聚集体。
具体实施方式
下述实施例中涉及的幽门螺杆菌为来源于NTCC国家典型培养物保藏中心的幽门螺杆菌SS1；下述实施例中涉及的其他乳杆菌均来源于江南大学生物技术研究中心；下述实施例中涉及的NaCl购自国药集团；下述实施例中涉及的哥伦比亚培养基购自英国OXOID公司；下述实施例中涉及的无菌脱纤维绵羊血购自杭州新锐公司；下述实施例中涉及的BHI液体培养基购自青岛海博公司。
下述实施例中所涉及的鼠李糖乳杆菌SLT6来源于江南大学生物技术研究中心。
下述实施例中所涉及的乳杆菌分别为：
罗伊氏乳杆菌17648公开于专利WO2007073709A1中；
干酪乳杆菌GL1-GL13、罗伊氏乳杆菌LYS1、LYS3、LYS4、LYS5、鼠李糖乳杆菌SLT3、SLT4、SLT5、SLT6、嗜酸乳杆菌S1、S2、S3、S6、S8和发酵乳杆菌FJ1-FJ12均来源于江南大学生物技术研究中心。
下述实施例中涉及的培养基与试剂如下：
MRS固体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80 1mL/L、琼脂20g/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
MRS液体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80 1mL/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
哥伦比亚血平板：39g哥伦比亚培养基固体粉末溶于1L水中，121℃灭菌15min，待冷却到55℃～60℃后加入7.5％(v/v)的无菌脱纤维绵羊血，混匀后倒板。
BHI液体培养基(g/L)：胰蛋白胨10.0g/L、牛心浸粉17.5g/L、氯化钠5.0g/L、葡萄糖2.0g/L、磷酸氢二钠(12H2O)2.5g/L、pH值7.4±0.2。
人工胃液(g/L)：胃蛋白酶(猪胃蛋白酶)3g/L，氯化钠5g/L，调节pH值为4.0±0.2。
下述实施例中涉及的检测方法如下：
活菌数的检测方法：采用国标《GB 4789.35-2016食品安全国家标准食品微生物学检测乳酸菌检测》。
共聚率的检测及计算方法：
分别测定乳杆菌、混合菌液反应前/后(0min/T min)的OD值，根据以下公式计算共聚率：共聚率(％)＝[(OD600乳杆+OD600幽门)-2×OD600混合t min]/(OD600乳杆+OD600幽门)×100。(共聚率测定法具体可参见文献：Chen X,Tian F,Liu X,et al.In vitro screening oflactobacilli with antagonistic activity against Helicobacter pylori fromtraditionally fermented foods.[J].Journal of Dairy Science,2010,93(12):5627-5634)。
下述实施例中涉及的幽门螺杆菌菌体的制备方法如下：
将幽门螺杆菌在哥伦比亚血平板上划线后，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养3天，得到单菌落；挑取单菌落接种于含5％(v/v)胎牛血清的BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天得到种子液；将种子液以2％(v/v)的接种量接种于BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天，得到幽门螺杆菌菌液；将幽门螺杆菌菌液8000g离心10min，得到幽门螺杆菌菌体；
其中，哥伦比亚血平板：39g哥伦比亚培养基固体粉末溶于1L水中，121℃灭菌15min，待冷却到55℃～60℃后加入7.5％(v/v)的无菌脱纤维绵羊血，混匀后倒板。
下述实施例中涉及的鼠李糖乳杆菌菌体的制备方法如下：
将鼠李糖乳杆菌划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到鼠李糖乳杆菌菌体。
下述实施例中涉及的北酸乳杆菌菌体的制备方法如下：
将北酸乳杆菌划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到北酸乳杆菌菌体。
实施例1：北酸乳杆菌的筛选及鉴定
1、筛选
以来源于健康人群新鲜粪便为样本，将样本经预处理后，在30％左右甘油中保存于-80℃冰箱，取出解冻后，混匀样本吸取0.5mL样本加到4.5mL 0.9％生理盐水进行梯度稀释，选择合适的梯度稀释液涂布在MRS固体培养基上，于37℃培养48h，挑取典型菌落至MRS平板上划线纯化，挑取单菌落转接至液体MRS液体培养基增菌，30％甘油保藏，得到菌株CCFM1207。
2、鉴定
提取菌株CCFM1207的基因组，将菌株CCFM1207的16S rDNA进行扩增和测序(由上海美吉生物医药科技有限公司完成)，经测序分析，该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，将该序列在GenBank中进行比对，与乳杆菌属的同源度为：98.95％；结果显示菌株为北酸乳杆菌，命名为北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207。
实施例2：北酸乳杆菌CCFM1207菌体的培养
将实施例1制备得到的北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207接入MRS固体培养基中，于37℃培养48h后，观察其菌落并在显微镜下对其菌体进行观察，发现其菌落呈白色微透明、圆形或略不规则、凸起、表面粗糙。
将北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)CCFM1207接入MRS液体培养基中分别于10～50℃下培养48h，培养过程中，间隔一段时间通过酶标仪测量培养液的OD600，发现北酸乳杆菌CCFM1207在30～37℃生长最佳，培养18～24h达到生长稳定期，结果如图1所示。
实施例3：北酸乳杆菌共聚集致病菌幽门螺杆菌的作用
具体步骤如下：
(1)幽门螺旋杆菌的培养：
将幽门螺杆菌在哥伦比亚血平板上划线后，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养3天，得到单菌落；挑取单菌落接种于含5％(v/v)胎牛血清的BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天得到种子液；
将种子液以2％(v/v)的接种量接种于BHI液体培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天，得到幽门螺杆菌菌液；
将幽门螺杆菌菌液8000g离心10min，得到幽门螺杆菌菌体，用人工胃液(pH＝4)调节菌溶液浓度为OD600＝0.5，得到幽门螺杆菌菌悬液。
(2)北酸乳杆菌CCFM1207和鼠李糖乳杆菌SLT6的培养
将北酸乳杆菌CCFM1207和鼠李糖乳杆菌SLT6分别划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；
将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，分别制备得到北酸乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌体，用PBS缓冲液(pH＝7.42)调节，制备得到菌溶液浓度均为OD600＝0.5的北酸乳杆菌CCFM1207菌悬液和鼠李糖乳杆菌SLT6菌悬液。
(3)取步骤(1)制备得到的调好菌浓度的幽门螺杆菌菌悬液(2mL)分别与2mL北酸乳杆菌CCFM1207菌悬液、2mL鼠李糖乳杆菌SLT6菌悬液(等体积比)进行充分震荡混合分别制备得到北酸乳杆菌与幽门螺旋杆菌混合液，鼠李糖乳杆菌SLT6与幽门螺旋杆菌混合液。
(4)分别将步骤(3)制备得到的混合液在室温26℃条件下，静置孵育0min，4min，10min，30min，60min，90min，120min，150min，180min。
分别测定乳杆菌、混合菌液反应前/后(0min/T min)的OD值，并计算共聚率。结果如表1和图2所示：
表1：乳杆菌与幽门螺杆菌的共聚率
进一步研究这种共聚作用发生的时间因素发现(如表1所示)鼠李糖SLT6在0～180min对幽门螺杆菌均未出现强共聚作用，而北酸乳杆菌CCFM1207与幽门螺杆菌的共聚率在10min内可达40％以上，并且随着时间的延长，共聚率增加。因此得出结论，北酸乳杆菌CCFM1207具有短时间内黏附并聚集幽门螺杆菌的能力。
(5)不同菌株的外人工模拟胃液环境共聚集实验
将待测试的乳杆菌划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到乳杆菌菌体，用PBS(pH＝7.42)调节菌溶液浓度为OD600＝0.5。
分别将39株乳杆菌按照上述方法，制备得到菌悬液。
取步骤(1)制备得到的调好菌浓度的幽门螺杆菌菌悬液分别同39株乳杆菌菌悬液各2mL，等体积比混合，并充分震荡10s以混合均匀。室温26℃条件下，静置孵育120min。分别测定乳杆菌与幽门螺旋杆菌的混合菌液反应后(T min)的OD值，并计算共聚率，结果如表2和图2所示。
表2：不同乳杆菌与幽门螺旋杆菌的混合菌液反应后的共聚率
由图2，通过对干酪、罗伊氏、鼠李糖、嗜酸和发酵乳杆菌与幽门螺杆菌的体外人工模拟胃液环境共聚集实验的筛选，得到一株效果较优的北酸乳杆菌CCFM1207，其共聚率可以达到42％以上。
实施例4：超声对北酸乳杆菌与幽门螺杆菌共聚作用的影响
具体步骤如下：
(1)幽门螺旋杆菌的培养：
将幽门螺杆菌在哥伦比亚血平板上划线后，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养3天，得到单菌落；挑取单菌落接种于含5％(v/v)胎牛血清的BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天得到种子液；
将种子液以2％(v/v)的接种量接种于BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天，得到幽门螺杆菌菌液；将幽门螺杆菌菌液8000g离心10min，得到幽门螺杆菌菌体，用人工胃液(pH＝4)调节菌溶液浓度为OD600＝0.5备用，得到幽门螺杆菌菌悬液。
(2)北酸乳杆菌CCFM1207和鼠李糖乳杆菌SLT6的培养
将北酸乳杆菌CCFM1207和鼠李糖乳杆菌SLT6分别划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；
将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，分别制备得到北酸乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌体，用PBS缓冲液(pH＝7.42)调节，制备得到菌溶液浓度均为OD600＝0.5的北酸乳杆菌CCFM1207菌悬液和鼠李糖乳杆菌SLT6菌悬液。
(3)超声组：在超声频次2000Hz以上，对步骤(2)制备得到的北酸乳杆菌CCFM1207菌悬液和鼠李糖乳杆菌SLT6菌悬液进行超声处理，时间为12min，超声结束后，分别取菌悬液2mL，分别与步骤(1)制备得到的幽门螺杆菌菌悬液(2mL)进行等体积比混合，充分震荡后，在室温26℃条件下，静置孵育120min；分别制备得到北酸乳杆菌与幽门螺旋杆菌混合液1，鼠李糖乳杆菌SLT6与幽门螺旋杆菌混合液2；
不超声组：分别将步骤(2)制备得到的北酸乳杆菌CCFM1207菌悬液和鼠李糖乳杆菌SLT6菌悬液2mL，分别与步骤(1)制备得到的幽门螺杆菌菌悬液(2mL)进行等体积比混合，充分震荡后，在室温26℃条件下，静置孵育120min；分别制备得到北酸乳杆菌与幽门螺旋杆菌混合液3，鼠李糖乳杆菌SLT6与幽门螺旋杆菌混合液4；
分别测定乳杆菌、混合菌液反应前/后(0min/T min)的OD值，根据以下公式计算共聚率：共聚率(％)＝[(OD600乳杆+OD600幽门)-2×OD600混合t min]/(OD600乳杆+OD600幽门)×100。结果如表3和图3所示。
表3：超声对乳杆菌与幽门螺杆菌共聚作用的影响
结果显示，经过超声破碎的乳杆菌，共聚作用会被削弱，但是变化不显著(p>0.05)，更不会使共聚作用完全消失(或出现)，因此乳杆菌与幽门螺杆菌的共聚集作用是一个超声不敏感的相互作用，与乳杆菌细胞的完整性无显著相关性。
实施例5：孵育转速对北酸乳杆菌与幽门螺杆菌共聚作用的影响
具体步骤如下：
(1)幽门螺旋杆菌的培养：
将幽门螺杆菌在哥伦比亚血平板(哥伦比亚血平板：39g哥伦比亚培养基固体粉末溶于1L水中，121℃灭菌15min，待冷却到55℃～60℃后加入7.5％(v/v)的无菌脱纤维绵羊血，混匀后倒板)上划线后，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养3天，得到单菌落；挑取单菌落接种于含5％(v/v)胎牛血清的BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天得到种子液；
将种子液以2％(v/v)的接种量接种于BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天，得到幽门螺杆菌菌液；将幽门螺杆菌菌液8000g离心10min，得到幽门螺杆菌菌体，用人工胃液(pH＝4)调节菌溶液浓度为OD600＝0.5，得到幽门螺杆菌菌悬液。
(2)北酸乳杆菌CCFM1207和鼠李糖乳杆菌SLT6的培养
分别将北酸乳杆菌和鼠李糖乳杆菌划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到北酸乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌体，用PBS(pH＝7.42)调节菌溶液浓度为OD600＝0.5，分别制备得到菌悬液。
(3)分别取步骤(1)制备得到的调好菌浓度的幽门螺杆菌菌悬液，与步骤(2)制备得到的乳杆菌菌悬液各2mL，进行充分震荡和混合。
室温26℃，分别在静置0r/min、150r/min、250r/min条件下，孵育120min。分别测定乳杆菌、混合菌液反应前/后(0min/T min)的OD值并计算共聚率，结果如表4及图4所示。
表4：孵育转速对共聚集作用的影响
(注：混合前的幽门螺杆菌溶液OD600＝0.543)
不同孵育转速试验测试不同剪切力对共凝集作用稳定性的影响，图4显示北酸乳杆菌CCFM1207对幽门螺杆菌的共聚率始终保持在40％以上，转速150r/min条件下的共聚率最高，但与静置时无显著差异(p>0.05)，转速250r/min条件下共聚率最低。乳杆菌与幽门的共聚集能力对0～250r/min的转速未表现出敏感性，人在进食和消化等生理过程中，胃部的蠕动会形成一定大小的剪切力和转速，该试验证明北酸乳杆菌CCFM1207与幽门螺杆菌发生共凝集作用具有稳定性，适用于口服益生菌等的开发。
实施例6：温度对北酸乳杆菌与幽门螺杆菌共聚作用的影响
具体步骤如下：
(1)幽门螺旋杆菌的培养：
将幽门螺杆菌在哥伦比亚血平板上划线后，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养3天，得到单菌落；挑取单菌落接种于含5％(v/v)胎牛血清的BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天得到种子液；
将种子液以2％(v/v)的接种量接种于BHI液体培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天，得到幽门螺杆菌菌液；
将幽门螺杆菌菌液8000g离心10min，得到幽门螺杆菌菌体，用人工胃液(pH＝4)调节菌溶液浓度为OD600＝0.5，得到幽门螺杆菌菌悬液。
(2)北酸乳杆菌CCFM1207的培养
将北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；
将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，制备得到北酸乳杆菌菌体，用PBS缓冲液(pH＝7.42)调节，制备得到菌溶液浓度均为OD600＝0.5的北酸乳杆菌CCFM1207菌悬液。
(3)分别取步骤(1)制备得到的调好菌浓度的幽门螺杆菌菌悬液，与步骤(2)制备得到的乳杆菌菌悬液各2mL，进行充分震荡和混合。分别置于4℃、37℃和80℃环境下孵育120min。(菌株经过巴氏杀菌：80～85℃，处理10～15min可以失活)，分别测定乳杆菌、混合菌液反应前/后(0min/T min)的OD值并计算共聚率，结果如表5所示。
表5：温度对共聚集作用的影响
由上表可知温度对共凝集作用稳定性的影响不显著，在80℃、120min条件下，北酸乳杆菌CCFM1207已经完全失活，但是其对幽门螺杆菌的共聚率并没有下降，因此试验证明北酸乳杆菌CCFM1207与幽门螺杆菌发生共凝集作用不依赖于乳杆菌的活性，完全是菌株间的物理作用，这个发现将帮助我们在开发益生菌时，极大地降低生产成本。
实施例7：北酸乳杆菌与幽门螺杆菌共聚集作用的电镜图
具体步骤如下：
(1)幽门螺旋杆菌的培养：
将幽门螺杆菌在哥伦比亚血平板上划线后，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养3天，得到单菌落；挑取单菌落接种于含5％(v/v)胎牛血清的BHI培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天得到种子液；
将种子液以2％(v/v)的接种量接种于BHI液体培养基中，于37℃三气培养箱中(85％N2、10％CO2、5％O2)培养4天，得到幽门螺杆菌菌液；
将幽门螺杆菌菌液8000g离心10min，得到幽门螺杆菌菌体，用人工胃液(pH＝4)调节菌溶液浓度为OD600＝0.5，得到幽门螺杆菌菌悬液。
(2)北酸乳杆菌CCFM1207的培养
将北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；
将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，制备得到北酸乳杆菌菌体，用PBS缓冲液(pH＝7.42)调节，制备得到菌溶液浓度均为OD600＝0.5的北酸乳杆菌CCFM1207菌悬液。
(3)分别取步骤(1)制备得到的调好菌浓度的幽门螺杆菌菌悬液，与步骤(2)制备得到的乳杆菌菌悬液各2mL，进行充分震荡和混合。室温26℃条件下，静置120min后北酸乳杆菌CCFM1207与幽门螺杆菌的混合液出现如图5所示的分层。离心混合液得到聚集体，将聚集体置于2.5％的戊二醛溶液中4℃固定过夜，收集固定后的聚集体经70％-100％乙醇梯度脱水后进行冷冻干燥48h，得到待拍摄的聚集体样品。经过钯溅射喷金处理，利用冷场发射扫描电子显微镜进行拍摄，得到图6。
图5显示北酸乳杆菌CCFM1207与幽门螺杆菌共同孵育120min后的宏观表现，二者形成的共聚体在混合液中发生了沉降，上层溶液吸光度下降，而不发生共聚的鼠李糖乳杆菌SLT6并未出现此现象。图6(a)、(b)分别代表微观电子显微镜不同拍摄倍数(5000×，12000×)下北酸乳杆菌CCFM1207与幽门螺杆菌的聚集体，乳杆菌呈现较规则的棒状形态，幽门螺杆菌呈不规则弯曲状，扫描电镜显示两种菌发生相互之间的聚集堆积，形成结合的共聚体团块。
实施例8：北酸乳杆菌的应用
北酸乳杆菌CCFM1207可用于制备菌粉，菌粉的具体制备过程如下：
北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到北酸乳杆菌CCFM1207菌粉；
其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；
保护剂的成分包含：130g/L脱脂奶粉。
实施例9：北酸乳杆菌的应用
北酸乳杆菌CCFM1207可用于制备胶囊制品，胶囊制品的具体制备过程如下
北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；菌悬液添加至浓度为30g/L的海藻酸钠溶液中至浓度为2×109CFU/mL后，充分搅拌，使得北酸乳杆菌CCFM1207的细胞均匀地分散于海藻酸钠溶液中，得到混合液；将混合液挤压到浓度为20g/L的氯化钙溶液中形成胶粒；待形成的胶粒静止固化30min后，过滤收集胶粒；将收集得到的胶粒进行冷冻干燥48h，得到粉剂；将粉剂装入到药用胶囊中，得到胶囊制品；
其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基。
实施例10：北酸乳杆菌的应用
北酸乳杆菌CCFM1207可用于制备片剂，片剂的具体制备过程如下：
北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到北酸乳杆菌CCFM1207菌粉；
其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；
保护剂的成分包含：130g/L脱脂奶粉。
称取北酸乳杆菌CCFM1207菌粉25.7重量份、淀粉55.0重量份、纤维素衍生物4.5重量份、羧甲基淀粉钠12.0重量份、滑石粉0.8重量份、蔗糖1.0重量份与水1.0重量份，得到原材料；将原材料混合，得到湿颗粒；将湿颗粒用中南制药机械厂的压片机进行压片后使用青州市益康中药机械有限公司的小型药物干燥机进行干燥，得到片剂。
实施例11：北酸乳杆菌的应用
北酸乳杆菌CCFM1207可用于制备发酵乳，发酵乳的具体制备过程如下：
北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到北酸乳杆菌CCFM1207菌粉；
其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；
保护剂的成分包含：130g/L脱脂奶粉。
将北酸乳杆菌CCFM1207菌粉与商业干粉发酵剂保加利亚乳杆菌和商业干粉发酵剂嗜热链球菌按照质量比1:1:1的比例混合，得到发酵剂；将糖添加至鲜奶中至浓度为50g/L，得到混合液；将混合液在65℃、20MPa的条件下进行均质后在95℃下保温杀菌5min，得到发酵原料；将发酵原料降温至35℃后以0.03％(v/v)的接种量将发酵剂接种至发酵原料中，于35℃下保温发酵16h，得到发酵乳；将发酵乳于42℃下放置4h进行凝乳后，在4℃下冷藏24h进行后熟，得到发酵乳成品。
实施例12：北酸乳杆菌的应用
北酸乳杆菌CCFM1207可用于制备豆奶，豆奶的具体制备过程如下：
北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到北酸乳杆菌CCFM1207菌粉；
其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；
保护剂的成分包含：130g/L脱脂奶粉。
将大豆在温度80℃下浸泡2h后去除大豆皮，得到去皮大豆；将去皮大豆沥去浸泡水后加沸水磨浆，得到豆浆；将豆浆在高于80℃的温度条件下保温12min，得到熟豆浆；将熟豆浆用150目筛网过滤后离心分离，得到粗豆奶；将粗豆奶加热到温度140～150℃后迅速导入真空冷却室进行抽真空，使得粗豆奶中的异味物质随着水蒸汽迅速排出，得到熟豆奶；将熟豆奶降温至约37℃后在熟豆奶中添加北酸乳杆菌CCFM1207菌粉至浓度为不低于1×106CFU/mL，得到豆奶(豆奶需在4℃下冷藏保存)。
实施例13：北酸乳杆菌的应用
北酸乳杆菌CCFM1207可用于制备果蔬饮料，果蔬饮料的具体制备过程如下：
北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到北酸乳杆菌CCFM1207菌粉；
其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；
保护剂的成分包含：130g/L脱脂奶粉。
将新鲜水果和蔬菜洗净后榨汁，得到果蔬汁；将果蔬汁在温度140℃下高温热杀菌2秒，得到杀菌后的果蔬汁；将杀菌后的果蔬汁降温至约37℃后在杀菌后的果蔬汁中添加北酸乳杆菌CCFM1207菌粉至浓度为不低于1×106CFU/mL，得到果蔬饮料(果蔬饮料需在4℃下冷藏保存)。
实施例14：北酸乳杆菌的应用
北酸乳杆菌CCFM1207可用于制备乳饮品，乳饮品的具体制备过程如下：
北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到北酸乳杆菌CCFM1207菌粉；
其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；
保护剂的成分包含：130g/L脱脂奶粉。
将脱脂奶在95℃热杀菌20min后冷却至4℃，得到原料；在原料中添加北酸乳杆菌CCFM1207菌粉至浓度为不低于1×106CFU/mL，得到乳饮品(乳饮品需在4℃下冷藏保存)。
实施例15：北酸乳杆菌的应用
北酸乳杆菌CCFM1207可用于制备巧克力，巧克力的具体制备过程如下：
北酸乳杆菌CCFM1207划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到北酸乳杆菌CCFM1207菌粉；
其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；
保护剂的成分包含：130g/L脱脂奶粉。
将可可块和白砂糖以1:1～1:3的质量比混合后加热，搅拌均匀，得到巧克力融浆；先将乳化剂(液体卵磷脂、大豆磷脂、山梨醇酐单月桂酸酯)与北酸乳杆菌CCFM1207菌粉以乳化剂：菌粉＝80～90：10～20的质量比混合均匀，再进行精磨、除酸、除水、结晶、调温，最后选择合适的模型浇注成型，得到巧克力(巧克力需在4℃下冷藏保存)。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 一株具有共聚幽门螺杆菌能力的北酸乳杆菌及其应用
<130> BAA211547A
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1193
<212> DNA
<213> 人工序列
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gacagccatg caccacctgt cttagcgtcc ccgaagggaa ctccgtatct ctacagattg 480
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accgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt tgagtttcaa ccttgcggtc gtactcccca 600
ggcggagtgc ttaatgcgtt agctgcagca ctgagaggcg gaaacctccc aacacttagc 660
actcatcgtt tacggcatgg actaccaggg tatctaatcc tgttcgctac ccatgctttc 720
gagcctcagc gtcagttgca gaccagagag ccgccttcgc cactggtgtt cttccatata 780
tctacgcatt ccaccgctac acatggagtt ccactctcct cttctgcact caagaaaaac 840
agtttccgat gcagttcctc ggttaagccg agggctttca catcagactt atttttccgc 900
ctgcgctcgc tttacgccca ataaatccgg acaacgcttg ccacctacgt attaccgcgg 960
ctgctggcac gtagttagcc gtgactttct gggttgatna ccgtcaaata aaggccagtt 1020
actacctnta tccttcttcn nnananngag ctttacgatc cgaaaannnc ntnnnnnnnn 1080
cgnntgctca tcagacttgc gtccnnnnga nanncnnacn gctncntccg nnnnnttngg 1140
nnnngnnnnc antccannnn nngcnatcan nnnnnnnnnc aacntcnngc nnn 1193
Claims (10)
1.一株北酸乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)，其特征在于，所述北酸乳杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62013，保藏日期为2021年10月25日。
2.一种产品，其特征在于，所述产品中含有权利要求1所述的北酸乳杆菌。
3.如权利要求2所述的产品，其特征在于，所述产品为食品、药品或保健品。
4.如权利要求2或3所述的产品，其特征在于，所述产品中，北酸乳杆菌的含量至少为5×109CFU/mL或5×109CFU/g。
5.如权利要求4所述的产品，其特征在于，所述食品为保健食品；或所述食品为使用含有权利要求1所述北酸乳杆菌的发酵剂生产得到的乳制品、豆制品或果蔬制品；或所述食品为含有权利要求1所述北酸乳杆菌的饮料或零食。
6.含有权利要求1所述的北酸乳杆菌的微生物制剂。
7.如权利要求6所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂中，北酸乳杆菌的含量至少为5×109CFU/mL或5×109CFU/g。
8.权利要求1所述的北酸乳杆菌在制备预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的产品中的应用，其特征在于，所述应用不以疾病的诊断和治疗为目的。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品为食品、药品或保健品。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述产品中，北酸乳杆菌的含量至少为5×109CFU/mL或5×109CFU/g。
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