CN114134159B

CN114134159B - 水稻基因OsWOX3B在调控根系形态中的应用

Info

Publication number: CN114134159B
Application number: CN202111683290.0A
Authority: CN
Inventors: 孙文强; 余四斌; 张潇丹; 龙雨林
Original assignee: Huazhong Agricultural University
Current assignee: Huazhong Agricultural University
Priority date: 2021-12-31
Filing date: 2021-12-31
Publication date: 2023-09-26
Anticipated expiration: 2041-12-31
Also published as: CN114134159A

Abstract

本发明公开了水稻基因OsWOX3B在调控根系形态中的应用，该基因负调控水稻根系生长，具体地，在水稻中过表达OsWOX3B基因，冠根数目减少，胚根缩短，在水稻中抑制OsWOX3B基因表达，胚根变长，冠根数目增加，植株生物量增加。

Description

水稻基因OsWOX3B在调控根系形态中的应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及水稻基因OsWOX3B在调控根形态中的应用。

背景技术

水稻是禾本科植物，具有典型的须根系，发芽早期通过胚根吸收水分和养分，水稻胚根在发育后期停止生长，水分和养分的吸收主要依靠茎节间长出的冠根。研究表明，在模式植物拟南芥和水稻中，胚根和冠根的发生和生长发育的调控机制比较相似，都涉及到以生长素为核心的代谢路径，包括生长素合成、极性运输以及信号传导等。同时，生长素信号途径还受细胞***素的拮抗作用、以及其他激素的二次调控。

与生长素的合成、极性运输以及信号传导等相关的基因突变会影响水稻胚根或冠根的生长发育。其中，Crl1是第一个被克隆的水稻冠根形成基因，该基因突变后不能形成冠根。Crl1编码一个LOB(Lateral organ boundaries)家族蛋白，在冠根起始的组织中特异表达，研究发现Crl1启动子上一个顺式作用元件可与生长素响应因子OsARF1直接结合，表明Crl1可能通过参与生长素的信号途径影响冠根的形成。超量表达生长素合成基因OsYUCCA1可显著增加转基因植株的冠根数目，而下调OsYUCCA1的表达严重抑制冠根的形成。生长素极性运输蛋白OsPIN1的表达被抑制后，转基因植株的冠根也受到显著的抑制，而用生长素类似物NAA(1-Naphthaleneacetic acid)处理转基因抑制表达的植株又可以恢复冠根的表型。冠根形成基因OsGNOM1/CRL4通过调控生长素运输蛋白基因的表达，影响生长素在根中的极性分布，进而影响冠根发生和发育。

同样，超表达或敲除细胞***素途径的基因会显著影响根系的生长发育，表明细胞***素在植物根系的生长发育中也起到重要的作用。Kitomi等分离克隆到一个少根突变体基因Crl5(Crown rootless 5)。该基因编码一个AP2转录因子家族蛋白，同Crl1类似，生长素调控蛋白OsARF1可以与Crl5的启动子直接结合；有意思的是，Crl5也调控细胞***素响应因子OsRR1和OsRR2的表达，表明该基因同时参与生长素和细胞***素的信号途径。Gao等(2014)通过筛选T-DNA突变体库发现一份冠根数显著增加的突变体ren1-D。该突变体中T-DNA的***使得细胞***素氧化酶基因OsCKX4的表达量显著上升；研究显示细胞***素响应因子ORR2和ORR3能够与OsCKX4的启动子直接结合，因此认为，OsCKX4参与细胞***素的信号途径，从而调控冠根的形成。这些参与生长素或细胞***素途径的根系调控基因在影响水稻根系形态的同时也严重的影响了其他器官的生长发育，大多出现植株极端矮化、分蘖减少、育性和结实下降，难以应用于育种改良。

OsWOX3B基因编码一种含有WUS结构域的WOX家族转录因子，调控水稻叶片及颖壳表皮毛的形成，突变该基因，叶片及颖壳表皮毛缺失形成光叶和光壳表型(Sun WQ,Gao DW,Xiong Y,Tang XX,Xiao XF,Wang CR,Yu SB.Hairy Leaf 6,an AP2/ERF transcriptionfactor,interacts with OsWOX3B and regulates trichome formation in rice.MolPlant,2017,10:1417-1433.)。然而，目前还未见OsWOX3B调控水稻根系生长发育的研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供水稻基因OsWOX3B的新用途，具体地，基因OsWOX3B在调控水稻根系形态中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

OsWOX3B基因在调控水稻根系形态中的应用，所述OsWOX3B基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，或者OsWOX3B基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

具体地，在水稻中过表达OsWOX3B基因，冠根数目减少，胚根缩短；在水稻中抑制OsWOX3B基因表达，胚根变长，冠根数目增加，植株生物量增加。

一种调控水稻根系形态的方法：通过抑制OsWOX3B基因(SEQ ID NO.1)在水稻中的表达，从而提高胚根长度，增加冠根数目。具体地，构建靶向OsWOX3B基因的抑制子，并导入水稻植株中，所述的抑制子可以是T-DNA***突变或者是OsWOX3B基因靶向dsRNA干扰或amiRNA干扰等中的任意一种。

在本发明的具体实施例中，将T-DNA载体转化水稻，获得阳性转基因植株，筛选T-DNA***到OsWOX3B启动子区域的突变体，将OsWOX3B突变体阴性家系和阳性家系种子进行根系形态考察，统计发芽7天的胚根长度和田间分蘖期(生长60天)的冠根数目和植株生物量，结果表明突变体阳性家系的胚根长度和冠根数目以及植株生物量与阴性家系相比都显著增加。

附图说明

图1为超表达载体构建示意图。将基因OsWOX3B连接到表达载体PU1301上形成超表达重组载体，该基因由941个碱基组成。

图2为T0代超表达转基因植株的阳性检测结果。用超表达载体PU1301上的载体特异性引物TEV-F和OsWOX3B基因引物RT730R对T0代单株进行PCR检测的结果。

图3为纯合超表达家系(OX1)与野生型中花11(WT)OsWOX3B的相对表达量比较。**表示t测验达到0.01水平显著。

图4为纯合超表达家系(OX1)与野生型中花11胚根长度(a)、冠根数目(b)和生物量(c)比较。**表示t测验达到0.01水平显著。

图5为OsWOX3B的突变体单株检测结果。

胶图第一排为T-DNA***到基因OsWOX3B的边界特异性引物MF1和MR1对突变体单株进行PCR检测的结果，胶图第二排为T-DNA载体上的特异性引物LBT2和基边界引物MR1对突变体单株进行PCR检测的结果。

图6为OsWOX3B突变体阴性(MT-)与阳性家系(MT+)中OsWOX3B相对表达量比较。**表示t测验达到0.01水平显著。

图7为OsWOX3B突变体阴性(MT-)与阳性家系(MT+)胚根长度(a)、冠根数目(b)和生物量(c)比较。**表示t测验达到0.01水平显著。

具体实施方式

本发明所用到的遗传转化的培养基及其配制的方法如下所述：

(1)试剂和溶液缩写

本发明中培养基所用到的植物激素的缩写表示如下：

6-BA(6-BenzylaminoPurine，6-苄基腺嘌呤)

CN(Carbenicillin，羧苄青霉素)

KT(Kinetin，激动素)

NAA(Napthalene acetic acid，萘乙酸)

IAA(Indole-3-acetic acid，吲哚乙酸)

2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid，2,4-二氯苯氧乙酸)

AS(Acetosringone，乙酰丁香酮)

CH(Casein Enzymatic Hydrolysate，水解酪蛋白)

HN(Hygromycin B，潮霉素)

DMSO(Dimethyl Sulfoxide，二甲基亚砜)

N6max(N6大量元素成分溶液)

N6mix(N6微量元素成分溶液)

MSmax(MS大量元素成分溶液)

MSmix(MS微量元素成分溶液)

(2)主要溶液配方

1)N6培养基大量元素母液(按照10倍浓缩液(10×)配制)：

将上述试剂逐一溶解，然后室温下用蒸馏水定容至1000毫升。

2)N6培养基微量元素母液(按照100倍浓缩液(100×)配制

将上述试剂在室温下溶解并用蒸馏水定容至1000毫升。

3)铁盐(Fe₂EDTA)贮存液(按照100×浓缩液配制)

将3.73克乙二铵四乙酸二钠(Na₂EDTA·2H₂O)和2.78克FeSO₄·7H₂O分别溶解，混合并用蒸馏水定容至1000毫升，至70℃温浴2小时，4℃保存备用。

4)维生素贮存液(按照100×浓缩液配制)

加蒸馏水定容至1000毫升，4℃保存备用。

5)MS培养基大量元素母液(MSmax母液)(按照10×浓缩液配制)

将上述试剂在室温下溶解，并用蒸馏水定容至1000毫升。

6)MS培养基微量元素母液(MSmin母液)(按照100×浓缩液配制)

将上述试剂在室温下溶解，并用蒸馏水定容至1000毫升。

7)2,4-D贮存液(1毫克/毫升)的配制：

秤取2,4-D 100毫克，用1毫升1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10毫升蒸馏水溶解完全后定容至100毫升，于室温下保存。

8)6-BA贮存液(1毫克/毫升)的配制：

秤取6-BA 100毫克，用1毫升1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10毫升蒸馏水溶解完全后定容至100毫升，室温保存。

9)萘乙酸(NAA)贮存液(1毫克/毫升)的配制：

秤取NAA 100毫克，用1毫升1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10毫升蒸馏水溶解完全后定容至100毫升，4℃保存备用。

10)吲哚乙酸(IAA)贮存液(1毫克/毫升)的配制：

秤取IAA 100毫克，用1毫升1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10毫升蒸馏水溶解完全后定容至100毫升，4℃保存备用。

11)葡萄糖贮存液(0.5克/毫升)的配制：

秤取葡萄糖125克，然后用蒸馏水溶解定容至250毫升，灭菌后4℃保存备用。

12)AS贮存液的配制：

秤取AS 0.392克，加入DMSO 10毫升溶解，分装至1.5毫升离心管内，4℃保存备用。

13)1N氢氧化钾贮存液

秤取氢氧化钾5.6克，用蒸馏水溶解定容至100毫升，室温保存备用。

(3)用于水稻遗传转化的培养基配方

1)诱导培养基

加蒸馏水至900毫升，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，煮沸并定容至1000毫升，分装到50毫升三角瓶(25毫升/瓶)，封口后按常规方法灭菌(例如121℃下灭菌25分钟，下述的培养基灭菌方法与本培养基的灭菌方法相同)。

2)继代培养基

加蒸馏水至900毫升，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，煮沸并定容至1000毫升，分装到50毫升三角瓶(25毫升/瓶)，封口，按上述方法灭菌。

3)预培养基

加蒸馏水至250毫升，1N氢氧化钾调节pH值到5.6，封口，按上述方法灭菌。

使用前加热溶解培养基并加入5毫升葡萄糖贮存液和250微升AS贮存液，分装倒入培养皿中(25毫升/皿)。

4)共培养基

使用前加热溶解培养基并加入5毫升葡萄糖贮存液和250微升AS贮存液，分装倒入培养皿中(25毫升/每皿)。

5)悬浮培养基

加蒸馏水至100毫升，调节pH值到5.4，分装到两个100毫升的三角瓶中，封口，按上述方法灭菌。

使用前加入1毫升无菌葡萄糖贮存液和100微升AS贮存液。

6)选择培养基

加蒸馏水至250毫升，调节pH值到6.0，封口，按上述方法灭菌。

使用前溶解培养基，加入250微升HN(50毫克/毫升)和400微升CN(250毫克/毫升)分装倒入培养皿中(25毫升/皿)。(注：第一次选择培养基羧苄青霉素浓度为400毫克/升，第二次及以后选择培养基羧苄青霉素浓度为250毫克/升)。

7)分化培养基

加蒸馏水至900毫升，1N氢氧化钾调节pH值到6.0。

煮沸并用蒸馏水定容至1000毫升，分装到50毫升三角瓶(50毫升/瓶)，封口，按上述方法灭菌。

8)生根培养基

加蒸馏水至900毫升，用1N氢氧化钾调节pH值到5.8。

煮沸并用蒸馏水定容至1000毫升，分装到生根管中(25毫升/管)，封口，按上述方法灭菌。

实施例1：基因OsWOX3B的克隆

抽取水稻品种中花11(中国公开品种)的DNA，用引物730F和730R(引物序列为：ATGGCGCCGGCGGTGCAGCAGCAGC和CTAGACGACGTCATGCTGCTCTTCC)进行聚合酶链式反应(PCR)，PCR程序：94℃预变性5分钟；35个循环(94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸1分钟)，72℃延伸10分钟，将得到的PCR产物进行测序得到基因OsWOX3B的基因序列，由941个碱基组成，所示的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。抽取水稻品种中花11根系的RNA，反转录成cDNA，用引物730F和730R(引物序列为：ATGGCGCCGGCGGTGCAGCAGCAGC和CTAGACGACGTCATGCTGCTCTTCC)进行PCR，PCR程序：94℃预变性5分钟；35个循环(94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸1分钟)，72℃延伸7分钟，将得到的PCR产物进行测序得到基因OsWOX3B的编码序列(CDS)，由861个碱基组成，所示的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。利用Primer3软件(http://frodo.wi.mit.edu/)翻译编码序列(CDS)获得氨基酸序列，编码287个氨基酸，其序列为SEQID NO.3所示的氨基酸序列。

上述引物由上海生工合成，序列测定由华大基因测定。DNA、RNA抽提，PCR及试剂配方参照《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克等，金冬雁等(译)，科学出版社，2002)。

实施例2：重组载体的构建和转化农杆菌的建立

根据图1的技术路线，抽取水稻品种中花11的DNA，用引物序列OX730F和OX730R(引物序列为：AAAGGTACCATGGCGCCGGCGGTGCAGCAGCAGC和AAAGGATCCCTAGACGACGTCATGCTGCTCTTCC，由上海生工合成)进行PCR，PCR程序：94℃预变性5分钟；35个循环(94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸1分钟)，72℃延伸7分钟，分离得到OsWOX3B的基因片段，序列为SEQ IDNo.1所示。将目标片段先用KpnI和BamHI酶切，分离回收目标产物，与用KpnI和BamHI酶切过的PU1301载体(Zhao Y et al.,2009)用T4连接酶连接形成OsWOX3B超表达载体。上述引物由上海生工合成，序列测定由华大基因测定。限制性内切酶(BamHI、KpnI)和T4连接酶均购于Takara公司；DNA、PCR及试剂配方参照《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克等，，金冬雁等(译)，科学出版社，2002)。

将超表达载体转化农杆菌EHA105(Takara公司产品)中，菌株命名为PU730。

实施例3：农杆菌介导的遗传转化

(1)诱导

将成熟的中花11(中国公开品种)种子去壳，然后依次用70％体积比的乙醇处理1分钟，0.15％浓度的氯化汞(HgCl₂)种子表面消毒15分钟；用灭菌水洗种子4-5次；将种子放在粳稻诱导培养基上；将接种后的培养基置于黑暗处培养4周，温度25±1℃。

(2)继代

挑选亮黄色、紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于粳稻继代培养基上黑暗下培养2-3周，温度25±1℃。

(3)预培养

挑选紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于粳稻预培养基上黑暗下培养4-5天，温度25±1℃。

(4)农杆菌培养

在带有卡那霉素抗性(上海生工公司产品)选择的LA培养基上预培养农杆菌株PU730两天，温度28℃；刮取农杆菌至悬浮培养基中悬浮培养，温度28℃。

(5)侵染

将预培养的愈伤转移至灭好菌的瓶子内；调节农杆菌PU730的悬浮液至OD₆₀₀ 0.8-1.0；将愈伤在农杆菌悬浮液中浸泡30分钟；转移愈伤至灭菌好的滤纸上吸干；然后放置在粳稻共培养基上培养3天，温度19-20℃。

(6)筛选

用灭菌水洗涤愈伤8遍；浸泡在含400毫克/L羧苄青霉素(CN)(上海生工公司产品)的灭菌水中30分钟；转移愈伤至灭菌好的滤纸上吸干；转移愈伤至含有250mg/L羧苄青霉素(CN)、50mg/L潮霉素(Hn)(Roche公司产品)粳稻选择培养基上选择培养2-3次，每次2周。

(7)分化

将抗性愈伤转移至粳稻分化培养基上，光照下培养，温度26℃。

(8)生根

剪掉再生苗分化时产生的根；然后将其转移至生根培养基中光照下培养2-3周，温度26℃。

(9)移栽

洗掉再生植株根上的残留培养基，移入钵中盆栽，同时在最初的几天保持水分湿润，待植株存活健壮后移入大田。

实施例4：OsWOX3B超表达转基因植株的鉴定

由实施例3得到的T0代OsWOX3B超表达转基因植株共13株，分别命名为OX1-OX13，抽取T0代超表达植株DNA，用PU1301载体引物TEV-F(引物序列为TTTCACCATTTACGAACGATAGCCG)和OsWOX3B基因引物RT730R(引物序列为GAGGTGGTGGTGGTAGTAGTGG)进行PCR阳性检测，PCR程序为94℃预变性5分钟；30个循环(94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸1分钟)，72℃延伸7分钟，PCR产物用1％的琼脂糖跑胶检测，能扩出500bp左右的条带的单株为阳性单株，结果如图2所示。收获阳性超表达单株自交种。选取3个生长正常结实的阳性超表达单株种植成T1代超表达家系，继续用TEV-F和RT730R引物进行PCR鉴定阳性超表达植株，各家系收获能正常结实的阳性单株的自交种子继续种植成T2代家系，同时种植野生型中花11(WT)作为对照。用TEV-F和RT730R鉴定T2代家系阳性超表达单株，其中OX1家系所有单株全部为阳性，提取OX1家系与野生型对照中花11(WT)的RNA，反转录成cDNA，用引物RT730F和RT730R(引物序列为CTGATGATGCTGGAGGAGATGT和GAGGTGGTGGTGGTAGTAGTGG)进行实时荧光定量PCR检测OsWOX3B相对表达量，如图3所示，统计发现OX1家系中OsWOX3B基因表达量显著升高。

实施例5：OsWOX3B超表达与水稻根系形态调控

由实施例4得到的纯合超表达家系OX1和野生型WT的种子，在培养箱用发芽盒进行发芽实验，调查发芽7天胚根长度，如图4所示，OsWOX3B超表达家系OX1的胚根长度显著短于野生型WT。将超表达家系OX1与野生型WT种植到水稻田，生长至分蘖期(生长60天)，从田间挖取植株根系考察冠根数目和植株生物量(干物质重量)，超表达OX1家系的冠根数目生物量与野生型中花11相比显著减少。

实施例6：OsWOX3B抑制表达与水稻根系形态调控

基因OsWOX3B的启动子突变体创制：将T-DNA载体pFX-E24.2-15R(Wu CY,Li XJ,Yuan WY,Chen GX,Kilian A,Li J,Xu CG,Li XH,Zhou D.X.,Wang SP,ZhangQF.Development of enhancer trap lines for functional analysis of ricegenome.Plant J,2003,35:418-427)转入到根癌农杆菌EHA105(购于Takara公司，公开产品)中，用以转化水稻品种中花11。抽提DNA，用T-DNA载体特异引物LBT2(ATAGGGTTTCGCTCATGTGTTGAGCAT)和OsWOX3B基因引物MR1(GCCGGTGAGGAGACAGAAAGGG)进行PCR检测，其中编号04Z11LZ36的单株能够扩增条带，为OsWOX3B基因启动子T-DNA***的突变植株，收获该植株自交种子。

04Z11LZ36自交种子种植T1代植株，共16株，命名为M1-M16，提取DNA，利用OsWOX3B基因引物组合MF1+MR1(引物序列分别为GACGCCAAGAGAATGAGGGGGT和GCCGGTGAGGAGACAGAAAGGG)和T-DNA载体与OsWOX3B基因引物组合LBT2+MR1(引物序列为ATAGGGTTTCGCTCATGTGTTGAGCAT和GCCGGTGAGGAGACAGAAAGGG)进行PCR检测，MF1+MR1扩出条带且LBT2+MR1扩不出条带的单株为没有T-DNA***的阴性单株，MF1+MR1扩不出条带且LBT2+MR1扩出条带的单株为T-DNA纯合***的阳性单株，MF1+MR1与LBT2+MR1都能扩出条带的为杂合单株。如图5所示，其中M4、8、13为阴性单株，M2、5、6、9、10、14、15为阳性单株，M1、3、7、11、12、16为杂合单株，收获阳性和阴性突变体单株自交种子。

将M4和M5自交种子种植成突变体阴性(MT-)和阳性(MT+)家系，抽取RNA，并反转录成cDNA，用引物RT730F和RT730R(引物序列为CTGATGATGCTGGAGGAGATGT和GAGGTGGTGGTGGTAGTAGTGG)进行实时荧光定量PCR，检测OsWOX3B相对表达量，如图6所示，统计发现突变体阳性家系(MT+)中OsWOX3B表达量显著低于阴性家系(MT-)。收获MT-和MT+家系自交种。

突变体阴性和阳性家系MT-和MT+种子，在培养箱用发芽盒进行发芽实验，调查发芽7天胚根长度，OsWOX3B突变体阳性家系MT+的胚根长度显著长于阴性家系MT-(图7)。将MT-和MT+种植到水稻田，生长至分蘖期(发芽60天)，从田间挖取植株根系考察冠根数目和生物量(干物质重)，OsWOX3B突变体阳性家系MT+的冠根数目和生物量阴性家系MT-相比显著增加(图7)。

序列表

<110> 华中农业大学

<120> 水稻基因OsWOX3B在调控根系形态中的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 941

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atggcgccgg cggtgcagca gcagcagagc ggcggcggcg gcggatcgac gggggcggcg 60

gcggtggggt cgacgacgcg gtggtgcccg acgccggagc agctgatgat gctggaggag 120

atgtacaggg gagggctccg gacgccgaac gcggcgcaga tacagcagat cacggcgcac 180

ctctcgacgt acggccgcat cgagggcaag aacgtcttct actggttcca gaaccacaag 240

gcccgcgacc gccagaagct ccgccgccgc ctctgcatct cccaccacct cctctcctgc 300

gcccactact accaccacca cctcgccgcc gccgccgccg tcgttccgcc gccgcagctt 360

ctgccgccgc tgcacccctc ctcctcctcc tcctcctgcg gcggtggcct catcgaccac 420

gctaattccc ttctctcccc cacgtcggcg accaccccca cctccgccgc cgcagcagca 480

gcagcagcag cttacaccac cagctactac taccccttca ccgccgccgc cgcaccgcca 540

ccgcccagga cgtcgccggc ggcgagcccc ctcttccact acaaccaggt acgtaatggt 600

gtaacctaac ctagctagct agctagctac tagttaatca ttgcttaatc gatcatgtcg 660

cgtggcaggg aggcggcggc gtggtgttgc cggcggcgga ggcgatcggg cgttcgtcgt 720

cgtcgtcgga ctactcgctg gggaagctag tggacaactt cggggtggcg ctggaggaga 780

cgttcccggc gcagccgcag cagccggcga cgacgatggc gatgacggcc gtcgtcgaca 840

ctacggcggt ggcggcggcg gcaggtggct tctgccggcc gctcaagacg ctggacctct 900

tccccggcgg cctcaaggaa gagcagcatg acgtcgtcta g 941

<210> 2

<211> 861

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atggcgccgg cggtgcagca gcagcagagc ggcggcggcg gcggatcgac gggggcggcg 60

gcggtggggt cgacgacgcg gtggtgcccg acgccggagc agctgatgat gctggaggag 120

atgtacaggg gagggctccg gacgccgaac gcggcgcaga tacagcagat cacggcgcac 180

ctctcgacgt acggccgcat cgagggcaag aacgtcttct actggttcca gaaccacaag 240

gcccgcgacc gccagaagct ccgccgccgc ctctgcatct cccaccacct cctctcctgc 300

gcccactact accaccacca cctcgccgcc gccgccgccg tcgttccgcc gccgcagctt 360

ctgccgccgc tgcacccctc ctcctcctcc tcctcctgcg gcggtggcct catcgaccac 420

gctaattccc ttctctcccc cacgtcggcg accaccccca cctccgccgc cgcagcagca 480

gcagcagcag cttacaccac cagctactac taccccttca ccgccgccgc cgcaccgcca 540

ccgcccagga cgtcgccggc ggcgagcccc ctcttccact acaaccaggg aggcggcggc 600

gtggtgttgc cggcggcgga ggcgatcggg cgttcgtcgt cgtcgtcgga ctactcgctg 660

gggaagctag tggacaactt cggggtggcg ctggaggaga cgttcccggc gcagccgcag 720

cagccggcga cgacgatggc gatgacggcc gtcgtcgaca ctacggcggt ggcggcggcg 780

gcaggtggct tctgccggcc gctcaagacg ctggacctct tccccggcgg cctcaaggaa 840

gagcagcatg acgtcgtcta g 861

<210> 3

<211> 286

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Met Ala Pro Ala Val Gln Gln Gln Gln Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

Thr Gly Ala Ala Ala Val Gly Ser Thr Thr Arg Trp Cys Pro Thr Pro

20 25 30

Glu Gln Leu Met Met Leu Glu Glu Met Tyr Arg Gly Gly Leu Arg Thr

35 40 45

Pro Asn Ala Ala Gln Ile Gln Gln Ile Thr Ala His Leu Ser Thr Tyr

50 55 60

Gly Arg Ile Glu Gly Lys Asn Val Phe Tyr Trp Phe Gln Asn His Lys

65 70 75 80

Ala Arg Asp Arg Gln Lys Leu Arg Arg Arg Leu Cys Ile Ser His His

85 90 95

Leu Leu Ser Cys Ala His Tyr Tyr His His His Leu Ala Ala Ala Ala

100 105 110

Ala Val Val Pro Pro Pro Gln Leu Leu Pro Pro Leu His Pro Ser Ser

115 120 125

Ser Ser Ser Ser Cys Gly Gly Gly Leu Ile Asp His Ala Asn Ser Leu

130 135 140

Leu Ser Pro Thr Ser Ala Thr Thr Pro Thr Ser Ala Ala Ala Ala Ala

145 150 155 160

Ala Ala Ala Ala Tyr Thr Thr Ser Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Ala Ala

165 170 175

Ala Ala Pro Pro Pro Pro Arg Thr Ser Pro Ala Ala Ser Pro Leu Phe

180 185 190

His Tyr Asn Gln Gly Gly Gly Gly Val Val Leu Pro Ala Ala Glu Ala

195 200 205

Ile Gly Arg Ser Ser Ser Ser Ser Asp Tyr Ser Leu Gly Lys Leu Val

210 215 220

Asp Asn Phe Gly Val Ala Leu Glu Glu Thr Phe Pro Ala Gln Pro Gln

225 230 235 240

Gln Pro Ala Thr Thr Met Ala Met Thr Ala Val Val Asp Thr Thr Ala

245 250 255

Val Ala Ala Ala Ala Gly Gly Phe Cys Arg Pro Leu Lys Thr Leu Asp

260 265 270

Leu Phe Pro Gly Gly Leu Lys Glu Glu Gln His Asp Val Val

275 280 285

Claims

1.OsWOX3B基因在调控水稻根系形态中的应用，其特征在于，所述OsWOX3B基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在水稻中过表达OsWOX3B基因，冠根数目减少，胚根缩短；在水稻中抑制OsWOX3B基因表达，胚根变长，冠根数目增加，植株生物量增加。