CN114129620A - 一种治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及兽医药技术领域，具体是一种治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，所述的中药组合物由以下重量份的原料药制成：白头翁150‑190份，蒲公英150‑180份，地锦草130‑160份，黄花地丁120‑150份，车前子100‑140份，大血藤90‑140份，北豆根90‑130份，柴胡90‑120份，甘草80‑120份。本发明还提供其制备方法和应用。本发明的中药组合物，具有清热燥湿，抗菌消炎，凉血止痢，消肿散结，补脾益气及增强机体免疫能力之功效，且该组方安全无毒副作用。在多地对患有鲑科鱼类弧菌病的鱼类进行了临床治疗试验，治愈率为82.43％，有效率为89.14％。治疗期间未发现鱼类有任何不良反应。

Description

一种治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及兽医药技术领域，具体地说，是一种治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
鲑科鱼类弧菌病是由鳗弧菌引起的一种严重危害鲑科鱼类的细菌性疫病。鲑科鱼类鳗弧菌病属于世界性流行的疫病，可感染虹鳟、七彩鲑、鳗鲡、香鱼、鲈鱼、鳕鱼、大菱鲆、牙鲆、黄鱼等多种鱼类。
鳗弧菌属于条件致病菌，当鱼类在不良的环境条件下，遇到捕捞等不利刺激或是受伤时，会诱发疫病的产生。鱼类从孵化后至成鱼均易感染，传染性强，死亡率高。成鱼及亲鱼的感染率相对较低，引起死亡率较低，但病情持续时间较长，病鱼携带的病原菌又可以感染幼鱼。一般该病发生在水温相对较高的时节，水温在16～18℃发病，低水温时(低于16℃)该病较少爆发。鳗弧菌的感染途径有多种，主要包括皮肤、鳃、侧线以及肠道等。
鳗弧菌的感染的主要临床症状是体表出血，通常会引起全身性的组织病变。不同的鱼感染鳗弧菌后会有不同的症状。病鱼突发性食欲下降，濒死鱼体色发黑，眼球突出，角膜混浊，鳍基充血，***红肿。病情发展严重时肌肉溃烂，其溃烂灶深度较结疖病深。此溃烂灶通常由起始时的红点发展成***病灶，呈圆形向周围发展，从而形成大块皮肤的溃疡，溃疡向肌肉层发展从而引起穿孔。***病灶破裂后流出血脓状组织坏死物。剖检可见病鱼肝脏苍白坏死，脾脏肿大，肾脏柔软似液化状，肠粘膜组织腐烂脱落，肌肉组织有弥散性或点状出血，有时伴有淡黄色粘稠腹水症状。
目前，发病渔场预防鲑科鱼类弧菌病现有的疫苗主要是***全菌灭活疫苗。但是该类疫苗需以注射的方式对鱼类进行免疫，免疫操作繁琐且存在多种副作用，灭活疫苗又存在毒株返祖的风险，故此类疫苗不适用于水产规模化养殖业中。治疗鲑科鱼类弧菌病方面主要使用化学消毒剂对养殖水体和水生动物进行消毒，加之抗生素等药物拌饵投喂，但抗生素等药物的大量使用会造成水产类食品的药物残留，从而对人类健康也会造成巨大影响，进一步引发人类公共食品安全问题，并且对鱼类耐药菌株的出现和水生生态***的平衡造成极大的影响。为此，应用中草药治疗鲑科鱼类弧菌病，研制开发出新型安全高效环境友好型的新兽药已成为一种必然选择。
中国专利文献CN106924449A公开了一种防治弧菌病组合物，包含下述组分：半边莲花200～300重量份、檵木叶400～500重量份、X 200～500重量份，其中X为黄芪、牡荆花、地胆草花、黄连叶、黄芩中的一种或多种。该组合物采用檵木叶、半边莲花等中草药作为有效成分，对弧菌病的防治效果好，且毒副作用小，无残留，病原体不易产生耐药性，原料来源广泛，成本低，可以制成多种剂型，应用更灵活，具有抗弧菌病、抗原虫、增强机体免疫力的作用，可用于制备防治弧菌病的药物。中国专利文献CN103919889A公开了一种用于提高大菱鲆免疫力的中药组合物，是以紫锥菊、茯苓、白花蛇舌草、板蓝根依一定比例配比而组成，应用于给予鳗弧菌疫苗基础免疫后的大菱鲆，作为增强大菱鲆免疫力的佐剂，能够显著增强大菱鲆的免疫力，从而有效减少鱼类的死亡，降低大菱鲆养殖的损失。
但是关于一种治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物及其制备方法和应用目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中存在的问题，提供一种清热燥湿，抗菌消炎，凉血止痢，消肿散结，补脾益气及增强机体免疫能力之功效的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，其制备方法，及其在治疗鲑科鱼类弧菌病中的应用。
本发明的第一方面，提供一种治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，由以下重量份的原料药制成：
白头翁150-190份，蒲公英150-180份，地锦草130-160份，黄花地丁120-150份，车前子100-140份，大血藤90-140份，北豆根90-130份，柴胡90-120份，甘草80-120份。
进一步的，所述的鲑科鱼类为虹鳟、金樽、或七彩鲑。
进一步的，由以下重量份的原料制成：白头翁150-180份，蒲公英160-180份，地锦草140-160份，黄花地丁130-150份，车前子110-140份，大血藤100-130份，北豆根90-120份，柴胡90-110份，甘草80-110份。
在本发明的优选实施方式中，由以下重量份的原料药制成：白头翁150份，蒲公英170份，地锦草150份，黄花地丁130份，车前子140份，大血藤100份，北豆根110份，柴胡90份，甘草80份。
在本发明的另一优选实施方式中，由以下重量份的原料药制成：白头翁160份，蒲公英180份，地锦草140份，黄花地丁150份，车前子120份，大血藤120份，北豆根90份，柴胡110份，甘草100份。
在本发明的另一优选实施方式中，由以下重量份的原料药制成：白头翁180份，蒲公英160份，地锦草160份，黄花地丁140份，车前子110份，大血藤130份，北豆根120份，柴胡100份，甘草90份。
本发明的第二方面，提供一种如上所述的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物的制备方法，是加入原料药总重量8-10倍的水，煎煮2-3次，每次1.0-2.5小时；然后过滤浓缩至相对密度为1.10-1.20(60℃)，再加蒸馏水调节药液生药含量为1.0g/mL，即得。
进一步的，所述的制备方法中：加入原料药总重量10倍的水，煎煮3次，每次2.0小时。
本发明的第三方面，提供一种如上所述的中药组合物在制备治疗鲑科鱼类弧菌病的药物中的应用。
本发明的第四方面，提供一种治疗鲑科鱼类弧菌病的药物制剂，其包含有效量的如上所述的中药组合物，和药学上可接受的载体或辅料。
进一步的，所述的药物制剂为兽用口服制剂。使用方法：使用时对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
本发明优点在于：
1、本发明依据中兽医辨证论治的原则，根据鲑科鱼类弧菌病的发病特点，经过试验研究筛选出以白头翁、蒲公英、地锦草、黄花地丁、车前子、大血藤、北豆根、柴胡及甘草为有效药的中药兽药组方，方中白头翁、蒲公英、地锦草及黄花地丁清热解毒、抗菌消炎、泻火止痢为主药；车前子、大血藤清热燥湿、止泻散结为辅药，北豆根、柴胡解毒止泻、解热疏肝为佐药；甘草补脾益气、调和诸药为使药。诸药合用，具有清热燥湿，抗菌消炎，凉血止痢，消肿散结，补脾益气及增强机体免疫能力之功效，且安全无毒副作用。
2、本发明分别在甘肃省永登县的一个虹鳟养殖场、一个金鳟养殖场及一个七彩鲑养殖场，甘肃省永靖县的一个虹鳟养殖场，甘肃省临泽县的一个虹鳟养殖场，共治疗患有弧菌病病鱼21815尾，治愈17983尾，治愈率为82.43％，总有效尾数为19445尾，总有效率为89.14％。治疗期间未发现鱼类有任何不良反应，生长情况良好。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到。
实施例1：本发明的中药组合物
组方：白头翁150份，蒲公英170份，地锦草150份，黄花地丁130份，车前子140份，大血藤100份，北豆根110份，柴胡90份，甘草80份。
制备方法：准确称取上述药材，加10倍重量的水，煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并药液，煎液浓缩至相对密度为1.15(60℃)，再加蒸馏水调至药液生药含量为1.0g/mL。
使用方法：对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
实施例2：本发明的中药组合物
组方：白头翁160份，蒲公英180份，地锦草140份，黄花地丁150份，车前子120份，大血藤120份，北豆根90份，柴胡110份，甘草100份。
制备方法：准确称取上述药材，加9倍重量的水，煎煮3次，每次2.0小时，过滤，合并药液，煎液浓缩至相对密度为1.15(60℃)，再加蒸馏水调至药液生药含量为1.0g/mL。
使用方法：对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
实施例3：本发明的中药组合物
组方：白头翁180份，蒲公英160份，地锦草160份，黄花地丁140份，车前子110份，大血藤130份，北豆根120份，柴胡100份，甘草90份。
制备方法：准确称取上述药材，加8倍重量的水，煎煮3次，每次2.5小时，过滤，合并药液，煎液浓缩至相对密度为1.10(60℃)，再加蒸馏水调至药液生药含量为1.0g/mL。
使用方法：对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
实施例4：本发明的中药组合物
组方：白头翁170份，蒲公英160份，地锦草140份，黄花地丁120份，车前子110份，大血藤130份，北豆根90份，柴胡120份，甘草100份。
制备方法：准确称取上述药材，加10倍重量的水，煎煮2次，每次2.0小时，过滤，合并药液，煎液浓缩至相对密度为1.10(60℃)，再加蒸馏水调至药液生药含量为1.0g/mL。
使用方法：对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
实施例5：本发明的中药组合物
组方：白头翁190份，蒲公英150份，地锦草130份，黄花地丁140份，车前子120份，大血藤90份，北豆根130份，柴胡100份，甘草80份。
制备方法：准确称取上述药材，加9倍重量的水，煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并药液，煎液浓缩至相对密度为1.20(60℃)，再加蒸馏水调至药液生药含量为1.0g/mL。
使用方法：对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
实施例6：本发明的中药组合物
组方：白头翁160份，蒲公英170份，地锦草150份，黄花地丁130份，车前子100份，大血藤110份，北豆根120份，柴胡90份，甘草100份。
制备方法：准确称取上述药材，加8倍重量的水，煎煮2次，每次2.5小时，过滤，合并药液，煎液浓缩至相对密度为1.20(60℃)，再加蒸馏水调至药液生药含量为1.0g/mL。
使用方法：对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
实施例7：本发明的中药组合物
组方：白头翁160份，蒲公英170份，地锦草150份，黄花地丁130份，车前子100份，大血藤140份，北豆根120份，柴胡90份，甘草110份。
制备方法：准确称取上述药材，加8倍重量的水，煎煮2次，每次2.5小时，过滤，合并药液，煎液浓缩至相对密度为1.20(60℃)，再加蒸馏水调至药液生药含量为1.0g/mL。
使用方法：对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
实施例8：本发明的中药组合物
组方：白头翁160份，蒲公英170份，地锦草150份，黄花地丁130份，车前子100份，大血藤140份，北豆根120份，柴胡90份，甘草120份。
制备方法：准确称取上述药材，加8倍重量的水，煎煮2次，每次2.5小时，过滤，合并药液，煎液浓缩至相对密度为1.20(60℃)，再加蒸馏水调至药液生药含量为1.0g/mL。
使用方法：对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
实施例9：本发明中药组合物的临床治疗试验
纳入标准：病鱼突发性食欲下降，体色发黑，眼球突出，鳍基充血，***红肿。病鱼有***病灶及皮肤肌肉溃疡，***病灶破裂后流出血脓状组织坏死物。剖检可见病鱼肝脏苍白坏死，脾脏肿大，肾脏柔软似液化状，肠粘膜组织腐烂脱落，肌肉组织有弥散性或点状出血，有时伴有淡黄色粘稠腹水症状。病原学检查能够分离鉴定出鳗弧菌。病鱼可自主摄食。
排除标准：病鱼已被施予其它治疗措施均不纳入本试验研究。其次病原学检查，检出有其他细菌感染，如柱状黄杆菌、气单胞菌杆菌及屈挠杆菌等均不纳入本试验研究。
治疗标准：使用本发明中药组合物治疗之后，病鱼的健康状况和生长状况能恢复和同日龄正常鱼一样，在治疗试验期间鱼类均未出现任何不良反应。
治愈：使用本发明中药组合物治疗之后，病鱼的健康状况和生长状况恢复和同日龄正常鱼一样，在治疗试验期间鱼类均未出现任何不良反应。
显效：使用本发明中药组合物治疗之后，病鱼的健康状况和生长状况逐渐恢复和同日龄正常鱼一样，在治疗试验期间鱼类均未出现任何不良反应。
有效：使用本发明中药组合物治疗之后，病鱼的健康状况和生长状况基本上恢复和同日龄正常鱼一样，在治疗试验期间鱼类均未出现任何不良反应。
无效：使用本发明中的中药组合物治疗之后，病鱼的死亡率和同日龄未使用本发明中中药组合物鱼类的死亡率不存在差异。
分别以本发明实施例1-5制备的中药组合物，对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程，治疗前均未使用任何药物。共治疗患有弧菌病病鱼21815尾，治愈17983尾，治愈率为82.43％，总有效尾数为19445尾，总有效率为89.14％。并在治疗期间病鱼未见任何不良反应，生长状况良好。
实施例10：
在甘肃省永登县某虹鳟养殖场，以本发明实施例1制备的中药组合物，对病鱼拌料口服用药(病鱼纳入标准和治疗标准参照实施例9)，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程，治疗前均未使用任何药物。共治疗患有弧菌病的病鱼4832例，治愈4091例，治愈率为84.66％，显效377例，显效率为7.80％，无效364例，无效率为7.53％，总有效尾数为4468尾，总有效率为92.47％；且未见任何不良反应，生长状况良好。
实施例11：
在甘肃省永登县某金鳟养殖场，以本发明实施例2制备的中药组合物，对病鱼拌料口服用药(病鱼纳入标准和治疗标准参照实施例9)，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程，治疗前均未使用任何药物。共治疗患有弧菌病的病鱼4341例，治愈3607例，治愈率为83.09％，显效298例，显效率为6.86％，无效436例，无效率为10.04％，总有效尾数为3905尾，总有效率为89.96％；且未见任何不良反应，生长状况良好。
实施例12：
在甘肃省永登县某七彩鲑养殖场，以本发明实施例3制备的中药组合物，对病鱼拌料口服用药(病鱼纳入标准和治疗标准参照实施例9)，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程，治疗前均未使用任何药物。共治疗患有弧菌病的病鱼2945例，治愈2369例，治愈率为80.44％，显效174例，显效率为5.91％，无效402例，无效率为13.65％，总有效尾数为2543尾，总有效率为86.35％；且未见任何不良反应，生长状况良好。
实施例13：
在甘肃省永靖县某虹鳟养殖场，以本发明实施例4制备的中药组合物，对病鱼拌料口服用药(病鱼纳入标准和治疗标准参照实施例9)，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程，治疗前均未使用任何药物。共治疗患有弧菌病的病鱼4128例，治愈3407例，治愈率为82.53％，显效254例，显效率为6.15％，无效467例，无效率为11.31％，总有效尾数为3661尾，总有效率为88.68％；且未见任何不良反应，生长状况良好。
实施例14：
在甘肃省临泽县某虹鳟养殖场，以本发明实施例5制备的中药组合物，对病鱼拌料口服用药(病鱼纳入标准和治疗标准参照实施例9)，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程，治疗前均未使用任何药物。共治疗患有弧菌病的病鱼5569例，治愈4509例，治愈率为80.97％，显效359例，显效率为6.65％，无效701例，无效率为12.59％，总有效尾数为4868尾，总有效率为87.41％；且未见任何不良反应，生长状况良好。
实施例15：安全性评价
按照实施例1的方法制备本发明的中药组合物。
通过对小鼠灌服的LD50试验表明，以药物浓度1.00g/mL和动物耐受的最大给药容积给药，未出现死亡，无法测出灌胃给药方式的LD50，只能表明该中药制剂口服灌胃的LD50>40000mg/kg体重。通过腹腔注射给药，在药物浓度1.00g/mL和最大给药容积下，也无小鼠死亡，也无法测出腹腔注射给药方式的LD50，故认为，腹腔注射的LD50>10000mg/kg体重。根据《兽药试验技术规范汇编》的结果评定标准，以及毒理学评价标准，判定该中药组方实际无毒。在最大给药量试验中，24h内4次灌胃给药，每次以小鼠灌胃给药的最大给药容积给药，除给药后动物出现稍有不适，不爱活动，采食量下降等症状外，在常规观察的14d内小白鼠的状况良好，没有出现异常现象，且无一只死亡。根据最大耐受倍数的计算方式，该制剂相对于鱼类临床用量的最大倍数为33.33倍。
为了掌握因连续使用该中药组方而产生毒副反应和严重程度，以及停药后的发展和恢复情况，为拟定临床安全用药剂量提供参考。按40000mg/kg组、20000mg/kg组、10000mg/kg组和0剂量组口服灌胃给药，连续28d，在大鼠上进行了该中药组方的亚慢性毒性试验。在试验期内，高剂量体重减轻明显外，其余各试验组小鼠的饮食，行为，粪便均正常，发育良好，无任何中毒症状且血象及血清中CREA(肌酐)、ALT(谷丙转氨酶)、ALP(碱性磷酸酶)、AST(谷草转氨酶)、TP(总蛋白)、ALB(白蛋白)的均在正常范围。这说明该制剂安全，为其在临床上的安全应用提供了依据。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims (10)

1.一种治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：白头翁150-190份，蒲公英150-180份，地锦草130-160份，黄花地丁120-150份，车前子100-140份，大血藤90-140份，北豆根90-130份，柴胡90-120份，甘草80-120份。
2.根据权利要求1所述的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，其特征在于，所述的鲑科鱼类为虹鳟、金樽、或七彩鲑。
3.根据权利要求1所述的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料制成：白头翁150-180份，蒲公英160-180份，地锦草140-160份，黄花地丁130-150份，车前子110-140份，大血藤100-130份，北豆根90-120份，柴胡90-110份，甘草80-110份。
4.根据权利要求1所述的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：白头翁150份，蒲公英170份，地锦草150份，黄花地丁130份，车前子140份，大血藤100份，北豆根110份，柴胡90份，甘草80份。
5.根据权利要求1所述的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：白头翁160份，蒲公英180份，地锦草140份，黄花地丁150份，车前子120份，大血藤120份，北豆根90份，柴胡110份，甘草100份。
6.根据权利要求1所述的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：白头翁180份，蒲公英160份，地锦草160份，黄花地丁140份，车前子110份，大血藤130份，北豆根120份，柴胡100份，甘草90份。
7.一种如权利要求1-6任一所述的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物的制备方法，其特征在于，加入原料药总重量8-10倍的水，煎煮2-3次，每次1.0-2.5小时；然后过滤浓缩至60℃相对密度为1.10-1.20，再加蒸馏水水调节药液生药含量为1.0g/mL，即得。
8.一种如权利要求1-6任一所述的治疗鲑科鱼类弧菌病的中药组合物在制备治疗鲑科鱼类弧菌病的药物中的应用。
9.一种治疗鲑科鱼类弧菌病的药物制剂，其特征在于，其包含有效量的如权利要求1-6任一所述的中药组合物，和药学上可接受的载体或辅料。
10.根据权利要求9所述的药物制剂，其特征在于，所述的药物制剂为兽用口服制剂；使用时对病鱼拌料口服用药，按生药量每次每公斤体重鱼1.2mL，每天2次，14天为1个疗程。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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张明等: "20味中药对鳗弧菌的药敏试验", 《动物医学进展》 *
苏振霞等: "十六种中草药提取物对鳗弧菌体外抑菌作用的研究", 《淡水渔业》 *

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