CN114113636A - 一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法 - Google Patents

一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114113636A
CN114113636A CN202111499679.XA CN202111499679A CN114113636A CN 114113636 A CN114113636 A CN 114113636A CN 202111499679 A CN202111499679 A CN 202111499679A CN 114113636 A CN114113636 A CN 114113636A
Authority
CN
China
Prior art keywords
human monoclonal
dimer
ctni
ngal
bnp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111499679.XA
Other languages
English (en)
Inventor
景晓辉
李红星
何思雨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hebei Tewente Biotechnology Development Co ltd
Original Assignee
Hebei Tewente Biotechnology Development Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hebei Tewente Biotechnology Development Co ltd filed Critical Hebei Tewente Biotechnology Development Co ltd
Priority to CN202111499679.XA priority Critical patent/CN114113636A/zh
Publication of CN114113636A publication Critical patent/CN114113636A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4712—Muscle proteins, e.g. myosin, actin, protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/575—Hormones
    • G01N2333/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Brain natriuretic peptide [BNP, proBNP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/34—Genitourinary disorders
    • G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明涉及一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法，属于诊断试剂盒制备技术领域。本发明所述试纸卡依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述样品垫的不同位置分别喷划有荧光标记的四种鼠抗人单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜分别喷划有检测线和质控线，检测线的不同位置上分别喷划四种鼠抗人单克隆抗体，质控线上喷划多克隆抗体。本发明所述试纸卡将四个生物标志物的抗体划膜到同一个试纸卡上，创新性的实现了一次加样，同时检测样本中BNP、cTnI、D‑Dimer和NGAL四个生物标志物，检测时间短、抗干扰性强，准确性和稳定性高，并且样本不用任何预处理，直接利用EDTA抗凝静脉全血或血浆即可完成检测。

Description

一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法
技术领域
本发明涉及诊断试剂盒制备技术领域，具体涉及一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法。
背景技术
心肺肾四项是B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide，BNP)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)、D-二聚体(D-Dimer，DD)和肌钙蛋白I(Cardiac troponin I，cTnI)的简称。BNP是一种心脏神经内分泌激素，可特异性的在心室容量负荷过重、压力负荷过重及室壁张力增加的情况下由心室肌细胞分泌，对于定量判断患者是否患有心力衰竭，具有重要临床意义，并且与心衰的严重程度、预后也存在密切相关。cTn是以cTnI-C-T复合物和游离cTnI形式存在于心肌细胞中，心肌损伤时释放到血循环中后，cTnI-C-T可进一步分解为cTnI-C复合物和游离cTnI，cTnI是诊断急性心肌梗死的“金指标”。对急性冠状动脉综合征的预后评估及风险分层、心肌缺血损伤面积评估以及检测心脏手术造成心肌损伤程度有着重要意义。D-Dimer是纤维蛋白原单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物，它的生成或增高反映了凝血和纤溶***的激活，临床上可用D-Dimer对深静脉血栓和肺栓塞进行诊断评估，阴性排除深静脉血栓和肺栓塞，可作为外科手术、溶栓治疗监测指标，心血管疾病的辅助诊断。NGAL是脂质运载蛋白家族成员，心脏手术后2小时内显著升高，对术后急性肾损伤预测敏感度、特意性均较高，是术后急性肾损伤的早期生物标志物。
在临床上，急性胸痛是成人急诊就诊的常见原因之一。胸痛病因繁多，需立即对胸痛的危险程度做出评估。低危胸痛需合理分流，中危胸痛需动态评估与监测，致命性胸痛需要立即进入抢救流程。引起胸痛的常见病因有急性心肌梗死、急性冠状动脉综合征、心衰、肺栓塞等，而上述疾病与肾损伤以及肾衰竭密不可分，心脏手术后可能引起急性肾损伤与肾衰竭，肾损伤以及肾衰竭也可能伴随各类心血管疾病。同时，在临床上也存在胸痛和腹痛并存的患者，需同时检测心肺肾功能是否存在障碍。
因此，联合检测BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL可以对心衰患者、急性心肌梗死患者、急性冠状动脉综合征、肺栓塞以及急性肾损伤、急性肾衰竭的临床治疗提供有价值的指导，不仅能用于疾病的快速诊断和鉴别，也能在危险分层、预后判断与治疗决策中起到关键性的作用。
目前，相应的生物标志物检测主要采用ELLISA和化学发光等技术，但这些现有的测定方法和工具多数为单独检测，少数为两项联合检测，并且还需要对检测样本进行预处理，导致检测时间较长，耽误诊断和治疗时间。此外，现有的测定方法和工具抗干扰性能不佳，待检血液样本中的生物大分子多种多样，可以与测定工具，如试纸卡的样品垫和检测条等发生非特异性吸附，导致检测的准确性和稳定性降低，使测定值偏离实际值，医生依据这种不准确的测定结果得出的诊断结果可能是错误的，延误治疗。
发明内容
本发明的目的在于提供一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法。本发明所述试纸卡将四个生物标志物的抗体划膜到同一个试纸卡上，创新性的实现了一次加样，同时检测样本中BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL四个生物标志物，检测时间短、抗干扰性强，准确性和稳定性高，并且样本不用任何预处理，直接利用EDTA抗凝静脉全血或血浆即可完成检测。
本发明提供了一种心肺肾四项联检试纸卡，所述试纸卡依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；
所述样品垫为滤血膜；所述样品垫的不同位置分别喷划有BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体；
所述硝酸纤维素膜分别喷划有检测线和质控线，检测线的不同位置上分别喷划BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体，质控线上喷划多克隆抗体；
所述荧光标记的鼠抗人单克隆抗体的荧光标记情况为：BNP的鼠抗人单克隆抗体和cTnI的鼠抗人单克隆抗体分别标记Eu-固相双向螯合物，D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别标记Sm-固相双向螯合物。
优选的是，所述多克隆抗体能够与BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体结合。
优选的是，所述样品垫上，NGAL、cTnI、D-Dimer和BNP的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体喷划的位置分别距离样品垫底端17.5mm、20mm、22.5mm和25mm。
优选的是，所述硝酸纤维素膜上，BNP、D-Dimer、cTnI和NGAL的鼠抗人单克隆抗体喷划的位置分别距离硝酸纤维素膜底端8mm、15mm、18mm和25mm；所述多克隆抗体距离硝酸纤维素膜底端28mm。
优选的是，所述滤血膜的材质为玻纤膜。
优选的是，所述试纸卡还包括外壳。
本发明还提供了上述技术方案所述试纸卡的制备方法，包括以下步骤：
将BNP的鼠抗人单克隆抗体和cTnI的鼠抗人单克隆抗体分别用Eu-固相双向螯合物进行标记，将D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别用Sm-固相双向螯合物进行标记，得到BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体；
将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别喷划在硝酸纤维素膜上；
将多克隆抗体喷划在硝酸纤维素膜上；
将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体喷划在样品垫上；
将样品垫、硝酸纤维素膜、吸水纸以及上下壳进行组装，得到试纸卡。
优选的是，所述硝酸纤维素膜的宽度为5±1mm，所述样品垫的宽度为7±1mm，所述吸水垫的宽度为10±1mm。
优选的是，喷划前，所述荧光标记的鼠抗人单克隆抗体、多克隆抗体和鼠抗人单克隆抗体的工作浓度分别为0.8mg/mL。
本发明还提供了一种心肺肾四项联检试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述的试纸卡、含有标准曲线的RFID卡、热敏打印纸卷、一袋200μL的吸管及说明书。
本发明提供了一种心肺肾四项联检试纸卡(荧光免疫法)。本发明所述试纸卡将四个生物标志物的抗体划膜到同一个试纸卡上，创新性的实现了一次加样，同时检测样本中BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL四个生物标志物，检测时间短、抗干扰性强，准确性和稳定性高，并且样本不用任何预处理，直接利用EDTA抗凝静脉全血或血浆即可完成检测。本发明所述试纸卡能够实现一次检测鉴别诊断心衰、心梗、心肌损伤、肺栓塞及肾损伤肾衰竭及其预后评估，对胸痛及胸痛合并腹痛急诊患者进行合理分流，对心脏手术或肾脏手术后各脏器器官的早期病变提供有效鉴别诊断。
附图说明
图1为本发明提供的试纸卡的组装顺序图；
图2为本发明提供的试纸卡外观俯视图。
具体实施方式
本发明提供了一种基于时间分辨免疫荧光法的心肺肾四项联检试纸卡，所述试纸卡依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；
所述样品垫为滤血膜；所述样品垫的不同位置分别喷划有BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体；
所述硝酸纤维素膜分别喷划有检测线和质控线，检测线的不同位置上分别喷划BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体，质控线上喷划多克隆抗体；
所述荧光标记的鼠抗人单克隆抗体的荧光标记情况为：BNP的鼠抗人单克隆抗体和cTnI的鼠抗人单克隆抗体分别标记Eu-固相双向螯合物，D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别标记Sm-固相双向螯合物。
本发明BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的四对抗体，即BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体以及BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体，均为商品化产品，有稳定的供应渠道，可实现大批量生产。本发明上述四对抗体中，每对抗体的抗原表位距离优选较远。具体的，本发明优选根据抗体夹心法的原理，选择抗体生产厂家推荐的抗体对。本发明对以及在本发明中，所述多克隆抗体能够与BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体结合，具体的，所述多克隆抗体用于与多余的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体结合。本发明对所述多克隆抗体的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的能与BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的单克隆抗体结合的多克隆抗体即可，如Sigma公司市售的型号为G5518的多克隆抗体。Eu-固相双向螯合物和Sm-固相双向螯合物选用商品化产品，厂家为赛默飞。
在本发明中，所述样品垫上，NGAL、cTnI、D-Dimer和BNP的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体喷划的位置优选分别距离样品垫底端17.5mm、20mm、22.5mm和25mm。
在本发明中，所述硝酸纤维素膜上，BNP、D-Dimer、cTnI和NGAL的鼠抗人单克隆抗体喷划的位置优选分别距离硝酸纤维素膜底端8mm、15mm、18mm和25mm；所述多克隆抗体距离硝酸纤维素膜底端28mm。本发明上述距离的设置能够尽可能的保证荧光不受干扰，实现高准确率的检测。
在本发明中，所述滤血膜的材质优选为玻纤膜。
在本发明中，所述试纸卡优选还包括外壳，更优选包括上壳和下壳。本发明所述外壳的材质优选为PVC。
本发明利用荧光免疫层析方法设计得到所述试纸卡，将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体同时划膜在一个试纸卡上，所述试纸卡后续利用时间分辨免疫荧光分析仪进行检测，优选利用干式荧光免疫分析仪进行检测。具体的，分析仪对该试纸卡进行激发光扫描并分别收集613nm和600nm波长的发射光信号，分别得到BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体划线上的荧光值及C线上的荧光值，利用此方式可同时检测BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL，并且具有很高的抗干扰性，能够在同一时间检测BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL，节省急诊诊断时间，为医生诊疗提供帮助。
本发明还提供了上述技术方案所述试纸卡的制备方法，包括以下步骤：
将BNP的鼠抗人单克隆抗体和cTnI的鼠抗人单克隆抗体分别用Eu-固相双向螯合物进行标记，将D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别用Sm-固相双向螯合物进行标记，得到BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体；
将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别喷划在硝酸纤维素膜上；
将多克隆抗体喷划在硝酸纤维素膜上；
将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体喷划在样品垫上；
将样品垫、硝酸纤维素膜、吸水纸及上下壳进行组装，得到试纸卡。
在本发明中，所述硝酸纤维素膜的宽度为5±1mm，所述样品垫的宽度为7±1mm，所述吸水垫的宽度为10±1mm。
在本发明中，喷划前，所述荧光标记的鼠抗人单克隆抗体、多克隆抗体和鼠抗人单克隆抗体的工作浓度分别为0.8mg/mL。
本发明还提供了一种基于时间分辨免疫荧光法的心肺肾四项联检试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述的试纸卡、含有标准曲线的RFID卡、热敏打印纸卷、一袋200μL的吸管及说明书。
本发明在进行联检试验时，按照行业标准优选先利用含有BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL四种抗原的标准品，配制不同浓度的参考品，使用本申请的试纸卡进行检测，绘制标准曲线。在本发明中，所述试纸卡加样后，优选在干式荧光免疫分析仪上进行检测。
下面结合具体实施例对本发明所述的一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
选择抗体：根据抗体夹心法的原理，选择常规市售的适用于时间分辨的抗体对。
荧光微球标记：分别将BNP鼠抗人单克隆抗体、cTnI鼠抗人单克隆抗体标记Eu-固相双向螯合物，D-Dimer鼠抗人单克隆抗体、NGAL鼠抗人单克隆抗体标记Sm-固相双向螯合物，得到荧光鼠抗人单克隆抗体，标记后备用；
配置特定浓度的荧光单克隆抗体：将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光鼠抗人单克隆抗体恢复至室温，利用抗体缓冲液配置单克隆抗体工作浓度均为0.8mg/mL；
配置特定浓度的单克隆抗体：将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体恢复至室温，利用抗体缓冲液配置单克隆抗体工作浓度均为0.8mg/mL；
配置特定浓度的多克隆抗体：将多克隆抗体恢复至室温，利用抗体缓冲液配置多克隆抗体工作浓度均为0.8mg/mL；
特定位置划NC膜：分别利用不同的划膜仪划头在NC膜的特定位置上划BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体以及羊抗鼠多克隆抗体，BNP的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端8mm处，D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端15mm处，cTnI的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端18mm处，NGAL的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端25mm处，羊抗鼠多克隆抗体划在距离NC膜底端28mm处，划完后干燥备用；
特定位置划滤血膜(样品垫)：利用不同的划膜仪划头在滤血膜上特定位置喷划配置好的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人荧光单克隆抗体，注意避开加样孔的位置，NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端17.5mm处，cTnI的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端20mm处，D-Dimer的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端22.5mm处，BNP的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端25mm处，划完后干燥备用；
切条：将NC膜、滤血膜、吸水垫切成需要的尺寸，NC膜宽度为5mm，过滤垫宽度为7mm，吸水垫宽度为10mm；
组装：如图1所示，将准备好的滤血膜、NC膜、吸水垫按照操顺序放置在塑料下壳上，扣上塑料上壳，组装在一起；
焊接打码：组装好的试纸卡焊接在一起，利用打码机将批号信息形成二维码打在试纸卡上；
生成标准曲线：利用BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL抗原配置内部参考品，设置8个梯度浓度，分别利用心肺肾四项联检试纸卡在干式荧光免疫分析仪上测试荧光浓度，收集数据，利用软件生成可录入分析仪的标准曲线，并录入到对应的多波长多激发光的时间分辨荧光免疫分析仪中；
在测试板中加入200μL的样本，避光反应15min后放入分析仪中扫描，分析仪屏幕给出各个待检测标志物的浓度。
实施例2
选择急诊科急性胸痛患者的血液样本20例，使用2mL紫帽管抽取血液样本，抽取后上下颠倒混匀备用；
使用吸管分别吸取200μL血液样本加入心肺肾四项联检试纸卡。对比试纸卡选择河北特温特生物科技发展有限公司生产的已上市的BNP检测试剂盒试纸卡、cTnI检测试剂盒试纸卡、D-Dimer检测试剂盒试纸卡、NGAL检测试剂盒试纸卡。上述试纸卡加入样本后反应15min放入分析仪中读取试验结果，记录如表1：
表1临床样本检测对比结果
Figure BDA0003402248790000071
Figure BDA0003402248790000081
上述试验数据表明，心肺肾四项联检试纸卡可同一时间检测出BNP、D-Dimer、cTnI、NGAL四个生物标志物的浓度，可节省患者就诊时间，实现急诊快速分流。
实施例3
一、线性检测
B型钠尿肽(BNP)在50pg/mL～4000pg/mL范围内呈线性，r≥0.95。肌钙蛋白I(cTnI)0.05ng/mL～30ng/mL范围内呈线性，r≥0.95。D-二聚体(D-Dimer)在100ng/mL～5000ng/mL范围内呈线性，r≥0.95。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在60ng/mL～1300ng/mL范围内呈线性，r≥0.95。取标准品溶液，用小牛血清稀释成BNP浓度为4000pg/mL、2500pg/mL、1000pg/mL、100pg/mL、50pg/mL，cTnI浓度为30ng/mL、20ng/mL、10ng/mL、0.4ng/mL、0.05ng/mL，D-Dimer浓度为5000ng/mL、3000ng/mL、1000ng/mL、600ng/mL、100ng/mL，NGAL浓度为1300ng/mL、600ng/mL、300ng/mL、150ng/mL、60ng/mL的5个浓度的测试样本测量程序重复测试3次，求得平均值(yi)。以样本浓度(xi)作为自变量，以测定均值(yi)作为因变量，根据公式(1)计算线性相关系数r。
Figure BDA0003402248790000091
式中：r:线性相关系数
x：样本浓度
Figure BDA0003402248790000092
样本浓度的平均值
y：测定均值
Figure BDA0003402248790000093
测定均值的平均值
线性检测结果见表2：
表2心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)线性测定结果
Figure BDA0003402248790000094
Figure BDA0003402248790000101
表2数据表明，心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL线性测定结果均在0.995以上，远远高于行业标准的基本要求，完全可以满足设计要求。
二、准确度检测
用同一批号的试纸卡，测定高(BNP：1000pg/mL，cTnI：20ng/mL，D-Dimer：2000ng/mL，NGAL：1300ng/mL)、低(BNP：100pg/mL，cTnI：0.4ng/mL，D-Dimer：200ng/mL，NGAL：150ng/mL)浓度标准品，在同一台荧光免疫分析仪上分别检测，重复测定3次，求得平均值
Figure BDA0003402248790000102
按照公式(2)计算相对偏差(B％)，相对偏差应不大于20％。
Figure BDA0003402248790000103
式中：B％：相对偏差
Figure BDA0003402248790000104
测定结果的平均值
T：标称值
准确度检测结果见表3：
表3心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)准确度测定结果
Figure BDA0003402248790000105
表3数据表明，心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的相对偏差测定结果均在10％以下，远远高于行业标准的基本要求，完全可以满足设计要求。
三、批内精密度检测
分别取高浓度(BNP：1000pg/mL，cTnI：20ng/mL，D-Dimer：2000ng/mL，NGAL：1300ng/mL)、低浓度(BNP：100pg/mL，cTnI：0.4ng/mL，D-Dimer：200ng/mL，NGAL：150ng/mL)的质控品为样本，用同一批号的试纸卡，每个水平质控品重复测定10次，分别计算测定结果的平均值
Figure BDA0003402248790000111
和标准差(SD)，按照公式(3)计算相对标准差RSD(或变异系数CV)，相对标准差RSD(或变异系数CV)≤15％。
Figure BDA0003402248790000112
式中：RSD：相对标准差
SD：标准差
Figure BDA0003402248790000113
测定结果的平均值
批内精密度检测结果见表4：
表4心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)批内精密度测定结果
Figure BDA0003402248790000114
Figure BDA0003402248790000121
表4数据表明，心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的相对标准差测定结果均在10％以下，远远高于行业标准的基本要求，完全可以满足设计要求。
四、批间精密度检测
用三个不同批号的试剂盒，每个批号取3个试纸卡，取B型钠尿肽(BNP)1000pg/mL、肌钙蛋白(cTnI)15ng/mL、D-二聚体(D-Dimer)2000ng/mL、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)150ng/mL的质控品测试，分别计算3个批号试纸卡的检测结果的平均值
Figure BDA0003402248790000122
并计算所有三个批号的检测结果的总均值
Figure BDA0003402248790000123
按照公式(4)计算批间相对极差R，批间相对极差应不大于20％。
Figure BDA0003402248790000124
式中：
Figure BDA0003402248790000125
中的最大值
Figure BDA0003402248790000126
中的最小值
Figure BDA0003402248790000127
的总均值
批间精密度检测结果见表5：
表5心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)批间精密度测定结果
Figure BDA0003402248790000128
Figure BDA0003402248790000131
表5数据表明，心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的批间相对极差测定结果均在10％以下，完全可以满足设计要求。
五、最低检测限的检测
取零值血浆为空白基质样本，用同一批号的试纸卡，重复测试20次，计算测量均值
Figure BDA0003402248790000132
和标准差(SD)，按照公式(5)计算最低检测限(LoD)。B型钠尿肽(BNP)最低检测限不大于50pg/mL。肌钙蛋白(cTnI)最低检测限不大于0.05ng/mL。D-二聚体(D-Dimer)最低检测限不大于100ng/mL。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)最低检测限不大于60ng/mL。
Figure BDA0003402248790000133
式中
Figure BDA0003402248790000134
测量均值
SD：标准差
最低检测限的检测结果见表6：
表6心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)最低检测限测定结果
Figure BDA0003402248790000135
Figure BDA0003402248790000141
表6数据表明，心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的最低检测限测定结果远远低于行业标准，完全可以满足设计要求。
六、抗干扰性检测
取B型钠尿肽(BNP)3000pg/mL、肌钙蛋白(cTnI)15ng/mL、D-二聚体(D-Dimer)4000ng/mL、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)1300ng/mL的质控品，分别加入干扰物，使得血红蛋白的浓度为10g/L，胆固醇的浓度为100mg/mL，甘油三酯的浓度为1000mg/mL，胆红素的浓度为2mg/mL，纤维蛋白原的浓度为1mg/mL，每种测试3次，分别与不加干扰物的质控品比较，相对偏差不大于5％。
抗干扰性检测结果见表7：
表7心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)抗干扰性检测结果
Figure BDA0003402248790000142
Figure BDA0003402248790000151
表7数据表明，心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的抗干扰性测定结果均可以满足设计要求。
七、稳定性检测
该试剂盒长期稳定性试验结果显示，该产品可以冷藏于2℃～8℃时可以稳定保存至少一年。每隔6个月进行一次分析性能评估，通过多次试验表明，该产品在6个月，12个月的测试结果是符合产品设计要求的。因此，采用每隔6个月进行稳定性评估，根据产品设计要求，检测线性、准确度、批内精密度、最低检测限这三项指标，可以有效分析产品的稳定性。
稳定性检测结果见表8：
表8心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)稳定性检测结果
Figure BDA0003402248790000161
Figure BDA0003402248790000171
Figure BDA0003402248790000181
表8数据表明，心肺肾四项联检试剂盒(荧光免疫法)在冷藏于2℃～8℃时可以保持一年的稳定性，完全可以满足设计要求。
八、与其他类型的试剂盒检测结果对比
分别取高浓度(BNP：1000pg/mL，cTnI：20ng/mL，D-Dimer：2000ng/mL，NGAL：1300ng/mL)、低浓度(BNP：100pg/mL，cTnI：0.4ng/mL，D-Dimer：200ng/mL，NGAL：150ng/mL)的质控品为样本，随机抽选心肾肺四项联检试剂盒(荧光免疫法)试纸卡，选择河北特温特生物科技发展有限公司已上市的B型钠尿肽检测试剂盒(荧光免疫法)、肌钙蛋白I检测试剂盒(荧光免疫法)、D-二聚体检测试剂盒(荧光免疫法)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒(荧光免疫法)作为对照进行检测，每个水平质控品重复测定10次，分别计算测定结果的平均值
Figure BDA0003402248790000193
和标准差(SD)，按照公式(3)计算相对标准差RSD(或变异系数CV)，对比不同试剂盒检测结果的差异性。
检测结果见表9-1和表9-2：
表9-1心肾肺四项联检试剂盒(荧光免疫法)检测结果
Figure BDA0003402248790000191
表9-2其他类型的试剂盒检测结果
Figure BDA0003402248790000192
Figure BDA0003402248790000201
表9-1和表9-2数据对比结果表明，心肾肺四项联检试剂盒(荧光免疫法)与其他单项试剂盒之间的精密度均符合要求，一致性良好，能够满足一次加样同时检测BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL四个生物标志物，帮助临床快速鉴别诊断心肾肺脏器类疾病及其预后评估的目的。
对比例1
采用荧光免疫时间分辨技术，根据激发波长选择使用Eu-双向螯合物及Sm-双向螯合物标记单克隆抗体。
标记方法及序号如表10所示：
表10试验序号及标记方法
试验序号 BNP cTnI D-Dimer NGAL
TY-1 Eu-双向螯合物 Eu-双向螯合物 Eu-双向螯合物 Eu-双向螯合物
TY-2 Sm-双向螯合物 Sm-双向螯合物 Sm-双向螯合物 Sm-双向螯合物
TY-3 Eu-双向螯合物 Eu-双向螯合物 Sm-双向螯合物 Sm-双向螯合物
TY-4 Sm-双向螯合物 Sm-双向螯合物 Eu-双向螯合物 Eu-双向螯合物
TY-5 Eu-双向螯合物 Sm-双向螯合物 Eu-双向螯合物 Sm-双向螯合物
TY-6 Sm-双向螯合物 Eu-双向螯合物 Sm-双向螯合物 Eu-双向螯合物
根据前期资料查询结果，配置特定工作浓度的抗体，0.8mg/mL。
划膜，分别利用不同的划膜仪划头在NC膜的不同位置相同间隔依次划BNP、D-Dimer、cTnI和NGAL的鼠抗人单克隆抗体以及羊抗鼠多克隆抗体，利用不同的划膜仪划头在滤血膜上喷划配置好的BNP、D-Dimer、cTnI和NGAL的鼠抗人荧光单克隆抗体，注意避开加样孔的位置。
切条组装，形成测试板，利用双波长时间分辨荧光免疫分析仪进行检测。
试验按照公式(2)和公式(3)检验准确度及批内精密度，检验结果如表11所示：
表11试验结果
Figure BDA0003402248790000211
对比试验结果发现，TY-5条件及TY-6条件均符合企业产品技术要求，选定TY-5条件为最终条件。
对比例2
根据前期试验数据，选择TY-5的标记方法，进行划线位置的进一步验证，试验序号及划线位置如表12：
表12 NC划线位置的验证
Figure BDA0003402248790000212
Figure BDA0003402248790000221
切条组装，形成测试板，利用双波长时间分辨荧光免疫分析仪进行检测。
试验按照公式(2)和公式(3)检验准确度及批内精密度，检验结果如表13所示：
表13试验结果
Figure BDA0003402248790000222
对比试验结果发现使用TY-5荧光标记法，TH-3的NC膜划膜条件，准确度及精密度效果更好。
考虑到时间分辨的荧光特性，优化滤血膜的划膜位置，划膜位置为：利用不同的划膜仪划头在滤血膜上特定位置喷划配置好的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人荧光单克隆抗体，注意避开加样孔的位置，NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端17.5mm处，cTnI的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端20mm处，D-Dimer的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端22.5mm处，BNP的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端25mm处。优化试验结果如表14。
表14优化试验的试验结果
BNP D-Dimer cTnI NGAL
准确度 6.96％ 5.94％ 7.41％ 7.67％
精密度 4.37％ 7.61％ 4.91％ 6.43％
对比以上试验结果，最优的荧光标记方法为分别将BNP、D-Dimer标记Eu-固相双向螯合物、cTnI、NGAL标记Sm-固相双向螯合物作为荧光单克隆抗体，然后划膜位置为：利用不同的划膜仪划头在NC膜的特定位置上划BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体以及羊抗鼠多克隆抗体，BNP的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端8mm处，D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端15mm处，cTnI的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端18mm处，NGAL的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端25mm处，羊抗鼠多克隆抗体划在距离NC膜底端28mm处；利用不同的划膜仪划头在滤血膜上特定位置喷划配置好的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人荧光单克隆抗体，注意避开加样孔的位置，NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端17.5mm处，cTnI的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端20mm处，D-Dimer的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端22.5mm处，BNP的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端25mm处。
对比例3
抗体工作浓度的验证
依据前期资料确定抗体工作浓度为0.8mg/mL，并且试验已经确定了抗体标记方法及划膜位置，为确保试验条件的是最优性能，验证不同抗体的工作浓度下测试板的准确度及精密度，按照公式(2)和公式(3)检验准确度及批内精密度，试验序号、各抗体工作浓度及试验结果如下。
3.1荧光BNP单抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表15：
表15抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000231
试验结果如下表16：
表16试验结果
Figure BDA0003402248790000232
Figure BDA0003402248790000241
从试验结果对比可知，荧光BNP单抗工作浓度最佳为0.8mg/mL。
3.2荧光D-Dimer单抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表17：
表17抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000242
试验结果如下表18：
表18试验结果
Figure BDA0003402248790000243
从试验结果对比可知，荧光D-Dimer单抗工作浓度最佳为0.8mg/mL。
3.3荧光cTnI单抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表19：
表19抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000244
试验结果如下表20：
表20试验结果
Figure BDA0003402248790000251
从试验结果对比可知，荧光cTnI单抗工作浓度最佳为0.8mg/mL。
3.4荧光NGAL单抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表21：
表21抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000252
试验结果如下表22：
表22试验结果
Figure BDA0003402248790000253
从试验结果对比可知，荧光NGAL单抗工作浓度最佳为0.8mg/mL。
3.5 BNP单抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表23：
表23抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000254
Figure BDA0003402248790000261
试验结果如下表24：
表24试验结果
Figure BDA0003402248790000262
从试验结果对比可知，BNP单抗工作浓度最佳为0.8mg/mL。
3.6 D-Dimer单抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表25：
表25抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000263
试验结果如下表26：
表26试验结果
Figure BDA0003402248790000264
Figure BDA0003402248790000271
从试验结果对比可知，D-Dimer单抗工作浓度最佳为0.8mg/mL。
3.7 cTnI单抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表27：
表27抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000272
试验结果如下表28：
表28试验结果
Figure BDA0003402248790000273
从试验结果对比可知，cTnI单抗工作浓度最佳为0.8mg/mL。
3.8 NGAL单抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表29：
表29抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000274
试验结果如下表30：
表30试验结果
Figure BDA0003402248790000275
Figure BDA0003402248790000281
从试验结果对比可知，NGAL单抗工作浓度最佳为0.8mg/mL。
3.9多抗工作浓度的验证，各抗体工作浓度如表31：
表31抗体的工作浓度(单位：mg/mL)及试验序号
Figure BDA0003402248790000282
试验结果如下表32：
表32试验结果
Figure BDA0003402248790000283
从试验结果对比可知，多克隆抗体的工作浓度最佳为0.8mg/mL。
综上，最优的荧光标记方法为分别将BNP、D-Dimer标记Eu-固相双向螯合物、cTnI、NGAL标记Sm-固相双向螯合物作为荧光单克隆抗体，然后划膜位置为：利用不同的划膜仪划头在NC膜的特定位置上划BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体以及羊抗鼠多克隆抗体，BNP的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端8mm处，D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端15mm处，cTnI的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端18mm处，NGAL的鼠抗人单克隆抗体划在距离NC膜底端25mm处，羊抗鼠多克隆抗体划在距离NC膜底端28mm处；利用不同的划膜仪划头在滤血膜上特定位置喷划配置好的BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人荧光单克隆抗体，注意避开加样孔的位置，NGAL的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端17.5mm处，cTnI的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端20mm处，D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端22.5mm处，BNP的鼠抗人单克隆抗体划在距离滤血膜膜底端25mm处。上述所有抗体喷划以前最优的工作浓度均为0.8mg/mL。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种心肺肾四项联检试纸卡，其特征在于，所述试纸卡依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；
所述样品垫为滤血膜；所述样品垫的不同位置分别喷划有BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体；
所述硝酸纤维素膜分别喷划有检测线和质控线，检测线的不同位置上分别喷划BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体，质控线上喷划多克隆抗体；
所述荧光标记的鼠抗人单克隆抗体的荧光标记情况为：BNP的鼠抗人单克隆抗体和cTnI的鼠抗人单克隆抗体分别标记Eu-固相双向螯合物，D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别标记Sm-固相双向螯合物。
2.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述多克隆抗体能够与BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体结合。
3.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述样品垫上，NGAL、cTnI、D-Dimer和BNP的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体喷划的位置分别距离样品垫底端17.5mm、20mm、22.5mm和25mm。
4.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上，BNP、D-Dimer、cTnI和NGAL鼠抗人单克隆抗体喷划的位置分别距离硝酸纤维素膜底端8mm、15mm、18mm和25mm；所述多克隆抗体距离硝酸纤维素膜底端28mm。
5.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述滤血膜的材质为玻纤膜。
6.根据权利要求5所述的试纸卡，其特征在于，所述试纸卡还包括外壳。
7.权利要求1～6任一项所述试纸卡的制备方法，包括以下步骤：
将BNP的鼠抗人单克隆抗体和cTnI的鼠抗人单克隆抗体分别用Eu-固相双向螯合物进行标记，将D-Dimer的鼠抗人单克隆抗体和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别用Sm-固相双向螯合物进行标记，得到BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体；
将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的鼠抗人单克隆抗体分别喷划在硝酸纤维素膜上；
将多克隆抗体喷划在硝酸纤维素膜上；
将BNP、cTnI、D-Dimer和NGAL的荧光标记的鼠抗人单克隆抗体喷划在样品垫上；
将样品垫、硝酸纤维素膜、吸水纸以及上下壳进行组装，得到试纸卡。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的宽度为5±1mm，所述样品垫的宽度为7±1mm，所述吸水垫的宽度为10±1mm。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，喷划前，所述荧光标记的鼠抗人单克隆抗体、多克隆抗体和鼠抗人单克隆抗体的工作浓度分别为0.8mg/mL。
10.一种心肺肾四项联检试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～6任一项所述的试纸卡、含有标准曲线的RFID卡、热敏打印纸卷、一袋200μL的吸管及说明书。
CN202111499679.XA 2021-12-09 2021-12-09 一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法 Pending CN114113636A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111499679.XA CN114113636A (zh) 2021-12-09 2021-12-09 一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111499679.XA CN114113636A (zh) 2021-12-09 2021-12-09 一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114113636A true CN114113636A (zh) 2022-03-01

Family

ID=80364052

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111499679.XA Pending CN114113636A (zh) 2021-12-09 2021-12-09 一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114113636A (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103492590A (zh) * 2011-02-22 2014-01-01 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 循环生物标志物
CN104865387A (zh) * 2015-05-20 2015-08-26 瑞莱生物科技（江苏）有限公司 快速定量检测ST2和NT-proBNP的免疫荧光试纸条及其制备方法
CN105527439A (zh) * 2015-12-30 2016-04-27 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 一种ngal时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条及其制备方法
CN208224279U (zh) * 2017-11-01 2018-12-11 杭州微瑞科技有限公司 D-二聚体快速定量检测***
CN109975557A (zh) * 2019-04-29 2019-07-05 厦门稀土材料研究所 Il-6/pct联合检测时间分辨检测试剂盒及方法
CN209102725U (zh) * 2018-10-22 2019-07-12 河北特温特生物科技发展有限公司 心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒
CN111308103A (zh) * 2020-03-18 2020-06-19 厦门稀土材料研究所 心肺五联检测试剂盒及其稀土纳米荧光检测卡和检测方法
CN112067824A (zh) * 2020-08-13 2020-12-11 河南沃迈生物科技有限公司 一种bnp检测试剂盒

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103492590A (zh) * 2011-02-22 2014-01-01 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 循环生物标志物
US20140141986A1 (en) * 2011-02-22 2014-05-22 David Spetzler Circulating biomarkers
CN104865387A (zh) * 2015-05-20 2015-08-26 瑞莱生物科技（江苏）有限公司 快速定量检测ST2和NT-proBNP的免疫荧光试纸条及其制备方法
CN105527439A (zh) * 2015-12-30 2016-04-27 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 一种ngal时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条及其制备方法
CN208224279U (zh) * 2017-11-01 2018-12-11 杭州微瑞科技有限公司 D-二聚体快速定量检测***
CN209102725U (zh) * 2018-10-22 2019-07-12 河北特温特生物科技发展有限公司 心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒
CN109975557A (zh) * 2019-04-29 2019-07-05 厦门稀土材料研究所 Il-6/pct联合检测时间分辨检测试剂盒及方法
CN111308103A (zh) * 2020-03-18 2020-06-19 厦门稀土材料研究所 心肺五联检测试剂盒及其稀土纳米荧光检测卡和检测方法
CN112067824A (zh) * 2020-08-13 2020-12-11 河南沃迈生物科技有限公司 一种bnp检测试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106872420B (zh) 一种时间分辨荧光定量检测尿微量白蛋白的试剂盒及方法
CN109975557B (zh) Il-6/pct联合检测时间分辨检测试剂盒及方法
CN102323422B (zh) 半定量同时检测cTnI和Myo的免疫层析试纸条及其制备
WO2018120855A1 (zh) 检测myo的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法
WO2018120856A1 (zh) 检测cTnI的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法
CN113311173B (zh) 一种用于提高检测精确性的检测血液样本中ST2和Galectin-3抗体的联检试纸条、制备方法和试剂盒
CN102395681A (zh) 使用拉曼光谱和含磷酸酯基团的芳族化合物检测有机体和酶反应的方法
CN107918022A (zh) 一种cTnI检测试剂盒及其使用方法
CN107957495A (zh) 一种ck-mb检测试剂盒及其使用方法
US7569209B2 (en) Method for diagnosis of sepsis by determination of S100B
CN115166262A (zh) 一种肝素结合蛋白的量子点荧光检测方法及应用
CN115436627A (zh) 一种胱抑素c荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法
CN110554197A (zh) 一种荧光免疫层析联合检测试剂盒及其制备方法
CN110596396A (zh) 一种检测蛋白的方法以及试纸条和试剂盒
CN114113636A (zh) 一种心肺肾四项联检试纸卡、试剂盒及制备方法
CN108181465B (zh) 检测25-羟基维生素d的荧光层析试剂盒及其定量检测方法
CN116106556A (zh) 一种量子点荧光微球定量检测胎球蛋白b的免疫层析试纸条及其制备方法
CN207301081U (zh) 一种胰蛋白酶原时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条
CN115963256A (zh) 一种癌胚抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法
JP2007520712A (ja) 患者サンプルにおけるＣｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ）の濃度の選択的測定による敗血症の診断
CN111855986A (zh) 联合定量检测五项心脏标志物试剂盒及制备方法
CN211148667U (zh) 一种检测试剂板
CN210323044U (zh) Il-6/pct联合检测时间分辨检测卡及试剂盒
CN109540846B (zh) 一种测量糖化的蛋白质的方法
CN109444431A (zh) 一种心脏肌球蛋白结合蛋白c的定量检测方法及检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination