CN114088821A - 消毒用品中度米芬含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及消毒用品检测领域，具体公开了消毒用品中度米芬含量的检测方法。本申请的消毒用品中度米芬含量的检测方法，包括如下步骤S1：度米芬消毒用品前处理：将度米芬消毒用品用溶剂溶解，得到度米芬溶解液；S2：高效液相检测：取样10μL，进样检测，其中，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱，流动相采用磷酸二氢盐溶液‑乙腈，其中磷酸二氢盐溶液与乙腈的体积比为（20~30）：（70~85），流动相的pH为2~3，检测波长265nm~275nm。本申请提供了一种与药典中完全不同的流动相与固定相，相比于药典中度米芬的检测方法，此方法具有成本低，检测范围较大，相对标准偏差小，且检出限低的优点。
Description
技术领域
本申请涉及消毒用品检测的领域，更具体地说，它涉及一种消毒用品中度米芬含量的检测方法。
背景技术
度米芬为白色或微黄色结晶，极易溶于乙醇和氯仿，溶于水，但是在***中几乎不溶，度米芬以溴代十二烷与苯氧乙基二甲胺为原料制得，度米芬常用做杀菌剂与消毒剂，可用于口腔、咽喉感染的辅助治疗及皮肤、创伤感染和外科器械消毒。
中国药典《度米芬滴丸》项下的度米芬测定方法，度米芬滴丸：本品含度米芬（C22H40BrNO·H2O）应为标示量的85.0%～115.0%；含量测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定，a、供试品溶液，取本品20粒，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含度米芬0.8mg的溶液，必要时滤过；b、对照品溶液，取度米芬对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.8mg的溶液；c、色谱条件，用磺化交联的苯乙烯-二乙烯基共聚物为填充剂，以甲醇～0.05mol/L醋酸钠溶液（80∶20）为流动相；检测波长为274nm，进样体积10μL。
针对上述中的相关技术，发明人认为将上述方法直接挪用在消毒用品中度米芬含量的检测中不适用，存在有导致检测结果不准确的缺陷。
发明内容
为了解决将上述方法直接挪用在消毒用品中度米芬含量的检测，检测结果不准确的问题，本申请提供一种消毒用品中度米芬含量的检测方法。
本申请提供的消毒用品中度米芬含量的检测方法，包括如下步骤：
S1：度米芬消毒用品前处理：将度米芬消毒用品用溶剂溶解，得到度米芬溶解液；
S2：高效液相检测：取样10μL，进样检测，其中，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱，流动相采用磷酸二氢盐溶液-乙腈，其中磷酸二氢盐溶液与乙腈的体积比为（20~30）：（70~85），流动相的pH为2~3，检测波长265nm~275nm。
通过采用上述技术方案，C18硅烷键合硅胶柱为一种通用的高效液相色谱柱，且价格便宜，而药典中所用的磺化交联的苯乙烯-二乙烯基共聚物色谱柱价格昂贵，且适用性单一。本方法中的流动相采用的是磷酸二氢盐溶液与乙腈，即本方法提供了一种与药典中完全不同的流动相，且调整了磷酸二氢盐溶液与乙腈的配比；相比于药典中度米芬含量的检测方法，此方法以特定色谱柱与特定比例的流动相配合使用，来检测消毒用品中的度米芬的含量时，检测方法的检测线性范围更大，相对标准偏差更小，因此检测结果更准确，检出限更低。
可选的，步骤S2中磷酸二氢盐溶液与乙腈的体积比为（23~25）：（75~77）。
通过采用上述技术方案，进一步调整磷酸二氢盐溶液与乙腈的比例，使得被流动相带动进入色谱柱的度米芬消毒用品中的极性部分与非极性部分很好的被分离，检测出的峰面积与度米芬标准峰面积较接近，且多次实验的标准偏差较小，因此最终检测消毒用品中度米芬含量的检出限更低。
可选的，S1中，所述溶剂为甲醇。
通过采用上述技术方案，由于度米芬在水中能溶解，在乙醇中易溶，且甲醇的极性较乙醇大，因此，度米芬在甲醇中的溶解性更强，当分别采用甲醇与乙醇两种溶剂溶解度米芬时，甲醇作为溶剂溶解度米芬较彻底，因此，以甲醇为溶剂溶解的度米芬进行检测时的检出限更低。
可选的，所述S1还包括将度米芬溶解液超声处理10-30min得到度米芬预处理液的步骤。
通过采用上述技术方案，超声处理度米芬溶解液的目的在于将度米芬更好的溶解在甲醇中，进而使得度米芬在极性流动相与非极性色谱柱中的分离效果更好，则检测的峰形更接近标准峰形，最终测得度米芬的检出限较低。
可选的，所述S1还包括将度米芬预处理液冷却至室温，用S1中的溶剂重新定容至超声前体积，得到度米芬标准液的步骤。
通过采用上述技术方案，由于超声操作会导致待超声的度米芬预处理液的温度上升，从而导致度米芬预处理液的体积在高温下蒸发而变小，且测量的体积并不是常温下的标准体积，进而影响后期的检测准确性；因此需要将度米芬预处理液冷却至室温，然后定容至超声前体积，补充超声过程中损失的溶剂，最终使得用溶剂溶解度米芬的浓度更接近度米芬预处理液的初始浓度，进而使得通过检测结果得到的检出限也更加准确。且在进行仪器精密度实验时，每次检测的度米芬浓度不会出现较大偏差，标准偏差较小。
可选的，所述超声处理为冰浴超声，超声温度为0~10℃。
通过采用上述技术方案，在进行超声时，随着超声时间的延长，温度逐渐会上升，则溶剂挥发的更快，溶剂挥发过快会影响度米芬预处理液的浓度，最终影响检测结果，因此进行冰浴超声，维持超声时的低温，有利于保证度米芬预处理液浓度的准确性，从而保证检测结果的准确性和可靠性。
可选的，所述S1还包括将度米芬溶解液、度米芬预处理液或度米芬标准液用小于或等于0.45μm的滤膜进行过滤，得到度米芬进样液的步骤。
通过采用上述技术方案，用滤膜对度米芬标准液进行过滤，过滤掉度米芬标准液中的杂质，使得最终检测的度米芬溶液中杂质含量较少，高效液相色谱峰的峰面积仅包含度米芬的峰面积，不会有其他杂质影响度米芬的峰面积，线性关系更标准。
可选的，步骤S2中流动相的pH为2.3~2.5。
通过采用上述技术方案，由于度米芬中含有极性基团，对于含有极性官能团的化合物来说，pH会影响化合物的存在状态，进而影响分离选择性及色谱峰的对称性；通过进一步调整磷酸二氢盐流动相的pH，使得度米芬在合适pH值的流动相中可以更好的分离，有利于降低度米芬的检出限。
可选的，所述磷酸二氢盐溶液为磷酸二氢钠或磷酸二氢钾中的一种。
通过采用上述技术方案，磷酸二氢钠或磷酸二氢钾均为两种常用的pH缓冲液，将磷酸二氢钾或磷酸二氢钠分别与乙腈以一定的体积比组成流动相，进行消毒用品中的度米芬检测，对度米芬的检测结果均较好。
可选的，所述磷酸二氢盐溶液的浓度为0.02mol/L。
通过采用上述技术方案，由于合适浓度的磷酸二氢盐溶液，具有合适的缓冲容量，则在进行流动相的pH调节时，可以在pH为2-3的变化范围内进行进一步精细的调节。
综上所述，本申请具有至少以下一种有益效果：
1、与药典中度米芬的检测方法相比，本申请的方法采用了价格低、普适性好的C18色谱柱，且使用了由磷酸二氢盐溶液和乙腈组成的流动相，通过色谱柱和流动相的配合，使得本申请度米芬的检测方法成本低、检测线性范围大，相对标准偏差小，且检出限低；
2、本方法采用冰浴超声，通过维持超声时的低温，降低溶剂挥发量，从而降低对度米芬预处理液浓度的影响，保证检测结果的准确性和可靠性。
附图说明
图1是检出限检测中度米芬浓度为0μg/mL的高效液相色谱图；
图2是检出限检测中度米芬浓度为100μg/mL的高效液相色谱图；
图3是检出限检测中度米芬检测的线性关系曲线。
具体实施方式
以下结合实施例及对比例对本申请作进一步详细说明。
原料来源：消毒凝胶、口腔抑菌喷液、妇炎净洗液、足廯净喷雾剂与宝宝肤康凝胶，购自合肥陶一堂医药生物科技有限公司；度米芬标准样品，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；磷酸二氢钾、乙腈，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；甲醇、乙醇，购自西安恒田化工科技有限公司。
实施例1
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
S1：度米芬消毒用品前处理：将0.5g度米芬消毒用品置于50mL容量瓶中，用20mL甲醇溶解，得到度米芬溶解液；将度米芬溶解液用0.45μm的滤膜进行过滤，得到度米芬进样液；
S2：高效液相检测：取度米芬进样液10μL，进样检测，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱色谱柱，流动相采用0.02moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，其中磷酸二氢钾溶液20mL，乙腈85mL（体积比为20：85），流动相pH 为2.4，检测波长为269nm，记录色谱图。
实施例2
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
与实施例1的不同之处在于，S2中进行高效液相检测时，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱色谱柱，流动相采用0.02moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，其中磷酸二氢钾溶液30mL，乙腈70mL（体积比为30：70），pH 为2.4，检测波长为269nm。
实施例3
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
与实施例1的不同之处在于，S2中进行高效液相检测时，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱色谱柱，流动相采用0.02moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，其中磷酸二氢钾溶液24mL，乙腈76mL（体积比为24：76），流动相pH 为2.4，检测波长为269nm。
实施例4
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
S1：a、度米芬消毒用品前处理：将0.5g度米芬消毒用品置于50mL容量瓶中，用20mL甲醇溶解，得到度米芬溶解液；
b、将度米芬溶解液在室温下超声20min，得到度米芬预处理液；
c、将度米芬预处理液冷却至室温，用甲醇重新定容至20mL，得到度米芬标准液；
S2：高效液相检测：取度米芬标准液10μL，进样检测，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱色谱柱，流动相采用0.02moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，其中磷酸二氢钾溶液30mL，乙腈70mL（体积比为30：70），pH 为2.4，检测波长为269nm，记录色谱图。
实施例5
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
与实施例4的不同之处在于：
S1：b步骤中将度米芬溶解液在0~10℃的温度范围内进行冰浴超声20min，得到度米芬预处理液。
实施例6
与实施例4的不同之处在于，S1：c步骤中度米芬预处理液超声结束直接进行定容，不用冷却至室温。
具体步骤为：c、将度米芬预处理液用甲醇重新定容至20mL，得到度米芬标准液。
实施例7
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
与实施例5的不同之处在于：溶剂不同；
具体步骤为：
S1：a、度米芬消毒用品前处理：将0.5g度米芬消毒用品置于50mL容量瓶中，用20mL乙醇溶解，得到度米芬溶解液；
c、将度米芬预处理液冷却至室温，用乙醇重新定容至20mL，得到度米芬标准液。
对比例1
与实施例5的不同之处在于：步骤S2流动相的pH为8。
具体步骤为：S2中进行高效液相检测时，取度米芬进样液10μL，进样检测，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱色谱柱，流动相采用0.2moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，其中磷酸二氢钾溶液24mL，乙腈76mL（体积比为24：76），流动相pH 为8，检测波长为269nm，记录色谱图。
对比例2
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
与实施例5的不同之处在于，S2中高效液相检测的色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱色谱柱，流动相采用0.02moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，其中磷酸二氢钾溶液10mL，乙腈90mL（体积比为10：90），流动相pH 为2.4，检测波长为269nm。
对比例3
采用中国药典《度米芬滴丸》项下的度米芬测定方法进行检测。
对比例4
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
S1：取样品约5.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密吸取流动相50 mL 对样品进行稀释，称量，超声15 min 后，再称量，用流动相补足减失质量，过滤膜，即得样品溶液。
S2：高效液相检测：取样品溶液10μL，进样检测，高效液相检测的色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱，流动相采用0.012 mol/L十二烷基硫酸钠-乙腈-甲醇(体积比为2：6：2)，检测波长为275nm，记录色谱图。
对比例5
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
S1：取本品内容物，精密称定适量(约相当于度米芬2.5 mg) ， 置于250mL容量瓶中，加甲醇约150mL，超声处理15 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
S2：高效液相检测：取供试品溶液10μL，进样检测，高效液相检测的色谱柱为Agilent TC-C18 (4.6mm×250mm，5μm)，流动相为0.012 mol/L十二烷基硫酸钠溶液(0.5%磷酸二氢钠，用30%磷酸溶液调至pH值至3.0)-乙腈(体积比为25:75)，检测波长269nm，记录色谱图。
对比例6
消毒用品中度米芬含量的检测方法，其检测步骤为：
与实施例5的不同之处在于：S2中进行高效液相检测时，取度米芬进样液10μL，进样检测，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱色谱柱，流动相采用0.02moL/L磷酸二氢钾-甲醇，其中磷酸二氢钾溶液25mL，甲醇75mL（体积比为25：75），流动相pH 为2.4，检测波长为275nm，记录色谱图。
性能检测试验
a、检出限检测
检测步骤为：
S1：度米芬消毒用品前处理：分别将不同重量的度米芬标准样品置于50mL容量瓶中，用20mL甲醇溶解，得到不同浓度的度米芬溶解液；将度米芬溶解液用0.45μm的滤膜进行过滤，得到度米芬进样液；
S2：高效液相检测：取度米芬进样液10μL，进样检测，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱，流动相采用0.02moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，其中磷酸二氢钾溶液20mL，乙腈85mL（体积比为20：85），流动相pH 为2.4，检测波长为269nm，记录色谱图。
（用表1的度米芬溶解液进行度米芬检测，并绘制线性关系图）：
表1
| 浓度（μg/mL） | 0 | 10 | 20 | 50 | 100 | 400 | 600 |
采用上述方法检测 50μg/mL度米芬溶解液，进行仪器精密度试验，试验结果如表2所示：
表2
| 色谱峰面积 | 平均值 | RSD/% |
| 1.9125,1.8943,1.9051,1.8994,1.9213,1.8997,1.8969 | 1.9042 | 0.005059 |
结合表1和表2，可以得到，以度米芬的质量浓度（X）为横坐标，相应的色谱峰面积（Y）为纵坐标绘制标准工作曲线，其中，色谱峰面积（Y）为三次检测的平均值，得到线性方程为Y=0.1159X+3.1086，限位范围为0-600 μg/mL，R2=0.999，以3RSD/k（k为低浓度斜率）的方法，计算得到检出限为0.0748μg/mL。
本申请的实施例3、4、5与对比例3、4、5、6的检出限对比结果如表3所示：
表3
| 体系 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | 对比例6 |
| 检出限(μg/mL) | 0.0748 | 0.0685 | 0.0579 | 0.7 | 0.13 | 2.03 | 1.5 |
注：实施例4、5与对比例3、4、5、6中检出限的检测方法与计算方法与实施例3中检出限的检测方法与计算方法相同。
由表3可以看出，对比例3、4、5、6中采用不用色谱柱与流动相的结合进行度米芬的检测时，检出限均比本申请实施例的检出限高；实施例4与实施例3的不同之处在于添加了超声操作，实施例4的检出限比实施例3的检出限低；实施例5与实施例4的不同之处在于将常温超声操作改为冰浴超声操作，实施例5的检出限比实施例4的检出限低。
实际样品分析
按照实施例5的步骤制备不同种类的度米芬进样液，并进行检测，检测结果如表4所示：
表4
| 样品 | 度米芬检测值 | 标示量 |
| 消毒凝胶 | 0.2043 | 0.15-0.25 |
| 口腔抑菌喷液 | 0.4122 | 0.3-0.5 |
| 妇炎净洗液 | 0.3694 | 0.3-0.5 |
| 足廯净喷雾剂 | 0.5825 | 0.3-0.7 |
| 宝宝肤康凝胶 | 0.3412 | 0.2-0.4 |
将不同的实际样品进行检测，检测结果对照标准曲线，得到的度米芬检测值均在样品标示量范围内，证明此标准曲线较准确，得到的检出限结果也较准确。
色谱图分析
对实施例1至7和对比例1至6中得到的高效液相谱图进行分析，统计保留时间与拖尾因子。统计结果如表5所示：
表5
| 检测指标 | 保留时间 | 拖尾因子（r） |
| 实施例1 | 0.51 | 1.11 |
| 实施例2 | 0.46 | 1.12 |
| 实施例3 | 0.44 | 1.08 |
| 实施例4 | 0.43 | 1.04 |
| 实施例5 | 0.43 | 1.01 |
| 实施例6 | 0.46 | 1.10 |
| 实施例7 | 0.66 | 1.56 |
| 对比例1 | 0.83 | 1.52 |
| 对比例2 | 1.5 | 1.42 |
| 对比例3 | 13.6 | 1.98 |
| 对比例4 | 6.8 | 1.56 |
| 对比例5 | 8.6 | 1.31 |
| 对比例6 | 10.5 | 2.3 |
结合实施例1、2和实施例3，可以看出，一定体积比例的流动相及固定相的配合，使得度米芬的检测出峰速度较快，拖尾因子分别为1.11、1.12、1.08，峰形标准；当磷酸二氢钾溶液-乙腈体积比为24:75时，保留时间最短，拖尾因子最小。
结合实施例4与实施例3，由于实施例4与实施例3的不同之处在于，实施例4添加了超声操作，可以看出，超声操作使得度米芬在甲醇中分散性变好，最终检测得到的色谱峰的拖尾因子为1.04，比实施例3更接近标准度米芬峰的峰形，说明超声操作效果好。
结合实施例5与实施例4，可以看出，实施例5中对度米芬检测样品进行了冰浴超声，使得度米芬样品在超声时，甲醇溶剂难以挥发，则度米芬样品在甲醇中溶解的较彻底与均匀，最终检测得到的色谱峰的拖尾因子为1.01，最接近标准度米芬峰的峰形，说明冰浴超声效果较好。
结合实施例6和实施例5，可以看出，当度米芬预处理液超声后未降温直接进行检测时，由于溶剂挥发较多，度米芬在溶剂中溶解得到的真实度米芬标准液浓度与理论度米芬标准液浓度不同，对出峰的标准性有较大的影响，拖尾因子变大。
结合实施例7和实施例5，可以看出，实施例7中所用样品溶剂为乙醇，当乙醇为样品溶剂进行样品检测时，度米芬样品的色谱峰拖尾因子为1.14，峰形拖尾比溶剂为甲醇时严重，因此，甲醇为溶解度米芬样品的最佳溶剂。
结合实施例5和对比例1，可以看出，当磷酸二氢钾溶液的pH变为8时，对度米芬的出峰有较大的影响，保留时间明显延长，拖尾因子大于1.5，拖尾严重。
结合实施例5和对比例2，可以看出，当磷酸二氢钾溶液与乙腈的比例范围超出本申请的的比例范围时，对度米芬的出峰有较大的影响，保留时间明显延长，拖尾因子为1.42，拖尾严重。
结合实施例5与对比例3、4、5、6，可以看出，四种检测方法的保留时间相比于本申请的保留时间延长大约15-25倍，导致检测度米芬的时间延长，检测效率大大降低；对比例3为依据药典进行的度米芬检测，相比于本申请的方法，拖尾因子较大，拖尾严重；对比例4、5、6依据本行业中其他检测度米芬的方法进行检测，其他检测方法的拖尾严重，检测峰形不标准。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (10)
1.消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：度米芬消毒用品前处理：将度米芬消毒用品用溶剂溶解，得到度米芬溶解液；
S2：高效液相检测：取样10μL，进样检测，其中，色谱柱采用C18硅烷键合硅胶柱，流动相采用磷酸二氢盐溶液-乙腈，其中磷酸二氢盐溶液与乙腈的体积比为（20~30）：（70~85），流动相的pH为2~3，检测波长265nm~275nm。
2.根据权利要求1所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，步骤S2中磷酸二氢盐溶液与乙腈的体积比为（23~25）：（75~77）。
3.根据权利要求1所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，S1中，所述溶剂为甲醇。
4.根据权利要求1所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，所述S1还包括将度米芬溶解液超声处理10-30min得到度米芬预处理液的步骤。
5.根据权利要求4所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，所述S1还包括将度米芬预处理液冷却至室温，用S1中的溶剂重新定容至超声前体积，得到度米芬标准液的步骤。
6.根据权利要求4所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，所述超声处理为冰浴超声，超声温度为0~10℃。
7.根据权利要求1或4或5或6任意一项所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，所述S1还包括将度米芬溶解液、度米芬预处理液或度米芬标准液用小于或等于0.45μm的滤膜进行过滤，得到度米芬进样液的步骤。
8.根据权利要求1所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，步骤S2中流动相的pH为2.3~2.5。
9.根据权利要求1所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢盐溶液为磷酸二氢钠或磷酸二氢钾中的一种。
10.根据权利要求1所述的消毒用品中度米芬含量的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢盐溶液的浓度为0.02mol/L。
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