CN114073654A - 露莓汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种露莓汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途,其中所述组合物用于减少细胞中的活性氧物质引起的氧化性损伤、减少肌肤的血色素含量、抑制黑色素生成、减少肌肤红色斑点及提升肌肤的保湿能力。
Description
技术领域
本案是关于一种露莓(Rubus fruticosus)汁液的用途,特别是关于露莓汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途。
背景技术
随着环境变迁,紫外线指数及空气污染日益严重,阳光中紫外线辐射是造成肌肤损伤、老化、晒黑的主要原因,肌肤长期暴露在阳光下甚至会生成黑色素,形成斑点,难以消退。另外,阳光中紫外线辐射会促使肌肤细胞中产生活性氧物质(reactive oxygenspecies,ROS,亦称自由基)影响,导致肌肤老化、失去光泽、干燥等,甚至呈现泛红的状态。
另外,肌肤细胞随着年纪而逐渐老化,肤质日渐变得粗糙并产生皱纹,由于肌肤细胞的代谢速度减缓而导致肌肤的复原速度日渐变慢,再加上长期受到空气污染等外在的环境刺激,累积大量活性氧物质及黑色素等无法及时完全代谢,造成肌肤状况无法得到改善。
习知的化妆品、保养品及健康食品大多由化学成分所制成,长期使用不但对人体健康有害无益,更对较敏感的肌肤造成刺激,加剧肌肤泛红的情况,此外,制造过程对环境及生态不友善,造成环境污染,甚至通过排水***而进入生态圈。
为了解决上述问题,本领域的技术人员亟需研发出具有对抗紫外线、抗氧化、抑制黑色素生成、减少肌肤红色斑点、舒缓泛红现象及提升肌肤的保湿能力的调理肌肤的组合物,以造福有此需求的广大族群。
发明内容
有鉴于此,本发明之目的是为提供一种露莓(Rubus fruticosus)汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途其中所述组合物用于抑制黑色素生成及减少肌肤红色斑点,透过减少细胞中的黑色素相关基因表达量达到所述抑制黑色素生成,其中所述组合物用于减少细胞中的活性氧物质引起的氧化性损伤而达成抗氧化作用,保护肌肤细胞,实现抗氧化、美白及减少肌肤红色斑点。
本发明之另一目的是为提供一种露莓(Rubus fruticosus)汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途,减少肌肤的血色素含量,舒缓肌肤泛红的现象,并且提升肌肤的保湿能力,增加肌肤的光泽度,延缓肌肤老化。
一种露莓(Rubus fruticosus)汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途,其中所述露莓汁液是以一含水之溶剂提取而得。
在一些实施例中,所述露莓(Rubus fruticosus)汁液的总多酚的含量为8000至11000ppm之间。
在一些实施例中,所述组合物用于减少细胞中的活性氧物质引起的氧化性损伤。
在一些实施例中,所述组合物用于减少肌肤的血色素含量。
在一些实施例中,所述组合物用于抑制黑色素生成。
在一些实施例中,所述组合物用于透过减少细胞中的黑色素相关基因表达量达到所述抑制黑色素生成。
在一些实施例中,所述黑色素相关基因包括:酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)、酪胺酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)、黑素皮质素受体1(MC1R)。
在一些实施例中,所述组合物用于减少肌肤红色斑点。
在一些实施例中,所述组合物用于提升肌肤的保湿能力。
在一些实施例中,所述组合物用于透过增加细胞中的保湿相关基因表达量达到所述提升肌肤的保湿能力。
在一些实施例中,所述组合物是进一步制备成保养品组合物、保健食品组合物、化妆品组合物或皮肤外用剂。
综上所述,任一实施例的露莓汁液可抑制活性氧物质产生、透过减少细胞中的黑色素相关基因(例如:酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)、酪胺酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)、黑素皮质素受体1(MC1R))的表达量达到所述抑制黑色素生成,故露莓汁液可有效防止由紫外线所产生的多种肌肤老化现象,实现抗氧化、美白及减少肌肤红色斑点,提供肌肤对于紫外线以及蓝光的防护。
此外,所述露莓汁液减少肌肤的血色素含量,舒缓肌肤泛红的现象,并且提升肌肤的保湿能力,增加肌肤的光泽度。
附图说明
图1是空白控制组、对照组、及实验组的活性氧化物质(ROS)高度表达的细胞比例之结果比较图。###p值<0.001,相较于空白控制组,***p值<0.001,相较于对照组。
图2是所述空白控制组与所述实验组的保湿相关基因的表达量之结果比较图。***p值<0.001,相较于空白控制组。
图3是所述空白控制组与所述实验组的黑色素相关基因的表达量之结果比较图。**p值<0.01,***p值<0.001,相较于空白控制组。
图4是所述空白控制组、对照组、及所述实验组的黑色素含量之结果比较图。***p值<0.001,相较于空白控制组。
图5A及图5B分别是受试者连续摄取含有所述实验组的饮品在第0周、第4周及第8周后的肌肤紫外线红色斑点数量的结果比较图以及以检测仪所拍摄的图像,以施用前受试者的紫外线红色斑点的数量为100%。*p值<0.1,相较于0周。
图6A及图6B分别是受试者连续摄取含有所述实验组的饮品在第0周、第4周及第8周后的肌肤血色素指数以及以检测仪所拍摄的图像,以施用前受试者的肌肤血色素指数为100%。*p值<0.1,***p值<0.001,相较于0周。
图7A及图7B分别是受试者连续摄取含有所述实验组的饮品在第0周、第4周及第8周后的肌肤光泽度变化以及以检测仪所拍摄的图像,以施用前受试者的肌肤光泽度为100%。*p值<0.1,相较于0周。
具体实施方式
以下将描述本案的部分具体实施态样。在不背离本案精神下,本案尚可以多种不同形式之态样来实践,不应将保护范围限于说明书所具体陈述的条件。
本案使用Excel软体进行统计分析。数据以平均值±标准差(SD)表示,各组之间的差异以学生t检验(student's t-test)进行分析。
本文中所使用数值为近似值,所有实验数据皆表示在正负10%的范围内,最佳为在正负5%的范围内。
如本文中所使用,术语“汁液”是指藉由提取作用所制备之产物。所述汁液可以溶于溶剂中之溶液形式呈现,或汁液可为不含或大体上不含溶剂之浓缩物或精华呈现。
露莓(学名:Rubus fruticosus,又名黑莓)是蔷薇科悬钩子属的一种灌木的果实。
如本文所用“露莓”通常是指植物果实,其中果实可包含原始、经干燥或以其他物理方式加工以利于处理之果实,其可进一步包含完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨或以其他方式经加工以影响原物料之大小及实体完整性之果实。
在一些实施例中,「露莓汁液」可为露莓的果实经榨取而得的汁液。举例而言,在一些实施例中,是将露莓的果实经碾碎、挤压并去除果渣与较细小的悬浮物后,再将其浓缩至一定糖度而得。在另一些实施例中,露莓汁液于制备过程中亦可经过其他大致上不影响其产生本文所述功效的程序,例如发酵,以增添风味或其他用途。
在一些实施例中,「露莓汁液」亦可为使用合适的提取溶剂提取露莓的果实而得到的提取液。举例而言,可将露莓浸泡于水中于常温下经适当时间进行提取,再经过滤去除固态杂质后可得到露莓果实提取液。
在一些实施例中,由露莓果实所榨取的汁液(有时亦称之为「露莓汁液」)可抑制自由基生成、减少肌肤的血色素含量、抑制黑色素生成、减少肌肤红色斑点的数量以及提升肌肤的保湿能力。因此,露莓汁液可用于制备抑制自由基生成、减少肌肤的血色素含量、抑制黑色素生成、减少肌肤红色斑点的数量以及提升肌肤的保湿能力的肌肤调理的组合物。
在一些实施例中,前述的组合物可为医药组合物、保养品组合物、食品组合物、保健食品组合物。
医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于经肠道地(enterally)、非经肠道地(parenterally)或局部地(topically)投药的剂型。例如可为:注射品(injection)[例如,无菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterile powder)、外部制剂(external preparation)或其他类似物。
医药组合物可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术之医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如,医药上可接受的载剂可包含下列一种或多种载剂:乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体(liposome)以及类似之物。有关这些载剂的选用与数量是熟习此项技术人员可视情况进行选择的。
以口服剂型为例,可利用任何合宜之方法,将所述生物活性物质或医药组成物以适于口服投药的剂型提供,其中,适于口服之液态剂型包括糖浆剂、口服液、悬浮液、酏剂等,适于口服之固态剂型则包括粉剂、颗粒剂、***锭、糖衣锭、肠溶锭、咀嚼锭、发泡锭、膜衣锭、胶囊剂、长效缓释锭等。于根据本发明所提供之所述生物活性物质或医药组成物中可含有任何不会不利影响活性成分(即,乳双歧杆菌TCI604及/或其代谢产物)之所欲效益的医药上可接受之载剂。举例言之,但不以此为限,前述液态剂型之医药上可接受之载剂的例子包括:水、食盐水、葡萄糖(dextrose)、甘油、乙醇或其类似物、油(例如橄榄油、蓖麻油、棉籽油、花生油、玉米油、及胚芽油)、甘油、聚乙二醇、及前述之组合;前述固态剂型之医药上可接受之载剂的例子则包括:纤维素、淀粉、高岭土(kaolinite)、膨润土(bentonite)、柠檬酸钠、明胶、琼脂、羧甲基纤维素、***胶、海藻胶、单硬脂酸甘油酯(glycerylmonostearate)、硬脂酸钙(calcium stearate)、及前述之组合。
在一些实施例中,医药上可接受的载剂可包含下列一种溶剂:水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及其他任何合适的溶剂。
在一些实施例中,所述医药组合物可由下列所述的任一种非经肠道途径(parenteral routes)来投药:皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection)以及病灶内注射(intralesional injection)。
在一些实施例中,医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于局部地施用于皮肤上的外部制剂(external preparation)。举例而言,其可为下列所述的任一种,但不限于此:乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(liniment)、粉末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、滴剂(drop)、悬浮液(suspension)、油膏(salve)以及绷带(bandage)。
在一些实施例中,外部制剂是藉由将医药组合物与一为熟习此项技艺者所详知的基底(base)相混合而制成。
在一些实施例中,所述基底可包含下列一种或多种的添加剂(additives):水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氢化合物(hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum,)]、蜡(wax)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellowwax)]、保存剂(preserving agents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性剂(surfactants)、吸收增强剂(absorption enhancers)、安定剂(stabilizing agents)、胶凝剂(gelling agents)[诸如974P(974P)、微结晶纤维素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纤维素(carboxymethylcellulose)]、活性剂(active agents)、保湿剂(humectants)、气味吸收剂(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH调整剂(pH adjusting agents)、螯合剂(chelating agents)、乳化剂(emulsifiers)、闭塞剂(occlusive agents)、软化剂(emollients)、增稠剂(thickeners)、助溶剂(solubilizing agents)、渗透增强剂(penetration enhancers)、抗刺激剂(anti-irritants)、着色剂(colorants)以及推进剂(propellants)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在熟习此项技术之人士的专业素养与例行技术范畴内。
在一些实施例中,保养品中可包含有一被广泛地使用于保养品制造技术之可接受的佐剂(acceptable adjuvant)。例如,所述可接受的佐剂可包含下列一种或多种佐剂:溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂(screening agent)、螯合剂、界面活性剂、染色试剂(coloring agent)、增稠剂(thickening agent)、填料(filler)、香料以及气味吸收剂。可根据实际需求对这些试剂的选用与数量进行合适的调整。
在一些实施例中,保养品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于护肤(skincare)或化妆(makeup)的形式,其可为下列中的任一种,但不限于此:水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oilysolution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或复合型之乳剂、凝胶、软膏、乳霜、面膜(mask)、贴片、贴布(pack)、擦剂、粉末、气溶胶、喷雾、乳液、乳浆、糊剂、泡沫、分散液、滴剂、慕斯(mousse)、防晒油(sunblock)、防晒精华液、防晒乳霜、防晒喷剂、化妆水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妆产品(makeup removerproducts)、肥皂(soap)以及其他身体清洁产品(body cleansing products)等。
在本发明的一实施例中,提供化妆品组合物和个人护理产品,其包含能够显示变色的着色组合物,例如包含在载体和苯乙烯-马来酸酐共聚物中的颜料颗粒的颜料研磨物。化妆品组合物可以是给人体皮肤提供色彩的任意化妆品或个人护理产品形式。例如,化妆品组合物可以是、但不限于唇膏、唇彩、保湿唇膏、指甲油、粉底、扑面粉、底粉、遮瑕膏、腮红、眼影、眼线器、睫毛膏或古铜色化妆品。个人护理产品可以是给人体皮肤赋予色彩的任意适合的形式。例如,个人护理产品可以包括日霜或洗剂、晚霜或洗剂、防晒露、霜或油和其它SPF产品、增湿剂、油膏、软膏、凝胶、体乳、人造褐变组合物、脱毛等。
本发明的化妆品组合物和个人护理产品施用于人皮肤***,包括皮肤、唇、指甲、毛发和其它角质表面。本文所用的术语“角质表面”是指包含角蛋白的人皮肤***的部分,包括但不限于哺乳动物、优选人类的皮肤、唇、毛发(包括头皮、睫毛、眉毛、面毛和体毛和指甲(脚趾甲、指甲、甲上皮等)。
能够显示变色的化妆品或个人护理产品施用于皮肤的任意区域且优选面部、颈部、手、足或身体的另外的区域上,例如壁、腿和背部。
在一些实施例中,保养品亦可与下列中之已知活性的外用剂(external useagents)的一种或多种一起合并使用:美白剂(whitening agents)[诸如维生素A酸(tretinoin)、儿茶素(catechin)、曲酸、熊果苷以及维生素C]、保湿剂、杀菌剂(bactericides)、紫外线吸收剂(ultraviolet absorbers)、植物提取汁液(plantextracts)[诸如芦荟提取汁液(aloe extract)]、皮肤营养剂(skin nutrients)、麻醉剂(anesthetics)、抗痘剂(anti-acne agents)、止痒剂(antipruritics)、止痛剂(analgesics)、抗皮肤炎剂(antidermatitis agents)、抗过角化剂(antihyperkeratolytic agents)、抗干皮肤剂(anti-dry skin agents)、抗汗剂(antipsoriatic agents)、抗老化剂(antiaging agents)、抗皱剂(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出剂(antiseborrheic agents)、伤口治疗剂(wound-healing agents)、皮质类固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有关这些外用剂的选用与数量是落在熟习此项技术之人士的专业素养与例行技术范畴内。
在一些实施例中,医药组合物可被当作食品添加物(food additive),藉由习知方法于原料制备时添加,或是于食品的制作过程中添加,而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品。
在一些实施例中,食品的种类可为但不限于:饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食补充品(dietary supplements)。
所述根据本发明所提供之生物活性物质或医药组成物是可呈任何合宜的型式,并无特殊限制,端视所欲的用途而呈对应之合宜剂型;举例言之,但不以此为限,所述生物活性物质或医药组成物可以口服之投药方式施用至有需要之个体上。视使用形式及用途而定,可选用医药上可接受之载剂以提供所述生物活性物质或医药组成物,其中,所述载剂为熟悉制药技术者所熟知,包括赋形剂、稀释剂、辅助剂、安定剂、吸收促进剂、崩散剂、增溶剂、乳化剂、抗氧化剂、黏合剂、结合剂、增黏剂、分散剂、悬浮化剂、润滑剂、吸湿剂等。
根据本发明所提供之食品组成物可为饮品、固态食品、或半固态食品,且可以健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充品或特殊营养食品的形式提供。举例言之,但不以此为限,所述食品组成物可为乳制品、肉类加工品、面包类、面食品、饼干、冰品、***锭、胶囊、果汁类、茶类、气泡水、酒精饮料、运动饮料、营养饮料、婴幼儿离乳食品等产品。较佳地,所述食品组成物是以健康食品或保健食品的形式提供。
此外,视使用形式及需求而定,可于根据本发明所提供之食品组成物中含有任何适宜之食品添加物。举例言之,包括但不限于,防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、漂白剂、保色剂、膨胀剂、营养添加剂、着色剂、调味剂(例如:甜味剂)、黏稠剂、结着剂、食品工业用化学药品、乳化剂、以及品质改良用、酿造用及食品制造用剂。
可于根据本发明所提供之健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充食品或特殊营养食品的外包装上标示建议使用量、特定族群(例如:孕妇、儿童等)的使用标准及条件、或与其他食品或医药共同服用的建议事项,以利使用者在无医师、药师或相关执事人员指导下自行服用而无安全疑虑。
下列多个实施例中的实验步骤若无特别叙明,即在室温(25±5℃)、常压(1atm)下进行。
[实施例1]:露莓(Rubus fruticosus)的汁液之制备
首先,将露莓(Rubus fruticosus)(来自于智利(Chile))的果实切成12mm的大小,接而以水、醇类、含水醇类或其组合作为提取溶剂对露莓同时进行均质及提取,其中提取的温度介于75℃至95℃,较佳为80℃~90℃,提取溶剂与露莓的体积比介于5~20:1~5,较佳为5:1。提取温度界于50℃~100℃,较佳为80℃~90℃。本实施例中提取时间为0.5~3小时,较佳为1小时。
经上述提取步骤所得露莓汁液冷却至室温后,可进一步以800~1300rpm之转速在15℃~25℃下离心5~10分钟而获得一上清液,所述上清液可以400目(mesh)之滤网过滤,以移除残余固体物。进一步在55℃~65℃进行减压浓缩而获得一浓缩产物。在一实施例中,为获得固态的露莓汁液,可将前述经减压浓缩的露莓汁液以喷雾干燥方式去除溶剂,因此获得露莓汁液粉末。在另一实施例中,将2.5g的上述经浓缩的露莓汁液加入到50mL的水或饮料中,得到浓度为0.05mg/mL的露莓汁液饮品,所述露莓汁液饮品的糖度为5.0±0.3°Bx。
[实施例2]:露莓汁液的总黄酮及总多酚含量检测
总黄酮含量检测的分析方法主要是参考Zhishen Jia et al.,(1999),FoodChemistry,64:555-559所述方法并加以修饰,取200μL之适当稀释后的样品加入1000μL之H2O,混合均匀后,加入200μL之5%柠檬酸钠(Sodium nitrite),静置6分钟后加入200μL之10%硝酸铝(Aluminum nitrate),再静置6分钟。最后加入2mL之4%氢氧化钠(Sodiumhydroxide)与1.4mL之H2O,混合均匀,于500nm下进行分析,以芸香素(Rutin)为标准品绘制标准曲线。在本实施例中,实施例1之露莓汁液的总黄酮的含量为1000至3000ppm之间,优选地2000至3000ppm之间,具体地为2248.9ppm。
总多酚含量检测的分析方法是将各样本以水稀释10倍后取100mL到离心管中。接着,加入500μL之Folin-Ciocalteu酚试剂至离心管中与稀释后的样本混合并静置3分钟后,再加入400μL之7.5%碳酸钠混匀静置30分钟后以得到待测反应溶液。于二次静置后,取200μL之待测反应溶液至96孔板中,并测量待测反应溶液于750nm下之吸光值。并且,以没食子酸(Gallic acid)作为标准品制作标准曲线。在本实施例中,实施例1之露莓汁液的总多酚的含量为8000至11000ppm之间,优选地9000至10000ppm之间,具体地为9364.6ppm。
[实施例3]:细胞实验-露莓汁液抑制活性氧物质(ROS)生成
于此,以荧光探针DCFH-DA配合流式细胞仪,测定人类皮肤纤维母细胞CCD-966sk经露莓提取组合物处理后,其活性氧物质含量的变化。
材料与仪器
1.细胞株:人类皮肤纤维母细胞CCD-966sk(生物资源保存及研究中心(BCRC),No.60153),以下简称CCD-966sk细胞。
2.培养基:含有10vol%FBS(fetal bovine serum,购自Gibco)之基础培养基。其中,基础培养基是由Eagle’s最低限度基本培养基(Eagle’s minimum essential medium(MEM),购自Gibco,产品编号15188-319)额外添加成分使其含有1mM丙酮酸钠(sodiumpyruvate,购自Gibco)、1.5g/L碳酸氢钠(sodium bicarbonate,购自Sigma)及0.1mM非必需氨基酸(non-essential amino acid solution,购自Gibco)所配制而成。
3.磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液):购自Gibco,产品编号10437-028。
4.DCFH-DA溶液:将二氯二氢荧光素二乙酸酯(2,7-dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA;产品编号SI-D6883,购自Sigma)溶于二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO,购自Sigma,产品编号SI-D6883-50MG)以配制成5mg/mL的DCFH-DA溶液。
5.流式细胞仪(Flow cytometry),Beckman,Catalog No.660519。
6.双氧水(H2O2):购自Sigma-Aldrich,产品型号95299-1L。
7.胰蛋白酶(Trypsin-EDTA):10X Trypsin-EDTA(购自Gibco)以1X PBS溶液稀释10倍。
8.露莓汁液:此实验中所使用的露莓汁液是透过如上实施例1所获得。
实验步骤
实验将会分为实验组、空白控制组(未添加露莓汁液、亦无经过双氧水处理的组别)、以及对照组(未添加露莓汁液,但经过双氧水处理的组别)三组进行,各组分别进行二重复试验:
1.将CCD-966sk细胞以每孔1×105个的方式,接种于每孔含2mL培养基之6孔培养盘中。
2.将培养盘置于5%CO2、37℃下,培养24小时。
3.移除培养基。
4.加入2mL实验培养基至培养盘的各孔中,并于37℃下培养1小时。
实验组的实验培养基为添加有5μL的露莓汁液之2mL细胞培养基(即露莓汁液占细胞培养基的体积百分比为0.25%)。
控制组的实验培养基为单纯的2mL细胞培养基(即不含露莓汁液)。
对照组的实验培养基为单纯的2mL细胞培养基(即不含露莓汁液)。
5.添加浓度为5μg/mL的DCFH-DA溶液2μL于每孔中的细胞培养基,使DCFH-DA处理细胞15分钟。
6.于DCFH-DA处理后,于实验组的实验培养基以及对照组的实验培养基分别加入H2O2,并于37℃下反应1小时。具体来说,35%wt的双氧水先稀释成100mM(将10μL的双氧水加入990μL的二次蒸馏水),再取20μL的100mM的双氧水加入2mL的细胞培养盘中。
7.反应后,每孔以1mL的1X PBS溶液润洗2次。
8.将200μL胰蛋白酶加至每孔中并在暗处反应5分钟。反应后,添加6mL细胞培养基终止反应。
9.将各孔中之细胞与细胞培养基收集至个别对应的1.5mL离心管内,并将含有细胞与培养基之离心管以400xg离心10分钟。
10.离心后,移除上清液,并以1X PBS溶液回溶细胞沉淀物。
11.再以400xg离心10分钟。
12.离心后,移除上清液,于暗处以以1mL的1X PBS溶液再次悬浮细胞,以得到待测细胞液。
13.使用流式细胞仪检测各孔的待测细胞液中DCFH-DA的荧光信号。进行荧光检测之激发波长为450-490nm,放射波长为510-550nm。由于DCFH-DA进入细胞后会先被水解为DCFH(二氯二氢荧光素),再被活性氧物质氧化为可发出绿色荧光的DCF(二氯荧光素),经DCFH-DA处理之细胞的荧光强度可反映细胞内活性氧物质含量,并藉此得知细胞内活性氧物质高度表达的细胞数占原细胞数的比例。因实验是进行二重复,故将各组的二重复实验之量测结果平均以取得平均值,然后以控制组的平均值为100%之相对ROS的生成量,将对照组与实验组的平均值换算为相对ROS的生成量,如图1所示。
实验结果
如图1所示,由比较控制组、对照组的结果可知,在经过双氧水处理后,相对ROS的生成量通过高荧光表达会大幅增加约280%;其显示双氧水处理确实会导致细胞内产生活性氧物质,进而对皮肤纤维母细胞产生后续伤害。另一方面,根据比较对照组以及实验组的结果可知,当细胞经过露莓汁液处理后,相对ROS的生成量明显减少约29%,甚至低于控制组;其显示露莓汁液可有效减少活性氧物质在细胞内的产生或累积。换言之,露莓汁液可作为一种活性氧物质清除剂。亦即,露莓汁液可透过降低细胞内活性氧物质含量,减少细胞受到活性氧物质等所导致的氧化伤害。
[实施例4]细胞实验-露莓汁液提升保湿基因的表达量
举例来说,保湿相关基因为KRT10基因(Gene ID:3858)、KRT1基因(Gene ID:3848)及SMPD1基因(Gene ID:6609)。
其中,角蛋白10(keratin 10,KRT10)及角蛋白1(keratin 1,KRT1)是负责编码角蛋白,皮肤的主要构成物,而鞘磷脂磷酸二酯酶(Sphingomyelin Phosphodiesterase 1,SMPD1)、酪胺酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TYRP1)是负责编码鞘磷脂磷酸二酯酶,将鞘磷脂转化为神经酰胺。
材料与仪器
细胞株:人类初代皮肤角质细胞HPEK-50(Human primary epidermalkeratinocytes)(CELLnTEC公司(瑞士),HPEK-50)。
培养基:Keratinocyte-SFM(购自Thermo公司,编号17005042)。
RNA提取试剂套组(购自Geneaid公司,中国台湾,Lot No.FC24015-G)。
测量标的基因引子,其中包含SRD5A1基因、SRD5A2基因、AR基因、KROX20基因、SCF基因、VEGF基因、IGF1基因、TGF-B基因,另包括内部控制组(TBP基因)。
ABI StepOnePlusTM即时PCR***(ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司,美国))。
露莓汁液:此实验中所使用的露莓汁液是透过如上实施例1所获得。
实验步骤
首先,取1.5x105个人类初代皮肤角质细胞至每孔含有2毫升上述培养基的六孔细胞培养盘中,于37℃下培养24小时,将每孔培养后的人类初代皮肤角质细胞依据下列测试条件分为控制组以及实验组(共二组)来处理每孔培养后的人类初代皮肤角质细胞。
测试条件
控制组是单纯使用2毫升培养液来培养人类初代皮肤角质细胞,未再加入其他添加成分。实验组是将如上实施例所制备的露莓汁液0.25mg/mL浓度的培养基2mL,培养人类初代皮肤角质细胞24小时,每组进行三重复。
将处理后的人类初代皮肤角质细胞(即控制组及实验组)以细胞裂解液分别破细胞膜以形成二组的细胞溶液。接着,以RNA提取试剂套组(购自Geneaid公司,中国台湾,LotNo.FC24015-G)分别提取四组细胞溶液内的RNA。接着,每组取1000纳克(ng)的提取出的RNA作为模板,透过III反转录酶(购自Invitrogene公司,美国,编号18080-051)将提取出的RNA反转录为相应之cDNA。再藉由ABI StepOnePlusTM即时PCR***(ABIStepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司,美国))、KAPASYBR FAST(购自Sigma公司,美国,编号38220000000)及表1的引子(SEQ ID NO:1~8)对两组的cDNA进行定量即时反转录聚合酶连锁反应(quantitative real-time reversetranscription polymerase chain reaction)以观察二组的人类初代皮肤角质细胞内的KRT10基因、KRT1基因及SMPD1基因的表达量。定量即时反转录聚合酶连锁反应的仪器设定条件为95℃反应20秒,接着95℃反应3秒,60℃反应30秒,并重复40个回圈,并使用2-ΔCt方法进行基因定量。于此,藉由cDNA进行定量即时反转录聚合酶连锁反应可间接定量KRT10基因、KRT1基因及SMPD1基因的mRNA表达量,进而推断KRT10基因、KRT1基因及SMPD1基因编码的蛋白质的表达量。
表1:
引子名称 | 序列编号 | 引子序列 |
KRT10-F | SEQ ID NO:1 | TCCTACTTGGACAAAGTTCGGG |
KRT10-R | SEQ ID NO:2 | CCCCTGATGTGAGTTGCCA |
KRT1-F | SEQ ID NO:3 | AGAGTGGACCAACTGAAGAGT |
KRT1-R | SEQ ID NO:4 | ATTCTCTGCATTTGTCCGCTT |
SMPD1-F | SEQ ID NO:5 | CTGACTCTCGGGTTCTCTGG |
SMPD1-R | SEQ ID NO:6 | TCCACCATGTCATCCTCAAA |
TBP-F | SEQ ID NO:7 | TATAATCCCAAGCGGTTTGC |
TBP-R | SEQ ID NO:8 | GCTGGAAAACCCAACTTCTG |
*F为FORWARD顺向,R为REVERSE反向。
需要特别说明的是,下文述及之图式中显示的KRT10基因、KRT1基因及SMPD1基因的相对基因表达是以相对倍率呈现,其中使用Excel软体之STDEV公式计算标准差,并在Excel软体中以单尾学生t检验(Student t-test)分析是否具有统计上的显著差异。图式中「*」代表p值小于0.05,「**」代表p值小于0.01,以及「***」代表p值小于0.001。当「*」越多时,代表统计上的差异越显著。
请参阅图2。将控制组的TBP基因的表达量视为1倍,实验组相对于控制组的KRT10基因的表达量为31.6倍、实验组相对于控制组的KRT1基因的表达量为34.7倍、实验组相对于控制组的SMPD1基因的表达量为9.9倍。由此可知,当人类黑色素瘤细胞以含有0.25mg/mL露莓汁液处理后,由于KRT10基因、KRT1基因与角蛋白形成呈现正相关,角蛋白中有天然保湿因子NMF,使细胞间的空隙变少,抵御外界刺激入侵,保护真皮层,避免皮肤受损和发炎。结果如图2所示,本发明之露莓汁液可提升细胞的保湿基因(KRT10基因、KRT1基因及SMPD1基因)的基因表达,而使露莓汁液对肌肤具有保湿效果。
[实施例5]细胞实验-露莓汁液降低黑色素基因的表达量
举例来说,黑色素相关基因为TYR基因(Gene ID:7299)、TYRP1基因(Gene ID:7306)、MITF基因(Gene ID:4286)及MC1R基因(Gene ID:4157)。
其中,小眼畸形相关转录因子(microphthalamia-associated transcriptionfactor,MITF)是皮肤正常黑色素细胞发育时所需之转录因子,其可调控其他数种参与黑色素形成的蛋白质的基因表达,如酪胺酸酶(tyrosinase,TYR)、酪胺酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TYRP1)等基因的表达。黑素皮质素受体(melanocortin1-receptor,MC1R)基因是人类皮肤合成黑色素过程中的关键基因。
因此,本实施例中以TYR基因、TYRP1基因、MITF基因及MC1R基因作为分析标的。
材料与仪器
1.细胞株:人类黑色素瘤细胞(human melanoma cell)A375.S2(ATCC,编号CRL-1872)。
2.培养基:含有10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)(GIBCO公司,编号10438-026,美国)、1%抗生素-抗霉菌素(Antibiotic-Antimycotic)(Gibco公司,编号15240-062)、1mM丙酮酸钠(Gibco公司,编号11360-070)的MEM-NAA培养基(Gibco公司,编号41500-03)。
RNA提取试剂套组(购自Geneaid公司,中国台湾,Lot No.FC24015-G)。
5.测量标的基因引子,其中包含TYRP1基因、TYR基因、MITF基因及MC1R基因,另包括内部控制组(GAPDH基因)。
7.ABI StepOnePlusTM即时PCR***(ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司,美国))。
8.露莓汁液:此实验中所使用的露莓汁液是透过如上实施例1所获得。
实验步骤
首先,取1.5x105个人类黑色素瘤细胞至每孔含有2毫升上述培养基的六孔细胞培养盘中于37℃下培养24小时,并将每孔培养后的人类黑色素瘤细胞依据下列测试条件分为控制组以及实验组(共二组)来处理每孔培养后的人类黑色素瘤细胞。
测试条件:
实验控制组是单纯使用2毫升培养液来培养人类黑色素瘤细胞,未再加入其他添加成分。实验组是将如上实施例所制备的露莓汁液0.125mg/mL浓度的培养基2mL,培养人类黑色素瘤细胞24小时。
将处理后的人类黑色素瘤细胞(即控制组及实验组)以细胞裂解液分别破细胞膜以形成二组的细胞溶液。接着,以RNA提取试剂套组(购自Geneaid公司,中国台湾,LotNo.FC24015-G)分别提取四组细胞溶液内的RNA。接着,每组取1000纳克(ng)的提取出的RNA作为模板,透过III反转录酶(购自Invitrogene公司,美国,编号18080-051)将提取出的RNA反转录为相应之cDNA。再藉由ABI StepOnePlusTM即时PCR***(ABIStepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司,美国))、KAPASYBR FAST(购自Sigma公司,美国,编号38220000000)及表2的引子(SEQ ID NO:9~18)对每组的cDNA进行定量即时反转录聚合酶连锁反应(quantitative real-time reversetranscription polymerase chain reaction)以观察三组的人类黑色素瘤细胞内的TYRP1基因、TYR基因、MITF基因及MC1R基因的表达量。定量即时反转录聚合酶连锁反应的仪器设定条件为95℃反应20秒,接着95℃反应3秒,60℃反应30秒,并重复40个回圈,并使用2-ΔCt方法进行基因定量。于此,藉由cDNA进行定量即时反转录聚合酶连锁反应可间接定量TYRP1基因、TYR基因、MITF基因及MC1R基因的mRNA表达量,进而推断TYRP1基因、TYR基因、MITF基因及MC1R基因编码的蛋白质的表达量。
表2:
引子名称 | 序列编号 | 引子序列 |
TYRP1-F | SEQ ID NO:9 | GACACGCCTCCTTTTTATTCCA |
TYRP1-R | SEQ ID NO:10 | ATGGGTTTGTCCCCCTGTTC |
TYR-F | SEQ ID NO:11 | CTCAAAGCAGCATGCACAAT |
TYR-R | SEQ ID NO:12 | GCCCAGATCTTTGGATGAAA |
MITF-F | SEQ ID NO:13 | GCCTCCAAGCCTCCGATAAG |
MITF-R | SEQ ID NO:14 | GCACTCTCTGTTGCATGAACT |
MC1R-F | SEQ ID NO:15 | CATCATCGACCCCCTCATCTAC |
MC1R-R | SEQ ID NO:16 | CAGGAACCAGACCACACAATATCA |
GAPDH-F | SEQ ID NO:17 | CTGGGCTACACTGAGCACC |
GAPDH-R | SEQ ID NO:18 | AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG |
*F为FORWARD顺向,R为REVERSE反向。
需要特别说明的是,下文述及之图式中显示的TYR基因、TYRP1基因、MITF基因及MC1R基因的相对基因表达是以相对倍率呈现,其中使用Excel软体之STDEV公式计算标准差,并在Excel软体中以单尾学生t检验(Student t-test)分析是否具有统计上的显著差异。图式中「*」代表p值小于0.05,「**」代表p值小于0.01,以及「***」代表p值小于0.001。当「*」越多时,代表统计上的差异越显著。
请参阅图3。将控制组的GAPDH基因的表达量视为1,实验组相对于控制组的TYR基因的表达量为0.12倍、实验组相对于控制组的TYRP1基因的表达量为0.86倍、实验组相对于控制组的MITF基因的表达量为0.75倍、实验组相对于控制组的MC1R基因的表达量为0.65倍,代表实验组的TYR基因的表达量相较于控制组减少了88%,实验组的TYRP1基因的表达量相较于控制组减少了14%,实验组的MITF基因的表达量相较于控制组减少了25%,实验组的MC1R基因的表达量相较于控制组减少了35%。由此可知,当人类黑色素瘤细胞以含有0.125mg/mL露莓汁液处理后,由于MC1R、MITF基因与黑色素形成呈现正相关,结果如图3所示,本发明之露莓汁液可抑制黑色素瘤细胞TYR基因、TYRP1基因、MC1R基因、MITF基因的基因表达,而使露莓汁液对黑色素形成具有抑制效果。
[实施例6]细胞实验-露莓汁液降低黑色素生成
于此,以ELISA读盘机(enzyme-linked immunosorbent assay reader)测定黑色素瘤细胞株B16F10经露莓汁液处理后,其黑色素含量的变化。
材料与仪器
2.培养基:将Dulbecco's modified minimal essential medium(DMEM,购自Gibco,Cat.12100-038)添加额外成分使其含有1vol%的抗生素溶液(AntibioticAntimycotic Solution,购自Gibco,15240-062)及10vol%的FBS(fetal bovine Serum,购自Gibco,10437-028)。
3.磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液):购自Gibco,产品编号10437-028。
4.以二次蒸馏水配制1N NaOH(购自Sigma,产品编号221465)溶液。
5.ELISAreader(购自BioTek,产品编号FLx 800)。
6.露莓汁液:此实验中所使用的露莓汁液是透过如上实施例1所获得。
实验步骤
实验将会分为实验组、控制组及对照组三组进行,各组分别进行三重复试验:
1.将B16F10细胞以每孔1.5×105个的方式,接种于每孔含3mL培养基之6孔培养盘中。
2.将培养盘置于5%CO2、37℃环境下,培养24小时。
3.而后,在不干扰附着细胞的情况下,移除每孔之培养基。
4.本实验分为控制组、对照组、实验组。其中,各组加入2mL的新鲜DMEM培养液。而对照组之培养液额外加入曲酸(Kojic acid),使其浓度为0.25mg/mL,其中曲酸已被广泛认知为具有降低黑色素生成效果之物质;实验组之培养液额外加入露莓汁液,使其浓度为0.25mg/mL。各组进行三重复,并使其于37℃下培养24小时。
5.将反应完毕之实验组及对照组移至蓝光箱中,使其在室温(25±5℃)下接受蓝光照射3小时。另外,控制组移至暗室中,使其在室温下静置3小时。
6.反应后,将细胞于37℃下培养48小时。
7.而后,移除培养基,并以PBS溶液清洗细胞2次。
8.将200μl胰蛋白酶(Trypsin-EDTA(10X),购自Gibco;产品编号15400-054)加至每孔中反应3分钟。反应后,添加6mL培养基溶液终止反应。而后收集各孔中之悬浮细胞与培养基至对应的15mL离心试管内,将各离心试管以400xg离心5分钟使细胞沉淀。
9.以PBS溶液清洗沉淀细胞二次后,再以200μL PBS溶液重新悬浮细胞。
10.将细胞悬浮液以液态氮冷冻10分钟,再置于室温约30分钟至完全解冻。
11.完全解冻后,将试管以12,000g离心3分钟。
12.移除上清液,再以120μL 1N氢氧化钠溶液重新悬浮细胞沉淀后,使试管于60℃干浴1小时,以获得待检测样本。
13.将100μL待检测样本移入一96孔盘,使用ELISA读盘机测量细胞溶液在450nm的吸光值。
实验结果
实验组以及控制组的黑色素相对表达量是依下列公式计算:黑色素相对表达量(%)=(各组OD450值/控制组OD450值)×100%。因实验是进行三重复,故将三重复实验之结果平均后,显示于图4。
如图4所示,在本发明之露莓汁液的处理下,可达到降低黑色素生成的功效。具体而言,实验组(露莓汁液)相对控制组之黑色素生成量为78.81%,对照组相对控制组之黑色素生成量为67.42%,实验组与控制组相比黑色素生成降低约21.19%,且本案露莓汁液之功效近似于曲酸之降低黑色素生成之效果。因此,本发明实施例所制备之露莓汁液,确实可有效减少黑色素细胞所生成之黑色素,故可应用于减少皮肤黑斑、提升肌肤光泽、白皙度肌肤美白的相关组合物的成分中。
由以上多个细胞实验可知,露莓汁液确实可降低皮肤纤维母细胞的活性氧物质(ROS)生成,防止肌肤因紫外线而产生的伤害。且露莓汁液可减少黑色素相关基因(TYRP1基因、MC1R基因、MITF基因)的表达量,并且抑制黑色素生成,减少蓝光造成的皮肤黑斑,维持白净肌肤。
而为证实野露莓汁液对于人体的功效,亦进行相关人体实验如下。
[实施例7]肌肤紫外线红色斑点(UV斑)相对量检测
以VISIA Complexion Analysis System(Canfield scientific,USA)的UV光进行脸部肌肤拍摄,紫外线可被黑色素吸收,提高色素斑的显现度,检测肉眼不可见的表皮层黑色素斑。测量数值越高,说明紫外线色斑越多。
将本案露莓汁液与水配制成露莓汁液饮品,以提供受试者合适的有效剂量。于此实施例中,请7位受试者(20~65岁的一般男女性)以每日食用一瓶浓度为0.005mg/mL的露莓汁液饮品(50mL)的摄取剂量饮用所配制的露莓汁液饮品,共持续8周。并于实验开始前(第0周,尚未饮用)、第4周以及第8周对受试者已清洁过的面部肌肤,以全脸肤质检测仪(7th Generation VISIA Complexion Analysis System;Canfield,USA)测定所述些受试者的全脸皮肤的红色斑点数量以及面积。
关于受试者肌肤红色斑点数量以及实际的外观变化,分别显示于图5A以及图5B。图5A是以受试者摄取露莓汁液饮品前,由仪器根据红色斑点数量以及面积所测得之数值为100%,并记录受试者摄取露莓汁液饮品4周、8周后的根据红色斑点数量/面积所测得之数值。图5B是其中一位受试者脸部肌肤在第0周、第4周及第8周以检测仪所拍摄的图像。
如图5A所示,当受试者摄取露莓汁液饮品4周后,即可开始观察到红色斑点数量/面积的减少,当连续摄取4周后,面部肌肤的红色斑点数量即下降至原本的2.4%,而当连续摄取8周后,面部肌肤的红色斑点数量即下降至原本的4.1%。图5B的实拍影像中亦可发现,随着摄取露莓汁液饮品的期间增加,肌肤上的红色斑点数量及面积明显减少,改善人数达86%,具有抵抗色斑生成的功效。
[实施例8]肌肤泛红的血色素相对量检测
以VISIA Complexion Analysis System(Canfield scientific,USA)的RBX偏振光技术进行对上述实施例7中的受试者的脸部肌肤拍摄,检测皮肤深层血管或血红素。测量数值越高,说明皮肤泛红状况越严重。
如图6A所示,当受试者摄取露莓汁液饮品4周后,即可开始观察到血色素相对量的减少,当连续摄取4周后,面部肌肤的血色素指数即下降至原本的7.4%,而当连续摄取8周后,面部肌肤的血色素指数即下降至原本的9.3%。图6B的实拍影像中亦可发现,随着摄取露莓汁液饮品的期间增加,肌肤上的血色素指数明显减少,改善人数达100%,所述结果显示本发明之露莓汁液饮品能有效改善个体皮肤泛红,能使皮肤维持稳定的健康状况,具有良好的肌肤舒缓功效。
[实施例9]肌肤光泽度检测
肌肤光泽度检测探头Glossymeter GL200(C+K Multi Probe Adapter System,Germany)是由照射到上述实施例7中的受试者的皮肤表面的光的直接反射和散反射来反映的。测量数值越高,说明皮肤越具有光泽。
如图7A所示,当受试者摄取露莓汁液饮品4周后,即可开始观察到光泽度的增加,当连续摄取4周后,面部肌肤的光泽度即增加至原本的4.2%,而当连续摄取8周后,面部肌肤的血色素指数即增加至原本的9.4%。图7B的实拍影像中亦可发现,随着摄取露莓汁液饮品的期间增加,肌肤上的光泽度明显增加,改善人数达86%,所述结果显示本发明之露莓汁液饮品具有提亮肌肤的功效。
综上所述,本案除证实露莓汁液可抑制自由基产生,并且透过减少细胞中的黑色素相关基因(例如:酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)、酪胺酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)、黑素皮质素受体1(MC1R))的表达量达到所述抑制黑色素生成,故露莓汁液可有效防止由紫外线所产生的多种肌肤老化现象,提供肌肤对于紫外线以及蓝光的防护外,本案另亦证实露莓汁液可减少因紫外线引起的红色斑点、舒缓肌肤泛红的现象、增加肌肤的光泽感,并且提升肌肤的保湿能力。据此,露莓汁液可以使肌肤整体达到抗氧化、美白及有光泽,并防止肌肤受到紫外线的伤害,防止肌肤老化。
当然,本发明还可有其它多种实施例,在不背离本发明精神及其实质的情况下,熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形,但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。
【序列表】
<110>大江生医股份有限公司
<120>露莓汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途
<150> US63/068,396
<151> 2020-08-21
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<151> 2021-07-06
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<400> 18
aagtggtcgt tgagggcaat g 21
Claims (11)
1.一种露莓汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途,其特征在于:所述露莓汁液是以一含水的溶剂提取而得。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述露莓汁液的总多酚的含量为8000至11000ppm之间。
3.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述组合物用于减少细胞中的活性氧物质引起的氧化性损伤。
4.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述组合物用于减少肌肤的血色素含量。
5.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述组合物用于抑制黑色素生成。
6.如权利要求5所述的用途,其特征在于:所述组合物用于透过减少细胞中的黑色素相关基因表达量达到所述抑制黑色素生成。
7.如权利要求6所述的用途,其特征在于:所述黑色素相关基因包括:酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)、酪胺酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)、黑素皮质素受体1(MC1R)。
8.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述组合物用于减少肌肤红色斑点。
9.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述组合物用于提升肌肤的保湿能力。
10.如权利要求9所述的用途,其特征在于:所述组合物用于透过增加细胞中的保湿相关基因表达量达到所述提升肌肤的保湿能力。
11.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述组合物是进一步制备成保养品组合物、保健食品组合物、化妆品组合物或皮肤外用剂。
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