CN114052048A - 一种香樟叶提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种香樟叶提取物及其制备方法和应用，其是将香樟叶经烘干、粉碎后，用二氯甲烷回流提取制得所述香樟叶提取物。本发明制备方法简单，易操作，其总得率在4.69％‑7.38％之间，适合大规模生产，且所得提取物在抑制苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌、链孢粘帚霉病菌方面的活性优于目前大量使用的环境友好型植物源农药丁子香酚。

Description

一种香樟叶提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及抑制植物病原菌技术领域，尤其涉及一种香樟叶提取物及其制备方法和应用。
背景技术
由于长期使用或滥用化学农药，已导致病原菌对许多化学药剂产生了严重的抗性；此外，残留在农产品表面的农药严重的危害人体的健康，同时造成环境的污染和生态平衡的破坏。许多研究已表明，在与植物病原真菌长期斗争过程中，植物自身能产生抑制植物病原菌的次生代谢产物，如丁子香酚、乙蒜素、苦参碱等，均对植物病原真菌有较强的抑制作用，且不易产生抗性。因此，寻找高效抑制植物病原菌的天然植物源提取物已成为替代化学农药、研发环境友好型生物农药的重要途径之一。
由苹果黑腐皮壳菌(Valsa maliMiyabe et Yamada)引起的苹果腐烂病(Valsacanker of apple)是危害我国苹果的重要病害，侵害苹果的枝干和果实，导致苹果树皮腐烂，果实产量和品质严重下降，分布广泛，危害严重，几乎所有苹果产区均有发生。链孢粘帚霉病菌(Gliocladium catenulatum)是豌豆根腐病的一种致病真菌，能侵袭三叶草和豆类衰弱的植物组织。
香樟Cinnamomum camphora为樟科樟属植物，主要分布在我国福建、台湾、江西、广东、云南、贵州、四川等地区，人工林达上万公顷，植物资源丰富。然而，其资源利用上也仅停留于挥发油(质量分数≤5％)的开发，大量嫩枝、叶提取后做为废弃物处理，没有其他有价值的产品，植物利用率低。通过长期致力于香樟植物资源开发与利用的研究，并经研究首次发现，香樟叶提取物能较好抑制植物病原菌，为此，本发明提出一种香樟叶提取物及其制备方法和应用，该方法操作简单，成本较低，所得提取物活性显著，极具开发前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能抑制植物病原菌的香樟叶提取物的制备方法及其在抑制苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌、链孢粘帚霉病菌等植物病原真菌上的应用。
为实现上述目的，本发明提出了一种香樟叶提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
1)取收集的新鲜香樟叶，经50-60℃烘干后粉碎，过20-50目筛，得干燥的粉末；
2)步骤1)所得粉末1000g，加入二氯甲烷6000-8000mL，加热至沸腾并回流提取50min，过滤，收集提取液；
3)将步骤2)所得提取液减压浓缩，得香樟叶提取物。
香樟叶提取物在抑制植物病原真菌中的应用。
所述植物病原真菌包括苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌、链孢粘帚霉病菌中的任意一种。
将所述香樟叶提取物与水混合，配制成浓度为80～260ppm的药液，用于喷施叶表至叶面滴水为止；或配制成浓度为40～130ppm的药液，用于灌根。
本发明显著优势在于：
(1)本发明所用原材料——香樟可以大量人工培育，资源丰富，其提取方法操作简单实用，总得率在4.69％-7.38％之间，可实现规模化生产。
(2)本发明所得提取物对苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌、链孢粘帚霉病菌的抑制活性显著，且在相同浓度下，其抑制活性优于目前防治植物病原菌大量使用的环境友好型植物源农药丁子香酚。
具体实施方式
一种香樟叶提取物，其具体制备方法如下：
1)取收集的新鲜香樟叶，经50-60℃烘干后粉碎，过20-50目筛，得干燥的粉末；
2)步骤1)所得粉末1000g，加入二氯甲烷6000-8000mL，加热至沸腾并回流提取50min，过滤，收集提取液，
3)将步骤2)所得提取液减压浓缩，得香樟叶提取物。
香樟叶提取物抑制植物病原真菌活性研究：
利用菌丝生产速率法测定香樟叶提取物的抑菌活性。其具体是使用配制并灭菌的PDA培养基制作培养平板，设置空白对照组、阳性对照药丁子香酚组、香樟叶提取物试验组；阳性对照药丁子香酚组和香樟叶提取物试验组各设置3个浓度，每个浓度设置3个重复；分别采用苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌、链孢粘帚霉病菌进行接种，接种好的培养皿需用保鲜膜封口倒置，以免菌种生长过程中产生的水分或空气中的杂质影响菌种的正常生长。放置于28±5℃的智能人工培养箱中培养3～7d，每24h观察一次。空白对照平板菌种菌丝直径长至2/3左右时进行测量。测量时，先观察菌落形状，然后采用十字交叉测量法，不规则菌落量取其最大直径，分别测量并记录各组菌落生长直径。按照公式计算抑菌率(计算公式如下)，结果见表1-3。
阳性对照药丁子香酚组或香樟叶提取物试验组抑菌率＝(阳性对照药丁子香酚组或香樟叶提取物试验组菌落直径-空白对照组菌落直径)/(空白对照组菌落直径-0.5)×100％。
Figure BDA0003318500280000041
表1丁子香酚和香樟叶提取物对苹果黑腐皮壳病菌的抑菌率对比
Figure BDA0003318500280000042
表2丁子香酚和香樟叶提取物对西瓜尖孢镰孢菌的抑菌率对比
Figure BDA0003318500280000043
表3丁子香酚和香樟叶提取物对链孢粘帚霉病菌的抑菌率对比
由上述结果可见，相同浓度下，香樟叶提取物对病原菌的抑制活性明显优于丁子香酚。
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员更容易理解，实施例所描述的具体物料比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
取香樟叶，置于55℃的烘箱中烘干，然后用粉碎机粉碎并过30目筛，收集粉末备用；称取粉末1000g，加入二氯甲烷8000mL，加热至沸腾并回流提取50min，将提取液减压浓缩，得香樟叶提取物73.8g，其总得率为7.38％。
利用菌丝生产速率法测定香樟叶提取物的抑菌活性，结果显示：浓度为200μg/mL的提取物对苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌和链孢粘帚霉病菌的抑菌率分别为91.74±3.39％、96.99±3.20％和97.69±3.15％。
实施例2
取香樟叶，置于55℃的烘箱中烘干，然后用粉碎机粉碎并过30目筛，收集粉末备用；称取粉末1000g，加入二氯甲烷6000mL，加热至沸腾并回流提取50min，将提取液减压浓缩，得香樟叶提取物46.9g，其总得率为4.69％。
利用菌丝生产速率法测定香樟叶提取物的抑菌活性，结果显示：浓度为200μg/mL的提取物对苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌和链孢粘帚霉病菌的抑菌率分别为89.79±2.26％、93.99±4.01％和94.02±3.97％。
实施例3
取香樟叶，置于55℃的烘箱中烘干，然后用粉碎机粉碎并过30目筛，收集粉末备用；称取粉末100g，加入二氯甲烷800mL，加热至沸腾并回流提取50min，将提取液减压浓缩，得香樟叶提取物6.29g，其总得率为6.29％。
利用菌丝生产速率法测定香樟叶提取物的抑菌活性，结果显示：浓度为200μg/mL的提取物对苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌和链孢粘帚霉病菌的抑菌率分别为90.56±4.16％、92.67±2.46％和96.21±3.05％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (4)

1.一种香樟叶提取物的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
1)取收集的新鲜香樟叶，经50-60℃烘干后粉碎，过20-50目筛，得干燥的粉末；
2)步骤1)所得粉末1000g，加入二氯甲烷6000-8000mL，加热至沸腾并回流提取50min，过滤，收集提取液；
3)将步骤2)所得提取液减压浓缩，得香樟叶提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法得到的香樟叶提取物在抑制植物病原真菌中的应用。
3.根据权利要求2所述的一种香樟叶提取物的应用，其特征在于：所述植物病原真菌包括苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌、链孢粘帚霉病菌中的任意一种。
4.根据权利要求3所述的一种香樟叶提取物的应用，其特征在于：其具体应用方法为：将所述香樟叶提取物与水混合，配制成浓度为80～260ppm的药液，用于喷施叶表至叶面滴水为止；或配制成浓度为40～130ppm的药液，用于灌根。
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