CN114032188A - 一种粘红酵母培养物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种粘红酵母培养物的制备方法，包括：将粘红酵母接种至斜面培养基上，获得长满粘红酵母菌落的斜面；将所述菌落接种至液体种子培养基上，得到粘红酵母种子液；将所述粘红酵母种子液接入固体发酵培养基中，将所述固体发酵培养基混合均匀后，进行浅盘发酵；发酵周期结束后，关闭通风口，无菌收集发酵产物。本发明将粘红酵母通过液体深层发酵培养和固体发酵培养相结合，生产一种富含天然β‑胡萝卜素的酵母培养物。该产品兼具天然β‑胡萝卜素和微生态制剂双重功效，且使用成本较低，目前市场尚无同类产品，市场前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其是涉及一种粘红酵母培养物的制备方法。
背景技术
在现代养殖业集约化发展的要求下，饲用抗生素以其显著的预防疾病、促生长效果得到了广泛的应用。但饲用抗生素的长期使用和滥用造成了一些人们始料未及的后果：耐药病原菌快速出现，动物自身免疫力下降，药物残留危害人类健康，***物造成环境污染，严重影响了人类的公共卫生和安全。目前，抗生素的滥用和残留已成为一个全球性的卫生危机。为此，各国纷纷采取措施严格限制饲用抗生素的使用,并积极寻求其替代品。
酵母培养物作为抗生素的替代品之一，是一种在特定工艺条件下酵母在特定的培养基上生长发酵后再加工形成的微生态制剂，它主要是由酵母细胞外代谢产物、发酵后培养基和少量已无活性的酵母细胞构成的。酵母培养物成分复杂，主要包括：蛋白质、多肽、寡糖、葡聚糖、氨基酸及其有机酸、矿物质、维生素、酶类、未知营养因子等。这些成分协同作用，使酵母培养物在畜禽生产性能改善、机体免疫力提高、肠道微生态平衡维持等方面效果显著。目前，酵母培养物已在禽类、畜类以及水产养殖等领域都得到了广泛的研究应用。
粘红酵母(Rhodotorula glutinis)属于子囊菌纲半子囊菌亚纲酵母目隐球酵母科红酵母亚科红酵母属，细胞圆形、卵形或长形。繁殖方式为多边芽殖，有明显的红色或黄色色素。菌落在麦芽汁斜面上可由光滑到褶皱，有光泽，质地粘稠有时发硬，其横切面扁平到有较宽凸起，边缘不规则到整齐，顶端常有较原始的假菌丝。粘红酵母不仅在代谢过程中产生大量的氨基酸、虾青素、β-胡萝卜素等多种功能性营养成分，而且是极具潜力的天然β-胡萝卜素的生产菌。
β-胡萝卜素具有营养强化剂和着色剂双重功效。将β-胡萝卜素应用于禽畜养殖中，可以有效改善动物的生长性能，提高免疫能力，增强动物的繁殖能力。此外，β-胡萝卜素不仅以维生素A的前体物发挥作用，同时还作为抗氧化剂、抗癌剂等在机体中发挥作用。β-胡萝卜素生产方法有：化学合成、植物提取、盐藻生产和微生物发酵。其中，化学合成的产物活性单一，工艺复杂，且含有有害物质，价值较低；植物提取法客服了化学合成法的部分缺点，但生产成本高，资源浪费严重，不宜推广；盐藻生产法生产条件苛刻，产物收获困难，生产成本较大；微生物发酵法工艺简单，周期短，成本低，可规模化生产。因此，微生物发酵法将成为未来天然β-胡萝卜素生产的主要发展方向。国内外对于β-胡萝卜素发酵菌株的研究主要集中在三孢布拉氏霉 (Blakeslea trispora)和红酵母(Rhodotorula)。三孢布拉氏霉发酵产率虽然较高，但发酵工艺复杂、发酵周期长、成本高，不易于产业化。粘红酵母生长速率快、营养要求简单，发酵工艺易于调控，菌体可综合利用，易于进行大规模培养、具有很高的应用价值和开发前景。近年来，对粘红酵母产β－胡萝卜素研究已有相关报道。
吴晓宗为了提高粘红酵母的β-胡萝卜素产量，对保藏的一株粘红酵母进行诱变育种，并对诱变后菌株产β-胡萝卜素条件进行优化。结果表明，在优化后的培养基中β-胡萝卜素的产量达到13.43mg/L。王岁楼研究了高静水压处理对粘红酵母(Rh.glutinis RG5)生物量和β-胡萝卜素产量的影响，发现 150MPa保压20min时突变株RG5～3的生物量虽然比出发菌株下降了9.25％，但目的产物β-胡萝卜素的产量却提高了68.6％，达到了9.639mg/L，并且该诱变株遗传性稳定。司菊萍等对红酵母在几种不同培养基上的生长及对不同碳源的利用情况作了研究，结果优化出以玉米浆4％和甘蔗汁2％为最适培养基, 在此培养基上于28℃培养84h，红酵母生物量和β-胡萝卜素产量分别可达 15.3g/L和1126μg/L。
上述对粘红酵母生产β-胡萝卜素研究和应用，有力的推动了国内在这一领域的发展，但也反映出一些不足。(1)发酵工艺的选取。β-胡萝卜素的研究生产多偏向于液体发酵，固体发酵较少。液态发酵法存在生产工艺复杂、能耗高、环境污染大、成本高等缺点。与液态发酵法相比，固态发酵法具有能耗低、培养基简单、生产过程节水、操作简单易行等优点。(2)β-胡萝卜素产量较低。不同来源菌种β-胡萝卜素产量差异显著，且普遍处于较低水平，难以满足市场需求。(3)酵母细胞破壁方法难运用于工业生产。目前应用较多的细胞破壁方法主要有研磨法、二甲基亚砜法和酸热法，其中酸热法在国内研究中使用最普遍，但均难以满足工业生产的需求。
发明内容
本发明提供一种粘红酵母培养物的制备方法，解决了现有技术中粘红酵母生产β-胡萝卜素产量较低的问题。
本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
一种粘红酵母培养物的制备方法，包括：
将粘红酵母接种至斜面培养基上，获得长满粘红酵母菌落的斜面；
将所述菌落接种至液体种子培养基上，得到粘红酵母种子液；所述液体种子培养基按下述重量比例配制(％)：葡萄糖2～4，酵母膏0.2～1，蛋白胨2～ 4，硫酸铵1～2，pH6.5±0.2；
将所述粘红酵母种子液接入固体发酵培养基中，将所述固体发酵培养基混合均匀后，进行浅盘发酵；
发酵周期结束后，关闭通风口，无菌收集发酵产物。
在一些实施例中，所述粘红酵母使用粘红酵母和生香酵母替代。
在一些实施例中，还可以包括，液体培养基的发酵培养；
将所述粘红酵母种子液接种于液态发酵培养基中，得到粘红酵母发酵液；所述液态发酵培养基按下述重量比例配制(％)：葡萄糖2～4，酵母膏0.2～1，蛋白胨2～4，硫酸铵0.5～1，pH 6.5±0.2；
将所述粘红酵母发酵液按照1％-5％的接种量接入固体发酵培养基。
在一些实施例中，所述固体发酵培养基按下述比例配制：麸皮40～50％，豆粕粉25～35％，棕榈粕20～25％，葡萄糖2～5％，磷酸氢二钾0.4～0.8％，氯化钙0.2～0.4％，硫酸镁0.2～0.4％，甘露聚糖酶4～10μg/g，生长因子50μg/g，初始水分55～65％，pH自然。
在一些实施例中，将所述发酵产物转置于无氧密闭环境中，快速升温至 50～70℃，维持18～36h，得到破壁后的产品。
在一些实施例中，将所述破壁后的产品进行气流烘干，烘干温度50～60℃，时间12～24h，至含水量5～10％停止；
将烘干后的物料进行超微粉碎，粒径达到60～120目。
在一些实施例中，所述斜面培养基按下述重量比例配制(％)：酵母膏1，蛋白胨2，葡萄糖2，琼脂2，pH6.0；
或者
土豆汁20，葡萄糖2，琼脂2，pH自然。
在一些实施例中，所述浅盘发酵的条件为：以20m3/h的通风量通入无菌空气，曲房相对湿度保持在85％～95％，料温控制在25℃～35℃，发酵周期2～ 3天。
在一些实施例中，所述浅盘发酵的粘红酵母的标准为活菌数≥5.0× 109CFU/g。
在一些实施例中，获得的产品中β-胡萝卜素含量不低于550μg/g干重。
本发明获得的产品用于饲料添加剂。
本发明具有的有益效果是：
(1)本发明的液体种子培养基中添加了硫酸铵，在菌体生物量和β-胡萝卜素产量上都有显著提高。
(2)本发明的固体培养基中添加50μg/g生长因子，在菌体生物量和β- 胡萝卜素产量上都有显著提高。
(3)本发明的发酵工艺以固体发酵为主，包含或不包含液体深层发酵，简单易行，发酵周期短，且控制精准。
(4)本发明将粘红酵母通过液体深层发酵培养和固体发酵培养相结合，生产一种富含天然β-胡萝卜素的酵母培养物。该产品兼具天然β-胡萝卜素和微生态制剂双重功效，且使用成本较低，目前市场尚无同类产品，市场前景广阔。
(5)本发明的破壁工艺为物理破壁法。该工艺为利用在低氧环境下酵母细胞本身的热应激变化，在高温下细胞自溶，从而达到释放β-胡萝卜素的工艺。该工艺简单易行，适合工业化生产。
(6)功能多效。本产品富含粘红酵母培养时代谢产生的β-胡萝卜素、维生素、多种酶及裂解细胞壁多糖等生物活性物质，因而具备多重功效。具有改善畜禽体内菌群平衡，提高动物免疫力，增加饲料适口性，促进动物对饲料的消化吸收等功能。
(7)产品安全。本产品为酵母类微生态制剂，动物饲用后无任何副作用，无残留问题，不引起耐药性，是非常安全的饲料添加剂。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面进一步阐述本发明。
实施例中提及的菌株为购买取得。
实施例1
粘红酵母(CICC 31229)液体种子培养基优化
本实验以粘红酵母生物量和β-胡萝卜素产量为指标，设计了空白组和添加不同无机盐的实验组。具体实验方法及结果如下：
选用培养基如下：
基础液体种子培养基：葡萄糖2％，酵母膏0.5％，蛋白胨2％，pH 6.5±0.2；液体种子培养基优化方法：
1.菌种活化
将菌种粘红酵母接种至基础液体种子培养基上，28℃～32℃培养2～3d，得到粘红酵母种子液。
2.液体种子培养基优化
将步骤1中种子液于无菌室中挑取适量菌种接种至摇瓶中的基础液体种子培养基以及分别添加1％硫酸铵、氯化铵、硫酸钠、硫酸钾、氯化钾、硝酸钠的液体种子培养基上，28℃～32℃，培养2～3d，摇床转速100～ 200r/min。
发酵结束后测定生物量和β-胡萝卜素含量，实验数据如下表：
由表中数据可知，与对照组相比，添加硫酸铵组在菌体生物量和β-胡萝卜素产量上都有显著提高。其中，粘红酵母细胞干重提高57.2％，β-胡萝卜素产量提高39.2％。
3.将优化后培养基与CN 103848651 A和CN 101912041 A中培养基进行比对，结果如下表：
实施例2
生长因子对粘红酵母固体发酵的影响
选用培养基如下：
①斜面培养基：酵母膏1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％，pH6.0；
②液体种子培养基：葡萄糖2％，酵母膏0.5％，蛋白胨2％，硫酸铵1％， pH 6.5±0.2；
③基础固体发酵培养基：麸皮45％，豆粕粉30％，棕榈粕22％，葡萄糖 4％，磷酸氢二钾0.6％，氯化钙0.3％，硫酸镁0.3％，甘露聚糖酶8μg/g，初始水分55～65％，pH自然。
发酵培养方法：
1.斜面培养
将原始菌种粘红酵母接种至斜面培养基上，28℃～32℃培养2～3d，得到长满粘红酵母菌落的斜面。
2.种子制备
将步骤1中斜面上的菌落于无菌室中挑取适量菌种接种至摇瓶中的液体种子培养基上，28℃～32℃，培养2～3d，摇床转速100～200r/min，得到粘红酵母种子液。
4.固体培养基的接种培养
取步骤2中得到的粘红酵母种子液按10％的重量比接入基础固体发酵培养基以及添加50μg/g生长因子的培养基中，28℃～32℃，培养2～3d。发酵结束后测定生物量和β-胡萝卜素含量，实验数据如下表：
| 实验组 | 基础组 | 基础组+50μg/g生长因子 |
| 干重(g/L) | 21.57 | 34.25 |
| β-胡萝卜素含量(μg/g<sub>干重</sub>) | 286.42 | 572.31 |
| β-胡萝卜素产量(mg/L) | 6.18 | 19.60 |
由表中数据可知，与基础组相比，添加50μg/g生长因子组在菌体生物量和β-胡萝卜素产量上都有显著提高。其中，粘红酵母细胞干重提高58.8％，β-胡萝卜素产量提高99.8％。
实施例3
一种粘红酵母培养物的制备方法，其中：
选用培养基如下：
①斜面培养基：酵母膏1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％，pH6.0；
②液体种子培养基：葡萄糖4％，酵母膏1％，蛋白胨2％，硫酸铵1％，pH
6.5±0.2；
③液体发酵培养基：葡萄糖4％，酵母膏1％，蛋白胨2％，硫酸铵1％，pH
6.5±0.2；
④固体发酵培养基按下述比例配制：麸皮50％，豆粕粉25％，棕榈粕25％，葡萄糖5％，磷酸氢二钾0.4％，氯化钙0.4％，硫酸镁0.2％，甘露聚糖酶 10μg/g，生长因子50μg/g，初始水分55～65％，pH自然。
上述培养基的灭菌要求均为：121℃，30min。
发酵培养方法：
1.一级斜面培养
将原始菌种粘红酵母(CICC 31229)接种至斜面培养基上，28℃～32℃培养2～3d，得到长满粘红酵母菌落的斜面。
2.二级种子制备
将步骤1中斜面上的菌落于无菌室中挑取适量菌种接种至摇瓶中的液体种子培养基上，28℃～32℃，培养2～3d，摇床转速100～200r/min，得到粘红酵母种子液。
3.液体培养基的发酵培养
取步骤2中得到的粘红酵母培养液按5％的接种量接种于液态发酵培养基中，28℃～32℃，摇床转速100～200r/min，培养1～2d，得到粘红酵母发酵液。
5.固体培养基的接种培养
取步骤3中得到的粘红酵母培养物按10％的重量比接入固体发酵培养基中，将固体发酵培养基混合均匀后，进行浅盘发酵。发酵时，以20m3/h 的通风量通入无菌空气，曲房相对湿度保持在85％～95％，料温控制在 25℃～35℃，发酵周期3天。培养48h后，取样检测培养基中粘红酵母活菌数，活菌数≥5.0×109CFU/g时视为发酵成熟，如果未达到，继续培养至活菌数≥5.0×109CFU/g。
6.酵母细胞的破壁方法
发酵周期结束后，关闭通风口，无菌收集发酵产物，转置于无氧密闭环境中，快速升温至50℃，维持36h。
7.发酵产物的烘干
将步骤5中破壁后的产品进行气流烘干，烘干温度60℃，时间12h，至含水量10％停止。
8.物料超微粉碎
将步骤6中得到的烘干物料进行超微粉碎。粉碎后，粒径达到60～120目。
按所需重量自动化装袋。
此方案下，粘红酵母干重为33.97g/kg，烘干后酵母培养物β-胡萝卜素含量为584μg/g干重，β-胡萝卜素产量为19.84mg/kg。
实施例4
一种粘红酵母培养物的制备方法，其中：
选用培养基如下：
①PDA斜面培养基：土豆汁20％，葡萄糖2％，琼脂2％，pH自然；
②液体种子培养基：葡萄糖2％，酵母膏0.2％，蛋白胨4％，硫酸铵2％， pH 6.5±0.2；
③液体发酵培养基：葡萄糖2％，酵母膏0.2％，蛋白胨4％，硫酸铵2％， pH 6.5±0.2；
④固体发酵培养基按下述比例配制：麸皮50％，豆粕粉35％，棕榈粕15％，葡萄糖2％，磷酸氢二钾0.8％，氯化钙0.2％，硫酸镁0.4％，甘露聚糖酶6μg/g，生长因子50μg/g，初始水分55～65％，pH自然。
上述培养基的灭菌要求均为：121℃，20min。
发酵培养方法：
1.一级斜面培养
将原始菌种粘红酵母接种至斜面培养基上，28℃～32℃培养2～3d，得到长满粘红酵母菌落的斜面。
2.二级种子制备
将步骤1中斜面上的菌落于无菌室中挑取适量菌种接种至摇瓶中的液体种子培养基上，28℃～32℃，培养2～3d，摇床转速100～200r/min，得到粘红酵母种子液。
3.液体培养基的发酵培养
取步骤2中得到的粘红酵母培养液按3％的接种量接种于液态发酵培养基中，28℃～32℃，摇床转速100～200r/min，培养1～2d，得到粘红酵母发酵液。
4.固体培养基的接种培养
取步骤3中得到的粘红酵母培养物按15％的重量比接入固体发酵培养基中，将固体发酵培养基混合均匀后，进行浅盘发酵。发酵时，以20m3/h 的通风量通入无菌空气，曲房相对湿度保持在85％～95％，料温控制在 25℃～35℃，发酵周期2～3天。培养48h后，取样检测培养基中粘红酵母活菌数，活菌数≥5.0×109CFU/g时视为发酵成熟，如果未达到，继续培养至活菌数≥5.0×109CFU/g。
5.酵母细胞的破壁方法
发酵周期结束后，关闭通风口，无菌收集发酵产物，转置于无氧密闭环境中，快速升温至70℃，维持20h。
6.发酵产物的烘干
将步骤5中破壁后的产品进行气流烘干，烘干温度55℃，时间20h，至含水量5～10％停止。
7.物料超微粉碎
将步骤6中得到的烘干物料进行超微粉碎。粉碎后，粒径达到60～120目。
按所需重量自动化装袋。
此方案下，粘红酵母干重为34.20g/kg，烘干后酵母培养物β-胡萝卜素含量为566μg/g干重，β-胡萝卜素产量为19.36mg/kg。
实施例5
一种粘红酵母培养物的制备方法，其中：
选用培养基如下：
①斜面培养基：酵母膏1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，pH6.0；
②液体种子培养基：葡萄糖3％，酵母膏0.5％，蛋白胨3％，硫酸铵1.5％， pH 6.5±0.2；
③固体发酵培养基按下述比例配制：麸皮45％，豆粕粉30％，棕榈粕25％，葡萄糖3％，磷酸氢二钾0.6％，氯化钙0.3％，硫酸镁0.2～0.4％，甘露聚糖酶4μg/g，生长因子50μg/g，初始水分55～65％，pH自然。
上述培养基的灭菌要求均为：121℃，20min。
发酵培养方法：
1.一级斜面培养
将原始菌种粘红酵母接种至斜面培养基上，28℃～32℃培养2～3d，得到长满粘红酵母菌落的斜面。
2.二级种子制备
将步骤1中斜面上的菌落于无菌室中挑取适量菌种接种至摇瓶中的液体种子培养基上，28℃～32℃，培养2～3d，摇床转速100～200r/min，得到粘红酵母种子液。
3.固体培养基的接种培养
取步骤2中得到的粘红酵母培养物按5％的重量比接入固体发酵培养基中，将固体发酵培养基混合均匀后，进行浅盘发酵。发酵时，以20m3/h的通风量通入无菌空气，曲房相对湿度保持在85％～95％，料温控制在25℃～ 35℃，发酵周期2～3天。培养48h后，取样检测培养基中粘红酵母活菌数，活菌数≥5.0×109CFU/g时视为发酵成熟，如果未达到，继续培养至活菌数≥5.0×109CFU/g。
4.酵母细胞的破壁方法
发酵周期结束后，关闭通风口，无菌收集发酵产物，转置于无氧密闭环境中，快速升温至50℃，维持36h。
5.发酵产物的烘干
将步骤5中破壁后的产品进行气流烘干，烘干温度55℃，时间24h，至含水量5～10％停止。
6.物料超微粉碎
将步骤5中得到的烘干物料进行超微粉碎。粉碎后，粒径达到60～120目。
按所需重量自动化装袋。
此方案下，粘红酵母干重为33.54g/kg，烘干后酵母培养物β-胡萝卜素含量为558μg/g干重，β-胡萝卜素产量为18.72mg/kg。
实施例6
一种粘红酵母培养物的制备方法，其中：
选用培养基如下：
①斜面培养基：酵母膏1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％，pH6.0；
②液体种子培养基：葡萄糖2％％，酵母膏0.2％，蛋白胨2％，硫酸铵1％， pH 6.5±0.2；
③液体发酵培养基：葡萄糖2％％，酵母膏0.2％，蛋白胨2％，硫酸铵1％， pH 6.5±0.2；
④固体发酵培养基按下述比例配制：麸皮40％，豆粕粉30％，棕榈粕30％，葡萄糖3％，磷酸氢二钾0.6％，氯化钙0.3％，硫酸镁0.3％，甘露聚糖酶6μg/g，生长因子50μg/g，初始水分55～65％，pH自然。
上述培养基的灭菌要求均为：121℃，30min。
选用菌种：粘红酵母(Rhodotorula glutinis)(CICC 31229)，酿酒酵母CICC31195(生香酵母)。
发酵培养方法：
1.一级斜面培养
将原始菌种粘红酵母和生香酵母J分别接种至斜面培养基上，28℃～32℃
培养2～3d，得到长满菌落的斜面。
2.二级种子制备
将步骤1中斜面上的菌落于无菌室中挑取适量菌种分别接种至摇瓶中的液体种子培养基上，28℃～32℃，培养2～3d，摇床转速100～200r/min，得到种子液。
3.液体培养基的发酵培养
取步骤2中得到的酵母培养液按3％的接种量分别接种于液态发酵培养基中，28℃～32℃，摇床转速100～200r/min，培养1～2d，分别得到粘红酵母发酵液和生香酵母发酵液。
4.固体培养基的接种培养
取步骤3中得到的酵母培养物按10％的重量比接入固体发酵培养基中，其中生香酵母发酵液和粘红酵母发酵液的比例为1:10～15。将固体发酵培养基混合均匀后，进行浅盘发酵。发酵时，以20m3/h的通风量通入无菌空气，曲房相对湿度保持在85％～95％，料温控制在25℃～35℃，发酵周期2～3 天。培养48h后，取样检测培养基中粘红酵母活菌数，活菌数≥5.0×109CFU/g 时视为发酵成熟，如果未达到，继续培养至活菌数≥5.0×109CFU/g。
5.酵母细胞的破壁方法
发酵周期结束后，关闭通风口，无菌收集发酵产物，转置于无氧密闭环境中，快速升温至60℃，维持24h。
6.发酵产物的烘干
将步骤5中破壁后的产品进行气流烘干，烘干温度55℃，时间20h，至含水量5～10％停止。
7.物料超微粉碎
将步骤6中得到的烘干物料进行超微粉碎。粉碎后，粒径达到60～120目。
按所需重量自动化装袋。
此方案下，粘红酵母干重为33.48g/kg，烘干后酵母培养物β-胡萝卜素含量为575μg/g干重，β-胡萝卜素产量为19.25mg/kg。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (10)
1.一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，包括：
将粘红酵母接种至斜面培养基上，获得长满粘红酵母菌落的斜面；
将所述菌落接种至液体种子培养基上，得到粘红酵母种子液；所述液体种子培养基按下述重量比例配制(％)：葡萄糖2～4，酵母膏0.2～1，蛋白胨2～4，硫酸铵1～2，pH 6.5±0.2；
将所述粘红酵母种子液接入固体发酵培养基中，将所述固体发酵培养基混合均匀后，进行浅盘发酵；
发酵周期结束后，关闭通风口，无菌收集发酵产物。
2.根据权利要求1所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，所述粘红酵母使用粘红酵母和生香酵母替代。
3.根据权利要求1或2所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，还可以包括，液体培养基的发酵培养；
将所述粘红酵母种子液接种于液态发酵培养基中，得到粘红酵母发酵液；所述液态发酵培养基按下述重量比例配制(％)：葡萄糖2～4，酵母膏0.2～1，蛋白胨2～4，硫酸铵0.5～1，pH 6.5±0.2；
将所述粘红酵母发酵液按照1％-5％的接种量接入固体发酵培养基。
4.根据权利要求1所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，所述固体发酵培养基按下述比例配制：麸皮40～50％，豆粕粉25～35％，棕榈粕20～25％，葡萄糖2～5％，磷酸氢二钾0.4～0.8％，氯化钙0.2～0.4％，硫酸镁0.2～0.4％，甘露聚糖酶4～10μg/g，生长因子50μg/g，初始水分55～65％，pH自然。
5.根据权利要求1所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，
将所述发酵产物转置于无氧密闭环境中，快速升温至50～70℃，维持18～36h，得到破壁后的产品。
6.根据权利要求5所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，
将所述破壁后的产品进行气流烘干，烘干温度50～60℃，时间12～24h，至含水量5～10％停止；
将烘干后的物料进行超微粉碎，粒径达到60～120目。
7.根据权利要求1或2所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，所述斜面培养基按下述重量比例配制(％)：酵母膏1，蛋白胨2，葡萄糖2，琼脂2，pH6.0；
或者
土豆汁20，葡萄糖2，琼脂2，pH自然。
8.根据权利要求1所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，所述浅盘发酵的条件为：以20m3/h的通风量通入无菌空气，曲房相对湿度保持在85％～95％，料温控制在25℃～35℃，发酵周期2～3天。
9.根据权利要求1所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，所述浅盘发酵的粘红酵母的标准为活菌数≥5.0×109CFU/g。
10.根据权利要求6所述的一种粘红酵母培养物的制备方法，其特征在于，获得的产品中β-胡萝卜素含量不低于550μg/g干重。
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