CN114028296A - 一个多维度修护皮肤敏感的化妆品成分与应用 - Google Patents

一个多维度修护皮肤敏感的化妆品成分与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一个多维度修护皮肤敏感的化妆品成分与应用，该成分为牡丹根提取物。

Description

一个多维度修护皮肤敏感的化妆品成分与应用
技术领域
本发明涉及日用化工领域，尤其涉及一种牡丹根提取物在改善皮肤敏感问题中的应用。
背景技术
皮肤敏感(敏感肌)是一种常见的皮肤反应，在中国女性中的发生率约为36％。皮肤敏感与皮肤过敏不同，过敏反应主要由致敏剂引发，比如香豆素，咪唑烷基脲，法尼醇等。而皮肤敏感主要是被非致敏剂引发的皮肤不适症状，包括刺痛，瘙痒，有时还伴随着发红。敏感肌形成的机理非常复杂，当前主要认为是由于皮肤屏障不完整，神经反应过度、炎症信号等造成。
虽然现有技术中针对皮肤敏感的每一个机理都有研究，也尝试通过一些成分的组合解决该问题，可这需要考虑成分之间的配伍性、协同性等复杂因素。并非所有的有效成分都应该一起使用，例如将都具有良好的护肤效果的烟酰胺和维生素C合用，但烟酰胺反而加速了维生素C的降解。
因此，本领域迫切需要一种物质，能够从多个机理维度发挥作用，改善皮肤敏感的问题。
发明内容
本发明旨在提供一种多维度修护皮肤敏感的方法。
本发明提供一种牡丹根提取物在制备加强和/或修护皮肤屏障的组合物中的应用。
在另一实施方式中，所述加强和/或修护皮肤屏障包括促进角质细胞中丝聚蛋白、兜甲蛋白、神经酰胺合成酶3、和/或超长链脂肪酸延长蛋白4的生成。
本发明提供一种牡丹根提取物在制备改善皮肤不适感的组合物中的应用。
在另一实施方式中，所述改善皮肤不适感包括减少皮肤中炎症因子。
在另一实施方式中，所述改善皮肤不适感包括抑制角质细胞产生的胸腺基质淋巴细胞生成素。
在另一实施方式中，所述改善皮肤不适感包括抑制巨噬细胞产生的肿瘤坏死因子α。
在另一实施方式中，所述改善皮肤不适感包括抑制角质细胞中产生的神经生长因子。
本发明提供一种牡丹根提取物在制备改善皮肤敏感的组合物中的应用。
在另一实施方式中，所述改善皮肤敏感包括加强和/或修护皮肤屏障、减少炎症因子、和具有舒缓作用。
在另一实施方式中，所述发挥舒缓功效包括抑制角质细胞中产生的神经生长因子。
在另一实施方式中，以组合物的总重量计，其中包括0.01-100wt％牡丹根提取物。
在另一实施方式中，所述组合物包括牡丹根提取物和化妆品学上可接受的载体。
在另一实施方式中，所述组合物为皮肤用产品。
在另一实施方式中，所述产品形式选自溶液、凝胶、霜剂、搽剂、微乳液喷雾剂、悬浮液或乳剂。
在另一实施方式中，液体形式的所述组合物中牡丹根提取物的浓度为0.01-3.0mg/mL。
本发明提供一种体外促进角质细胞中丝聚蛋白、兜甲蛋白、神经酰胺合成酶3、和/或超长链脂肪酸延长蛋白4的生成的方法，所述方法包括步骤：将角质细胞与牡丹根提取物混合。
本发明提供一种体外抑制角质细胞产生的胸腺基质淋巴细胞生成素、和/或抑制角质细胞中产生的神经生长因子的方法，所述方法包括步骤：将角质细胞与牡丹根提取物混合。
本发明提供一种体外抑制巨噬细胞产生的肿瘤坏死因子α的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将巨噬细胞与牡丹根提取物混合。
本发明提供的牡丹根提取物能够从多个机理维度发挥作用，改善皮肤敏感的问题。
附图说明
图1显示实施例1中牡丹根提取物促进角质细胞中丝聚蛋白(Filaggrin)，兜甲蛋白(Loricrin)，神经酰胺合成酶3(Ceramide Synthase 3)和超长链脂肪酸延长蛋白4(ELOVL4)的情况。
图2显示实施例2中牡丹根提取物抑制角质细胞产生的胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的情况。
图3显示实施例3中牡丹根提取物抑制巨噬细胞产生的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的情况。
图4显示实施例4中牡丹根提取物抑制角质细胞中产生的神经生长因子(NGF)的情况。
具体实施方式
发明人经过深入的研究，发现牡丹根提取物对于皮肤可以在修护皮肤屏障、减少细胞炎症因子和发挥舒缓功效等三个方面都发挥作用，从而改善敏感肌。在此基础上，完成了本发明。
如本发明所用，“牡丹根提取物”含酚类及酚苷类，单萜及单萜苷类，甾醇及其苷类，黄酮等植物化学成分。
如本发明所用，“皮肤屏障”是指物理屏障，由皮脂膜、角质层角化包膜、脂质等共同构成的“砖墙结构”,抵御外界有害、刺激物、日光进入,同时具有防止水分丢失的作用。皮肤物理屏障受损将引起皮肤干燥、皮肤老化、色素沉着和皮肤敏感。
如本发明所用，“角质细胞(Keratinocyte)”又称角质形成细胞或角蛋白形成细胞，是构成表皮层的主要细胞成分。不同分化阶段的角质细胞构成了皮肤的表皮层的四层结构，由外至内分别为角质层、颗粒层、棘层和基底层。角质细胞构成的表皮层起到了屏障功能。
如本发明所用，“炎症因子”是指参与炎症反应的各种细胞因子。主要有肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)等。
如本发明所用，“舒缓”或“减少神经过度反应”可以互换使用，都是指抑制和/或降低外界刺激造成的皮肤不适，包括但不限于，瘙痒、发红、发热、刺痛等。
“有效量(an effective amount)”一词意将对于加强和/或修护皮肤屏障，改善皮肤敏感等目的，此一用量在经过适当的使用期间后，能够达成加强和/或修护皮肤屏障、减少细胞炎症因子和/或发挥舒缓功效。
“组合物(composition)”是指当施用于一个体(一般指人)时，能够透过皮肤而诱发所亟求的改善皮肤敏感作用的一种组合物。
如本文所用，术语“化妆品学上可接受的载体”指使化妆品或个人洗护产品可施用的载体，包括各种赋形剂和稀释剂，它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在化妆品卫生规范2015版中可找到关于化妆品学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中这类载体可包括保湿剂、乳化剂、增稠剂、螯合剂、润肤剂等。例如但不限于，水、氢氧化钾、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、丁二醇、泛醇、甘草酸二钾、精氨酸、甘油、透明质酸钠、丙二醇、己二醇、甘油硬脂酸酯/PEG-100硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、甘油辛酸酯、黄原胶、甜菜碱、羟乙基纤维素、卡波姆、EDTA二钠、异构十六烷、棕榈酸异辛酯、棕榈酸乙基己酯、十六十八醇、鲸蜡硬脂醇、聚二甲基硅氧烷、柠檬酸或其盐、山嵛醇、山嵛醇聚醚、鲸蜡醇聚醚、季戊四醇四(乙基己酸)酯、角鲨烷、鲸蜡醇乙基己酸酯等。
“施用”一词在此是指直接施用相当用量的牡丹根提取物。
本文中使用“个体”或“个人”等词，是指可接受所述牡丹根提取物和/或方法用于皮肤上的人。
如本发明所用，“室温”是指15-45℃，优选为20-35℃。
本发明提供一种改善皮肤敏感的方法，包括修复皮肤屏障、减少炎症因子、和/或发挥舒缓功效。该方法包括施用牡丹根提取物和/或含有牡丹根提取物的组合物。
在本发明的一种实施方式中，修复皮肤屏障包括促进角质细胞中丝聚蛋白的表达，角化包膜蛋白的表达和长链脂质合成相关酶的表达；例如促进角质细胞中丝聚蛋白(Filaggrin)、兜甲蛋白(Loricrin)、神经酰胺合成酶3(Ceramide Synthase3)和/或超长链脂肪酸延长蛋白4(ELOVL4)的生成(包括基因表达)。
在本发明的一种实施方式中，减少炎症因子包括降低了皮肤细胞在受到刺激后肿瘤坏死因子α(TNF-α)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的表达。
在本发明的一种实施方式中，发挥舒缓功效包括降低了P物质诱导的神经生长因子(NGF)的过度表达。
本发明施用的牡丹根提取物若是液体，其浓度在0.01-3.0mg/mL之间，例如但不限于，0.01-0.5mg/mL、0.02-0.7mg/mL、0.3-2.0mg/mL、0.05-1.5mg/mL等。
在本发明的一种实施方式中，施用的牡丹根提取物是组合物中的唯一活性成分。
在本发明的一种实施方式中，施用的牡丹根提取物是购自上海晋晟化学有限公司商品名为
Figure BDA0003407571920000051
PAE的物质。
本发明提供一种组合物，其中包括牡丹根提取物与化妆品学上可接受的载体，从而可得到各种可施用于人皮肤的化妆品或个人洗护产品，包括但不限于，隔离霜、防晒霜、面霜、眼霜、乳液、精华液、化妆水、啫喱等。在本发明的一种实施方式中，牡丹根提取物是组合物中唯一的活性成分。
在本发明提供的化妆品或个人洗护产品的总重量计，其中含有0.005-1wt％的牡丹根提取物，例如但不限于，0.02-0.1wt％、0.007-0.3wt％、0.04-0.9wt％、0.06-0.7wt％、0.01-0.4wt％等。
在本发明的一些实施例中，将本发明提供的组合物与可用于形成水相的化妆品学上可接受的载体混合得到所述化妆品或个人洗护产品。所述可用于形成水相的化妆品学上可接受的载体包括但不限于，乙基己基甘油、丁二醇、甘油、透明质酸钠、和水中的一种或两种以上。
在本发明的一种实施方式中，是将本发明提供的组合物与水混合形成水相后，再与油相的化妆品学上可接受的载体混合、乳化得到所述化妆品或个人洗护产品。较佳地，可以在乳化后降温至室温加入防腐剂、香精等形成所述化妆品或个人洗护产品。
在本发明的另一种实施方式中，是在将油相的化妆品学上可接受的载体和水相的化妆品学上可接受的载体混合、乳化后，加入本发明提供的组合物而得到所述化妆品或个人洗护产品。较佳地，可以在乳化后降温至室温，加入本发明提供的组合物形成所述化妆品或个人洗护产品。
在本发明的另一种实施方式中，也可以在水相的化妆品学上可接受的载体均质化后，加入本发明提供的组合物而得到所述化妆品或个人洗护产品。较佳地，可以在均质化后降温至室温，加入本发明提供的组合物形成所述化妆品或个人洗护产品。
在本发明的一些实施例中，用于形成油相的化妆品学上可接受的载体包括但不限于，甘油硬脂酸酯、甘油单硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯/PEG-100硬脂酸酯复合物、异构十六烷、棕榈酸异辛酯、棕榈酸乙基己酯、鲸蜡硬脂醇、山嵛醇、十六十八醇、山嵛醇聚醚、鲸蜡醇聚醚、聚二甲基硅氧烷、季戊四醇四(乙基己酸)酯、角鲨烷、鲸蜡醇乙基己酸酯矿脂、乳木果油、角鲨烷、卵磷脂中的一种或两种以上。
虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，“约”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，“约”一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其它相似者)均经过“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与附随权利要求书所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。
除非本说明书另有定义，此处所用的科学与技术词汇的含义与本领域技术人员所理解与惯用的意义相同。此外，在不和上下文冲突的情形下，本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，只要这些特征的组合不存在矛盾，所有可能的组合都应当认为是本说明书记载的范围。说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于：本发明提供的牡丹根提取物或以其为唯一活性成分的组合物，可以从修护皮肤屏障，减少细胞炎症因子和减少神经过度反应三个方面同时发挥作用，改善敏感肌。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1
牡丹根提取物促进角质细胞中丝聚蛋白(Filaggrin，FLG)，兜甲蛋白(Loricrin，LOR)，神经酰胺合成酶3(Ceramide Synthase 3，CerS3)和超长链脂肪酸延长蛋白4(Elongation of very long chain fatty acids protein 4，ELOVL4)的生成
材料
测试***：
本次测试所用细胞为角质形成细胞，批号：EP21012001，由广东博溪生物科技有限公司通过细胞原代、传代培养获得。
主要试剂：
KC2500培养液(广东博溪)、MTT(Sigma)、DMSO(Sigma)、PBS(博士德)、RNAiso Plus(Takara)、反转录试剂盒(Takara)、荧光染料(Takara)。
主要设备：
CO2培养箱(Thermo)、超净工作台(苏净安泰)、倒置显微镜(Olympus)、微量振荡器(其林贝尔)、酶标仪(BioTek)、恒温箱(泰斯特)、荧光定量PCR仪(BioRad)、普通PCR仪(博日)。
受试物：
牡丹根提取物购自上海晋晟化学有限公司，商品名：
Figure BDA0003407571920000081
PAE
控制组是细胞+KC2500培养液
方法
接种：
按2.8×105个/孔的接种密度接种细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％CO2)中孵育过夜。
配液：
控制组：接种细胞(不加任何其它成分的空白，为能够体现细胞在正常情况下某些分子的表达水平)
牡丹根提取物：0.03mg/mL(牡丹根提取物溶解在DMSO中，再加入KC2500培养液中)
给药：
待6孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行分组给药，每孔给药量为2mL，每组设3个复孔，培养箱(37℃、5％CO2)中孵育24小时
收样：
培养24小时后，弃液，1mL/孔PBS清洗两次，每孔加入1mL RNAiso Plus，吹打裂解细胞后，收样
基因表达检测：
提取RNA，反转录至cDNA后，进行荧光定量PCR检测，采用2-△△CT方法进行结果计算
结果统计分析：
应用GraphPad Prism Program软件作图，各组间采用t-test统计分析，p＜0.05表示差异显著，p＜0.01表示差异极显著
结果
见附图1。
角质细胞中，牡丹根提取物具有促进丝聚蛋白(+28％)，兜甲蛋白(+14％)，超长链脂肪酸延长蛋白4(23％)和神经酰胺合成酶3(+11％)基因表达的效果(p<0.05)。
丝聚蛋白和兜甲蛋白在角质层细胞成熟过程中起到正向调控作用，具有强韧角质细胞屏障的效果；超长链脂肪酸延长蛋白4负责合成长链游离脂肪酸，而神经酰胺合成酶3负责将长链游离脂肪酸再合成长链神经酰胺。长链神经酰胺是角质层脂质中重要的组成部分，负责维护皮肤屏障的功能与完整性。
结果说明，牡丹根提取物具有强韧皮肤屏障的作用。
实施例2
牡丹根提取物抑制角质细胞产生的胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)
材料
测试***：
本次测试所用细胞为角质形成细胞，批号：EP21012001，由广东博溪生物科技有限公司通过细胞原代、传代培养获得。
主要试剂：
KC2500培养液(广东博溪)、MTT(Sigma)、DMSO(Sigma)、PBS(博士德)、RNAiso Plus(Takara)、反转录试剂盒(Takara)、荧光染料(Takara)。
主要设备：
CO2培养箱(Thermo)、超净工作台(苏净安泰)、倒置显微镜(Olympus)、微量振荡器(其林贝尔)、酶标仪(BioTek)、恒温箱(泰斯特)、荧光定量PCR仪(BioRad)、普通PCR仪(博日)。
受试物：
牡丹根提取物购自上海晋晟化学有限公司，商品名：
Figure BDA0003407571920000091
PAE
控制组是细胞+KC2500培养液
聚肌包苷酸 购自广东博溪生物科技有限公司
脂多糖 购自Sigma
*** 购自康朗生物
实验方法
接种：
按2.8×105个/孔的接种密度接种细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％CO2)中孵育过夜。
配液：
控制组：接种细胞(不加任何其它成分的空白，为能够体现细胞在正常情况下某些分子的表达水平)
刺激物：Poly I:C+LPS(24μg/mL+20μg/mL)(与DMSO+KC2500培养液混合形成)其中，Poly I:C(聚肌包苷酸)是Toll样受体(TLR 3)的激动剂；脂多糖(LPS)为Toll样受体(TLR4)的激动剂。根据J.Zhao et al.(Zhao,J.,Munanairi,A.,Liu,X.Y.,Zhang,J.,Hu,L.,Hu,M.,...&Chen,Z.F.(2020).PAR2 mediates itch via TRPV3 signaling inkeratinocytes.Journal of Investigative Dermatology,140(8),1524-1532.)和K.H.Lee et al.的报道(Lee,K.H.,Cho,K.A.,Kim,J.Y.,Kim,J.Y.,Baek,J.H.,Woo,S.Y.,&Kim,J.W.(2011).Filaggrin knockdown and Toll-like receptor 3(TLR3)stimulationenhanced the production of thymic stromal lymphopoietin(TSLP)from epidermallayers.Experimental dermatology,20(2),149-151.)，角质细胞上的Toll样受体被激活后会诱导TSLP的表达，进而引发炎症和皮肤瘙痒。
***：0.01wt％(溶解在DMSO+KC2500培养液)
牡丹根提取物：0.06mg/mL(先溶解在DMSO，再溶解于KC2500培养液)
给药诱导：
分别根据测试方案，待6孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行给药诱导操作，每孔给药量为2mL，每组设3个复孔，培养箱(37℃、5％CO2)中孵育24小时
收样：
培养24小时后，弃液，1mL/孔PBS清洗两次，每孔加入1mL RNAiso Plus，吹打裂解细胞后，收样
基因表达检测：
提取RNA，反转录至cDNA后，进行荧光定量PCR检测，采用2-△△CT方法进行结果计算
结果统计分析：
应用GraphPad Prism Program软件作图，各组间采用t-test统计分析，p＜0.05表示差异显著，p＜0.01表示差异极显著
结果
见附图2。
角质细胞中,刺激物通过角质细胞上的Toll样受体，诱导胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的表达；抗炎类药物***和牡丹根提取物都显著抑制了胸腺基质淋巴细胞生成素的表达(p<0.05)。
结果表明，刺激物增加了TSLP的表达，诱导了神经炎症。而牡丹根提取物降低了刺激物带来的影响，使得细胞内的神经炎症恢复至接近空白对照的水平(即正常状态下的水平)。
实施例3
牡丹根提取物抑制巨噬细胞产生的肿瘤坏死因子α(TNF-α)
材料
测试***：
本次实验所使用的细胞为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)，通过实验室传代培养获得。
主要试剂：
DMEM高糖培养基(Biosharp)、胎牛血清(Biosharp)、DPBS(Biosharp)、MTT(Biosharp)、DMSO(Biosharp)、0.25％胰酶(Biosharp)。
主要设备：
CO2培养箱(上海博迅，BC-J160)、生物安全柜(上海尚道，BHC-1300IIA2)、酶标仪(TECAN，Infinite F50)，离心机(湖南湘仪，H1850R)。
受试物：
牡丹根提取物购自上海晋晟化学有限公司，商品名：
Figure BDA0003407571920000111
PAE
控制组是含10％胎牛血清的DMEM(高糖)，即下述的培养基
脂多糖(LPS) 购自Sigma
*** 购自康朗生物
实验方法
接种：
细胞按100000个细胞/孔接种到96孔板，每种测试浓度3个复孔，37℃，5％CO2培养箱培养24小时±2。
配液：
控制组：接种细胞(不加任何其它成分的空白，为能够体现细胞在正常情况下某些分子的表达水平)
阴性对照组：含LPS的细胞培养基(5μg/ml)
阳性对照组：含有***(100μg/mL)和LPS的培养基
受试物组1：含有牡丹根提取物(0.8mg/mL)和LPS(脂多糖)的培养基
受试物组2：含有牡丹根提取物(1.6mg/mL)和LPS(脂多糖)的培养基
给药：
24小时±2后，吸弃96孔板中的培养基，DPBS清洗一次，受试物孔中加入受试物组1和受试物组2，阳性对照孔中加入阳性对照组，阴性对照孔中加入阴性对照组，每孔200μl。给药完毕后将96孔板放置在CO2培养箱中继续培养6h
收集上清：
培养24小时后，弃液，1mL/孔PBS清洗两次，每孔加入1mL RNAiso Plus，吹打裂解细胞后，收样
ELISA试剂盒检测TNF-α含量：
ELISA检测需根据小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫试剂盒的使用说明书进行检测
结果
见附图3。
巨噬细胞上，脂多糖(LPS)诱导了肿瘤坏死因子α(TNFα)蛋白的上调；抗炎药物***显著降低了肿瘤坏死因子α的数量；牡丹根提取物也减少了该炎症因子的数量(减少10％-13％)。
结果表明，刺激条件下TNF-α的表达大幅上升，而激素类抗炎药物***将TNF-α几乎拉回正常水平(但激素类药物无法长期使用，具有副作用)，牡丹根提取物虽然没有激素类药物作用明显，但也显著降低了炎症。
实施例4
牡丹根提取物抑制角质细胞中产生的神经生长因子(NGF)
材料
测试***：
本次测试所用细胞为角质形成细胞，批号：EP21012001，由广东博溪生物科技有限公司通过细胞原代、传代培养获得。
主要试剂：
KC2500培养液(广东博溪)、MTT(Sigma)、DMSO(Sigma)、PBS(博士德)、RNAiso Plus(Takara)、反转录试剂盒(Takara)、荧光染料(Takara)。
主要设备：
CO2培养箱(Thermo)、超净工作台(苏净安泰)、倒置显微镜(Olympus)、微量振荡器(其林贝尔)、酶标仪(BioTek)、恒温箱(泰斯特)、荧光定量PCR仪(BioRad)、普通PCR仪(博日)。
受试物：
牡丹根提取物购自上海晋晟化学有限公司，商品名：
Figure BDA0003407571920000131
PAE
控制组是细胞+KC2500培养液
P物质购自广东博溪生物科技有限公司
实验方法
接种：
按2.8×105个/孔的接种密度接种细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％CO2)中孵育过夜。
配液：
控制组：接种细胞(不加任何其它成分的空白，为能够体现细胞在正常情况下某些分子的表达水平)
P物质：浓度20nM
受试物组1：含有牡丹根提取物(0.03mg/mL)和P物质的培养基
受试物组2：含有牡丹根提取物(0.06mg/mL)和P物质的培养基
给药诱导：
分别根据测试方案，待6孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行给药诱导操作，每孔给药量为2mL，每组设3个复孔，培养箱(37℃、5％CO2)中孵育24小时
收样：
培养24小时后，弃液，1mL/孔PBS清洗两次，每孔加入1mL RNAiso Plus，吹打裂解细胞后，收样
基因表达检测：
提取RNA，反转录至cDNA后，进行荧光定量PCR检测，采用2-△△CT方法进行结果计算
结果统计分析：
应用GraphPad Prism Program软件作图，各组间采用t-test统计分析，p＜0.05表示差异显著，p＜0.01表示差异极显著
结果
见附图4。
P物质是一种神经信号肽，会诱导血管舒张(皮肤发红)和神经生长因子(NGF)的表达。本实验中神经信号肽P物质诱导了角质细胞中神经生长因子的表达，而牡丹根提取物显著抑制了刺激条件下神经生长因子的表达(p<0.01)，且具有浓度效应。
结果表明，NGF的升高参与了皮肤发痒的路径，因此牡丹根提取物具有舒缓的作用。
实施例4
皮肤用产品
爽肤水
原料名 含量(wt％)
水 To 100
牡丹根提取物 0.05
泛醇 1
1,3-丙二醇 3
1,2-己二醇 0.3
辛酰羟肟酸 0.2
甘油 5
PPG-26-丁醇聚醚-26 0.2
透明质酸 0.1
乳液
原料名 含量(wt％)
水 to100
棕榈酸乙基己酯 5
甘油 5
聚二甲基硅氧烷 2
鲸蜡硬脂醇 1
肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯 1
氢化聚异丁烯 4
白蜂蜡 1
牡丹根提取物 0.5
甘油硬脂酸酯 1
三甲基戊二醇/己二酸/甘油交联聚合物 1
鲸蜡醇磷酸酯钾 1
1,2-己二醇 0.5
对羟基苯乙酮 0.3
PEG-40硬脂酸酯 0.5
聚山梨醇酯-60 0.5
三乙醇胺 0.2
卡波姆 0.2
黄原胶 0.1
EDTA二钠 0.1
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims (12)

1.一种牡丹根提取物在制备加强和/或修护皮肤屏障的组合物中的应用。
2.一种牡丹根提取物在制备改善皮肤不适感的组合物中的应用。
3.一种牡丹根提取物在制备改善皮肤敏感的组合物中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述改善皮肤敏感包括加强和/或修护皮肤屏障、减少炎症因子、和具有舒缓作用。
5.如权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，以组合物的总重量计，其中包括0.01-100wt％牡丹根提取物。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述组合物包括牡丹根提取物和化妆品学上可接受的载体。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述组合物为皮肤用产品。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述产品形式选自溶液、凝胶、霜剂、搽剂、微乳液喷雾剂、悬浮液或乳剂。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，液体形式的所述组合物中牡丹根提取物的浓度为0.01-3.0mg/mL。
10.一种体外促进角质细胞中丝聚蛋白、兜甲蛋白、神经酰胺合成酶3、和/或超长链脂肪酸延长蛋白4的生成的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将角质细胞与牡丹根提取物混合。
11.一种体外抑制角质细胞产生的胸腺基质淋巴细胞生成素、和/或抑制角质细胞中产生的神经生长因子的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将角质细胞与牡丹根提取物混合。
12.一种体外抑制巨噬细胞产生的肿瘤坏死因子α的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将巨噬细胞与牡丹根提取物混合。
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