CN114015022B

CN114015022B - 一种阳离子共轭聚合物及基于其的比率型荧光探针、制备方法和应用

Info

Publication number: CN114015022B
Application number: CN202111355665.0A
Authority: CN
Inventors: 萨米尔·侯赛因; 田雪蒙; 陈曦; 王悦; 高瑞霞
Original assignee: Xian Jiaotong University
Current assignee: Xian Jiaotong University
Priority date: 2021-11-16
Filing date: 2021-11-16
Publication date: 2022-08-09
Anticipated expiration: 2041-11-16
Also published as: CN114015022A

Abstract

本发明公开了一种选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针及其制备方法和应用。该比率型荧光探针是一种新型阳离子共轭聚合物与十二烷基磺酸钠自组装体系，具有增强聚合物链内和分子间反向荧光共振能量转移特性。本发明的比率型荧光探针对血清白蛋白浓度具有特异性的明显增强的颜色响应，可在复杂基质环境中排除其他生物分子干扰，实现选择性定量检测血清白蛋白；且该比率型荧光探针能够极大程度地降低来自仪器的不稳定，测量条件以及探针浓度的变化对检测结果的干扰，灵敏度高、准确度高，操作方便快捷，适合现场检测。

Description

一种阳离子共轭聚合物及基于其的比率型荧光探针、制备方法和应用

技术领域

本发明属于荧光探针技术领域，涉及一种阳离子共轭聚合物及基于其的比率型荧光探针、制备方法和应用，具体设计一种新型阳离子共轭聚合物及基于其的可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术

血清白蛋白是人体内循环***中含量最多的蛋白质，它具有结合和运输内源性与外源物质，维持血液胶体渗透压，清除自由基，抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能，在生命过程中有着重要的意义。由于血清白蛋白参与人体内多种重要的生物功能，因此血清和尿液等人体体液中血清白蛋白的含量通常被认为是评估人体健康的指标。大量的临床研究表明，这些生物基质中的血清白蛋白异常水平与各种人类健康疾病的预后或诊断直接相关，可能预示着慢性肝炎、肝硬化，甚至肝衰竭及糖尿病等疾病。因此，血清白蛋白被认为是多种疾病临床评估的重要生物标志物，在临床和生物分析方面具有巨大的应用潜力。然而，由于复杂生物基质中存在多种生物分子的干扰，对血清白蛋白的精确测量和选择性分析仍然是研究人员面临的主要挑战。

目前对于血清白蛋白的检测方法主要有电泳法、免疫分析法和染料结合法。这些方法由于存在设备投入大、耗时长、样品预处理复杂等缺点限制了其在常规分析中的应用。荧光检测技术因其信号响应时间快、简单、灵敏度高等优点在蛋白质检测领域显示出良好的潜力。共轭聚合物(CPs)是一类新型的荧光有机材料，具有特殊的分子导线效应，促使光或电激发产生的激子在CPs链内和链间的快速迁移，在不改变功能基团与识别分子结合常数的情况下成百倍地放大传感的响应信号，有效地提高检测灵敏度、降低检测下限，因此被广泛应用于生物传感、成像、治疗、光电子等领域。但是，现有的CPs荧光探针大多数是通过监测单个荧光信号的增强或淬灭来进行检测，受制于自体荧光、仪器波动或环境的影响，难以保证检测结果的准确性。比率型荧光探针是通过测量两个不同波长处的荧光强度比值作为信号来测定目标物的一种分析方法，能够规避仪器和环境的影响，提高探针的灵敏度和稳定性。此外，目前报道的CPs体系用于蛋白质检测，由于非特异性静电或疏水相互作用力的存在，往往容易受到其他蛋白的干扰，选择性较差。因此，设计一种能够有效排除生物基质中其他多种蛋白的干扰，实现覆血清白蛋白准确、快速、选择性检测的比率型荧光探针，对于临床诊断和生物医学研究具有重要意义。

发明内容

为了克服以上技术缺点，本发明的目的在于提供一种阳离子共轭聚合物及基于其的比率型荧光探针、制备方法和应用，能够实现在复杂基质中选择性识别血清白蛋白。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一种阳离子共轭聚合物，其特征在于，该新型阳离子共轭聚合物含有聚芴荧光团和二噻吩苯并噻二唑荧光团，具有如下结构通式：

本发明还公开了上述的一种阳离子共轭聚合物的制备方法，包括以下步骤：

1)将2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴、2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴乙基)芴和4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑混合后，加入四氢呋喃溶液，得到溶液1；

2)将碳酸钾与超纯水混合，将得到的混合溶液加入溶液1中，脱气30min，加入催化剂四(三苯基膦)钯，通入氮气30min，经过加热回流后，进行聚合反应，聚合反应结束后，经过分离纯化，得到前体聚合物；

3)将前体聚合物、1–甲基咪唑和二氯甲烷混合后，经过室温反应后，再分离纯化，得到新型阳离子共轭聚合物。

优选地，步骤1)中，所述2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴、2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴乙基)芴、4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑和四氢呋喃溶液的用量比为(0.1～1.0)g：(0.1～1.2)g：(0.1～1.0)g：(25～100)mL。

优选地，步骤2)中，所述碳酸钾与超纯水的用量比为(0.5～5)g：(1～10)mL；加入四(三苯基膦)钯催化剂的用量为0.005g～0.020g；所述加热回流的反应温度为45℃～120℃，反应时间为6h～72h。

优选地，步骤2)中，所述分离纯化的步骤为：聚合反应结束后，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，加入水和二氯甲烷萃取有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤；旋转蒸发除去有机溶剂。

优选地，步骤3)中，所述前体聚合物、1–甲基咪唑和二氯甲烷的的用量比为(10～100)mg：(1～10)mL：(1～20)mL；所述室温反应时间为12h～96h。

优选地，步骤3)中，所述的分离纯化步骤为：室温反应结束后，旋转蒸发除去二氯甲烷；加入1mL甲醇溶解，转移至分子量为2.5kDa的透析袋中透析2天；用二氯甲烷洗涤三次，旋转蒸发除去有机溶剂。

本发明公开了一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针，该可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针是由上述的阳离子共轭聚合物与十二烷基磺酸钠组成的自组装体系。

本发明还公开了上述一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针的制备方法，将新型阳离子共轭聚合物与十二烷基磺酸钠以(5～50)μM：(5～100)μM的用量比混合后自组装，得到一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针。

本发明所公开的一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针能够在复杂生物环境中排除其他生物分子干扰选择性识别血清白蛋白。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明所述的一种新型阳离子共轭聚合物(PF–DBT–Im)，采用Suzuki交叉偶联聚合，颜色可调，在稀水溶液中表现为纳米聚集体，具有较弱链间荧光共振能量转移(interchain-FRET)而表现出紫色发光。

本发明所述的一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针(PF–DBT–Im/SDS)，是一种新型阳离子共轭聚合物(PF–DBT–Im)与十二烷基磺酸钠的自组装体系，当新型阳离子共轭聚合物(PF–DBT–Im)与十二烷基磺酸钠(SDS)自组装时，由于发生强烈聚集反应，并且强链间荧光共振能量的转移(interchain-FRET)使溶液的发光颜色由紫色急剧变化为深红色，可以依据颜色色度变化建立对血清白蛋白的定量检测。

本发明所述的一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针(PF–DBT–Im/SDS)，与传统比率型荧光探针相比，由于静电相互作用、疏水作用和血清白蛋白较高的本征量子产率的协同作用，发生了从血清白蛋白到所述比率型荧光探针(PF–DBT–Im/SDS)的分子间反向荧光共振能量转移(intermolecular reverse-FRET)，从而实现荧光探针颜色变化，能够在复杂生物环境中排除其他生物分子干扰从而选择性识别血清白蛋白。

本发明首次采用共轭聚合物-表面活性剂自组装体系实现在水介质中高选择性定量检测血清白蛋白。本发明所述的一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针(PF–DBT–Im/SDS)，与传统的单信号输出的荧光探针相比，能够极大程度地降低来自仪器的不稳定，测量条件以及探针浓度的变化对检测结果的干扰，灵敏度高、准确度高，操作方便快捷，适合现场检测。

附图说明

图1为本发明实施例1中新型阳离子共轭聚合物PF–DBT–Im的合成路线图；

图2为本发明实施例1中新型阳离子共轭聚合物PF–DBT–Im的核磁共振氢谱图；

图3为本发明实施例7中PF–DBT–Im/SDS对不同浓度的人血清白蛋白(HSA)的荧光响应光谱图；

图4为本发明实施例7中PF–DBT–Im/SDS在645nm处和420nm处的荧光强度的比值与不同浓度的人血清白蛋白之间的关系图；

图5为本发明实施例8中PF–DBT–Im/SDS对血清白蛋白选择性测试柱状图，即PF–DBT–Im/SDS响应与各种潜在的干扰物之间的关系图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、***、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

下面结合附图对本发明做进一步详细描述：

实施例1：

取0.1g的2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴(M1)、0.1g的2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴乙基)芴(M2)、0.1g的4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑(M3)于三口瓶中，加入25mL四氢呋喃溶液，得到溶液1；将0.5g碳酸钾与1mL超纯水混合，用注射器加入溶液1中，脱气30min，加入0.005g四(三苯基膦)钯做催化剂，通入氮气30min，45℃加热回流6h，进行聚合反应；聚合反应结束后，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，加入水和二氯甲烷萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤；旋转蒸发除去有机溶剂，得到前体聚合物PF–DBT–Br。将10mg的PF–DBT–Br、1mL的1–甲基咪唑和1mL二氯甲烷混合后，室温下反应12h；室温反应结束后，旋转蒸发除去二氯甲烷；加入1mL甲醇溶解，转移至分子量为2.5kDa的透析袋中透析2天；用二氯甲烷洗涤三次，旋转蒸发除去有机溶剂后，得到新型阳离子共轭聚合物PF–DBT–Im；将5μM的PF–DBT–Im与5μM的十二烷基磺酸钠(SDS)混合后自组装，得到一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针PF–DBT–Im/SDS。

通过核磁共振氢谱对PF–DBT–Im进行表征，结果如图2所示。从图2的测试结果可归属质子特征峰：¹H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ9.65–9.55(b,N＝CH–N),δ9.30–9.01(b,N–CH＝CH–N),δ8.30–6.70(b,aromatic backbone),4.15–4.04(b,N–CH₂–(CH₂)₅),3.90-3.70(b,N–CH₃),2.25–0.40(b,N–CH₂–(CH₂)₅)，确定所合成的产物为PF–DBT–Im。

实施例2：

取0.8g的2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴(M1)、0.4g的2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴乙基)芴(M2)、0.3g的4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑(M3)于三口瓶中，加入75mL四氢呋喃溶液，得到溶液1；将1.38g碳酸钾与5mL超纯水混合，用注射器加入溶液1中，脱气30min，加入0.009g四(三苯基膦)钯做催化剂，通入氮气30min，60℃加热回流24h，进行聚合反应；聚合反应结束后，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，加入水和二氯甲烷萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤；旋转蒸发除去有机溶剂，得到前体聚合物PF–DBT–Br；将50mg的PF–DBT–Br、5mL的1–甲基咪唑和8mL二氯甲烷混合后，室温下反应48h；室温反应结束后，旋转蒸发除去二氯甲烷；加入1mL甲醇溶解，转移至分子量为2.5kDa的透析袋中透析2天；用二氯甲烷洗涤三次，旋转蒸发除去溶剂后，得到新型阳离子共轭聚合物PF–DBT–Im；将25μM的PF–DBT–Im与25μM的十二烷基磺酸钠(SDS)混合后自组装，得到一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针PF–DBT–Im/SDS。

本实施例所得的荧光化合物的表征与实施例1中的表征结果是相同的。

实施例3：

取0.2g的2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴(M1)、0.6g的2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴乙基)芴(M2)、0.9g的4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑(M3)于三口瓶中，加入35mL四氢呋喃溶液，得到溶液1；将2.5g碳酸钾与3.5mL超纯水混合，用注射器加入溶液1中，脱气30min，加入0.017g四(三苯基膦)钯做催化剂，通入氮气30min，100℃加热回流32h，进行聚合反应；聚合反应结束后，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，加入水和二氯甲烷萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤；旋转蒸发除去有机溶剂，得到前体聚合物PF–DBT–Br。将30mg的PF–DBT–Br、6mL的1–甲基咪唑和12mL二氯甲烷混合后，室温下反应72h；室温反应结束后，旋转蒸发除去二氯甲烷；加入1mL甲醇溶解，转移至分子量为2.5kDa的透析袋中透析2天；用二氯甲烷洗涤三次，旋转蒸发除去有机溶剂后，得到新型阳离子共轭聚合物PF–DBT–Im。将20μM的PF–DBT–Im与40μM的十二烷基磺酸钠(SDS)混合后自组装，得到一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针PF–DBT–Im/SDS。

实施例4：

取0.6g的2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴(M1)、0.2g的2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴乙基)芴(M2)、0.6g的4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑(M3)于三口瓶中，加入60mL四氢呋喃溶液，得到溶液1；将3.7g碳酸钾与7mL超纯水混合，用注射器加入溶液1中，脱气30min，加入0.012g四(三苯基膦)钯做催化剂，通入氮气30min，80℃加热回流48h，进行聚合反应；聚合反应结束后，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，加入水和二氯甲烷萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤；旋转蒸发除去有机溶剂，得到前体聚合物PF–DBT–Br；将60mg的PF–DBT–Br、8mL的1–甲基咪唑和15mL二氯甲烷混合后，室温下反应54h；室温反应结束后，旋转蒸发除去二氯甲烷；加入1mL甲醇溶解，转移至分子量为2.5kDa的透析袋中透析2天；用DCM洗涤三次，旋转蒸发除去溶剂后，得到新型阳离子共轭聚合物PF–DBT–Im；将30μM的PF–DBT–Im与60μM的十二烷基磺酸钠(SDS)混合后自组装，得到一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针PF–DBT–Im/SDS。

实施例5：

取0.9g的2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴(M1)、0.8g的2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴乙基)芴(M2)、0.4g的4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑(M3)于三口瓶中，加入45mL四氢呋喃溶液，得到溶液1；将4.75g碳酸钾与8mL超纯水混合，用注射器加入溶液1中，脱气30min，加入0.006g四(三苯基膦)钯做催化剂，通入氮气30min，75℃加热回流54h，进行聚合反应；聚合反应结束后，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，加入水和二氯甲烷萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤；旋转蒸发除去有机溶剂，得到前体聚合物PF–DBT–Br；将80mg的PF–DBT–Br、3mL的1–甲基咪唑和5mL二氯甲烷混合后，室温下反应36h；室温反应结束后，旋转蒸发除去二氯甲烷；加入1mL甲醇溶解，转移至分子量为2.5kDa的透析袋中透析2天；用二氯甲烷洗涤三次，旋转蒸发除去溶剂后，得到新型阳离子共轭聚合物PF–DBT–Im；将40μM的PF–DBT–Im与70μM的十二烷基磺酸钠(SDS)混合后自组装，得到一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针PF–DBT–Im/SDS。

实施例6：

取1.0g的2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴(M1)、1.2g的2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴乙基)芴(M2)、1.0g的4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑(M3)于三口瓶中，加入100mL四氢呋喃溶液，得到溶液1；将5g碳酸钾与10mL超纯水混合，用注射器加入溶液1中，脱气30min，加入0.02g四(三苯基膦)钯做催化剂，通入氮气30min，120℃加热回流72h，进行聚合反应；聚合反应结束后，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，加入水和二氯甲烷萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤；旋转蒸发除去有机溶剂，得到前体聚合物PF–DBT–Br；将100mg的PF–DBT–Br、10mL的1–甲基咪唑和20mL二氯甲烷混合后，室温下反应96h；室温反应结束后，旋转蒸发除去二氯甲烷；加入1mL甲醇溶解，转移至分子量为2.5kDa的透析袋中透析2天；用二氯甲烷洗涤三次，旋转蒸发除去有机溶剂后，得到新型阳离子共轭聚合物PF–DBT–Im；将50μM的PF–DBT–Im与100μM的十二烷基磺酸钠(SDS)混合后自组装，得到一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针PF–DBT–Im/SDS。

实施例7：

本发明所述的一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针PF–DBT–Im/SDS对不同浓度人血清白蛋白的荧光检测。测试时，PF–DBT–Im/SDS的浓度始终保持在25μM，HSA的浓度为0μg mL^-1、100μg mL^-1、200μg mL^-1、300μg mL^-1、400μg mL^-1、500μg mL^-1、600μgmL^-1、700μg mL^-1、800μg mL^-1、900μg mL^-1、1000μg mL^-1；测试体系总量为1mL，测试温度为25℃，激发波长为380nm，测得的荧光光谱图如图3所示，随着HSA浓度的增加，420nm和645nm处的荧光强度逐渐上升。这说明，在紫外灯激发下，两个发射峰的同时变化能够实现比率化计算，降低来自仪器的不稳定，测量条件以及探针浓度的变化对检测结果的干扰；而且导致溶液颜色从深红色到粉红色的变化，实现对血清白蛋白的裸眼检测。图4为实施例1的荧光探针在645nm处的荧光强度与420nm处的荧光强度的比值(I₆₄₅/I₄₂₀)与不同浓度的HSA之间的关系图，由图4可知，该荧光强度比值与HSA浓度之间具有高R²值，呈现良好的线性相关性，表明检测分析中得到的数据精确度高、测量误差小，检测结果可靠性强。

实施例8：

本发明所述的一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针PF–DBT–Im/SDS对不同潜在干扰物存在时对人血清白蛋白(HSA)的选择性测试。用浓度为25μM的PF–DBT–Im/SDS比率型荧光探针对存在潜在干扰物的复杂体系进行荧光检测。测试体系由分析物丙氨酸(Ala)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Isoleu)、半胱氨酸(Cys)、缬氨酸(Val)、葡萄糖(Glucose)、血红蛋白(Hb)、细胞色素c(CytC)、核糖核酸酶(RNase)、胃蛋白酶(Pepsin)、胰蛋白酶(Trypsin)、辣根过氧化物酶(HRP)、溶菌酶(Lyz)、人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)组成，每个分析物的浓度均为1000μg mL^–1，测试体系总量为1mL，测试温度为25℃，激发波长为380nm，测得的荧光光谱图如图5所示，由图5可以看出本发明所述的一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针对血清蛋白有优异的选择性。表1所示为各种酶和蛋白质的等电点和本征量子产率，从表1可以看出，与其他蛋白质相比较，血清白蛋白具有较高的本征量子产率(表1)，在静电相互作用、疏水作用的协同作用下，能够发生从血清白蛋白到所述比率型荧光探针(PF–DBT–Im/SDS)的分子间反向荧光共振能量转移(intermolecular reverse-FRET)，产生强烈的颜色变化，从而实现对血清白蛋白的高选择性检测。

表1各种酶和蛋白质的等电点和本征量子产率

以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims

1.一种阳离子共轭聚合物，其特征在于，该阳离子共轭聚合物含有聚芴荧光团和二噻吩苯并噻二唑荧光团，具有如下结构式：

2.权利要求1所述的一种阳离子共轭聚合物的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

1)将2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴、2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴己基)芴和4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑混合后，加入四氢呋喃溶液，混匀得到溶液1；

2)将碳酸钾与超纯水混合后加入溶液1中，脱气处理，然后加入催化剂四(三苯基膦)钯，通入氮气，经过加热回流后，进行聚合反应，再经过分离纯化，得到前体聚合物；

3)将前体聚合物、1–甲基咪唑和二氯甲烷混合后，经过室温反应后，再分离纯化，得到阳离子共轭聚合物。

3.根据权利要求2所述的一种阳离子共轭聚合物的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述2,7-二溴-9,9-二(6-溴己基)芴、2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-9,9-二(6-溴己基)芴、4,7-二(5-溴噻吩-2-基)苯并[c][1,2,5]噻二唑和四氢呋喃溶液的用量比为(0.1～1.0)g：(0.1～1.2)g：(0.1～1.0)g：(25～100)mL。

4.根据权利要求2所述的一种阳离子共轭聚合物的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述碳酸钾与超纯水的用量比为(0.5～5)g：(1～10)mL；加入四(三苯基膦)钯催化剂的用量为0.005g～0.020g；所述加热回流的反应温度为45℃～120℃，反应时间为6h～72h。

5.根据权利要求2所述的一种阳离子共轭聚合物的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述分离纯化的步骤为：聚合反应结束后，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，加入水和二氯甲烷萃取有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋转蒸发除去有机溶剂。

6.根据权利要求2所述的一种阳离子共轭聚合物的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述前体聚合物、1–甲基咪唑和二氯甲烷的用量比为(10～100)mg：(1～10)mL：(1～20)mL；所述室温反应时间为12h～96h。

7.根据权利要求2所述的一种阳离子共轭聚合物的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述的分离纯化步骤为：室温反应结束后，旋转蒸发除去二氯甲烷；加入甲醇溶解，转移至分子量为2.5kDa的透析袋中透析2天；用二氯甲烷洗涤三次，旋转蒸发除去有机溶剂。

8.一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针，其特征在于，该可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针是由权利要求1所述的阳离子共轭聚合物与十二烷基磺酸钠组成的自组装体系。

9.权利要求8所述的一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于，将阳离子共轭聚合物与十二烷基磺酸钠以(5～50)μM：(5～100)μM的用量比混合后自组装，得到一种可选择性定量检测血清白蛋白的比率型荧光探针。