CN113975321A - 能够抗皮肤老化的中药提取物及中药制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种能够抗皮肤老化的中药提取物，其提取方法包括以下步骤：称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的6～18倍，煎煮30～150分钟，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的3～18倍，煎煮20～100分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；在10～100℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.00～2.00；然后加入无水乙醇，使含醇量达20～90％之间；静置6～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在20～90℃下真空浓缩，得到中药提取物。本发明将苦杏仁采用特定方法进行提取，所得到的提取物对人真皮成纤维细胞具有较好的促进细胞增殖的作用，从而能够抑制人真皮成纤维细胞的衰老，实现抗皮肤老化的效果。本发明还公开了一种能够抗皮肤老化的中药制剂。

Description

能够抗皮肤老化的中药提取物及中药制剂
技术领域
本发明涉及一种中药组合物，具体涉及一种能够抗皮肤老化的中药提取物。本发明还涉及一种能够抗皮肤老化的中药制剂。
背景技术
皮肤的老化可分为内源性因素和外源性因素，又可分为生理因素和病理因素两部分。其中，人的皮肤衰老在生理因素中占首要位置，而已有研究表明人皮肤真皮层的衰老是皮肤老化的主要原因。内源性因素中人体内DNA的甲基化占据重要的位置，其可以同时调控细胞的增殖和凋亡，并且转录因子P53在DNA损害时激活，进一步介导皮肤的发育调控，使皮肤老化。另外，内源性因素中还包括“自由基学说”，即自由基使体内脂质的过氧化会通过形成丙二醛，导致生物膜的通透性降低和硬化，从而导致细胞衰老、凋亡从而引起细胞死亡并使皮肤老化。皮肤老化在临床中表现为皮肤皱纹增多，干燥粗糙以及皮肤松弛。外源性因素中光损伤在皮肤老化中位于关键位置，光损伤会进一步促进并聚集自由基，诱导DNA的氧化应激，从而破坏真皮结构和其细胞外基质，进而促进皮肤老化。皮肤老化会导致其生理功能低下，皮脂腺汗腺功能衰退，皮肤干燥失去光泽，血液循环功能减退且伤口愈合减慢。
在中医经典古籍《黄帝内经》中提出“体察形色法”与“异方分形法”，认为可从人体皮肤变化观察人的身体健康情况。《神农本草经》中记载：“杏核，治咳逆上气雷鸣，喉痹下气，产乳金创，寒心奔豚。”杏仁早在《神农本草经》中便有记载可治“金创”，“金创”又为兵器等金属利器对人体造成的创伤，可见，杏仁有加快皮肤新陈代谢与创面恢复的功效。
而现代中药领域美容产品的开发仍存在较大缺口，更少有以中医理论指导的从细胞层面上提供支持依据的相关数据。如何将中药杏仁与现代美容领域结合起来，将中国古代的经验运用到现代生活中，是天然中药抗皮肤衰老相关产品研发行业所关注的重点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够抗皮肤老化的中药提取物，它可以促进人真皮成纤维细胞增殖，从而抑制人真皮成纤维细胞的衰老。
为解决上述技术问题，本发明能够抗皮肤老化的中药提取物的技术解决方案为：
其提取方法包括以下步骤：称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的6～18倍，煎煮30～150分钟，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的3～18倍，煎煮20～100分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；在10～100℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.00～2.00；然后加入无水乙醇，使含醇量达20～90％之间；静置6～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在20～90℃以下真空浓缩，得到所述能够促进皮肤细胞增殖的中药提取物。
在另一实施例中，所述提取方法包括以下步骤：称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的6～12倍，煎煮30～50分钟，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的6～15倍，煎煮20～60分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；在50～80℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.04～1.50；然后加入无水乙醇，使含醇量达50～90％之间；静置12～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在50～90℃以下真空浓缩，得到稠膏。
在另一实施例中，所述提取方法包括以下步骤：称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的10倍，煎煮40分钟，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的8倍，煎煮40分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；在80℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.21～1.30；然后加入无水乙醇，使含醇量达60％；静置26小时，滤过，滤液回收乙醇，在80℃以下真空浓缩，得到稠膏。
本发明还提供一种能够抗皮肤老化的中药制剂，其技术解决方案为：
以所述的中药提取物作为唯一活性成分用于促进人真皮成纤维细胞增殖。
在另一实施例中，所述中药制剂为外用制剂。
在另一实施例中，所述中药制剂还含有制备成化妆品、护肤品或外用药物可接受的辅料。
在另一实施例中，所述中药制剂被制成胶囊剂、颗粒剂、合剂、片剂或酊剂。
在另一实施例中，所述中药提取物作为唯一活性成分在所述中药制剂中的使用浓度为0.6～1.2mg/ml，每间隔5～7小时重复施用一次，用于急性受损皮肤的治疗。
在另一实施例中，所述中药提取物作为唯一活性成分在所述中药制剂中的使用浓度为1.2～2.3mg/ml，每间隔11～13小时重复施用一次，用于敏感性皮肤的预防。
在另一实施例中，所述中药提取物作为唯一活性成分在所述中药制剂中的使用浓度为1.2～4.6mg/ml，每间隔23～25小时重复施用一次，用于健康皮肤的抗老化。
在另一实施例中，所述中药提取物作为唯一活性成分在所述中药制剂中的使用浓度为2.3mg/ml，每间隔23～25小时重复施用一次，用于健康皮肤的抗老化。
本发明可以达到的技术效果是：
本发明将苦杏仁采用特定方法进行提取，所得到的提取物对人真皮成纤维细胞具有较好的促进细胞增殖的作用，从而能够抑制人真皮成纤维细胞的衰老，实现抗皮肤老化的效果，同时还能满足安全可靠、天然无刺激的现代美容研发要求。
由于本发明的中药提取物具有明显的促进细胞增殖的作用，因此还能够起到帮助皮肤细胞修复的作用，可以作为外用药剂，用于受损皮肤的治疗，以及敏感性皮肤的预防。
本发明从皮肤老化的内源性因素入手，通过促进人真皮成纤维细胞的增殖，延缓皮肤的老化。
本发明所采用的中药苦杏仁属于药食同源的天然食品，具有较高的安全性与较低的毒副作用，因此能够长期使用。
附图说明
本领域的技术人员应理解，以下说明仅是示意性地说明本发明的原理，所述原理可按多种方式应用，以实现许多不同的可替代实施方式。这些说明仅用于示出本发明的教导内容的一般原理，不意味着限制在此所公开的发明构思。
结合在本说明书中并构成本说明书的一部分的附图示出了本发明的实施方式，并且与上文的总体说明和下列附图的详细说明一起用于解释本发明的原理。
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：
图1是本发明能够抗皮肤老化的中药提取物的提取方法的操作流程示意图；
图2是将本发明实施例1-4制得的中药提取物作为测试品分别以0，0.6，1.2，2.3，4.6，9.2mg/ml的浓度刺激6小时，HDF-α细胞的生长情况示意图；
图3是将本发明实施例1-4制得的中药提取物作为测试品分别以0，0.6，1.2，2.3，4.6，9.2mg/ml的浓度刺激12小时，HDF-α细胞的生长情况示意图；
图4是将本发明实施例1-4制得的中药提取物作为测试品分别以0，0.6，1.2，2.3，4.6，9.2mg/ml的浓度刺激24小时，HDF-α细胞的生长情况示意图；
图5是将本发明实施例1-4制得的中药提取物作为测试品分别以0，0.6，1.2，2.3，4.6，9.2mg/ml的浓度刺激48小时，HDF-α细胞的生长情况示意图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例的附图，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另外定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本文中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性，而只是用来区分不同的组成部分。“包括”等类似的词语意指出现该词前面的元件、组分或者步骤涵盖出现在该词后面列举的元件、组分或者步骤及其等同，而不排除其他元件、组分或者步骤。
如图1所示，本发明能够抗皮肤老化的中药提取物，其提取方法包括以下步骤：
称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的6～18倍，煎煮30～150分钟(第一次煎煮)，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的3～18倍，煎煮20～100分钟(第二次煎煮)，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
优选地，煎煮时，待水沸后投料，以防止成分水解。
在10～100℃下测量密度，使药液浓缩至其稠度(即相对密度，下同)为1.00～2.00；然后缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，使含醇量达20～90％之间；静置6～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在20～90℃以下真空浓缩，得到稠膏。
优选地，提取方法包括以下步骤：
称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的6～12倍，煎煮30～50分钟(第一次煎煮)，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的6～15倍，煎煮20～60分钟(第二次煎煮)，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
在50～80℃下测量密度，使药液浓缩至其稠度为1.04～1.50；然后加入无水乙醇，边加边搅拌，使含醇量达50～90％之间；静置12～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在50～90℃以下真空浓缩，得到稠膏。
优选地，提取方法包括以下步骤：
称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的10倍，煎煮40分钟(第一次煎煮)，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的8倍，煎煮40分钟(第二次煎煮)，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
在80℃下测量密度，使药液浓缩至其稠度为1.21～1.30；然后加入无水乙醇，使含醇量达60％；静置26小时，滤过，滤液回收乙醇，在80℃以下真空浓缩，得到稠膏。
本发明的提取方法中，滤液回收乙醇步骤之后的浓缩需在真空下进行，并且温度不得高于90℃，优选温度不得高于80℃，在此条件下所得到的中药提取物的活性成分能够保持稳定。
为更好地说明本发明，变化与理解本发明的技术方案，本发明的典型但非限制性实施例如下：
实施例1中药提取物的制备：
称取苦杏仁5kg，捣碎后加水量10倍，煎煮40分钟，再加水8倍，煎煮40分钟，滤过，在80℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.21～1.30，后加入无水乙醇，使含醇量达60％，静置26小时，滤过，滤液回收乙醇，在80℃下真空浓缩至稠膏。
实施例2中药提取物的制备：
称取苦杏仁4kg，捣碎后加水量18倍，煎煮150分钟，再加水4倍，煎煮100分钟，滤过，在70℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.40，后加入无水乙醇，使含醇量达70％，静置36小时，滤过，滤液回收乙醇，在90℃下真空浓缩至稠膏。
实施例3中药提取物的制备：
称取苦杏仁2kg，捣碎后加水量6倍，煎煮120分钟，再加水18倍，煎煮20分钟，滤过，在20℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.90，后加入无水乙醇，使含醇量达20％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，在20℃下真空浓缩至稠膏。
实施例4中药提取物的制备：
称取苦杏仁0.5kg，捣碎后加水量12倍，煎煮70分钟，再加水3倍，煎煮70分钟，滤过，在30℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.20，后加入无水乙醇，使含醇量达30％，静置6小时，滤过，滤液回收乙醇，在30℃下真空浓缩至稠膏。
对比例5中药提取物的制备：
称取苦杏仁2kg，捣碎后加水量5倍，煎煮20分钟，再加水20倍，煎煮120分钟，滤过，在60℃下测量密度，使浓缩至其稠度为0.90，后加入无水乙醇，使含醇量达95％，静置5小时，滤过，滤液回收乙醇，在90℃下真空浓缩至稠膏。
对比例5中药提取物的制备：
称取苦杏仁1kg，捣碎后加水量20倍，煎煮200分钟，再加水2倍，煎煮15分钟，滤过，在60℃下测量密度，使浓缩至其稠度为2.10，后加入无水乙醇，使含醇量达15％，静置5小时，滤过，滤液回收乙醇，在90℃下真空浓缩至稠膏。
试验例1抑制人真皮成纤维细胞(HDF-α)衰老的研究
材料及方法
采用美国Molecular公司的SpectraMax190型酶标仪；德国Leica公司的LeicaDMi1型显微镜；二甲基亚砜(DMSO，批号BCBZ1685，Sigma，Swizerland瑞士)；96孔板(NestBiotech无锡耐思生物科技有限公司，中国)
(1)细胞培养
将HDF-α细胞置于含有10％FBS(胎牛血清)和1％PS的DMEM培养基中，在37℃、5％CO2(二氧化碳)培养箱培养，待细胞进入对数生长期，进行下一步实验。
(2)细胞铺板并分组给药
将HDF-α细胞以7000个/孔接种于96孔板中，采用DMEM培养基，每孔100μL，每个浓度组设置3个复孔，放置于37℃，0.5％CO2培养箱中过夜；
分别给予HDF-α以培养基或含不同浓度(0，0.6，1.2，2.3，4.6，9.2mg/ml)的本发明实施例1-4制得的中药提取物的培养基刺激6，12，24，48小时。刺激完成后，进行下一步检测。
每孔加入MTT(细胞增殖检测)试剂10μL并混匀，在培养箱中孵育4h，最后通过酶标仪于波长570nm测定吸光度，并取3个复孔的平均值，计算细胞存活率。
(3)统计
所有统计均在数据处理与图形软件GraphPad Prism 9.0中完成，符合正态分布的数据使用均数±标准差(x±s)表示，方差齐性的多组间比较采用单因素方差分析，组间两两等多重比较采用LSD-t检验；统计意义如下：ns，无统计学意义；*，p<0.05，有统计学差异；**，p<0.01，有显著统计学差异；***，p<0.001，有极其显著的统计学差异；P值即概率，反映某一事件发生的可能性大小。
从图2中可以看出，本发明的中药提取物对HDF-α细胞刺激6小时时，其促进细胞增殖的作用并不明显；仅0.6mg/ml和1.2mg/ml浓度具有一定的效果；
从图3中可以看出，本发明的中药提取物对HDF-α细胞刺激12小时时，其促进细胞增殖的作用并不明显；仅1.2mg/ml和2.3mg/ml浓度具有一定的效果；
从图4中可以看出，本发明的中药提取物对HDF-α细胞刺激24小时时，对HDF-α细胞具有明显的促进细胞增殖的作用；其中，中药提取物浓度在1.2～4.6mg/ml，特别是2.3mg/ml时，效果尤为明显；因此，本发明作为外用制剂适用于每日使用一次；
从图5中可以看出，本发明的中药提取物对HDF-α细胞刺激48小时时，其促进细胞增殖的作用明显下降；仅0.6mg/ml的浓度略有效果。
结论：在本实验条件下，2.3mg/ml浓度的杏仁提取物刺激24小时对HDF-α细胞具有明显的促进细胞增殖及抗衰老的作用。
经过细胞实验表明，本发明的中药提取物对人真皮成纤维细胞具有较强的促增殖能力，因此能延缓细胞衰老，有明显的抗衰老作用。
经过细胞实验表明，本发明的中药提取物在低浓度下未发现有明显的毒副作用或细胞杀伤作用。
本发明所得到的杏仁提取物对人真皮成纤维细胞具有较强的促增殖能力，且能延缓其细胞衰老，在中低剂量下无毒副作用和细胞杀伤作用。
当采用对比例5和对比例6所制得的中药提取物时，未测定到上述明显对人真皮成纤维细胞具有促增殖能力的结果。
本发明能够抗皮肤老化的中药提取物的使用方法如下：
对于急性受损皮肤的治疗，采用0.6～1.2mg/ml浓度的中药提取物作为唯一活性成分，外用于患处，每间隔6小时重复施用一次。0.6～1.2mg/ml浓度的含义是：中药提取物稠膏的浓度。
对于敏感性皮肤的预防，采用1.2～2.3mg/ml浓度的中药提取物作为唯一活性成分，外用于裸露皮肤，每间隔12小时重复施用一次。
对于日常护肤保养，采用1.2～4.6mg/ml浓度(优选浓度2.3mg/ml)的中药提取物作为唯一活性成分，外用于裸露皮肤，每间隔24小时重复施用一次。
以上所达仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变形，而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改属于本发明权利要求及其同等技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变形在内。

Claims (10)

1.一种能够抗皮肤老化的中药提取物，其特征在于，所述中药提取物的提取方法包括以下步骤：
称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的6～18倍，煎煮30～150分钟，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的3～18倍，煎煮20～100分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
在10～100℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.00～2.00；然后加入无水乙醇，使含醇量达20～90％之间；静置6～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在20～90℃以下真空浓缩，得到所述能够促进皮肤细胞增殖的中药提取物。
2.根据权利要求1所述的能够抗皮肤老化的中药提取物，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：
称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的6～12倍，煎煮30～50分钟，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的6～15倍，煎煮20～60分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
在50～80℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.04～1.50；然后加入无水乙醇，使含醇量达50～90％之间；静置12～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在50～90℃以下真空浓缩，得到稠膏。
3.根据权利要求1所述的能够抗皮肤老化的中药提取物，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：
称取苦杏仁并将其捣碎；加水量为苦杏仁的10倍，煎煮40分钟，取煎煮液；再加水量为苦杏仁的8倍，煎煮40分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
在80℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.21～1.30；然后加入无水乙醇，使含醇量达60％；静置26小时，滤过，滤液回收乙醇，在80℃以下真空浓缩，得到稠膏。
4.一种能够抗皮肤老化的中药制剂，其特征在于，以权利要求1至3任一项所述的中药提取物作为唯一活性成分用于促进人真皮成纤维细胞增殖。
5.根据权利要求4所述的能够抗皮肤老化的中药制剂，其特征在于，所述中药制剂为外用制剂。
6.根据权利要求4或5所述的能够抗皮肤老化的中药制剂，其特征在于，所述中药制剂还含有制备成化妆品、护肤品或外用药物可接受的辅料。
7.根据权利要求4或5所述的能够抗皮肤老化的中药制剂，其特征在于，所述中药提取物作为唯一活性成分在所述中药制剂中的使用浓度为0.6～1.2mg/ml，每间隔5～7小时重复施用一次，用于急性受损皮肤的治疗。
8.根据权利要求4或5所述的能够抗皮肤老化的中药制剂，其特征在于，所述中药提取物作为唯一活性成分在所述中药制剂中的使用浓度为1.2～2.3mg/ml，每间隔11～13小时重复施用一次，用于敏感性皮肤的预防。
9.根据权利要求4或5所述的能够抗皮肤老化的中药制剂，其特征在于，所述中药提取物作为唯一活性成分在所述中药制剂中的使用浓度为1.2～4.6mg/ml，每间隔23～25小时重复施用一次，用于健康皮肤的抗老化。
10.根据权利要求4或5所述的能够抗皮肤老化的中药制剂，其特征在于，所述中药提取物作为唯一活性成分在所述中药制剂中的使用浓度为2.3mg/ml，每间隔23～25小时重复施用一次，用于健康皮肤的抗老化。
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