CN113855740A - 一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的制备及应用方法 - Google Patents

一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的制备及应用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂，包括以下重量份数配比的原料药：薄荷醇20g，冰片20g，茜草100g，夏枯草100g，鱼腥草100g，大蓟根50g，芙蓉根50g。该用于治疗奶牛乳腺炎的膏剂的应用及方法，首先筛选患有临床型乳腺炎的奶牛，随后使用此膏剂对患病乳腺进行治疗，在实验的第0天和第8天进行尾静脉采血和无菌采集乳汁，通过ELISA检测血清和乳清中的IL‑1β，IL‑6和TNF‑α等炎性因子的表达情况，结果表明本膏剂能够显著抑制乳清和血清中炎性因子的表达，缓解乳腺炎奶牛的炎症反应，有力的说明了本外用膏剂能够减轻乳腺的炎症反应，对临床型奶牛乳腺炎具有一定的治疗作用。

Description

一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的制备及应用方法
技术领域
本发明涉及医学技术领域，具体为一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的制备及应用方法。
背景技术
奶牛乳腺炎是由于乳腺受到理化因素或机械损伤后，病原微生物穿过血乳屏障入侵乳腺组织，进而引起一系列的炎症反应的疾病。以***的红、肿、热、痛以及乳腺组织发生相关炎症反应、乳汁理化性质改变，体细胞增多，细菌含量上升等为主要特征，严重危害了奶牛的健康。乳腺炎的发生不仅造成了患病牛产奶量的显著下降，乳品质的降低，严重的还会导致患牛的死亡，极大制约了奶牛业的经济效益。
一直以来，抗生素是奶牛乳腺炎治疗的首选药物，不仅对急性临床乳腺炎有明显的效果，还能够有效防止败血症的发生。但是抗生素的滥用催生了多重耐药菌株的出现，使得目前常用的抗生素已经无法治疗一些广泛传播的致病菌，并且抗生素在发挥作用时选择性较低，不但能够杀灭病原菌，还会杀死益生菌，使得乳腺内的正常菌群平衡遭到破坏。
此外，抗生素作为治疗乳腺炎的主要手段，虽然能够有效的杀灭致病菌，但是抗生素在治疗乳腺炎的过程中主要以杀灭病原菌为主，而病原菌死亡后其内毒素残留在乳腺组织中能够引起剧烈的炎症反应。抗生素并不能有效的控制炎症反应的进程。所以目前亟待一种毒性低，残留少，耐药性低，具有抗炎作用的药物出现。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有的技术不足，本发明提供了一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的制备及应用方法，本发明具有来源广泛，价格低廉，具有抗炎作用，且不会引起抗生素的积累等问题，对于奶牛乳腺炎的治疗具有明显的效果。
(二)技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂，包括以下重量分数配比的原料药：薄荷醇20g，冰片20g，茜草100g，夏枯草100g，鱼腥草100g，大蓟根50g，芙蓉根50g。
为配合上述中药膏剂的使用，现提供一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂的制备方法：1)分别按重量要求称取夏枯草、茜草、鱼腥草、大蓟根和芙蓉根，清洗干燥后粉碎成粗粉备用；
2)将各原料药混合后，以60％的乙醇为溶剂，按料液比1:10的比例加入乙醇，用封口膜密封后浸泡过夜，随后置于超声波洗涤器中，设定功率500w，温度50℃，进行超声处理1h，按以上步骤重复三次，过滤合并滤液。
3)将步骤2中得到的滤液用中药旋转蒸发器浓缩成浓度为1g/ml的清膏。
4)向步骤3中得到的清膏中加入2ml吐温-80，使用磁力电动搅拌器进行搅拌，混合均匀后加入10g羧甲基纤维素钠，得到胶体溶液，作为液体A。
5)取20g薄荷醇与20g冰片，置于研钵中研磨，根据低温共融原理，将二者研磨成液态状混合物后备用。
6)取100ml的丙二醇置于50℃水浴锅中加热，随后加入步骤5中的液态状混合物进行搅拌，搅拌均匀，作为液体B，
7)取700ml凡士林，在80℃水浴锅中加热至完全溶解，随后将混合物A缓慢加入凡士林中，使用电动增力搅拌器搅拌均匀后，加入液体B，边加边搅拌，冷却至室温后停止搅拌，即得本外用膏剂。
为配合上述外用膏剂的使用，现提供一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的应用方法：S1、患临床型乳腺炎奶牛的筛选：应用CMT检测方法，初步筛选出乳腺炎为阳性的奶牛；
S2、挑选患有临床型奶牛乳腺炎的奶牛8头，将8头奶牛随机分为两组，分别为非膏剂治疗组(对照组)和外用膏剂治疗组(治疗组)；
S3、在进行给药治疗前，对实验奶牛进行尾静脉采血和无菌收集乳汁，随后送回实验室进行乳清和血清的分离，保存备用；
S4、对治疗组奶牛进行给药治疗，每天外用涂抹给药一次，共给药7天；
S5、给药治疗结束后，对实验奶牛进行尾静脉采血和无菌收集乳汁，随后送回实验室进行乳清和血清的分离，保存备用；
S6、对给药治疗前后分离得到的乳清和血清通过使用ELISA检测方法进行乳清和血清中炎性因子IL-1β，IL-6和TNF-α表达水平的检测，以评估奶牛炎症反应的变化情况。
优选的，所述的乳腺炎奶牛的筛选方法为：使用CMT检测方法，筛选出的奶牛乳汁的特性为盘底沉淀物较多，比较粘稠，并有少量胶状物，倾斜测试盒时，沉淀物有明显黏附于盘底难于流动的现象，旋转测试盘时，沉淀物有向中心聚集的倾向，检测结果为乳腺炎阳性的奶牛。
优选的，在检测结果为乳腺炎阳性的奶牛中，挑选出8头年龄，体重和临床症状相近的病牛，并对其进行随机分组，随后在实验的第0天和第8天进行尾静脉采血和无菌收集乳汁。
优选的，所述血液中血清的分离方法为：将采集好的血液置于4℃冰箱中，将试管呈45度角倾斜放置，待血液凝固后收集血清，随后用1000g的离心力离心10min，收集上清液备用。
优选的，所述的乳汁中乳清的提取方法：将无菌采集的乳汁置于4℃冰箱中静置1h，随后使用3000g的离心力离心20min，收集上清液备用；
优选的，所述的炎性因子的检测方法为：将分离得到的乳清和血清进行稀释处理后，根据炎性因子ELISA试剂盒说明书进行乳清和血清中的IL-1β、IL-6以及TNF-α炎性因子表达量的检测。
(三)有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的制备及应用方法，具备以下有益效果：
1、本发明通过ELISA的检测方法，评估了外周血中炎性因子的表达情况，证明了该外用膏剂能够缓解奶牛乳腺炎的炎症反应，抑制了外周血中的炎性因子的表达，减轻了机体的炎症反应，有力的说明了此外用膏剂能够减轻机体的炎症反应，对临床型奶牛乳腺炎的治疗具有一定的作用。
2、本发明通过ELISA的检测方法，评估了乳汁中炎性因子的表达情况，证明了该外用膏剂能够缓解奶牛乳腺炎的炎症反应，抑制了乳腺组织中炎性因子的表达，减轻了乳腺组织的炎症反应，有力的说明了此外用膏剂能够缓解乳腺组织的炎症反应，对奶牛乳腺炎的治疗具有一定的作用。
3、本发明由天然产物制作而成，通过在外用涂抹的方式给药，不仅方便了奶牛乳腺炎的治疗，还能够有效的避免抗生素残留等问题，且在治疗过程中不会产生耐药性，避免了抗生素带来的不利影响，为奶牛乳腺炎的预防和治疗提供了一种新的方案和思路。
附图说明
图1为本发明外用膏剂对患临床型乳腺炎的奶牛乳清中炎性因子IL-1β表达水平的影响示意图；
图2为本发明外用膏剂对患临床型乳腺炎的奶牛乳清中炎性因子IL-6表达水平的影响示意图；
图3为本发明外用膏剂对患临床型乳腺炎的奶牛乳清中炎性因子TNF-α表达水平的影响示意图；
图4为本发明外用膏剂对患临床型乳腺炎的奶牛血清中炎性因子IL-1β表达水平的影响示意图；
图5为本发明外用膏剂对患临床型乳腺炎的奶牛血清中炎性因子IL-6表达水平的影响示意图；
图6为本发明外用膏剂对患临床型乳腺炎的奶牛血清中炎性因子TNF-α表达水平的影响示意图；
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-6，本发明公开了一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂，包括以下重量份数配比的原料：薄荷醇20g，冰片20g，茜草100g，夏枯草100g，鱼腥草100g，大蓟根50g，芙蓉根50g。
为配合上述外用膏剂的使用，现提供一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的制备方法：1)分别按重量要求称取夏枯草、茜草、鱼腥草、大蓟根和芙蓉根，清洗干燥后粉碎成粗粉备用，
2)将各原料药混合后，以60％的乙醇为溶剂，按料液比1:10的比例加入乙醇，用封口膜密封后浸泡过夜，随后置于超声波洗涤器中，设定功率500w，温度50℃，进行超声处理1h，按以上步骤重复三次，过滤合并滤液。
3)将步骤2中得到的滤液用中药旋转蒸发器浓缩成浓度为1g/ml的清膏。
4)向步骤3中得到的清膏中加入2ml吐温-80，使用磁力电动搅拌器进行搅拌，混合均匀后加入10g羧甲基纤维素钠，得到胶体溶液，作为液体A。
5)取20g薄荷醇与20g冰片，置于研钵中研磨，根据低温共融原理，将二者研磨成液态状混合物后备用。
6)取100ml的丙二醇置于50℃水浴锅中加热，随后加入步骤5中的液态状混合物进行搅拌，搅拌均匀，作为液体B。
7)取700ml凡士林，在80℃水浴锅中加热至完全溶解，随后将混合物A缓慢加入凡士林中，使用电动增力搅拌器搅拌均匀后，加入液体B，边加边搅拌，冷却至室温后停止搅拌，即得本外用膏剂。
并且为了配合上述药物使用，还提供了一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的应用方法：S1、患临床型乳腺炎奶牛的筛选：应用CMT检测方法，初步筛选出乳腺炎为阳性的奶牛；
所述乳腺炎奶牛的筛选方法为：使用CMT检测方法，筛选出的奶牛乳汁的特性为盘底沉淀物较多，比较粘稠，并有少量胶状物，倾斜测试盒时，沉淀物有明显黏附于盘底难于流动的现象，旋转测试盘时，沉淀物有向中心聚集的倾向，检测结果为乳腺炎阳性的奶牛；
S2、挑选患有临床型奶牛乳腺炎的奶牛8头，将8头奶牛随机分为两组，分别为非膏剂治疗组(对照组)和外用膏剂治疗组(治疗组)；
在检测结果为乳腺炎阳性的奶牛中，挑选出8头年龄，体重和临床症状等相近的病牛，并对其进行随机分组。随后在实验的第0天和第8天进行尾静脉采血和无菌收集乳汁；
S3、在进行给药治疗前，对实验奶牛进行尾静脉采血和无菌收集乳汁，随后送回实验室进行乳清和血清的分离，保存备用；
S4、对治疗组奶牛进行给药治疗，每天外用涂抹给药一次，共给药7天；
S5、给药治疗结束后，对实验奶牛进行尾静脉采血和无菌收集乳汁，随后送回实验室进行乳清和血清的分离，保存备用；
所述血液中血清的分离方法为：将采集好的血液置于4℃冰箱中，将试管呈45度角倾斜放置，待血液凝固后收集血清，随后用1000g的离心力离心10min，收集上清液备用；
所述的乳汁中乳清的提取方法：将无菌采集的乳汁置于4℃冰箱中静置1h，随后使用3000g的离心力离心20min，收集上清液备用；
S6、对给药治疗前后分离得到的乳清和血清通过使用ELISA检测方法进行乳清和血清中炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平的检测，以评估奶牛炎症反应的变化情况；
所述的炎性因子的检测方法为：将分离得到的乳清和血清进行稀释处理后，根据炎性因子ELISA试剂盒说明书进行乳清和血清中的IL-1β、IL-6以及TNF-α炎性因子表达量的检测。
为配合上述实验方法，现提供如下数据统计：
从图1可以看出涂抹本外用膏剂治疗7天能显著降低奶牛乳清中的炎性因子IL-1β的表达，而不使用本膏剂处理的奶牛乳清中IL-1β降低较少，结果表明此外用膏剂能有效的减少奶牛乳清中IL-1β的表达量，进而有效促进奶牛乳腺炎的缓解。
从图2可以看出涂抹本外用膏剂治疗7天能显著降低奶牛乳清中的炎性因子IL-6的表达，而不使用本膏剂处理的奶牛乳清中IL-6降低较少，结果表明此外用膏剂能有效的减少奶牛乳清中IL-6的表达量，进而有效促进奶牛乳腺炎的缓解。
从图3可以看出涂抹本外用膏剂治疗7天能显著降低奶牛乳清中的炎性因子TNF-α的表达，而不使用本膏剂处理的奶牛乳清中TNF-α降低较少，结果表明此外用膏剂能有效的减少奶牛乳清中TNF-α的表达量，进而有效促进奶牛乳腺炎的缓解。
从图4可以看出涂抹本外用膏剂治疗7天能显著降低奶牛血清中的炎性因子IL-1β的表达，而不使用本膏剂处理的奶牛血清中IL-1β降低较少，结果表明此外用膏剂能有效的减少奶牛血清中IL-1β的表达量，进而有效促进奶牛乳腺炎的缓解。
从图5可以看出涂抹本外用膏剂治疗7天能显著降低奶牛血清中的炎性因子IL-6的表达，而不使用本膏剂处理的奶牛血清中IL-6降低较少，结果表明此外用膏剂能有效的减少奶牛血清中IL-6的表达量，进而有效促进奶牛乳腺炎的缓解。
从图6可以看出涂抹本外用膏剂治疗7天能显著降低奶牛血清中的炎性因子TNF-α的表达，而不使用本膏剂处理的奶牛血清中TNF-α降低较少，结果表明此外用膏剂能有效的减少奶牛血清中TNF-α的表达量，进而有效促进奶牛乳腺炎的缓解。
综上所述，该实验证明了此外用膏剂能够对乳腺炎起到一定的治疗和保护作用，从患乳腺炎奶牛的治疗过程中，我们发现通过膏剂处理一周的奶牛，其乳清，血清中的IL-1β，IL-6和TNF-α等炎性因子的表达量出现了显著的下降，与同期不使用本膏剂治疗的乳腺炎奶牛相比也具有明显的下降趋势，这些结果说明了，通过外用本膏剂能够有效的缓解奶牛乳腺炎的炎症反应，进而对奶牛乳腺炎起到一定的治疗和保护作用。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (8)

1.一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂，其特征在于，包括以下重量分数配比的原料药：薄荷醇20g，冰片20g，茜草100g，夏枯草100g，鱼腥草100g，大蓟根50g，芙蓉根50g。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂，现提供一种用于治疗奶牛乳腺炎的中药膏剂的制备方法，其特征在于：
1)分别按重量要求称取夏枯草、茜草、鱼腥草、大蓟根和芙蓉根，清洗干燥后粉碎成粗粉备用；
2)将各原料药混合后，以浓度为60％的乙醇为溶剂，按料液比1:10的比例加入乙醇，用封口膜密封后浸泡过夜，随后置于超声波洗涤器中，设定功率500w，温度50℃，进行超声处理1h，按以上步骤重复三次，过滤合并滤液；
3)将步骤2中得到的滤液用中药旋转蒸发器浓缩成浓度为1g/ml的清膏；
4)向步骤3中得到的清膏中加入2ml吐温-80，使用磁力电动搅拌器进行搅拌，混合均匀后加入10g羧甲基纤维素钠，得到胶体溶液，作为液体A；
5)称取20g薄荷醇与20g冰片，置于研钵中研磨，根据低温共融原理，将二者研磨成液态状混合物后备用；
6)量取100ml的丙二醇置于50℃水浴锅中加热，随后加入步骤5中的液态状混合物进行搅拌，搅拌均匀，作为液体B；
7)量取700ml凡士林，在80℃水浴锅中加热至完全溶解，随后将液体A缓慢加入凡士林中，使用电动增力搅拌器搅拌均匀后，加入液体B，边加边搅拌，冷却至室温后停止搅拌，即得本外用膏剂。
3.根据权利要求1所以的一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂，现提供一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的应用方法，其特征在于：
S1、患临床型乳腺炎奶牛的筛选：应用CMT检测方法，初步筛选出乳腺炎为阳性的奶牛；
S2、挑选患有临床型奶牛乳腺炎的奶牛8头，将8头奶牛随机分为两组，分别为非膏剂治疗组(对照组)和外用膏剂治疗组(治疗组)；
S3、在进行给药治疗前，对实验奶牛进行尾静脉采血和无菌收集乳汁，随后送回实验室进行乳清和血清的分离，保存备用；
S4、对治疗组奶牛进行给药治疗，每天外用涂抹给药一次，共给药7天；
S5、给药治疗结束后，对实验奶牛进行尾静脉采血和无菌收集乳汁，随后送回实验室进行乳清和血清的分离，保存备用；
S6、对给药治疗前后分离得到的乳清和血清通过使用ELISA检测方法进行乳清和血清中炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平的检测，以评估乳腺炎奶牛炎症反应的变化情况。
4.根据权利要求3所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的应用方法，其特征在于：所述的乳腺炎奶牛的筛选方法为：使用CMT检测方法，筛选出的奶牛乳汁的特性为盘底沉淀物较多，比较粘稠，并有少量胶状物，倾斜测试盒时，沉淀物有明显黏附于盘底难于流动的现象，旋转测试盘时，沉淀物有向中心聚集的倾向，检测结果为乳腺炎阳性的奶牛。
5.根据权利要求4所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的应用方法，其特征在于：在检测结果为乳腺炎阳性的奶牛中，挑选出8头年龄、体重和临床症状相近的病牛，并对其进行随机分组，随后在实验的第0天和第8天进行尾静脉采血和无菌收集乳汁。
6.根据权利要求3所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的应用方法，其特征在于：所述的血液中血清的分离方法为：将采集好的血液置于4℃冰箱中，将试管呈45度角倾斜放置，待血液凝固后收集血清，随后用1000g的离心力离心10min，收集上清液备用。
7.根据权利要求3所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的应用方法，其特征在于：所述的乳汁中乳清的提取方法：将无菌采集的乳汁置于4℃冰箱中静置1h，随后使用3000g的离心力离心20min，收集上清液备用。
8.根据权利要求3所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的外用膏剂的应用方法，其特征在于：所述的炎性因子的检测方法为：将分离得到的乳清和血清进行稀释处理后，根据炎性因子ELISA试剂盒说明书进行乳清和血清中的IL-1β、IL-6以及TNF-α炎性因子表达量的检测。
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