CN113841707A - 反式法尼醇作为增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用 - Google Patents

反式法尼醇作为增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了反式法尼醇作为增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用，反式法尼醇对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂具有增效作用，与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂混合使用可以提高甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的毒力，提高甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对田间荔枝霜疫病的防治效果，显著减少甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的使用量。反式法尼醇是天然产物，已被用于食品领域，对环境友好。本发明提供了该类化合物的新用途，可在农业领域用于植物病害的防治，为荔枝霜疫病的田间防治提供了新的方法。

Description

反式法尼醇作为增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用
技术领域
本发明属于植物病害防治领域，涉及反式法尼醇作为增效剂在荔枝霜疫病防治中的应用。
背景技术
植物病原卵菌，可造成多种毁灭性植物病害，其中最重要的三种类型分别为霜霉、疫霉和腐霉。荔枝霜疫霉(Phytophthora litchii Chen ex Ko et al)，归属于假菌界卵菌门卵菌纲霜霉目霜霉科，由该病原菌引起的荔枝霜疫病是荔枝产业链中最重要的一种病害，具有流行性和爆发性，常引起大量落果和烂果，尤其5、6月份多雨时，广东省的荔枝种植可造成30～80％的损失。
防治卵菌病害，由于抗病品种缺乏，化学杀菌剂仍是防治该病害最有效的方法之一。目前我国登记用于防治荔枝霜疫病的农药制剂共65种，含21种活性成分，其中包括两种QoI类杀菌剂(Quinone outside Inhibitors,QoI-fungicides)，即嘧菌酯和吡唑醚菌酯。
法尼醇，也称金合欢醇，是一类天然产物，可从植物或者微生物中提取，该类化合物对环境友好，安全无毒。法尼醇具有调节细菌、真菌等微生物的生长增殖活动。目前已有研究表明法尼醇对杀菌剂具有增效作用，与杀菌剂混合使用可以提高杀菌剂的毒力。
发明内容
本发明的目的之一是提供反式法尼醇作为杀菌剂的增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用，其中：
所述杀菌剂为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂；
所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为嘧菌酯；
所述荔枝霜疫病是由疫霉属卵菌引起的荔枝霜疫病；
所述荔枝霜疫病是由荔枝霜疫霉引起的荔枝霜疫病。
法尼醇具有多种同分异构体，反式法尼醇的分子式为C15H26O，化学名称为(2E,6E)-3,7,11-三甲基-2,6,10-十二烷三烯-1-醇，英文名为trans,trans-Farnesol，化学结构式如下：
Figure BDA0003322091500000021
本发明发现了反式法尼醇对于甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂具有增效作用，与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂混合使用能够提高杀菌剂的毒力，可作为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的增效剂使用，可用于田间荔枝霜疫病的防治。
本发明的目的之二是提供一种防治荔枝霜疫病的组合物，所述组合物包括杀菌剂和增效剂，其中：
所述杀菌剂为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂；
所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为嘧菌酯，反式法尼醇能显著提升嘧菌酯的杀菌效果；
所述增效剂为反式法尼醇；
所述反式法尼醇和嘧菌酯的质量比为2～32：1，在此范围内，法尼醇的增效效果显著，更优选的质量比为4:1或8:1。
本发明将(2E,6E)-法尼醇，即反式法尼醇与嘧菌酯混合后，发现其对荔枝霜疫霉有很好的增效作用，抑制率大大提高，显著降低了嘧菌酯的使用剂量。
本发明的目的之三是提供一种防治荔枝霜疫病的杀菌剂制剂，所述杀菌剂制剂包括上述防治荔枝霜疫病的组合物，增效剂可以和杀菌剂以组合产品的形式，加工成水分散粒剂、可湿性粉剂、悬浮剂、乳油、微乳剂、水乳剂、微囊剂、微囊悬浮剂，在此不做特殊限制。
相比于现有技术，本发明具有如下优点：
1、反式法尼醇对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂具有增效作用，与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂混合使用可以提高杀菌剂的毒力，提高甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对田间荔枝霜疫病的防治效果，显著减少甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的使用量，为现有杀菌剂新制剂的开发应用提供了新思路。
2、反式法尼醇是天然产物，已被用于食品领域，对环境友好。本发明提供了该类化合物的新用途，可在农业领域用于植物病害的防治，为荔枝霜疫病的田间防治提供了新的方法。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
以下各实施例中涉及试剂披露如下：
供试药剂：嘧菌酯(CAS号：131860-33-8；96％，广西田园生化股份有限公司)，反式法尼醇(CAS号：106-28-5；96％，西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)，法尼醇(CAS号：4602-84-0；≥95％，西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)。
供试菌株：荔枝霜疫霉菌株来源于中国热带农业科学院环境与植物保护研究所采后病害与保鲜课题组。
供试培养基：利马豆培养基，取60g利马豆，粉碎，加水于60℃加热1h，过滤取汁，加入16g琼脂，融化均匀，再加水定容至1000mL，121℃下高压灭菌20min，备用。
实施例1
本实施例提供了反式法尼醇在荔枝霜疫病防治中的增效作用，法尼醇与嘧菌酯以组合物的形式应用于荔枝霜疫病的防治。
采用菌丝生长速率法测定法尼醇或反式法尼醇对嘧菌酯的增效作用，在无菌条件下使用溶剂丙酮溶解供试化合物，配置杀菌剂和增效剂母液1000μg mL-1备用，药剂配比如下：嘧菌酯：法尼醇(或反式法尼醇)＝1:1，2:1，4:1，8:1，16:1，32:1(取同等体积溶剂作为对照)，将药剂混入利马豆培养基中，制备成含药平板，平板凝固后接入4mm菌碟(取自黑暗，25℃条件下正常生长7天的菌落边沿)，并置于25℃，黑暗培养4d，每个处理重复3次，增效作用采用Wadley增效系数进行评判，Wadley增效系数的计算方式见公式(1)～(3)：
Figure BDA0003322091500000041
Figure BDA0003322091500000051
Figure BDA0003322091500000052
其中，A、B为单剂，a、b为相应单剂在混剂中的比例，ob为实际观察值，th为理论值，SR>1.5为增效作用，SR＝0.5～1.5为相加作用，SR<0.5为拮抗作用。
试验结果显示(见表1)，单独使用时，法尼醇与反式法尼醇均对荔枝霜疫霉活性较低，而嘧菌酯对该病原菌具有较高的活性，混配使用后，法尼醇和嘧菌酯对荔枝霜疫霉表现为相加作用，而反式法尼醇在其与嘧菌酯配比为1:32～1:2，具有明显的增效作用。
表1 嘧菌酯与法尼醇/反式法尼醇混配对荔枝霜疫霉的联合生物活性测定
杀菌剂 质量比 EC<sub>50</sub>th EC<sub>50</sub>ob R<sup>2</sup> SR
嘧菌酯A / / 0.04656 0.9042 /
法尼醇F / / 306.2 0.9555 /
反式法尼醇TTF / / 341.8 0.9240 /
A:F 1:1 0.09311 0.1319 0.9337 0.71
A:F 2:1 0.06983 0.09555 0.9873 0.73
A:F 4:1 0.05820 0.07835 0.9470 0.74
A:F 8:1 0.05238 0.07152 0.9860 0.73
A:F 16:1 0.04947 0.06780 0.9797 0.73
A:F 32:1 0.04801 0.08638 0.9795 0.56
A:TTF 1:1 0.08767 0.1023 0.9609 0.91
A:TTF 2:1 0.06576 0.01196 0.7689 5.8
A:TTF 4:1 0.05480 0.007046 0.8907 8.3
A:TTF 8:1 0.04932 0.005812 0.8618 9.0
A:TTF 16:1 0.04658 0.006874 0.9628 7.2
A:TTF 32:1 0.04521 0.006087 0.7672 7.9
实施例2
采用离体叶片法，测定反式法尼醇协同嘧菌酯对荔枝霜疫霉的增效作用，选取叶位一致、面积大小相近的幼嫩荔枝叶片，用清水洗净，晾干，浸入75％酒精消毒10s，无菌水冲洗3次，晾干备用。
使用溶剂丙酮溶解供试化合物，配置嘧菌酯和反式法尼醇母液1000μg mL-1备用，药剂配比如下：嘧菌酯：反式法尼醇＝0:1，2:1，4:1，8:1，16:1，32:1，1:0(取同等体积溶剂作为对照)，各配比药剂浓度设定为20μg mL-1，将叶片完全浸入各杀菌剂药剂中10s，使其完全充分接触药液，随后取出晾干，用直径0.2mm接种针在叶片背面叶脉处创造伤口，并接种两个菌饼，每个处理接种5片叶子，接菌后，置于25℃，相对湿度>90％的保鲜盒中培养，3d后测量病斑直径，根据公式(4)计算防治效果：
Figure BDA0003322091500000061
试验结果如表2所示，嘧菌酯与反式法尼醇按配比使用较单独使用具有显著的增效作用，各配比药液有效成分浓度为20μgmL-1时，对荔枝霜疫霉的防效均在70％以上，显著高于嘧菌酯的防效(58.94％)，反式法尼醇20μg mL-1对荔枝霜疫霉侵染荔枝离体叶片没有任何活性。
表2 离体叶片法测定嘧菌酯与反式法尼醇不同增效配比对荔枝霜疫霉的活性
杀菌剂 质量比 平均病斑直径(cm) 防效(％)
溶剂对照 / 1.49
嘧菌酯A / 0.61 58.94±6.07b
反式法尼醇TTF / 1.44 3.36±0.2c
A:TTF 2:1 0.42 71.71±5.92a
A:TTF 4:1 0.36 75.86±2.31a
A:TTF 8:1 0.34 77.00±4.21a
A:TTF 16:1 0.39 73.85±2.04a
A:TTF 32:1 0.38 74.52±4.13a
实施例3
参考《农药田间药效试验准则》开展嘧菌酯+反式法尼醇对荔枝霜疫病的田间防效试验，田间试验地点为惠州市惠东县白花镇惠东年年红果园，时间为2019年5～6月，供试品种为桂味，供试药剂为嘧菌酯：反式法尼醇＝2:1，4:1，8:1，16:1，32:1，处理剂量分别为有效成分150mg/L；以68％精甲霜·锰锌WG(处理剂量有效成分为850mg/L)和嘧菌酯(处理剂量有效成分为150mg/L)为对照药剂，另设置等量清水的处理作空白对照，每个处理设4次重复，随机区组排列，所有试验小区的栽培条件和长势一致。
于2019年05月10日(小果期)、05月21日(中果期)和06月04日(果实膨大期)各施药一次，于末次施药后14d调查果实发病情况，每小区各调查2株树，每棵树按东、西、南、北、中五点取样，每点调查30个果实，记录总果数、各级病果数，计算病情指数及平均防效。
病果分级标准：0级，无病；1级，病斑占果实表面积10％以下；3级，病斑占果实表面积11～25％；5级，病斑占果实表面积26～50％；7级，病斑占果实表面积51％以上。
并根据公式(5)～(6)计算病情指数与防治效果：
Figure BDA0003322091500000071
Figure BDA0003322091500000072
试验结果如表3所示，不同配比嘧菌酯与反式法尼醇在供试药剂浓度150mg L-1下，对田间荔枝霜疫病的防治效果均达到70％以上，显著高于嘧菌酯单剂及市售常用药剂68％精甲霜·锰锌WG的防治效果。
表3 不同配比嘧菌酯与反式法尼醇对荔枝霜疫病的田间防治效果
处理 药剂浓度(mgL<sup>-1</sup>) 病情指数 防治效果(％)
CK / 25.33±1.81e /
嘧菌酯：反式法尼醇2:1 150 6.69±0.84b 73.59
嘧菌酯：反式法尼醇4:1 150 5.36±0.41a 78.85
嘧菌酯：反式法尼醇8:1 150 4.79±0.59a 81.11
嘧菌酯：反式法尼醇16:1 150 5.88±0.61ab 76.79
嘧菌酯：反式法尼醇32:1 150 5.48±0.76ab 78.38
嘧菌酯 150 8.67±0.99c 65.79
68％精甲霜·锰锌WG 850 9.83±1.13d 61.18
因此本发明提出反式法尼醇作为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用，反式法尼醇和杀菌剂的质量比为2～32：1，更优选的质量比为4:1或8:1。甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂可为醚菌酯,嘧菌酯,烯肟菌胺,肟菌酯,烯肟菌酯,吡唑醚菌酯,苯醚菌酯等，进一步说明，所述荔枝霜疫病是由疫霉属卵菌引起的荔枝霜疫病。荔枝霜疫病是由荔枝霜疫霉引起的荔枝霜疫病。
本发明还提出一种防治荔枝霜疫病的组合物或防治荔枝霜疫病的杀菌剂制剂，包括杀菌剂和增效剂，其中：所述杀菌剂为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，增效剂为反式法尼醇，反式法尼醇和甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的质量比为2～32：1，更优选的质量比为4:1或8:1。根据本领域技术人员知晓的辅料和工艺制作成水分散粒剂、可湿性粉剂、悬浮剂、乳油、微乳剂、水乳剂、微囊剂或微囊悬浮剂。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.反式法尼醇作为杀菌剂的增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用。
2.根据权利要求1所述的反式法尼醇作为杀菌剂的增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用，其特征在于所述反式法尼醇和杀菌剂的质量比为2～32：1。
3.根据权利要求1或2所述的反式法尼醇作为杀菌剂的增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用，其特征在于所述杀菌剂为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂。
4.根据权利要求3所述的反式法尼醇作为杀菌剂的增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用，其特征在于所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为嘧菌酯。
5.根据权利要求1所述的反式法尼醇作为杀菌剂的增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用，其特征在于所述荔枝霜疫病是由疫霉属卵菌引起的荔枝霜疫病。
6.根据权利要求1所述的反式法尼醇作为杀菌剂的增效剂在防治荔枝霜疫病中的应用，其特征在于所述荔枝霜疫病是由荔枝霜疫霉引起的荔枝霜疫病。
7.一种防治荔枝霜疫病的组合物，其特征在于所述组合物包括杀菌剂和增效剂，其中：所述杀菌剂为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，增效剂为反式法尼醇，反式法尼醇和甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的质量比为2～32：1。
8.根据权利要求7所述的防治荔枝霜疫病的组合物，其特征在于所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为嘧菌酯。
9.一种防治荔枝霜疫病的杀菌剂制剂，其特征在于所述杀菌剂制剂包括权利要求7所述防治荔枝霜疫病的组合物。
10.根据权利要求9所述的防治荔枝霜疫病的杀菌剂制剂，其特征在于所述杀菌剂制剂的剂型为水分散粒剂、可湿性粉剂、悬浮剂、乳油、微乳剂、水乳剂、微囊剂、微囊悬浮剂中的一种。
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