CN113825754B - 包括甲基和三氟甲基的双取代磺酰胺类选择性bcl-2抑制剂 - Google Patents

Abstract

公开包括甲基和三氟甲基的双取代磺酰胺类选择性BCL‑2抑制剂，具体公开式I化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐、其制备方法以及包含该化合物的药物组合物。还公开该化合物以及包含该化合物的药物组合物在治疗与抗凋亡蛋白BCL‑2相关疾病例如癌症中的用途。

Description

包括甲基和三氟甲基的双取代磺酰胺类选择性BCL-2抑制剂

相关申请的引用

本申请要求于2019年05月24日向中华人民共和国国家知识产权局提交的第201910439955.X号中国专利申请的优先权和权益及于2019年09月29日向中华人民共和国国家知识产权局提交的第201910933552.0号中国专利申请的优先权，在此将其全部内容以援引的方式整体并入文本中。

技术领域

本申请涉及选择性抑制抗凋亡蛋白BCL-2的化合物、其制备方法、含有这些化合物的药物组合物、以及其在治疗与抗凋亡蛋白BCL-2相关疾病例如癌症中的用途。

背景技术

BCL-2蛋白分为三个家族：BCL-2家族(其家族成员包括BCL-2、BCL-XL等)、BAX家族和BH3-only家族，其中BCL-2家族起着抗细胞凋亡的作用，后两个家族的成员起着促细胞凋亡的作用。

抗细胞凋亡BCL-2族蛋白与许多疾病有关并且正被研究作为潜在的治疗药物目标。用于介入疗法的此类目标包括，例如，BCL-2族蛋白BCL-2和BCL-XL等。最近，BCL-2族蛋白的抑制剂已经报道于WO2012071374、WO2010138588、WO2010065865。虽然其中教导了具有对靶蛋白高结合的抑制剂，但化合物结合亲合力仅仅是许多待考虑的参数之一。一个目标是产生这样的化合物：其相对于另一种蛋白，优先地结合到一种蛋白，即对其的选择性。为显示这种选择性，周知的是化合物显示对特定的蛋白的高结合亲合力，以及对另一成员的较低的结合亲合力。

已经公开的BCL-2抑制剂，它们相对于抗细胞凋亡BCL-XL蛋白及抗细胞凋亡BCL-2蛋白选择性不高，并且由此产生较大可能性的副作用，其特征为抑制抗细胞凋亡BCL-XL蛋白，产生如血小板减少等副作用。

本申请包括一系列化合物，相对于抗细胞凋亡BCL-2蛋白及抗细胞凋亡BCL-XL蛋白，其显示出较高的选择性，且抑制抗细胞凋亡BCL-2蛋白活性方面也具有较好性能。同时，还具有较好的肝微粒体稳定性，以及优化的药代动力学参数，具有更好的成药前景。

发明详述

一方面，本申请涉及式I化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，

其中，

R¹选自C_1-6烷基；

R²选自R³或-C_1-6亚烷基-R³；

R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被一个或两个选自以下的基团取代：3-6元杂环烷基、C_3-6环烷基、-COR^a、-SO₂R^b、或任选地被卤素取代的C_1-6烷基；

R^a或R^b分别独立地选自H、3-6元杂环烷基、C_3-6环烷基、或C_1-6烷基，所述C_1-6烷基任选地被卤素、-CN、-N(C_1-6烷基)₂、-NHC_1-6烷基、或-OC_1-6烷基取代。

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在一些实施方案中，R¹选自C_1-4烷基。在一些实施方案中，R¹选自甲基、乙基、正丙基、异丙基或叔丁基。在一些实施方案中，R¹选自甲基或乙基。在一些实施方案中，R¹选自甲基。

在一些实施方案中，R²选自R³或-(CH₂)_n-R³，其中，n选自1、2、3或4；或者n选自1、2或3；或者n选自1或2。

在一些实施方案中，R²选自-(CH₂)_n-R³，n选自1或2。在一些实施方案中，R²选自-CH₂R³。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被一个或两个基团取代。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基中的杂原子选自氧、氮，其中优选杂原子数目为1个或2个。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基中的杂原子选自氧，其中优选杂原子数目为1个或2个。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基中的杂原子选自氮，其中优选杂原子数目为1个或2个。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被一个或两个基团取代，取代位点为环上的N原子。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被一个或两个选自以下的基团取代：3-6元杂环烷基、-COR^a、-SO₂R^b、或任选地被卤素取代的C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被一个或两个选自以下的基团取代：-COR^a、-SO₂R^b、或任选地被卤素取代的C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被3-6元杂环烷基取代。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被-COR^a取代。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被-SO₂R^b取代。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被C_1-6烷基取代，所述C_1-6烷基任选地被卤素取代。在一些实施方案中，所述C_1-6烷基任选地被氟取代。在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被C_1-3烷基取代，所述C_1-3烷基任选地被氟取代。在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基任选地被甲基、乙基、被氟取代的甲基、或被氟取代的乙基取代。在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基任选地被甲基、乙基、三氟甲基、或被1个或5个氟取代的乙基取代。

在一些实施方案中，R^a或R^b分别独立地选自H、3-6元杂环烷基、C_3-6环烷基、或C_1-4烷基，所述C_1-4烷基任选地被卤素、-CN、-N(C_1-4烷基)₂、-NHC_1-4烷基、或-OC_1-4烷基取代。在一些实施方案中，R^a选自H、3-6元杂环烷基、C_3-6环烷基、或C_1-4烷基，所述C_1-4烷基任选地被卤素、-CN、-N(C_1-4烷基)₂、或-OC_1-4烷基取代。在一些实施方案中，R^b选自3-6元杂环烷基、C_3-6环烷基、或C_1-4烷基，所述C_1-4烷基任选地被卤素取代。

在一些实施方案中，R^a或R^b分别独立地选自H、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、环丁基、或单氧杂环丁基，所述甲基或乙基任选地被氟、-CN、-OCH₃、或-N(CH₃)₂取代。在一些实施方案中，R^a选自H、甲基、异丙基、叔丁基、环丙基、或单氧杂环丁基，所述甲基任选地被氟、-CN、-OCH₃、或-N(CH₃)₂取代。在一些实施方案中，R^b选自甲基、乙基、环丙基、环丁基、或单氧杂环丁基，所述甲基或乙基任选的被氟取代。

在一些实施方案中，R^a或R^b分别独立地选自H、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、三氟甲基、五氟乙基、-CH₂OCH₃、-CH₂CN、或-CH₂N(CH₃)₂、环丙基、环丁基、或单氧杂环丁基。在一些实施方案中，R^a选自H、甲基、异丙基、叔丁基、三氟甲基、-CH₂OCH₃、-CH₂CN、或-CH₂N(CH₃)₂、环丙基、或单氧杂环丁基。在一些实施方案中，R^b选自甲基、乙基、三氟甲基、五氟乙基、环丙基、环丁基、或单氧杂环丁基。

在一些实施方案中，R^a或R^b分别独立地选自任选地被-OC_1-4烷基取代的C_1-4烷基。

在一些实施方案中，R^a或R^b分别独立地选自甲基、异丙基、或-CH₂OCH₃。

在一些实施方案中，R^a选自任选地被-OC_1-4烷基取代的C_1-4烷基。在一些实施方案中，R^a选自甲基、异丙基、或-CH₂OCH₃。

在一些实施方案中，R^b选自C_1-4烷基。在一些实施方案中，R^b选自甲基。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被以下基团取代：-C(O)H、-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COC(CH₃)₃、-COCF₃、-COCH₂CN、-COCH₂OCH₃、-COCH₂N(CH₃)₂、-SO₂CH₃、-SO₂CH₂CH₃、-SO₂CF₃、-SO₂C₂F₅、甲基、乙基、-CF₃、-CH₂CH₂F、-C₂F₅、四氢吡喃、单氧杂环丁烷、-SO₂-环丙烷、-CO-环丙烷、-CO-单氧杂环丁烷、-SO₂-单氧杂环丁烷、-SO₂-环丁烷。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被以下基团取代：-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COCH₂OCH₃、-SO₂CH₃、甲基、乙基、-CH₂CH₂F。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被以下基团取代：-C(O)H、-COC(CH₃)₃、-COCF₃、-COCH₂CN、-COCH₂N(CH₃)₂、-SO₂CH₂CH₃、-SO₂CF₃、-SO₂C₂F₅、-CF₃、-C₂F₅、四氢吡喃、单氧杂环丁烷、-SO₂-环丙烷、-CO-环丙烷、-CO-单氧杂环丁烷、-SO₂-单氧杂环丁烷、-SO₂-环丁烷。

在一些实施方案中，R³选自四氢吡喃、哌啶、吗啉或二氧六环，所述四氢吡喃、哌啶、吗啉或二氧六环任选地被以下基团取代：-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COCH₂OCH₃、-SO₂CH₃、甲基、乙基、或-CH₂CH₂F。

在一些实施方案中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被以下基团取代：-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COCH₂OCH₃、-SO₂CH₃。

在一些实施方案中，R³选自四氢呋喃、四氢吡喃、二氧六环或吗啉，所述吗啉任选地被以下基团取代：-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COCH₂OCH₃、-SO₂CH₃。

在一些实施方案中，R³选自四氢呋喃、四氢吡喃、二氧六环或吗啉。

在一些实施方案中，R³选自四氢吡喃或二氧六环。

在一些实施方案中，R³选自哌啶或吗啉，所述哌啶或吗啉任选地被以下基团取代：-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COCH₂OCH₃、-SO₂CH₃、甲基、乙基、或-CH₂CH₂F。

在一些实施方案中，R³选自

在一些实施方案中，R³选自

在一些实施方案中，R³选自

在一些实施方案中，R³选自

在一些实施方案中，R³选自

在一些实施方案中，R³选自

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基中的杂原子选自N或O，杂原子个数选自1或2。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基选自二氧六环基、吗啉基、四氢吡喃基、哌啶基、或四氢呋喃基。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基选自6元杂环烷基。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基选自二氧六环基、吗啉基、四氢吡喃基、或哌啶基。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基选自二氧六环基。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基选自吗啉基。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基选自四氢吡喃基。

在一些实施方案中，所述5-6元杂环烷基选自四氢呋喃。

在一些实施方案中，所述3-6元杂环烷基中杂原子选自N或O，杂原子个数选自1或2。在一些实施方案中，所述3-6元杂环烷基中杂原子选自O，杂原子个数为1或2。在一些实施方案中，所述3-6元杂环烷基选自4-6元杂环烷基。在一些实施方案中，所述3-6元杂环烷基选自4元杂环烷基或6元杂环烷基。

在一些实施方案中，所述3-6元杂环烷基选自单氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基。

在一些实施方案中，所述C_3-6环烷基选自环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基。在一些实施方案中，所述C_3-6环烷基选自C_3-4环烷基。

另一方面，本申请涉及式II化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐：

其中，R²的定义同式I化合物。

本申请涉及以下化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，

或以下化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，

其中，R独立为以下基团：

本申请涉及以下化合物或其药学上可接受的盐，

/>

/>

或以下化合物或其药学上可接受的盐：

其中，R独立为以下基团：

/>

/>

/>

另一方面，本申请涉及一种药物组合物，其包含本申请的上述式I或式II、或其立体异构体或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本申请的药物组合物还包括药学上可接受的辅料。

另一方面，本申请描述了治疗哺乳动物中与抗凋亡蛋白BCL-2相关的疾病的方法，包括对需要该治疗的哺乳动物、优选人类给予治疗有效量的式I或式II、或其立体异构体或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。

另一方面，本申请描述了本申请的式I或式II、或其立体异构体或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在制备预防或者治疗与抗凋亡蛋白BCL-2相关的疾病的药物中的用途。

另一方面，本申请描述了本申请的式I或式II、或其立体异构体或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在预防或者治疗与抗凋亡蛋白BCL-2相关的疾病的用途。

另一方面，本申请描述了用于预防或者治疗与抗凋亡蛋白BCL-2相关的疾病的本申请的式I或式II、或其立体异构体或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。

其中，所述与抗凋亡蛋白BCL-2相关的疾病选自癌症。所述癌症选自急性淋巴细胞白血病。

本申请的化合物对RS4；11细胞有较好的增殖抑制作用，具有良好的选择性；并对RS4；11人急性淋巴白血病小鼠移植瘤模型均具有显著抑制肿瘤生长的作用，且荷瘤小鼠耐受良好。

定义

除非另有说明，本申请中所用的下列术语具有下列含义。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。

术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(-CH₂CH₃)、单取代的(如-CH₂CH₂F)、多取代的(如-CHFCH₂F、-CH₂CHF₂等)或完全被取代的(-CF₂CF₃或-C₂F₅)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。

本文中的C_m-n，是该部分具有给定范围中的整数个碳原子。例如“C_1-6”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子。

术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。

术语“烷基”是指通式为C_nH_2n+1的烃基。该烷基可以是直链或支链的。例如，术语“C_1-6烷基”指含有1至6个碳原子的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、己基、2-甲基戊基等)。类似地，烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基磺酰基和烷硫基的烷基部分(即烷基)具有上述相同定义。再例如术语“C_1-4烷基”指含有1至4个碳原子的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)。

术语“亚烷基”是指烷基的任意位置除去1个氢而形成的二价基团。例如，术语“C_0-6亚烷基”或“C_1-6亚烷基”的非限制性实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、甲基亚甲基、二甲基亚甲基、1，3-亚丙基等。C₀则表示键。

术语“环烷基”指完全饱和的并且可以以呈单环、桥环或螺环存在的碳环。除非另有指示，该碳环通常为3至10元环。环烷基的非限制性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片基(双环[2.2.1]庚基)、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基等。

术语“杂环烷基”是指完全饱和的并且可以以单环、桥环或螺环存在的环状基团。除非另有指示，该杂环通常为含有1至3个独立地选自硫、氧和/或氮的杂原子(优选1或2个杂原子)的3至7元环。3元杂环烷基的实例包括但不限于环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基；4元杂环烷基的非限制性实例包括但不限于吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基；5元杂环烷基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、异噁唑烷基、噁唑烷基、异噻唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、四氢吡唑基；6元杂环烷基的实例包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、1，4-噻噁烷基、1，4-二氧六环基、硫代吗啉基、1，3-二噻烷基、1，4-二噻烷基；7元杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基。优选为具有5或6个环原子的单环杂环烷基。

术语“治疗”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：

(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；

(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；

(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。

术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。

术语“药学上可接受的”是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

作为药学上可接受的盐，例如，可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。

术语“药物组合物”是指一种或多种本申请的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本申请的化合物。

术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。

词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprisin_g应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。

本申请的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本申请的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺异构化。质子互变异构体的具体实例是咪唑部分，其中质子可在两个环氮间迁移。价互变异构体包括通过一些成键电子的重组的互变。

本申请还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本申请化合物。可结合到本申请化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、¹²³I、¹²⁵I和³⁶Cl等。

某些同位素标记的本申请化合物(例如用³H及¹⁴C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即³H)和碳-14(即¹⁴C)同位素由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如¹⁵O、¹³N、¹¹C和¹⁹F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本申请化合物。

此外，用较重同位素(诸如氘(即²H))取代可以提供某些由更高的代谢稳定性产生的治疗优点(例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求)，并且因此在某些情形下可能是优选的，其中氘取代可以是部分或完全的，部分氘取代是指至少一个氢被至少一个氘取代。

本申请化合物可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本申请的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。

本申请的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。

给予本申请化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、***内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。

本申请的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。

在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本申请的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。

药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。

本文所述的式I或式II化合物的所有施用方法中，每天给药的剂量为0.01到200mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。

本申请的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本申请的实施例。本申请具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本申请的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本申请的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。

本领域合成路线规划中的一个重要考量因素是为反应性官能团(如本申请中的羟基)选择合适的保护基，例如，可参考Greene′s Protective Groups in OrganicSynthesis(4th Ed).Hoboken，New Jersey：John Wiley&Sons，Inc.

在一些实施方案中，本申请式I或式II的化合物可以由有机合成领域技术人员通过以下路线方法来制备：

路线1：

上述路线中，R¹、R²或的定义同上，X选自离去基团，优选自氟、氯、溴或碘；R⁵选自氨基保护基，优选为Boc或Cbz(苄氧基羰基)。

具体实施方式

缩略词：DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；Boc代表叔丁氧羰基；NaOAc代表乙酸钠；tBu代表叔丁基；TBS代表叔丁基二甲基硅基。

为清楚起见，进一步用实施例来阐述本发明，但是实施例并非限制本申请的范围。本申请所使用的所有试剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。

实施例1 4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物1-b的制备

0℃条件下，向DMF(173.7g)及二氯甲烷(460mL)溶液中，滴加三氯氧磷(200mL)，滴加完毕，升温至20℃搅拌1h后，降温至0℃，滴加3，3-二甲基环己酮(1-a)(200g)，滴加完毕，加热回流过夜。搅拌条件下将反应液滴加至含有NaOAc(86.7g)、NaCl(80g)、水(1.2L)及二氯甲烷(600mL)的溶液中，室温搅拌20min，分液，水相用二氯甲烷(500mL)萃取，合并有机相，用含有K₃PO₄(40g)、NaCl(90g)的水(1L)溶液再洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物1-b(249g)。

2)化合物1-c的制备

将化合物1-b(1.69g)、1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(0.4g)、K₃PO₄(8.30g)、乙二醇二甲醚(30mL)混合搅拌10min，进一步加入2-甲基-4-三氟甲基苯硼酸(2.0g)，N₂保护，85℃反应8h，反应完全。将15mL(含有5％质量比NaHCO₃+2％质量比L-半胱氨酸)水溶液和25mL乙酸乙酯加入反应液，搅拌0.5h，过滤，分液，水相用乙酸乙酯60mL×2萃取，合并有机相，所得有机相用饱和NaCl洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，柱层析得化合物1-c(2.3g)。

3)化合物1-e的制备

将2-[(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)氧基]-4-溴苯甲酸叔丁酯(化合物1-d)(77.8g)、Boc-哌嗪(55.8g)、三(二亚苄基丙酮)二钯(9g)、[(4-(N，N-二甲氨基)苯基]二叔丁基膦(5.2g)、叔丁醇钠(96.1g)、甲苯(800mL)、四氢呋喃(300mL)混合，搅拌，氮气保护，加热至60℃反应24h。用含有L-半胱氨酸(100g)和NaHCO₃(150g)的水溶液(1.5L)洗涤反应液2次(750mL×2)，饱和NaCl洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，得化合物1-e(40g)。ESI-MS：m/z＝495.4[M+H]+.

4)化合物1-f的制备

将化合物1-e(40g)、800mL四氢呋喃、270mL乙醇及15mL水混合，搅拌，加入KOH(45.3g)固体，升温至80℃搅拌回流8h，反应完全。加入500mL水搅拌，用稀盐酸调节pH至5～6，过滤，用水(1L)打浆2次(500mL×2)，干燥得化合物1-f(35g)。

5)化合物1-g的制备

将3-硝基-4-氯苯磺酰胺(100g)、4-氨甲基四氢吡喃(58g)和N，N-二异丙基乙胺(135g)溶于乙腈(1L)中，加热至85℃，反应8h，室温冷却，静置过夜，过滤，得化合物1-g(112g)。

6)化合物1-h的制备

将化合物1-f(35g)和二氯甲烷(100mL)混合，室温搅拌，加入4-二甲氨基吡啶(38.5g)及1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(65.8g)，搅拌溶解，加入3-硝基-4-[[(四氢吡喃-4-基)甲基]氨基]苯磺酰胺(化合物1-g)(25.2g)，室温反应3h。依次用质量分数5％的盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，加二氯甲烷(200mL)室温搅拌2h，过滤，干燥，得化合物1-h(40g)。

7)化合物1-i的制备

将化合物1-h加入500mL异丙醇中搅拌，加入50mL浓HCl，升温至65℃搅拌8h，反应完全。过滤，将滤饼溶于300mL水中，滴加饱和碳酸氢钠调pH6～7，过滤，干燥，所得固体用200mL乙酸乙酯打浆，过滤烘干得化合物1-i(27g)。

8)化合物1-1的制备

将化合物1-c(2.0g)及化合物1-i(4.9g)溶于20mL甲醇中，搅拌，加入硼氢化钠(5.72g)，搅拌6h，反应完全。加入25mL饱和氯化铵水溶液淬灭，40mL乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩滤液，柱层析得化合物1-1(120mg)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.80-11.58(m，2H)，8.67-8.55(m，2H)，8.05(d，J＝2.6Hz，1H)，7.83(dd，J＝9.3，2.4Hz，1H)，7.59-7.48(m，5H)，7.16(dd，J＝24.3，8.7Hz，2H)，6.74(dd，J＝9.0，2.4Hz，1H)，6.40(dd，J＝3.3，1.9Hz，1H)，6.28(d，J＝2.4Hz，1H)，3.86(dd，J＝11.2，4.2Hz，2H)，3.62(d，J＝13.2Hz，1H)，3.38-3.19(m，7H)，2.34-2.25(m，1H)，2.23(s，1H)，2.17(s，4H)，2.08(s，1H)，1.90(t，J＝14.5Hz，4H)，1.62(dd，J＝13.1，3.6Hz，2H)，1.56-1.40(m，J＝6.4Hz，3H)，1.33-1.20(m，3H)，0.97(d，J＝3.1Hz，6H).

¹³C NMR(126MHz，DMSO)δ163.97，158.95，158.66，158.21，154.01，147.90，146.83，145.91，145.28，140.86，136.63，135.62，134.30，132.57，130.06，129.46，128.33，127.26，124.77，123.25，122.73，120.32，118.43，115.56，114.17，109.71，103.48，100.44，67.08，58.52，48.41，45.88，44.35，44.30，34.69，34.32，30.62，29.05，29.01，27.49，24.69，19.09.

ESI-MS：m/z＝916.4[M+H]⁺.

实施例2 (R)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(1，4-二恶烷-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物2-d的制备

将化合物1-c(103g)、1-Boc-哌嗪(73.28g)溶于乙腈(1000mL)中，搅拌，降温至0℃，缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(227g)，室温搅拌5h。反应完全，加水(1L)和乙酸乙酯(300mL)萃取，收集有机相，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，得化合物2-d(150g)。

2)化合物2-e的制备

将化合物2-d(150g)、异丙醇(830mL)、盐酸(浓度36～38％，125mL)混合，加热至65℃，反应3h。冷却析出固体，过滤，干燥，得化合物2-e(80g)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.70(1H，brs)，7.64(1H，s)，7.55(1H，d，J＝8.0Hz)，7.27(1H，d，J＝8.0Hz)，3.53～3.40(8H，m)，3.14～3.03(2H，m)，2.79～2.65(2H，m)，2.20(3H，s)，1.99(1H，d，J＝18.0Hz)，1.88(1H，d，J＝18.0Hz)，1.50(2H，m)，0.99(3H，s)，0.98(3H，s)

ESI-MS：m/z＝367.4[M+H]+。

3)化合物2-g的制备

将NaH(21.1g)溶于THF(100mL)中降温至-20℃搅拌10min，将2-[(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)氧基]-4-溴苯甲酸叔丁酯(化合物1-d，128.3g)溶于200mL THF中，缓慢滴加至反应液中，滴加过程中控制内温0℃以下，滴加完毕后搅拌30min，向反应液中滴加TBSCl(64.7g)的THF(200mL)溶液，滴加过程中控制内温-10℃左右，滴毕反应30min，反应完全后，加入500mL饱和碳酸氢钠，并用乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，过柱得化合物2-f(150g)。ESI-MS：m/z＝503.1[M+H]⁺。

将化合物2-e(80g)、2-[(1-叔丁基二甲基硅基吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)氧基]-4-溴苯甲酸叔丁酯(化合物2-f，109.7g)、三(二亚苄基丙酮)二钯(2.7g)、[(4-(N，N-二甲氨基)苯基]二叔丁基膦(1.6g)、叔丁醇钠(187.4g)、甲苯(800mL)混合，搅拌，氮气保护，加热至100℃反应24h。反应结束，加水(1L)和乙酸乙酯(300mL)萃取，收集有机相，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，得化合物2-g(182.6g)。

ESI-MS：m/z＝789.6[M+H]⁺。

4)化合物2-h的制备

将化合物2-g(182.6g)、甲苯(1.8L)、三氟乙酸(107mL)的混合物加热至45℃，反应5h。浓缩反应液，加乙酸乙酯1.5L，饱和NaHCO3水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，加1L甲苯和200mL乙酸乙酯，加热溶清后，降温析出固体，过滤，干燥，得化合物2-h(75.2g)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)，δH：12.2(brs，1H)，11.64(s，1H)，7.97(d，J＝2.45Hz，1H)，7.74(d，J＝9.0Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.46(m，2H)，7.38(d，J＝2.2Hz，1H)，7.09(d，J＝8.0Hz，1H)，6.71(dd，J＝9.3，1.9Hz，1H)，6.35(m，1H)，6.33(d，J＝1.5Hz，1H)，3.10(brs，4H)，2.24(m，3H)，2.16(s，3H)，2.08(m，2H)，1.83(m，2H)，1.42(t，2H)，0.94(s，6H)，0.83(s，3H).

ESI-MS：m/z＝619.5[M+H]⁺。

5)化合物2-k的制备

将3-硝基-4-氯苯磺酰胺(0.64g)、(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐(0.5g)和N，N-二异丙基乙胺(1.58g)溶于乙腈(10mL)中，加热至85℃，反应6.5h，室温冷却，静置过夜，过滤，得化合物2-k(0.65g)。

ESI-MS：m/z＝316.2[M-H]^-.

6)化合物2-1的制备

将化合物2-h(0.3g)和二氯甲烷(5mL)混合，室温搅拌，加入4-二甲氨基吡啶(0.05g)及1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(0.07g)，搅拌溶解，加入化合物2-k(0.15g)和三乙胺(0.12g)，室温反应3h。依次用质量分数5％盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，经柱层析分离纯化得化合物2-1(0.12g)。

¹HNMR(500MHz，DMSO-d6)δH：11.73(s，2H)，8.61(1H，brs)，8.57(1H，brs)，8.05(1H，s)，7.82(1H，d，J＝9.0)，7.59(1H，s)，7.49～7.55(4H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0)，7.12(1H，d，J＝9.5)，6.73(1H，d，J＝9.0)，6.40(1H，s)，6.28(1H，s)，3.61～3.81(8H，m)，3.19～3.51(7H，m)，3.02(3H，m)，2.61(1H，m)，2.30(1H，m)，2.16(4H，s)，1.87～1.93(2H，m)，1.49(2H，s)，0.96(6H，s).

ESI-MS：m/z＝918.8[M+H]⁺.

实施例3 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(1，4-二噁烷-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物3-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-2-(氨甲基)-1，4-二氧六环盐酸盐替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物3-k(4.70)。ESI-MS：m/z＝316.1[M-H]^-.

2)化合物3-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物3-k，得到化合物3-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)，δH：11.72(s，1H)，11.68(m，1H)，8.60(t，J＝5.4Hz，1H)，8.57(d，J＝2.3Hz，1H)，8.04(d，J＝2.6Hz，1H)，7.83(dd，J＝9.2，2.0Hz，1H)，7.58(brs，1H)，7.54(d，J＝2.5Hz，1H)，7.51(m，3H)，7.17(d，J＝8.0Hz，1H)，7.11(d，J＝9.4Hz，1H)，6.73(dd，J＝9.0，2.0Hz，1H)，6.40(m，1H)，6.27(d，J＝1.9Hz，1H)，3.79(m，4H)，3.64(m，4H)，3.49(m，2H)，3.41(m，1H)，3.29(m，4H)，3.02(brs，2H)，2.91(brs，1H)，2.64(m，1H)，2.29(m，1H)，2.18(m，1H)，2.16(s，3H)，1.91(m，2H)，1.49(m，2H)，0.97(s，3H)，0.96(s，3H).

ESI-MS：m/z＝918.8[M+H]⁺.

实施例4 4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(S)-(4-甲氧乙酰基吗啉-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

/>

1)化合物4-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-2-(氨甲基)-4-甲氧乙酰基吗啉盐酸盐替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物4-k(0.39g)。ESI-MS：m/z＝387.1[M-H]^-。

2)化合物4-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物4-k，得到化合物4-1。

ESI-MS：m/z＝989.7[M+H]⁺.

实施例5 4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氢-2H-吡喃-2-基甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物5-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以2-氨甲基四氢吡喃替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物5-k(1.92g)。ESI-MS：m/z＝316.0[M+H]⁺.

2)化合物5-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物5-k，得到化合物5-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)，δH：11.74(s，2H)，8.64(t，J＝5.1Hz，1H)，8.56(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(d，J＝2.5Hz，1H)，7.81(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.55(d，J＝2.2Hz，1H)，7.51(m，3H)，7.17(d，J＝7.9Hz，1H)，7.11(d，J＝9.4Hz，1H)，6.73(d，J＝8.8Hz，1H)，6.40(m，1H)，6.27(s，1H)3.92(d，J＝10.9Hz，1H)，3.75(m，1H)，3.67(m，1H)，3.58(m，2H)，3.48(m，1H)，3.32(m，5H)，3.01(m，2H)，2.90(brs，1H)，2.61(m，1H)，2.29(m，1H)，2.16(s，3H)，1.91(m，2H)，2.08(s，1H)，1.80(m，1H)1.64(d，J＝12.4Hz，1H)，1.48(m，5H)，1.28(m，1H)，0.96(s，6H).

ESI-MS：m/z＝916.7[M+H]⁺.

实施例6 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氢呋喃-3-基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物6-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-3-氨基四氢呋喃盐酸盐替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物6-k(1.72g)。

2)化合物6-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物6-k，得到化合物6-1。

1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δH：11.79(1H，s)，11.74(1H，s)，8.56(1H，brs)，8.32(1H，d，J＝6.0)，8.03(1H，s)，7.85(1H，d，J＝9.0)，7.59(1H，s)，7.50～7.53(4H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0)，7.12(1H，d，J＝9.0)，6.73(1H，d，J＝8.5)，6.39(1H，s)，6.29(1H，s)，3.86～3.94(3H，m)，3.45～3.79(5H，m)，3.24(3H，m)，3.02(3H，m)，2.61(1H，m)，2.33(2H，m)，2.16(4H，s)，1.87～1.99(3H，m)，1.35(2H，s)，0.96(6H，s).

ESI-MS：m/z＝888.6[M+H]⁺.

实施例7 (R)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氢呋喃-3-基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物7-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(R)-3-氨基四氢呋喃盐酸盐替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物7-k(1.65g)。

2)化合物7-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物7-k，得到化合物7-1。

1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δH：11.79(1H，s)，11.74(1H，s)，8.57(1H，brs)，8.32(1H，d，J＝5.0)，8.03(1H，s)，7.85(1H，d，J＝9.0)，7.59(1H，s)，7.50～7.52(4H，m)，7.17(1H，d，J＝7.0)，7.12(1H，d，J＝8.5)，6.74(1H，d，J＝8.5)，6.39(1H，s)，6.29(1H，s)，3.48～3.93(8H，m)，3.24(3H，m)，3.02(3H，m)，2.61(1H，m)，2.33(2H，m)，2.16(4H，s)，1.91～1.96(3H，m)，1.50(2H，s)，0.96(6H，s).

ESI-MS：m/z＝888.6[M+H]⁺.

实施例8 4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物8-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以四氢呋喃-3-甲胺替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物8-k(1.20g)

2)化合物8-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物8-k，得到化合物8-1。

¹HNMR(500MHz，DMSO-d6)δH：11.74(2H，m)，8.67(1H，brs)，8.57(1H，brs)，8.05(1H，s)，7.79(1H，d，J＝9.0)，7.40～7.64(5H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0)，7.11(1H，d，J＝9.5)，6.73(1H，d，J＝9.0)，6.40(1H，s)，6.27(1H，s)，3.50～3.79(7H，m)，3.19～3.38(5H，m)，2.92(3H，m)，2.58(2H，m)，2.30(1H，m)，2.16(4H，s)，1.93(3H，m)，1.64(1H，m)，1.50(2H，s)，0.97(6H，s).

ESI-MS：m/z＝902.7[M+H]⁺.

实施例9 (R)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物9-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(3R)-四氢呋喃-3-甲胺替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物9-k(1.10g)

2)化合物9-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物9-k，得到化合物9-1。

¹HNMR(500MHz，DMSO-d6)δH：11.74(2H，m)，8.68(1H，brs)，8.57(1H，brs)，8.05(1H，s)，7.81(1H，d，J＝9.0)，7.49～7.59(5H，m)，7.17(1H，d，J＝7.5)，7.11(1H，d，J＝9.5)，6.73(1H，d，J＝8.5)，6.40(1H，s)，6.27(1H，s)，3.61～3.79(6H，m)，3.51(1H，m)，3.09～3.26(5H，m)，2.91(3H，m)，2.58(2H，m)，2.29(1H，m)，2.16(4H，s)，1.93(3H，m)，1.64(1H，m)，1.49(2H，s)，0.96(6H，s).

ESI-MS：m/z＝902.7[M+H]⁺.

实施例10 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[((四氢呋喃-3-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物10-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(3S)-四氢呋喃-3-甲胺(0.64g)替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物10-k(1.39g)。

2)化合物10-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物10-k，得到化合物10-1。

¹HNMR(500MHz，DMSO-d6)δH：11.75(2H，s)，8.68(1H，brs)，8.57(1H，brs)，8.05(1H，s)，7.81(1H，d，J＝9.0)，7.50～7.59(5H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0)，7.12(1H，d，J＝9.5)，6.73(1H，d，J＝9.0)，6.40(1H，s)，6.27(1H，s)，3.50～3.82(7H，m)，3.23～3.38(5H，m)，2.92(3H，m)，2.58(2H，m)，2.30(1H，m)，2.16(4H，s)，1.93(3H，m)，1.64(1H，m)，1.49(2H，s)，0.96(6H，s).

ESI-MS：m/z＝902.7[M+H]⁺.

实施例11 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物11-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-2-四氢糠胺替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物11-k(1.35g)。

2)化合物11-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物11-k，得到化合物11-1。

1H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.74(2H，s)，8.63(1H，m)，8.57(1H，s)，8.05(1H，s)，7.81(1H，d，J＝9.0Hz)，7.59(1H，s)，7.55～7.50(4H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0Hz)，7.14(1H，d，J＝9.0Hz)，6.74(1H，d，J＝9.0Hz)，6.40(1H，s)，6.28(1H，s)，4.10(1H，m)，3.82～3.61(5H，m)，3.54(1H，m)，3.41～3.24(4H，m)，3.00～2.87(3H，m)，2.61(1H，m)，2.28(1H，m)，2.16(4H，m)，2.03～1.84(4H，m)，1.62(1H，m)，1.49(2H，m)，1.23(1H，m)，0.96(6H，s)

ESI-MS：m/z＝902.7[M+H]⁺.

实施例12 (R)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物12-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(R)-2-四氢糠胺替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物12-k(1.38g)。

2)化合物12-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物12-k，得到化合物12-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.74(2H，s)，8.63(1H，m)，8.56(1H，m)，8.04(1H，m)，7.81(1H，d，J＝9.0Hz)，7.59(1H，s)，7.54～7.50(4H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0Hz)，7.14(1H，d，J＝9.0Hz)，6.73(1H，d，J＝9.0Hz)，6.40(1H，s)，6.28(1H，s)，3.85～3.52(7H，m)，3.41～3.23(4H，m)，3.00～2.91(3H，m)，2.61(1H，m)，2.28(1H，m)，2.16(4H，m)，2.08(1H，m)，2.01～1.84(3H，m)，1.63(1H，m)，1.49(2H，m)，1.23(1H，m)，0.96(6H，s).

ESI-MS：m/z＝902.7[M+H]⁺.

实施例13 4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物13-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以4-氨基四氢吡喃替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物13-k(1.70g)。

2)化合物13-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物13-k，得到化合物13-1。

¹HNMR(500MHz，DMSO-d6)δH：11.74(2H，s)，8.57(1H，brs)，8.26(1H，d，J＝7.0)，8.04(1H，s)，7.82(1H，d，J＝9.0)，7.59(1H，s)，7.49～7.54(4H，m)，7.20(1H，d，J＝9.5)，7.17(1H，d，J＝8.0)，6.73(1H，d，J＝8.5)，6.40(1H，s)，6.27(1H，s)，3.88(3H，m)，3.45～3.74(5H，m)，3.23(3H，m)，3.02(3H，m)，2.61(1H，m)，2.30(1H，m)，2.16(4H，s)，1.75～1.96(4H，m)，1.61(2H，m)，1.49(2H，s)，0.96(6H，s).

ESI-MS：m/z＝902.7[M+H]⁺.

实施例14 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氢吡喃-3-基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物14-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-3-氨基四氢吡喃盐酸盐替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物14-k(1.08g)。

2)化合物14-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物14-k，得到化合物14-1。

¹HNMR(500MHz，DMSO-d6)δH：11.74(2H，s)，8.58(1H，brs)，8.53(1H，d，J＝7.5)，8.05(1H，s)，7.83(1H，d，J＝9.5)，7.49～7.59(5H，m)，7.17(1H，d，J＝8.5)，6.73(1H，d，J＝8.5)，6.40(1H，s)，6.26(1H，s)，3.77～3.86(3H，m)，3.55～3.63(2H，m)，2.90～3.24(7H，m)，2.59(1H，m)，2.26(1H，m)，2.16(3H，s)，2.08(3H，s)，1.86～1.96(3H，m)，1.75(2H，m)，1.53(3H，m)，0.96(6H，s).

ESI-MS：m/z＝902.7[M+H]⁺.

实施例15 (R)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[((四氢吡喃-3-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物15-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(R)-3-氨甲基四氢吡喃盐酸盐替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物15-k(0.36g)。

2)化合物15-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物15-k，得到化合物15-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.75(2H，s)，8.61(1H，m)，8.57(1H，s)，8.05(1H，s)，7.81(1H，d，J＝9.0Hz)，7.59(1H，s)，7.55～7.49(4H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0Hz)，7.10(1H，d，J＝9.0Hz)，6.73(1H，d，J＝9.0Hz)，6.40(1H，s)，6.27(1H，s)，3.87～3.60(5H，m)，3.52～3.16(7H，m)，3.01～2.91(2H，m)，2.62(1H，m)，2.28(1H，m)，2.16(3H，s)，2.13(1H，m)，2.03～1.81(4H，m)，1.61(1H，m)，1.49(3H，m)，1.33～1.24(2H，m)，0.96(6H，s)

ESI-MS：m/z＝916.7[M+H]⁺.

实施例16 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[((四氢吡喃-3-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物16-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-3-氨甲基四氢吡喃盐酸盐替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物16-k(0.39g)。

2)化合物16-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物16-k，得到化合物16-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.75～11.72(2H，s)，8.62(1H，m)，8.57(1H，s)，8.05(1H，m)，7.81(1H，d，J＝9.0Hz)，7.59(1H，s)，7.55～7.49(4H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0Hz)，7.10(1H，d，J＝9.0Hz)，6.73(1H，d，J＝9.0Hz)，6.40(1H，s)，6.27(1H，s)，3.80～3.60(4H，m)，3.37～3.16(6H，m)，3.01～2.91(2H，m)，2.61(1H，m)，2.28(1H，m)，2.16(4H，m)，2.03～1.81(4H，m)，1.61(1H，m)，1.49～1.46(3H，m)，1.35～1.23(4H，m)，0.96(6H，s)

ESI-MS：m/z＝916.7[M+H]⁺.

实施例17 4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(2-(四氢吡喃-3-基)乙基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物17-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以2-(四氢-2H-吡喃-3-基)乙胺替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物17-k(1.06g)。

2)化合物17-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物17-k，得到化合物17-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.75～11.73(2H，s)，8.59～8.56(2H，m)，8.04(1H，s)，7.81(1H，d，J＝9.0Hz)，7.59(1H，s)，7.55～7.49(4H，m)，7.17(1H，d，J＝8.0Hz)，7.07(1H，d，J＝9.0Hz)，6.73(1H，d，J＝9.0Hz)，6.40(1H，s)，6.30(1H，s)，3.85～3.60(4H，m)，3.40～3.23(6H，m)，3.04～2.91(4H，m)，2.61(1H，m)，2.28(1H，m)，2.16(3H，s)，2.13(1H，m)，1.96～1.84(3H，m)，1.60～1.38(7H，m)，1.23～1.09(2H，m)，0.96(6H，s)

ESI-MS：m/z＝930.7[M+H]⁺.

实施例18 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(4-乙酰基吗啉-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物18-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-2-氨甲基-4-乙酰基吗啉替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物18-k(0.89g)。ESI-MS：m/z＝359.0[M+H]⁺.

2)化合物18-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物18-k，得到化合物18-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.72(2H，s)，8.64(1H，m)8.57(1H，t，J＝3.0Hz)，8.04(1H，d，J＝3.0Hz)，7.84(1H，m)，7.59(1H，s)，7.55(1H，d，J＝2.5Hz)，7.53～7.52(2H，m)，7.50(1H，d，J＝8.0Hz)，7.18～7.24(2H，m)，6.73(1H，dd，J＝9.0，2.0Hz)，6.40(1H，dd，J＝3.0，2.0Hz)，6.28(1H，d，J＝2.0Hz)，4.32(1H，d，J＝13.0Hz)，4.14(1H，d，J＝13.0Hz)，3.91～3.84(2H，m)，3.73～3.60(6H，m)，3.52～3.36(3H，m)，3.26～2.99(2H，m)，3.01(1H，m)，2.92(1H，m)，2.71(1H，m)，2.55(1H，m)，2.51(3H，m)，2.29(1H，m)，2.16(3H，m)，2.13(1H，m)，1.92(2H，m)，1.50(2H，m)，0.97(3H，s)，0.96(3H，s)

ESI-MS：m/z＝959.7[M+H]⁺.

实施例19 (R)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[((4-乙酰基吗啉-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物19-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(R)-2-氨甲基-4-乙酰基吗啉替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物19-k(0.89g)。ESI-MS：m/z＝359.0[M+H]⁺.

2)化合物19-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物19-k，得到化合物19-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.72(2H，s)，8.64(1H，m)8.57(1H，t，J＝3.0Hz)，8.04(1H，d，J＝3.0Hz)，7.84(1H，m)，7.59(1H，s)，7.55(1H，d，J＝2.5Hz)，7.53～7.52(2H，m)，7.50(1H，d，J＝8.0Hz)，7.18～7.24(2H，m)，6.73(1H，dd，J＝9.0，2.0Hz)，6.40(1H，dd，J＝3.0，2.0Hz)，6.28(1H，d，J＝2.0Hz)，4.32(1H，d，J＝13.0Hz)，4.14(1H，d，J＝13.0Hz)，3.91～3.84(2H，m)，3.73～3.60(6H，m)，3.52～3.36(3H，m)，3.26～2.99(2H，m)，3.01(1H，m)，2.92(1H，m)，2.71(1H，m)，2.55(1H，m)，2.51(3H，m)，2.29(1H，m)，2.16(3H，m)，2.13(1H，m)，1.92(2H，m)，1.50(2H，m)，0.97(3H，s)，0.96(3H，s)

ESI-MS：m/z＝959.7[M+H]⁺.

实施例20 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(4-异丁酰基吗啉-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物20-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-2-氨甲基-4-异丁酰基吗啉替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物20-k(0.82g)。ESI-MS：m/z＝387.0[M+H]⁺.

2)化合物20-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物20-k，得到化合物20-1。

1H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.71～11.65(2H，s)，8.65(1H，t，J＝5.0Hz)，8.57(1H，s)，8.04(1H，d，J＝2.5Hz)，7.83(1H，m)，7.58(1H，s)，7.55～7.49(4H，m)，7.17(2H，m)，6.73(1H，dd，J＝9.0，2.0Hz)，6.39(1H，dd，J＝3.0，2.0Hz)，6.27(1H，s)，4.35(1H，d，J＝13.0Hz)，4.18(1H，d，J＝13.0Hz)，3.99(1H，d，J＝13.0Hz)，3.81(1H，m)，3.74(1H，m)，3.62～3.60(4H，m)，3.47(1H，m)，3.26～3.16(4H，m)，3.02(2H，m)，2.87(2H，m)，2.68(1H，m)，2.56(1H，m)，2.29(1H，m)，2.18(1H，m)，2.16(3H，m)，1.92(2H，m)，1.50(2H，m)，1.01～0.96(12H，m)

ESI-MS：m/z＝987.8[M+H]⁺.

实施例21 (R)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(4-异丁酰基吗啉-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物21-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(R)-2-氨甲基-4-异丁酰基吗啉替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物21-k(0.87g)。ESI-MS：m/z＝387.0[M+H]⁺.

2)化合物21-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物21-k，得到化合物21-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)，δH：11.74(brs，2H)，8.67(brs，1H)，8.57(s，1H)，8.05(s，1H)，7.83(m，1H)，7.59(s，1H)，7.52(m，4H)，7.16(m，2H)，6.73(d，J＝8.5Hz，1H)，6.40(s，1H)，6.27(s，1H)，3.90(d，J＝10.7Hz，1H)，3.79(m，2H)，3.63(m，4H)，3.47(m，2H)，3.38(m，1H)，3.27(m，3H)，3.16(m，1H)，3.02(m，2H)，2.87(m，2H)，2.60(m，2H)，2.30(m，1H)，2.16(s，3H)，2.13(m，1H)，1.91(m，2H)，1.49(brs，2H)，0.99(m，6H)，0.96(m，6H).

ESI-MS：m/z＝987.8[M+H]⁺.

实施例22 (S)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(4-(甲磺酰基)吗啉-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物22-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(S)-2-氨甲基-4-(甲磺酰基)吗啉替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物22-k(0.68g)。ESI-MS：m/z＝395.0[M+H]⁺.

2)化合物22-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物22-k，得到化合物22-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)11.71(2H，s)，8.64(1H，t，J＝6.0Hz)，8.57(1H，d，J＝8.5Hz)，8.05(1H，d，J＝3.0Hz)，7.83(1H，dd，J＝9.0，2.0Hz)，7.58(1H，s)，7.55(1H，d，J＝2.5Hz)，7.54～7.49(3H，m)，7.18(1H，s)，7.16(1H，d，J＝2.0Hz)，6.73(1H，dd，J＝9.0，2.0Hz)，6.40(1H，dd，J＝3.0，2.0Hz)，6.27(1H，d，J＝2.0Hz)，4.85(2H，m)，3.98(1H，d，J＝11.0Hz)，3.80～3.74(2H，m)，3.67～3.55(5H，m)，3.49(1H，m)，3.56(1H，d，J＝11.0Hz)，3.31～3.19(3H，m)，3.02(2H，m)，2.92(3H，s)，2.85(1H，m)，2.67(1H，m)，2.28(1H，m)，2.18(1H，m)，2.16(3H，m)，1.92(2H，m)，1.50(2H，m)，0.97(3H，s)，0.96(3H，s)

ESI-MS：m/z＝995.8[M+H]⁺.

实施例23 (R)-4-(4-{[2-(2-甲基-4-三氟甲基苯基)-4，4-二甲基环己-1-烯基]甲基}-哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(4-(甲磺酰基)吗啉-2-基)甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基氧基)-苯甲酰胺

1)化合物23-k的制备

参照实施例2步骤5)化合物2-k的制备方法，以(R)-2-氨甲基-4-(甲磺酰基)吗啉替换(R)-(1，4-二恶烷)-2-甲胺盐酸盐，得化合物23-k(0.65g)。ESI-MS：m/z＝395.0[M+H]⁺.

2)化合物23-1的制备

参考实施例2步骤6)中化合物2-1的制备方法，将其中的化合物2-k换成化合物23-k，得到化合物23-1。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)，δH：11.74(s，2H)，8.66(t，J＝5.4Hz，1H)，8.57(d，J＝1.8Hz，1H)，8.04(d，J＝2.2Hz，1H)，7.84(d，J＝9.1Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.55(d，J＝2.0Hz，1H)，7.51(m，3H)，7.17(d，J＝8.8Hz，2H)，6.73(d，J＝8.7Hz，1H)，6.40(s，1H)，6.27(s，1H)，3.98(d，1H)，3.78(m，2H)，3.65(m，3H)，3.57(m，3H)，3.49(m，1H)，3.35(m，1H)，3.26(m，3H)，3.00(m，2H)，2.93(s，3H)，2.85(m，1H)，2.61(m，1H)，2.69(t，J＝10.9Hz，1H)，2.28(m，1H)，2.18(m，1H)，2.16(s，3H)，1.91(m，2H)，1.49(m，2H)，0.96(s，3H).

ESI-MS：m/z＝995.8[M+H]⁺.

参照实施例1的制备过程，采用下方表格中的片段为起始原料，制备以下化合物：

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试验例1本发明的化合物对人急性淋巴细胞白血病细胞RS4；11细胞的增殖抑制作用

取处于指数生长期状态良好的RS4；11细胞(来源于ATCC)，收集细胞至离心管，低速台式离心机，1500转/min，离心3min，弃上清，用移液器加入5mL完全培养基(RPMI基础培养基+10％FBS)进行细胞重悬。使用细胞计数仪计数，完全培养基进行稀释，调整细胞密度至2×10⁵个/mL，在加入等量的RPMI基础培养基调整血清浓度为5％，细胞密度为1×10⁵个/mL种板。使用排枪接种于96孔板上，100μL/孔，置于37℃、含5％CO₂饱和湿度的细胞培养箱中培养。培养24h后，使用纳升加样仪进行化合物加样，每一浓度设置2个复孔，以不加化合物的细胞作为阴性对照，72小时后加CCK-8，10μL/孔，4小时后Envision酶标仪450nm处检测其吸光值，计算抑制率，抑制率(％)＝(阴性对照组平均值-实验组平均值)/(阴性对照组平均值-空白组平均值)×100％，以化合物浓度对数为横坐标，抑制率为纵坐标，四参数分析，拟合量效曲线，计算IC₅₀(见表1)。

表1本发明的化合物对RS4；11细胞的增殖抑制作用

试验例2体外蛋白结合抑制活性

2.1 BCL-2/BAK结合抑制活性筛选

用试剂盒(名称：BCL-2/BAK(BH3)BINDING ASSAY KITS，货号：63ADK000CB01PEG，来源于cisbio)中的稀释缓冲液将500nM的Tag1-BCL-2蛋白母液稀释成5nM，同时将20μM的Tag2-BAK蛋白母液稀释成120nM，先每孔加入5μL的Tag1-BCL-2蛋白稀释液，然后用纳升加样仪将DMSO溶解的受试化合物加入到孔中，使化合物终浓度为200nM-0.0488nM，4倍梯度，共7个浓度，同时设空白对照孔(不含酶)与阴性对照孔(含酶，加溶媒DMSO)，设2个复孔，最后再每孔加入5μL的Tag2-BAK蛋白稀释液，离心混匀，25℃孵育15min。用试剂盒中的检测缓冲液将100×的anti-Tag1-Eu³⁺稀释成1×的使用浓度，同时将100×的anti-Tag2-XL665稀释成1×的使用浓度。将anti-Tag1-Eu³⁺和anti-Tag2-XL665按1∶1混匀，每孔加入5μL的混合液，25℃反应2h及以上。PE Envision多功能酶标仪进行读板(激发620nm，发射665nm)，采用四参数拟合，计算IC₅₀(结果如表2所示)。

2.2 BCL-XL/BAK结合抑制活性筛选

用试剂盒(名称：BCL-XL/BAK(BH3)BINDING ASSAY KITS，货号：63ADK000CB04PEG，来源于cisbio)中的稀释缓冲液将300nM的Tag1-BCL-XL蛋白母液稀释成2nM，同时将10μM的Tag2-BAK蛋白母液稀释成80nM，先每孔加入5μL的Tag1-BCL-XL蛋白稀释液，然后用纳升加样仪将DMSO溶解的不同受试化合物加入到孔中，使化合物终浓度为2000nM-0.488nM，4倍梯度，共7个浓度，同时设空白对照孔(不含酶)与阴性对照孔(含酶，加溶媒DMSO)，设2个复孔，最后再每孔加入5μL的Tag2-BAK蛋白稀释液，离心混匀，25℃孵育15min。用试剂盒中的检测缓冲液将100×的anti-Tag1-Eu³⁺稀释成1×的使用浓度，同时将100×的anti-Tag2-XL665稀释成1×的使用浓度。将anti-Tag1-Eu³⁺和anti-Tag2-XL665按1∶1混匀，每孔加入5μL的混合液，25℃反应2h及以上。PE Envision多功能酶标仪进行读板(激发620nm，发射665nm)，采用四参数拟合，计算IC₅₀(结果如表2所示)。

表2化合物抑制BCL-2/BAK和BCL-XL/BAK结合活性

试验例3受试物在RS4；11人急性淋巴白血病小鼠皮下移植瘤模型中的药效学评价

SPF级雌性NOD/SCID小鼠(上海灵畅生物科技有限公司)右侧腋窝皮下接种1×10⁷个RS4；11细胞(ATCC)。待肿瘤平均体积达180mm³左右时，根据肿瘤大小分为Vehicle(溶媒)、化合物1-1(25mg/kg)和化合物3-1(25mg/kg)这3个组。分组当天为d0天。d1天单次灌胃给药，给药体积为10mL/kg，后停药观察。

肿瘤体积计算公式：肿瘤体积(mm³)＝1/2×(a×b²)(其中a表示长径，b表示短径)。

相对肿瘤增殖率，T/C％，即在某一时间点，治疗组和对照组相对肿瘤体积或瘤重的百分比值。计算公式如下：T/C％＝T_RTV/C_RTV×100％(T_RTV：治疗组平均RTV；C_RTV：溶媒对照组平均RTV；相对肿瘤体积RTV＝TV_t/TV₀，TV₀为分组时该动物的瘤体积，TV_t为治疗后该动物的瘤体积)。

相对肿瘤抑制率，TGI(％)，计算公式如下：TGI％＝(1-T/C)×100％。(T和C分别为治疗组和对照组在某一特定时间点的相对肿瘤体积(RTV)或瘤重(TW))。

体重变化率(weight change rate，WCR)(％)，计算公式为：WCR＝(Wt_t-Wt₀)/Wt₀×100％，Wt₀为分组时(即d0天)动物体重，Wt_t为每一次测量时的动物体重。

所有实验结果以mean±SD(平均值±标准差)表示。用T检验比较治疗组相对肿瘤体积与对照组相比有无显著性差异，p＜0.05为具有显著性差异，p＜0.01为具有极显著性差异。

结果见表3。

表3对人急性淋巴白血病RS4；11皮下移植瘤的影响

注：与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。

Claims (23)

1.式II化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，

其中，

R²选自-C_1-6亚烷基-R³；

R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被一个或两个选自以下的基团取代：-COR^a、-SO₂R^b、或任选地被卤素取代的C_1-6烷基；所述5-6元杂环烷基中的杂原子选自S、N或O，杂原子个数选自1或2；

R^a或R^b分别独立地选自H、或C_1-6烷基，所述C_1-6烷基任选地被卤素、-CN、-N(C_1-6烷基)₂、-NHC_1-6烷基、或-OC_1-6烷基取代。

2.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R²选自-(CH₂)_n-R³，其中，

n选自1、2、3或4。

3.如权利要求2所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，n选自1、2或3。

4.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被一个或两个基团取代，取代位点为环上的N原子。

5.如权利要求4所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被一个或两个选自以下的基团取代：-COR^a、-SO₂R^b、或任选地被卤素取代的C_1-4烷基。

6.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R^a或R^b分别独立地选自H、或C_1-4烷基，所述C_1-4烷基任选地被卤素、-CN、-N(C_1-4烷基)₂、-NHC_1-4烷基、或-OC_1-4烷基取代。

7.如权利要求6所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R^a或R^b分别独立地选自H、甲基、乙基、异丙基、或叔丁基，所述甲基或乙基任选地被氟、-CN、-OCH₃、或-N(CH₃)₂取代。

8.如权利要求6所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R^a或R^b分别独立地选自H、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、三氟甲基、五氟乙基、-CH₂OCH₃、-CH₂CN或-CH₂N(CH₃)₂。

9.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被以下基团取代：-C(O)H、-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COC(CH₃)₃、-COCF₃、-COCH₂CN、-COCH₂OCH₃、-COCH₂N(CH₃)₂、-SO₂CH₃、-SO₂CH₂CH₃、-SO₂CF₃、-SO₂C₂F₅、甲基、乙基、-CF₃、-CH₂CH₂F、-C₂F₅、-。

10.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中R³选自四氢吡喃、哌啶、吗啉或二氧六环，所述四氢吡喃、哌啶、吗啉或二氧六环任选地被以下基团取代：-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COCH₂OCH₃、-SO₂CH₃、甲基、乙基、或-CH₂CH₂F。

11.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选自四氢呋喃、四氢吡喃、二氧六环或吗啉，所述四氢呋喃、四氢吡喃、二氧六环或吗啉任选地被一个或两个选自以下的基团取代：-COR^a、-SO₂R^b、或任选地被卤素取代的C_1-6烷基。

12.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中R³选自5-6元杂环烷基，所述5-6元杂环烷基任选地被以下基团取代：-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COCH₂OCH₃、-SO₂CH₃。

13.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选自四氢呋喃、四氢吡喃、二氧六环或吗啉，所述吗啉任选地被以下基团取代：-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-COCH₂OCH₃、-SO₂CH₃。

14.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选自

15.如权利要求14所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选

16.如权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选自

17.如权利要求16所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R³选自

18.以下化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，

或以下化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，R独立地为以下基团：

19.如权利要求18所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，选自以下化合物或其药学上可接受的盐，

或以下化合物或其药学上可接受的盐：

其中，R独立地为以下基团：

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20.一种药物组合物，其包含权利要求1-19中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，任选地包含药学上可接受的辅料。

21.权利要求1-19中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐、或权利要求20所述的药物组合物在制备预防或者治疗与抗凋亡蛋白BCL-2相关的疾病的药物中的用途。

22.权利要求21所述的用途，其中与抗凋亡蛋白BCL-2相关的疾病选自癌症。

23.权利要求21所述的用途，其中与抗凋亡蛋白BCL-2相关的疾病选自急性淋巴细胞白血病。