CN113773273B - 苯并异噻唑类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有通式Ι结构的苯并异噻唑类化合物、及其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐、及其制备方法和其在制备PD‑1/PD‑L1蛋白‑蛋白相互作用抑制剂中的用途。体外活性测试结果表明，本发明化合物对PD‑1/PD‑L1蛋白‑蛋白相互作用具有明显的抑制作用，可以将其作为免疫检查点抑制剂用于癌症的免疫疗法以及治疗自身免疫性疾病、病毒感染等多种疾病。

Description

苯并异噻唑类化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及苯并异噻唑类化合物、其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐、及其制备方法和其在制备PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用抑制剂中的用途。
背景技术
近年来，癌症发病率和死亡率在世界范围内迅速上升，其成为人类死亡的主要原因之一。随着研究的深入，免疫检查点阻断疗法已被认为是一种有前途的癌症治疗策略，其中对PD-1/PD-L1信号通路的抑制已成为癌症免疫治疗的重要进展之一。
程序性死亡蛋白1(programmedcelldeathprotein1,PD-1)及其配体PD-L1(Programmed celldeath-ligand1)是跨膜免疫检查点蛋白，主要表达于多种免疫细胞上；其中PD-1在活化的T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等细胞上表达，而PD-L1表达于T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和肿瘤细胞等细胞。PD-1是由基因PDCD1编码的由288个氨基酸残基组成的Ⅰ型跨膜蛋白，其结构包含四个部分：胞外的免疫球蛋白可变区(IgV)，疏水的跨膜区，胞内的免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和免疫受体酪氨酸转换基序(ITSM)。PD-L1是由CD274基因编码的由290个氨基酸残基组成的Ⅰ型跨膜蛋白，其胞外的结构由免疫球蛋白可变区(IgV)和免疫球蛋白稳定区(IgC)组成。
PD-1/PD-L1免疫检查点通路在维持自身耐受性、控制过度免疫反应、预防自身免疫性疾病等方面具有重要作用。肿瘤细胞可以通过增加PD-L1的表达来逃避免疫监测和破坏免疫细胞的细胞毒能力，目前发现近30％的实体和血液肿瘤，包括黑色素瘤、非小细胞肺癌和肾癌，其PD-L1表达上调。肿瘤细胞上的PD-L1与T细胞上的PD-1结合，减弱了T细胞的增殖和功能，提高了肿瘤细胞在宿主体内的生存能力。阻断PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用可恢复肿瘤特异性T淋巴细胞的抗肿瘤活性，逆转免疫抑制，导致肿瘤缩小和延长肿瘤患者的生存时间。因此，开发针对PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用的单克隆抗体和/或小分子抑制剂是一种有吸引力的癌症免疫治疗策略。
迄今为止，美国食品药品监督管理局(FDA)已经批准了六种用于治疗PD-1/PD-L1相关癌症的单克隆抗体，其中纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)和西米普利单抗(cemiplimab)靶向PD-1，阿维鲁单抗(avelumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)和度伐单抗(durvalumab)靶向PD-L1。此外，恒瑞医药、信达、百济神州等药企研发的靶向PD-1的单克隆抗体已经在国内上市，并用于非小细胞肺癌的治疗。
尽管这些抗体药物在癌症治疗中取得了巨大的成功，但仍然存在一些缺点，包括生物利用度差、免疫原性导致的严重毒副作用和治疗费用高昂。为了克服上述缺点，一些研究者致力于研究和开发针对PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用的小分子抑制剂。与抗体药物相比，小分子抑制剂具有更好的生物利用度、更可控的不良反应和治疗费用低廉等优点。因此，开发针对PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用的小分子抑制剂用于癌症的免疫治疗是一种可行性做法。
目前PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用小分子抑制剂的研发处于早期阶段，并没有小分子抑制剂药物上市，大多数仍处于临床前研究，只有少数小分子抑制剂进入到了临床研究中，如Curis公司的CA-170、阿诺医药的AN4005和再极医药的MAX-10181。因此，研制具有良好抗肿瘤活性的新型PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用小分子抑制剂具有重大意义。
发明内容
本发明人在参考此前文献报道的基础上，设计并合成了一系列新型苯并异噻唑类化合物。活性研究结果表明，此类化合物可以显著抑制PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用。
本发明涉及通式I所示的苯并异噻唑类化合物、其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003264578210000021
其中，
环A选自无取代或被1-3个R1取代的苯基，
Figure BDA0003264578210000022
Figure BDA0003264578210000023
R1独立地选自卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、氰基、羟基、羧基或氨基；
环B选自：
Figure BDA0003264578210000024
其中，Y1、Y2、Y3和Y4独立地为CH或N；
R2和R3各自独立地选自氢、(C1-C4)烷基、甲氧基(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基、羟基(C1-C4)烷基、氨基(C1-C4)烷基、氨基甲酰基(C1-C4)烷基、羧基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧甲酰基(C1-C4)烷基、四氢吡喃-4-基、氧杂环丁烷-3-基、吗啉-4-(C1-C4)烷基或N-甲基哌嗪-4-(C1-C4)烷基；
所述(C1-C4)烷基、甲氧基(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基、羟基(C1-C4)烷基、氨基(C1-C4)烷基、氨基甲酰基(C1-C4)烷基、羧基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧甲酰基(C1-C4)烷基、四氢吡喃-4-基、氧杂环丁烷-3-基、吗啉-4-(C1-C4)烷基、N-甲基哌嗪-4-(C1-C4)烷基任选被1-3个R8取代；
或者R2、R3和与它们连接的氮原子一起形成3-7元含氮杂环；
所述含氮杂环任选被1-3个R9取代；
R4、R5、R6和R7分别独立地选自氢、卤素、羟基、(C1-C4)烷基或(C1-C4)烷氧基；
R8独立地选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基、羧基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧甲酰基(C1-C4)烷基或(C1-C4)酰基；
R9独立地选自氢、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧甲酰基、羟基(C1-C4)烷基或氨基(C1-C4)烷基。
本发明优选涉及通式I所示的苯并异噻唑类化合物、其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐，
其中，
环A选自无取代或被1-3个卤素、甲基、甲氧基取代的苯基，
Figure BDA0003264578210000031
Figure BDA0003264578210000032
环B选自为
Figure BDA0003264578210000033
其中，
Y1、Y2、Y3和Y4分别独立地选自CH或N；
R4、R5、R6和R7分别独立地选自氢、卤素、羟基、甲基或甲氧基；
Figure BDA0003264578210000034
选自：
Figure BDA0003264578210000035
优选地，本发明通式I所示的苯并异噻唑类化合物、其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐选自以下化合物，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制：
Figure BDA0003264578210000036
Figure BDA0003264578210000041
Figure BDA0003264578210000051
此外，本发明还包括本发明化合物的前药。本发明化合物的前药是通式Ι的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如，通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
如本文所用，所述“药学上可接受的盐”包括与无机酸、有机酸、碱金属离子形成的盐；所述无机酸选自：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸或磷酸；所述有机酸选自：琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸或对甲苯磺酸；所述碱金属离子选自锂离子、钠离子或钾离子。
本发明中“卤素”是指氟、氯、溴或碘；“烷基”是指直链或支链的烷基；“含氮杂环”是指含有氮原子的单环或多环的环状体系，环状体系是非芳香性或芳香性的。
本发明可以包括通式I所示的苯并异噻唑类化合物、其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐作为活性成分，与药学上可接受的辅料混合制备成组合物。所述药学上可接受的辅料包括本领域公知的稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂等。稀释剂包括但不限于淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、磷酸氢钙等；湿润剂包括水、乙醇、异丙醇等；粘合剂包括但不限于淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、***胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇等；崩解剂包括但不限于干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯此咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂包括但不限于滑石粉、二氧化硅、聚乙二醇等。
本发明的药用组合物可配制成若干种剂型，所述剂型包括但不限于注射剂、片剂、胶囊剂等。
本发明的通式I所示的苯并异噻唑类化合物、其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐可以与其他活性成分组合使用，从而达到更优的治疗效果。
本发明还提供了通式I所示的苯并异噻唑类化合物、其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐在制备PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用抑制剂中的应用。
本发明还提供了通式I所示的苯并异噻唑类化合物、其立体异构体、互变异构体、消旋体、代谢产物、代谢前体、前药、水合物、溶剂化物或其药学上可接受的盐在制备治疗与PD-1/PD-L1信号通路相关疾病的药物中的应用。
所述与PD-1/PD-L1信号通路相关的疾病选自癌症、自身免疫性疾或病感染性疾病。所述癌症选自肺癌、皮肤癌、血液肿瘤、胶质瘤、消化***肿瘤、乳腺癌、淋巴瘤、神经***肿瘤、黑色素瘤；所述自身免疫性疾病选自器官特异性自身免疫病或***性自身免疫病；所述感染性疾病选自细菌感染或病毒感染。其中，所述器官特异性自身免疫病包括慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、溃疡性结肠炎或急性特发性多神经炎，所述***性自身免疫病包括类风湿性关节炎、***性红斑狼疮、***性血管炎或自身免疫性溶血性贫血。
下面的合成路线概括并描述了本发明的通式Ι苯并异噻唑类化合物的制备，所有的原料都是通过这些流程中描述的方式、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终衍生物都是通过这些流程中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。
合成路线：
Figure BDA0003264578210000061
(a)以2-氟-3-溴苯腈(R-1)为起始原料，与苯、取代苯或杂芳环硼酸或硼酸酯发生Suzuki偶联反应得到中间体R-2。
(b)以中间体R-2为原料，依次与Na2S·9H2O、NaOH溶液、NH3·H2O和NaClO溶液反应，经过分子内的环化作用得到中间体R-3。
(c)以中间体R-3为原料，与苯、取代苯或杂芳环甲醛发生Buchwald-Hartwig偶联反应得到中间体R-4和R-5。
(d)以中间体R-4和R-5为原料，与胺类化合物发生缩合反应，随后经硼氢化钠或氰基硼氢化钠还原得到目标产物R-6和R-7。
(e)以中间体R-4和R-5为原料，与胺类化合物发生缩合反应，经硼氢化钠或氰基硼氢化钠还原得到酯化中间体，随后与氢氧化锂发生水解反应，最终得到目标产物R-6和R-7。
上述路线中，所述的环A、R2、R3、R4、R5、R6、R7、Y1、Y2、Y3和Y4的定义如权利要求所述。本发明的具有通式Ι的苯并异噻唑类化合物可按照上述的反应路线制备得到。
本发明与现有技术相比取得的有益效果在于：
本发明的苯并异噻唑类化合物具有新颖的化学结构，并在体外研究中对PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用具有很高的抑制活性，可用于癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病等多种疾病的治疗。
具体实施方式
下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
在以下的实施例中，描绘了制备部分所述化合物的方法。应了解，以下方法及所属领域的普通技术人员已知的其他方法均可适用于本发明所述的所有化合物的制备。实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
实施例1：2-((4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000071
步骤1：2-氟-[1,1'-联苯基]-3-甲腈
将2-氟-3-溴苯腈(10.00g,49.99mmol)、苯硼酸(7.31g,59.99mmol)、Pd(PPh3)4(1.44g,1.25mmol)和K2CO3(13.82g,99.98mmol)置于反应瓶中，加入适量Dioxane/H2O(3/1)作为溶剂。氮气保护下，于95℃反应5h。反应结束后，将反应液倒入300ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经柱层析(石油醚:乙酸乙酯的体积比为50:1)分离提纯，得到白色固体8.49g，收率86.1％。
步骤2：7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺
将2-氟-[1,1'-联苯基]-3-甲腈(10.00g,50.71mmol)溶于适量DMSO中，加入Na2S·9H2O(12.79g,53.25mmol)，于70℃反应24h。将反应液冷却至室温，在搅拌下，依次加入4Mol/LNaOH溶液(38ml)、氨水溶液(25Wt.％,152ml)、次氯酸钠溶液(有效氯≧7.0％，76ml)，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，将反应液液倒入300ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，得到白色固体6.71g，收率58.5％。
步骤3：4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(1.00g,4.42mmol)、4-溴苯甲醛(0.90g,4.86mmol)、Pd(OAc)2(50mg,0.22mmol)、Xant-phos(256mg,0.44mmol)和Cs2CO3(2.88g,8.84mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.88g，收率60.3％。
步骤4：2-((4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例1)
将4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(125mg,0.38mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(228ul,3.78mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(72mg,1.89mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为10:1)，得到白色固体64mg，收率45.1％。HRMS(ESI)forC22H21N3OS[M+Na]+:calcd,398.1303；found,398.1312；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.65–9.62(s,1H),8.54–8.50(dd,J＝0.9,8.1Hz,1H),7.93–7.88(d,J＝8.6Hz,2H),7.77–7.72(m,3H),7.69–7.64(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.52–7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.33–7.28(d,J＝8.5Hz,2H),4.78–4.19(s,1H),3.71–3.68(s,2H),3.52–3.47(t,J＝5.8Hz,2H),2.63–2.58(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例2：N-(2-((4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙基)乙酰胺
Figure BDA0003264578210000081
参照实施例1的合成方法，以4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为N-乙酰基乙二胺。最终得到白色固体52mg，收率41.3％。HRMS(ESI)forC24H24N4OS[M+Na]+:calcd,439.1569；found,439.1573；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.69–9.66(s,1H),8.56–8.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.94–7.90(d,J＝8.1Hz,2H),7.87–7.82(t,J＝5.6Hz,1H),7.77–7.73(m,3H),7.69–7.64(t,J＝7.6Hz,1H),7.62–7.56(t,J＝7.6Hz,2H),7.52–7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.34–7.30(d,J＝8.1Hz,2H),3.72–3.69(s,2H),3.20–3.14(q,J＝6.2Hz,2H),2.62–2.57(t,J＝6.5Hz,2H),1.82–1.79(s,3H).
实施例3：2-(((6-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000091
步骤1：6-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)吡啶-3-甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、2-溴-5-醛基吡啶(452mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.58g，收率79.2％。
步骤2：2-(((6-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)氨基)乙烷-1-醇(实施例2)
将6-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)吡啶-3-甲醛(100mg,0.30mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(182ul,3.02mmol)，于50℃搅拌反应3h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(57mg,1.51mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7.5:1)，得到白色固体51mg，收率44.9％。HRMS(ESI)forC21H20N4OS[M+H]+:calcd,377.1431；found,377.1441；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.46–10.43(s,1H),8.69–8.65(d,J＝8.1Hz,1H),8.42–8.37(d,J＝8.5Hz,1H),8.32–8.28(d,J＝2.3Hz,1H),7.81–7.76(dd,J＝2.4,8.6Hz,1H),7.76–7.73(m,3H),7.66–7.61(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.52–7.46(t,J＝7.4Hz,1H),4.73–4.38(s,1H),3.74–3.71(s,2H),3.52–3.48(t,J＝5.8Hz,2H),2.64–2.59(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例4：2-(((5-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)甲基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000092
步骤1：5-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)吡啶-2-甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、5-溴-2-醛基吡啶(452mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.45g，收率61.5％。
步骤2：2-(((5-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)甲基)氨基)乙烷-1-醇(实施例4)
Figure BDA0003264578210000093
将5-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)吡啶-2-甲醛(100mg,0.30mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(182ul,3.02mmol)，于50℃搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(57mg,1.51mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7:1)，得到淡黄色固体35mg，收率30.1％。HRMS(ESI)forC21H20N4OS[M+H]+:calcd,377.1431；found,377.1439；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.01–9.98(s,1H),9.07–9.04(d,J＝2.7Hz,1H),8.60–8.55(d,J＝8.0Hz,1H),8.48–8.43(dd,J＝2.7,8.4Hz,1H),7.79–7.73(m,3H),7.71–7.66(t,J＝7.6Hz,1H),7.62–7.56(t,J＝7.5Hz,2H),7.52–7.47(t,J＝7.4Hz,1H),7.45–7.40(d,J＝8.5Hz,1H),4.77–4.50(s,1H),3.90–3.83(s,2H),3.56–3.51(t,J＝5.6Hz,2H),2.72–2.67(t,J＝5.6Hz,2H).
实施例5：2-((2-甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000101
步骤1：2-甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、4-溴-2-甲氧基苯甲醛(523mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.46g，收率57.8％。
步骤2：2-((2-甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例5)
将2-甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.28mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(167ul,2.77mmol)，于50℃搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(52mg,1.39mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7.5:1)，得到淡黄色固体26mg，收率23.1％。HRMS(ESI)forC23H23N3O2S[M+H]+:calcd,406.1584；found,406.1591；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.87–9.76(s,1H),8.61–8.57(d,J＝7.7Hz,1H),7.79–7.73(m,3H),7.71–7.65(m,3H),7.62–7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.52–7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.33–7.29(d,J＝8.2Hz,1H),5.25–4.46(s,1H),3.86–3.85(s,2H),3.85–3.84(s,3H),3.60–3.55(t,J＝5.6Hz,2H),2.78–2.73(t,J＝5.6Hz,2H).
实施例6：2-((2-甲基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000102
步骤1：2-甲基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、4-溴-2-甲基苯甲醛(325ul,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.38g，收率49.9％。
步骤2：2-((2-甲基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例6)
将2-甲基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.29mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(175ul,2.90mmol)，于50℃搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(55mg,1.45mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7.5:1)，得到白色固体57mg，收率50.4％。HRMS(ESI)forC23H23N3OS[M－H]－:calcd,388.1489；found,388.1509；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.66–9.63(s,1H),8.58–8.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.84–7.80(dd,J＝2.4,8.3Hz,1H),7.78–7.76(d,J＝2.3Hz,1H),7.76–7.72(m,3H),7.68–7.63(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.52–7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.32–7.28(d,J＝8.3Hz,1H),4.75–4.62(s,1H),3.79–3.76(s,2H),3.58–3.53(t,J＝5.7Hz,2H),2.76–2.71(t,J＝5.7Hz,2H),2.37–2.34(s,3H).
实施例7：2-((2-氯-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000111
步骤1：2-氯-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、2-氯-4-溴苯甲醛(533mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.61g，收率75.7％。
步骤2：2-((2-氯-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例7)
将2-氯-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.27mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(165ul,2.74mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(52mg,1.37mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7.5:1)，得到白色固体22mg，收率19.6％。HRMS(ESI)forC22H20ClN3OS[M+H]+:calcd,410.1088；found,410.1098；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.00–9.97(s,1H),8.59–8.54(d,J＝8.2Hz,1H),8.26–8.23(s,1H),7.92–7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.79–7.73(m,3H),7.71–7.66(t,J＝7.7Hz,1H),7.62–7.57(t,J＝7.6Hz,2H),7.56–7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.52–7.47(t,J＝7.5Hz,1H),4.88–4.69(s,1H),3.95–3.92(s,2H),3.60–3.55(t,J＝5.6Hz,2H),2.79–2.74(t,J＝5.6Hz,2H).
实施例8：2-((3-氯-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000121
步骤1：3-氯-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、4-溴-3-氯-苯甲醛(533mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.59g，收率73.2％。
步骤2：2-((3-氯-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例8)
将3-氯-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.27mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(165ul,2.74mmol)，于50℃搅拌反应1.5h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(52mg,1.37mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为10:1)，得到白色固体61mg，收率54.3％。HRMS(ESI)forC22H20ClN3OS[M+H]+:calcd,410.1088；found,410.1089；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.08–9.05(s,1H),8.40–8.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.94–7.89(d,J＝8.2Hz,1H),7.78–7.71(m,3H),7.68–7.63(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.55–7.52(d,J＝2.0Hz,1H),7.51–7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.36–7.31(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),4.68–4.43(s,1H),3.77–3.74(s,2H),3.53–3.48(t,J＝5.8Hz,2H),2.64–2.59(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例9：2-((3-甲基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000122
步骤1：3-甲基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、4-溴-3-甲基苯甲醛(484mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.46g，收率60.4％。
步骤2：2-((3-甲基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例9)
将3-甲基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.29mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(175ul,2.90mmol)，于50℃搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(55mg,1.45mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比10:1)，得到白色固体47mg，收率41.6％。HRMS(ESI)forC23H23N3OS[M－H]－:calcd,388.1489；found,388.1508；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.92–8.89(s,1H),8.41–8.36(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.76–7.70(m,3H),7.67–7.62(t,J＝7.6Hz,1H),7.60–7.56(m,3H),7.50–7.45(t,J＝7.4Hz,1H),7.28–7.24(d,J＝2.1Hz,1H),7.23–7.18(dd,J＝2.1,8.0Hz,1H),4.73–4.52(s,1H),3.78–3.75(s,2H),3.55–3.50(t,J＝5.7Hz,2H),2.69–2.64(t,J＝5.8Hz,2H),2.30–2.27(s,3H).
实施例10：2-((2,6-二甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000131
步骤1：2,6-二甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、4-溴-2,6-二甲氧基苯甲醛(596mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)，Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.28g，收率32.4％。
步骤2：2-((2,6-二甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例10)
将2,6-二甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.26mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(155ul,2.56mmol)，于50℃搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(48mg,1.28mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7.5:1)，得到淡黄色固体36mg，收率32.3％。HRMS(ESI)forC24H25N3O3S[M+H]+:calcd,436.1689；found,436.1697；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.11–10.08(s,1H),8.73–8.69(dd,J＝0.9,8.2Hz,1H),7.79–7.73(m,3H),7.71–7.65(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.58(t,J＝7.2Hz,2H),7.58–7.57(s,2H),7.52–7.47(t,J＝7.4Hz,1H),5.33–5.15(s,1H),4.07–4.04(s,2H),3.88–3.85(s,6H),3.69–3.64(t,J＝5.5Hz,2H),2.91–2.86(t,J＝5.5Hz,2H).
实施例11：2-((3-氟-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000132
步骤1：3-氟-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、3-氟-4-溴苯甲醛(494mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.71g，收率92.2％。
步骤2：2-((3-氟-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例11)
将3-氟-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.29mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(173ul,2.87mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(54mg,1.44mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7.5:1)，得到白色固体63mg，收率55.8％。HRMS(ESI)forC22H20FN3OS[M+H]+:calcd,394.1384；found,394.1396；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.27–9.24(s,1H),8.47–8.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.95–7.90(t,J＝8.3Hz,1H),7.77–7.71(m,3H),7.67–7.62(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.51–7.45(t,J＝7.4Hz,1H),7.29–7.24(dd,J＝1.9,12.0Hz,1H),7.18–7.14(dd,J＝1.8,8.3Hz,1H),4.57–4.46(s,1H),3.75–3.72(s,2H),3.52–3.47(t,J＝5.8Hz,2H),2.62–2.57(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例12：2-((3-甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000141
步骤1：3-甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、4-溴-3-甲氧基苯甲醛(523mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.69g，收率86.7％。
步骤2：2-((3-甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例12)
将3-甲氧基-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.28mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(167ul,2.77mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(52mg,1.39mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7.5:1)，得到白色固体54mg，收率48.0％。HRMS(ESI)forC23H23N3O2S[M－H]－:calcd,404.1438；found,404.1456；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.62–8.59(s,1H),8.38–8.33(dd,J＝0.9,8.2Hz,1H),8.21–8.16(d,J＝8.1Hz,1H),7.77–7.71(m,3H),7.67–7.61(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.51–7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.15–7.12(d,J＝1.8Hz,1H),6.98–6.93(dd,J＝1.8,8.1Hz,1H),4.75–4.44(s,1H),3.93–3.90(s,3H),3.79–3.76(s,2H),3.55–3.50(t,J＝5.7Hz,2H),2.69–2.64(t,J＝5.7Hz,2H).
实施例13：2-((3-溴-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000142
步骤1：3-溴-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、3,4-二溴苯甲醛(641mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.58g，收率64.2％。
步骤2：2-((3-溴-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例13)
将3-溴-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.24mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(147ul,2.44mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(46mg,1.22mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7:1)，得到白色固体56mg，收率50.5％。HRMS(ESI)forC22H20BrN3OS[M+Na]+:calcd,478.0388；found,478.0397；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.04–9.01(s,1H),8.37–8.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.87–7.83(d,J＝8.1Hz,1H),7.78–7.71(m,3H),7.71–7.68(d,J＝1.9Hz,1H),7.68–7.63(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.51–7.45(t,J＝7.4Hz,1H),7.40–7.36(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),4.65–4.46(s,1H),3.77–3.74(s,2H),3.53–3.48(t,J＝5.8Hz,2H),2.64–2.59(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例14：2-((2-氟-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000151
步骤1：2-氟-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-苯基苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,2.21mmol)、4-溴-2-氟苯甲醛(494mg,2.43mmol)、Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)、Xant-phos(128mg,0.22mmol)和Cs2CO3(1.44g,4.42mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.49g，收率63.6％。
步骤2：2-((2-氟-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例14)
将2-氟-4-((7-苯基苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.29mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(173ul,2.87mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(54mg,1.44mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7:1)，得到白色固体43mg，收率38.1％。HRMS(ESI)forC22H20FN3OS[M+Na]+:calcd,416.1209；found,416.1216；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.94–9.91(s,1H),8.57–8.52(d,J＝8.0Hz,1H),8.00–7.94(dd,J＝2.1,13.1Hz,1H),7.79–7.73(m,3H),7.71–7.64(m,2H),7.62–7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.52–7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.44–7.38(t,J＝8.6Hz,1H),4.66–4.47(s,1H),3.77–3.74(s,2H),3.52–3.48(t,J＝5.7Hz,2H),2.66–2.61(t,J＝5.7Hz,2H).
实施例15：2-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000161
步骤1：3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-2-氟苯甲腈
将2-氟-3-溴苯腈(3.00g,15.00mmol)、苯并-1,4-二氧六环-6-硼酸(2.96g,16.45mmol)、Pd(PPh3)4(520mg,0.45mmol)和K2CO3(4.56g,32.99mmol)置于反应瓶中，加入适量Dioxane/H2O(3/1)作为溶剂。氮气保护下，于95℃反应5h。反应结束后，将反应液倒入200ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经柱层析(石油醚:乙酸乙酯的体积比为20:1)分离提纯，得到白色固体3.40g，收率88.8％。
步骤2：7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
将3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-2-氟苯甲腈(1.50g,5.88mmol)溶于适量DMSO中，加入Na2S·9H2O(1.55g,6.45mmol)，于70℃反应24h。将反应液冷却至室温，在搅拌下，依次加入4Mol/LNaOH溶液(4.35ml)、氨水溶液(25Wt.％,17.66ml)、次氯酸钠溶液(有效氯≧7.0％，8.82ml)，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，将反应液倒入100ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，得到白色固体0.75g，收率44.9％。
步骤3：3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,1.76mmol)、4-溴-3-氯苯甲醛(425mg,1.94mmol)、Pd(OAc)2(20mg,0.089mmol)、Xant-phos(102mg,0.18mmol)和Cs2CO3(1147mg,3.52mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.71g，收率95.4％。
步骤4：2-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例15)
将3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.24mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(143ul,2.37mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(45mg,1.19mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7:1)，得到白色固体45mg，收率40.5％。HRMS(ESI)forC24H22ClN3O3S[M+Na]+:calcd,490.0968；found,490.0971；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.34–8.30(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.92–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(dd,J＝1.0,7.2Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.54–7.50(d,J＝1.9Hz,1H),7.35–7.30(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.0Hz,1H),4.66–4.43(s,1H),4.33–4.30(s,4H),3.76–3.73(s,2H),3.52–3.47(t,J＝5.8Hz,2H),2.63–2.58(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例16：2-((4-((7-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)-3-氯苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000171
步骤1：3-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-2-氟苯甲腈
将2-氟-3-溴苯腈(2.50g,12.50mmol)、3,4-(亚甲二氧基)苯硼酸(2.49g,15.00mmol)、Pd(PPh3)4(430mg,0.37mmol)和K2CO3(3.46g,25.03mmol)置于反应瓶中，加入适量Dioxane/H2O(3/1)作为溶剂。氮气保护下，于95℃反应5h。反应结束后，将反应液倒入150ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经柱层析(石油醚:乙酸乙酯的体积比为20:1)分离提纯，得到白色固体2.82g，收率93.4％。
步骤2：7-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
将3-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-2-氟苯甲腈(1.10g,4.56mmol)溶于适量DMSO中，加入Na2S·9H2O(1.20g,5.00mmol)，于70℃反应24h。将反应液冷却至室温，在搅拌下，依次加入4Mol/LNaOH溶液(3.37ml)、氨水溶液(25Wt.％,14.00ml)、次氯酸钠溶液(有效氯≧7.0％，6.80ml)，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，将反应液倒入100ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，得到白色固体0.48g，收率39.0％。
步骤3：4-((7-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)-3-氯苯甲醛
将7-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)苯并[d]异噻唑-3-胺(400mg,1.48mmol)、4-溴-3-氯苯甲醛(357mg,1.63mmol)、Pd(OAc)2(17mg,0.076mmol)、Xant-phos(86mg,0.15mmol)和Cs2CO3(964mg,2.96mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.58g，收率95.9％。
步骤4：2-((4-((7-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)-3-氯苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例16)
将4-((7-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)-3-氯苯甲醛(100mg,0.24mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(148ul,2.45mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(46mg,1.22mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7:1)，得到白色固体52mg，收率46.8％。HRMS(ESI)for C23H20ClN3O3S[M+Na]+:calcd,476.0812；found,476.0820；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.05–9.02(s,1H),8.35–8.31(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.93–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.67(dd,J＝1.0,7.3Hz,1H),7.64–7.58(t,J＝7.4,7.9Hz,1H),7.54–7.51(d,J＝1.9Hz,1H),7.36–7.31(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.29–7.26(d,J＝1.9Hz,1H),7.24–7.19(dd,J＝1.9,8.0Hz,1H),7.13–7.08(d,J＝8.0Hz,1H),6.14–6.11(s,2H),4.69–4.42(s,1H),3.77–3.74(s,2H),3.53–3.48(t,J＝5.8Hz,2H),2.64–2.59(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例17：2-((3-氯-4-((7-(3,4-二甲氧基苯基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000181
步骤1：2-氟-3',4'-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-甲腈
将2-氟-3-溴苯腈(2.50g,12.50mmol)、3,4-二甲氧基苯硼酸(2.73g,15.00mmol)、Pd(PPh3)4(430mg,0.37mmol)和K2CO3(3.46g,25.03mmol)置于反应瓶中，加入适量Dioxane/H2O(3/1)作为溶剂。氮气保护下，于95℃反应5h。反应结束后，将反应液倒入150ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经柱层析(石油醚:乙酸乙酯的体积比为10:1)分离提纯，得到白色固体3.00g，收率93.2％。
步骤2：7-(3,4-二甲氧基苯基)苯并[d]异噻唑-3-胺
将2-氟-3',4'-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-甲腈(1.20g,4.66mmol)溶于适量DMSO中，加入Na2S·9H2O(1.23g,5.12mmol)，于70℃反应24h。将反应液冷却至室温，在搅拌下，依次加入4Mol/LNaOH溶液(3.45ml)、氨水溶液(25Wt.％,14.00ml)、次氯酸钠溶液(有效氯≧7.0％，7.00ml)，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，将反应液倒入100ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，得到白色固体1.23g，收率91.8％。
步骤3：3-氯-4-((7-(3,4-二甲氧基苯基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-(3,4-二甲氧基苯基)苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,1.75mmol)、4-溴-3-氯苯甲醛(422mg,1.92mmol)、Pd(OAc)2(20mg,0.089mmol)、Xant-phos(101mg,0.17mmol)和Cs2CO3(1138mg,3.49mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.43g，收率57.9％。步骤4：2-((3-氯-4-((7-(3,4-二甲氧基苯基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例17)
将3-氯-4-((7-(3,4-二甲氧基苯基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.24mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(142ul,2.35mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(45mg,1.19mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为8:1)，得到白色固体49mg，收率44.1％。HRMS(ESI)forC24H24ClN3O3S[M－H]－:calcd,468.1154；found,468.1181；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.34–8.30(dd,J＝0.9,8.1Hz,1H),7.94–7.89(d,J＝8.2Hz,1H),7.78–7.74(dd,J＝0.9,7.3Hz,1H),7.65–7.59(t,J＝7.6Hz,1H),7.53–7.50(d,J＝1.9Hz,1H),7.35–7.31(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.31–7.26(m,2H),7.17–7.12(d,J＝9.0Hz,1H),4.60–4.45(s,1H),3.87–3.85(s,3H),3.85–3.82(s,3H),3.75–3.72(s,2H),3.52–3.47(t,J＝5.8Hz,2H),2.62–2.57(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例18：2-((3-氯-4-((7-(萘-2-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000191
步骤1：2-氟-3-(萘-2-基)苯甲腈
将2-氟-3-溴苯腈(2.50g,12.50mmol)、2-萘硼酸(2.58g,15.00mmol)、Pd(PPh3)4(430mg,0.37mmol)和K2CO3(3.46g,25.03mmol)置于反应瓶中，加入适量Dioxane/H2O(3/1)作为溶剂。氮气保护下，于95℃反应5h。反应结束后，将反应液倒入150ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经柱层析(石油醚:乙酸乙酯的体积比为20:1)分离提纯，得到白色固体2.80g，收率90.6％。
步骤2：7-(萘-2-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
将2-氟-3-(萘-2-基)苯甲腈(1.10g,4.45mmol)溶于适量DMSO中，加入Na2S·9H2O(1.18g,4.91mmol)，于70℃反应24h。将反应液冷却至室温，在搅拌下，依次加入4Mol/LNaOH溶液(3.30ml)、氨水溶液(25Wt.％,13.35ml)、次氯酸钠溶液(有效氯≧7.0％，6.67ml)，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，将反应液倒入100ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，得到白色固体0.64g，收率52.0％。
步骤3：3-氯-4-((7-(萘-2-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-(萘-2-基)苯并[d]异噻唑-3-胺(500mg,1.81mmol)、4-溴-3-氯苯甲醛(437mg,1.99mmol)、Pd(OAc)2(21mg,0.094mmol)、Xant-phos(105mg,0.18mmol)和Cs2CO3(1179mg,3.62mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.62g，收率82.6％。
步骤4：2-((3-氯-4-((7-(萘-2-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例18)
将3-氯-4-((7-(萘-2-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.24mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(145ul,2.41mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(46mg,1.22mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为8:1)，得到白色固体50mg，收率45.5％。HRMS(ESI)forC26H22ClN3OS[M－H]－:calcd,458.1099；found,458.1123；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.11–9.08(s,1H),8.44–8.39(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),8.30–8.26(d,J＝1.9Hz,1H),8.14–8.10(d,J＝8.5Hz,1H),8.08–8.03(m,1H),8.03–7.98(m,1H),7.94–7.91(d,J＝8.2Hz,1H),7.91–7.86(m,2H),7.72–7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.64–7.57(m,2H),7.55–7.51(d,J＝1.9Hz,1H),7.36–7.31(dd,J＝2.0,8.3Hz,1H),4.67–4.40(s,1H),3.76–3.73(s,2H),3.53–3.48(t,J＝5.8Hz,2H),2.63–2.58(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例19：2-((3-氯-4-((7-(吡啶-3-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000201
步骤1：2-氟-3-(吡啶-3-基)苯甲腈
将2-氟-3-溴苯腈(2.50g,12.50mmol)、3-吡啶硼酸(1.69g,13.75mmol)、Pd(PPh3)4(430mg,0.37mmol)和K2CO3(3.46g,25.03mmol)置于反应瓶中，加入适量Dioxane/H2O(3/1)作为溶剂。氮气保护下，于95℃反应5h。反应结束后，将反应液倒入150ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经柱层析(石油醚:乙酸乙酯的体积比为3:1)分离提纯，得到白色固体1.99g，收率80.2％。
步骤2：7-(吡啶-3-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
将2-氟-3-(吡啶-3-基)苯甲腈(1.00g,5.05mmol)溶于适量DMSO中，加入Na2S·9H2O(1.33g,5.54mmol)，于70℃反应24h。将反应液冷却至室温，在搅拌下，依次加入4Mol/LNaOH溶液(3.73ml)、氨水溶液(25Wt.％,15.13ml)、次氯酸钠溶液(有效氯≧7.0％，7.57ml)，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，将反应液倒入100ml水中，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，得到白色固体0.79g，收率68.7％。
步骤3：3-氯-4-((7-(吡啶-3-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-(吡啶-3-基)苯并[d]异噻唑-3-胺(400mg,1.76mmol)、4-溴-3-氯苯甲醛(425mg,1.94mmol)、Pd(OAc)2(20mg,0.089mmol)、Xant-phos(102mg,0.18mmol)和Cs2CO3(1147mg,3.52mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体0.57g，收率88.5％。
步骤4：2-((3-氯-4-((7-(吡啶-3-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例19)
将3-氯-4-((7-(吡啶-3-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.27mmol)溶于THF/MeOH(1/1)中，然后加入乙醇胺(165ul,2.74mmol)，于50℃搅拌反应1h。将反应液冷却至室温，加入NaBH4(52mg,1.37mmol)，室温下搅拌反应2h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7:1)，得到白色固体39mg，收率34.8％。HRMS(ESI)forC21H19ClN4OS[M+Na]+:calcd,433.0866；found,433.0882；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.15–9.12(s,1H),8.96–8.92(d,J＝2.4Hz,1H),8.71–8.67(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.46–8.42(d,J＝8.1Hz,1H),8.17–8.12(dt,J＝2.0,7.9Hz,1H),7.90–7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.86–7.82(d,J＝7.2Hz,1H),7.71–7.67(t,J＝7.7Hz,1H),7.63–7.59(dd,J＝4.8,7.9Hz,1H),7.54–7.52(d,J＝1.9Hz,1H),7.36–7.31(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),4.64–4.45(s,1H),3.77–3.74(s,2H),3.51–3.49(t,J＝5.8Hz,2H),2.62–2.60(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例20：N-(2-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙基)乙酰胺
Figure BDA0003264578210000211
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为N-乙酰基乙二胺。最终得到白色固体55mg，收率45.7％。HRMS(ESI)forC26H25ClN4O3S[M+H]+:calcd,509.1409；found,509.1430；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.04–9.01(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.92–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.86–7.81(t,J＝5.7Hz,1H),7.71–7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.54–7.51(d,J＝2.0Hz,1H),7.35–7.30(dd,J＝1.9,8.2Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.34–4.31(s,4H),3.74–3.71(s,2H),3.19–3.13(q,J＝6.3Hz,2H),2.60–2.55(t,J＝6.5Hz,2H),1.82–1.79(s,3H).
实施例21：N-(2-氯-4-(((2-甲氧基乙基)氨基)甲基)苯基)-7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
Figure BDA0003264578210000212
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为2-甲氧基乙胺。最终得到白色胶状物质51mg，收率44.7％。HRMS(ESI)forC25H24ClN3O3S[M+H]+:calcd,482.1300；found,482.1311；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.34–8.30(d,J＝7.9Hz,1H),7.93–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.1Hz,1H),7.63–7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.52–7.49(d,J＝2.0Hz,1H),7.34–7.29(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.17(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.33–4.30(s,4H),3.75–3.72(s,2H),3.44–3.39(t,J＝5.7Hz,2H),3.27–3.24(s,3H),2.70–2.65(t,J＝5.7Hz,2H).
实施例22：N1-(3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-N2,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺
Figure BDA0003264578210000213
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为N,N-二甲基乙二胺。最终得到白色胶状物质34mg，收率29.1％。HRMS(ESI)forC26H27ClN4O2S[M+H]+:calcd,495.1616；found,495.1690；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.05–9.02(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.96–7.91(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.56–7.53(d,J＝2.0Hz,1H),7.37–7.32(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.35–4.29(s,4H),3.80–3.77(s,2H),2.69–2.64(t,J＝6.3Hz,2H),2.48–2.45(t,J＝6.3Hz,2H),2.25–2.18(s,6H).
实施例23：N1-(3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺
Figure BDA0003264578210000221
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为N,N-二甲基-1,3-二氨基丙烷。最终得到白色固体37mg，收率30.7％。HRMS(ESI)forC27H29ClN4O2S[M+H]+:calcd,509.1773；found,509.1838；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.07–9.04(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.1Hz,1H),7.98–7.94(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.67(d,J＝7.3Hz,1H),7.62–7.59(t,J＝7.8Hz,1H),7.59–7.57(s,1H),7.40–7.36(d,J＝8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.33–4.31(s,4H),3.86–3.83(s,2H),2.70–2.65(t,J＝7.1Hz,2H),2.44–2.39(t,J＝7.1Hz,2H),2.25–2.22(s,6H),1.72–1.64(p,J＝7.0Hz,2H).
实施例24：3-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)丙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000222
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为3-氨基-1-丙醇。最终得到白色固体53mg，收率46.5％。HRMS(ESI)forC25H24ClN3O3S[M+H]+:calcd,482.1300；found,482.1314；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.04–9.01(s,1H),8.34–8.30(d,J＝7.8Hz,1H),7.94–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.1Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.54–7.50(d,J＝2.0Hz,1H),7.35–7.30(dd,J＝2.0,8.3Hz,1H),7.23–7.17(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.35–4.29(s,4H),3.74–3.71(s,2H),3.52–3.45(t,J＝6.3Hz,2H),2.63–2.57(t,J＝7.0Hz,2H),1.65–1.58(p,J＝6.6Hz,2H).
实施例25：(1r,4r)-4-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)环己烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000223
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为反式对氨基环己醇。最终得到白色固体55mg，收率44.5％。HRMS(ESI)forC28H28ClN3O3S[M－H]－:calcd,520.1467；found,520.1457；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.35–8.29(d,J＝7.8Hz,1H),7.91–7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.1Hz,1H),7.63–7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.53–7.50(d,J＝2.0Hz,1H),7.34–7.30(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.51–4.44(s,1H),4.35–4.28(s,4H),3.75–3.72(s,2H),3.39–3.36(m,1H),2.41–2.33(t,J＝10.0Hz,1H),1.91–1.86(d,J＝10.8Hz,2H),1.83–1.77(d,J＝10.8Hz,2H),1.15–1.06(m,4H).
实施例26：N-(2-氯-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯基)-7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
Figure BDA0003264578210000231
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为4-氨基四氢吡喃。最终得到白色固体55mg，收率45.8％。HRMS(ESI)forC27H26ClN3O3S[M－H]－:calcd,506.1311；found,506.1301；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.02–8.99(s,1H),8.34–8.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.91–7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.55–7.51(d,J＝2.0Hz,1H),7.36–7.31(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.34–4.29(s,4H),3.86–3.80(dt,J＝3.7,11.6Hz,2H),3.77–3.74(s,2H),3.29–3.24(t,J＝11.0Hz,2H),2.65–2.59(p,1H),1.82–1.76(d,J＝12.1Hz,2H),1.33–1.25(qd,J＝4.2,11.1Hz,2H).
实施例27：2-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)(甲基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000232
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为2-甲氨基乙醇。最终得到白色固体23mg，收率20.2％。HRMS(ESI)forC25H24ClN3O3S[M+H]+:calcd,482.1300；found,482.1324；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.02–8.99(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.95–7.91(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.50–7.47(d,J＝1.9Hz,1H),7.33–7.28(dd,J＝1.9,8.2Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.48–4.43(s,1H),4.34–4.30(s,4H),3.56–3.50(m,4H),2.49–2.44(t,J＝6.4Hz,2H),2.21–2.18(s,3H).
实施例28：1-(3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)哌啶-4-醇
Figure BDA0003264578210000233
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为4-羟基哌啶。最终得到淡黄色固体25mg，收率20.8％。HRMS(ESI)forC27H26ClN3O3S[M+H]+:calcd,508.1456；found,508.1475；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.94–7.90(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.45–7.42(d,J＝1.9Hz,1H),7.31–7.26(dd,J＝1.9,8.2Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.60–4.52(s,1H),4.34–4.31(s,4H),3.50–3.42(m,3H),2.71–2.66(t,J＝5.3,6.0Hz,2H),2.12–2.04(t,J＝11.0Hz,2H),1.75–1.68(dd,J＝6.9,16.3Hz,2H),1.44–1.38(dd,J＝7.6,17.5Hz,2H).
实施例29：(R)-3-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)丙烷-1,2-二醇
Figure BDA0003264578210000241
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为(R)-3-氨基-1,2-丙二醇。最终得到白色固体52mg，收率44.1％。HRMS(ESI)forC25H24ClN3O4S[M－H]－:calcd,496.1103；found,496.1105；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.92–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.53–7.50(d,J＝1.6Hz,1H),7.35–7.30(dd,J＝1.7,8.4Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.71–4.51(s,1H),4.33–4.30(s,4H),3.75–3.71(s,2H),3.61–3.55(p,J＝5.5Hz,1H),3.36–3.33(m,2H),2.64–2.59(dd,J＝4.5,11.7Hz,1H),2.48–2.44(dd,J＝7.2,11.8Hz,1H).
实施例30：(S)-3-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)丙烷-1,2-二醇
Figure BDA0003264578210000242
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为(S)-3-氨基-1,2-丙二醇。最终得到白色固体55mg，收率46.7％。HRMS(ESI)forC25H24ClN3O4S[M+H]+:calcd,498.1249；found,498.1273；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.04–9.01(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.95–7.89(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.53–7.50(d,J＝1.8Hz,1H),7.35–7.30(dd,J＝1.8,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.73–4.55(s,1H),4.34–4.31(s,4H),3.76–3.73(s,2H),3.61–3.56(p,J＝5.4Hz,1H),3.37–3.33(m,2H),2.65–2.60(dd,J＝4.4,11.8Hz,1H),2.49–2.44(dd,J＝7.2,11.7Hz,1H).
实施例31：N-(2-氯-4-((氧杂环丁烷-3-基氨基)甲基)苯基)-7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
Figure BDA0003264578210000251
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为3-氧杂环丁胺。最终得到白色固体53mg，收率46.7％。HRMS(ESI)forC25H22ClN3O3S[M+H]+:calcd,480.1143；found,480.1164；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.34–8.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.92–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.56(t,J＝7.7Hz,1H),7.51–7.47(d,J＝2.0Hz,1H),7.32–7.28(dd,J＝2.0,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.60–4.55(t,J＝6.5Hz,2H),4.34–4.29(m,6H),3.92–3.85(p,J＝6.7Hz,1H),3.66–3.60(s,2H).
实施例32：2-((3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)丙烷-1,3-二醇
Figure BDA0003264578210000252
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为2-氨基-1,3-丙二醇。最终得到白色固体61mg，收率51.8％。HRMS(ESI)forC25H24ClN3O4S[M－H]－:calcd,496.1103；found,496.1123；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.92–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.56–7.52(d,J＝2.0Hz,1H),7.37–7.32(dd,J＝2.0,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.55–4.40(s,2H),4.36–4.28(s,4H),3.81–3.78(s,2H),3.49–3.42(dd,J＝5.6,10.9Hz,2H),3.42–3.36(dd,J＝5.4,10.8Hz,2H),2.61–2.55(p,J＝5.6Hz,1H).
实施例33：N-(2-氯-4-(((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨基)甲基)苯基)-7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
Figure BDA0003264578210000253
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为4-甲基-1-哌嗪乙胺。最终得到白色固体57mg，收率43.8％。HRMS(ESI)forC29H32ClN5O2S[M+H]+:calcd,550.2038；found,550.2051；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.04–9.01(s,1H),8.34–8.30(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.92–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(dd,J＝1.0,7.3Hz,1H),7.63–7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.51–7.48(d,J＝1.9Hz,1H),7.33–7.28(dd,J＝1.9,8.2Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.33–4.30(s,4H),3.75–3.69(s,2H),2.61–2.56(t,J＝6.5Hz,2H),2.40–2.38(t,J＝6.5Hz,2H),2.42–2.22(s,8H),2.15–2.12(s,3H).
实施例34：N-(2-氯-4-(((2-吗啉基乙基)氨基)甲基)苯基)-7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-胺
Figure BDA0003264578210000261
参照实施例15的合成方法，以3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为4-(2-氨基乙基)吗啉。最终得到淡黄色油状物质44mg，收率34.6％。HRMS(ESI)forC28H29ClN4O3S[M+H]+:calcd,537.1722；found,537.1706；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.03–9.00(s,1H),8.34–8.29(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.92–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(dd,J＝1.0,7.3Hz,1H),7.63–7.57(t,J＝7.2,7.8Hz,1H),7.52–7.48(d,J＝1.9Hz,1H),7.33–7.28(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.17(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.33–4.30(s,4H),3.73–3.70(s,2H),3.58–3.54(t,J＝4.6Hz,4H),2.63–2.57(t,J＝6.5Hz,2H),2.42–2.38(t,J＝6.5Hz,2H),2.37–2.30(t,J＝4.4Hz,4H).
实施例35：(3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-D-丝氨酸乙酯
Figure BDA0003264578210000262
将3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(150mg,0.35mmol)溶于THF中，然后加入D-丝氨酸乙酯盐酸盐(301mg,1.77mmol)和三乙胺(247ul,1.77mmol)于50℃搅拌反应5h。在反应液中加入适量饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，将残留物溶于THF中，加入NaBH3CN(111mg,1.77mmol)和一滴冰醋酸，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为35:1)，得到白色固体89mg，收率46.5％。HRMS(ESI)forC27H26ClN3O5S[M+H]+:calcd,540.1354；found,540.1346；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.04–9.01(s,1H),8.34–8.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.93–7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.52–7.48(d,J＝2.0Hz,1H),7.33–7.28(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.88–4.83(t,J＝5.8Hz,1H),4.33–4.31(s,4H),4.14–4.08(qd,J＝2.2,7.1Hz,2H),3.82–3.77(d,J＝13.7Hz,1H),3.66–3.62(d,J＝13.8Hz,1H),3.62–3.58(t,J＝5.5Hz,2H),3.29–3.24(t,J＝5.2Hz,1H),1.23–1.20(t,J＝7.1Hz,3H).
实施例36：(3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-D-丝氨酸
Figure BDA0003264578210000271
将(3-氯-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-D-丝氨酸乙酯(60mg,0.11mmol)溶于THF/MeOH/H2O(2/1/1)中，加入LiOH(27mg,1.11mmol)，于室温下搅拌反应5h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，将残留物溶于THF/H2O(2/1)中。用1Mol/LHCl溶液调节溶液PH为7，抽滤，得到白色胶状物质，经红外干燥，最终得到淡黄色固体47mg，收率82.6％。HRMS(ESI)forC25H22ClN3O5S[M+H]+:calcd,512.1041；found,512.1056；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.07–9.04(s,1H),8.34–8.29(dd,J＝1.0,8.2Hz,1H),8.01–7.96(d,J＝8.3Hz,1H),7.71–7.67(dd,J＝0.9,7.3Hz,1H),7.64–7.58(m,2H),7.43–7.38(dd,J＝2.0,8.3Hz,1H),7.22–7.18(m,2H),7.08–7.01(d,J＝8.1Hz,1H),4.33–4.31(s,4H),4.01–3.96(d,J＝13.5Hz,1H),3.93–3.88(d,J＝13.5Hz,1H),3.72–3.68(dd,J＝4.7,11.1Hz,1H),3.67–3.63(dd,J＝6.1,11.1Hz,1H),3.22–3.17(t,J＝5.4Hz,1H).
实施例37：2-((3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003264578210000272
步骤1：3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛
将7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-胺(2.00g,7.03mmol)、3,4-二溴苯甲醛(1.95g,7.39mmol)、Pd(OAc)2(79mg,0.35mmol)、Xant-phos(407mg,0.70mmol)和Cs2CO3(4.60g,14.07mmol)置于反应瓶中，加入适量无水二氧六环作为溶剂。氮气保护下，于80℃反应12h。反应结束后，加入THF稀释反应液，抽滤，并用THF洗涤滤饼。合并THF有机层，减压蒸馏除去溶剂，经乙酸乙酯打浆纯化，最终得到黄色固体3.03g，收率92.2％。
步骤2：2-((3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)乙烷-1-醇(实施例37)
将3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(100mg,0.21mmol)溶于THF中，然后加入乙醇胺(65ul,1.07mmol)，于50℃搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入NaBH3CN(67mg,1.07mmol)和一滴冰醋酸，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为7.5:1)，得到白色固体62mg，收率56.6％。HRMS(ESI)forC24H22BrN3O3S[M+H]+:calcd,512.0638；found,512.0634；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.00–8.97(s,1H),8.31–8.27(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.87–7.82(d,J＝8.1Hz,1H),7.71–7.66(m,2H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.39–7.35(dd,J＝1.9,8.2Hz,1H),7.23–7.17(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.60–4.48(s,1H),4.33–4.30(s,4H),3.76–3.73(s,2H),3.52–3.47(t,J＝5.8Hz,2H),2.63–2.58(t,J＝5.8Hz,2H).
实施例38：2-((3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)丙烷-1,3-二醇
Figure BDA0003264578210000281
参照实施例37的合成方法，以3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为2-氨基-1,3-丙二醇。最终得到白色固体56mg，收率48.2％。HRMS(ESI)forC25H24BrN3O4S[M+H]+:calcd,542.0744；found,542.0720；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.99–8.96(s,1H),8.31–8.27(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.86–7.82(d,J＝8.2Hz,1H),7.72–7.69(d,J＝1.9Hz,1H),7.69–7.66(dd,J＝1.0,7.3Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.41–7.36(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.17(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.51–4.42(s,2H),4.33–4.31(s,4H),3.81–3.78(s,2H),3.47–3.36(m,4H),2.61–2.54(p,J＝5.6Hz,1H).
实施例39：(R)-3-((3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)氨基)丙烷-1,2-二醇
Figure BDA0003264578210000282
参照实施例37的合成方法，以3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将乙醇胺替换为(R)-3-氨基-1,2-丙二醇。最终得到白色固体53mg，收率45.7％。HRMS(ESI)forC25H24BrN3O4S[M+H]+:calcd,542.0744；found,542.0723；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.99–8.96(s,1H),8.31–8.26(dd,J＝0.9,8.1Hz,1H),7.87–7.82(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.66(m,2H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.39–7.34(dd,J＝1.9,8.2Hz,1H),7.23–7.17(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.67–4.55(s,1H),4.33–4.31(s,4H),3.75–3.72(s,2H),3.60–3.55(p,J＝5.8Hz,1H),3.36–3.33(m,2H),2.63–2.59(dd,J＝4.5,11.8Hz,1H),2.48–2.44(dd,J＝7.2,11.8Hz,1H).
实施例40：(3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-D-丝氨酸乙酯
Figure BDA0003264578210000283
将3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛(150mg,0.32mmol)溶于THF中，然后加入D-丝氨酸乙酯盐酸盐(273mg,1.61mmol)和三乙胺(224ul,1.61mmol)，于50℃搅拌反应5h。在反应液中加入适量饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，将残留物溶于THF中，加入NaBH3CN(101mg,1.61mmol)和一滴冰醋酸，于室温下搅拌反应6h。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥。抽滤，减压蒸馏除去溶剂，经制备薄层层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇的体积比为20:1)，得到白色固体91mg，收率48.5％。HRMS(ESI)forC27H26BrN3O5S[M+H]+:calcd,584.0849；found,584.0823；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.99–8.96(s,1H),8.31–8.27(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.86–7.82(d,J＝8.2Hz,1H),7.70–7.67(dd,J＝0.9,7.3Hz,1H),7.67–7.65(d,J＝1.9Hz,1H),7.63–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.37–7.33(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.88–4.83(t,J＝5.8Hz,1H),4.33–4.30(s,4H),4.14–4.08(qd,J＝2.5,7.1Hz,2H),3.82–3.77(d,J＝13.8Hz,1H),3.66–3.62(d,J＝13.8Hz,1H),3.62–3.58(t,J＝5.6Hz,2H),3.29–3.24(t,J＝5.2Hz,1H),1.23–1.20(t,J＝7.1Hz,3H).
实施例41：(3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-D-丝氨酸
Figure BDA0003264578210000291
将(3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-D-丝氨酸乙酯(60mg,0.10mmol)溶于THF/MeOH/H2O(2/1/1)中，加入LiOH(25mg,1.04mmol)，于室温下搅拌反应5h。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，将残留物溶于THF/H2O(2/1)中。用1Mol/LHCl溶液调节溶液PH为7，抽滤，得到白色胶状物质，经红外干燥，最终得到淡黄色固体45mg，收率78.8％。HRMS(ESI)forC25H22BrN3O5S[M+H]+:calcd,556.0536；found,556.0518；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.02–8.99(s,1H),8.31–8.26(dd,J＝1.0,8.2Hz,1H),7.95–7.91(d,J＝8.2Hz,1H),7.82–7.78(d,J＝1.9Hz,1H),7.71–7.67(dd,J＝1.0,7.3Hz,1H),7.64–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.47–7.42(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.0Hz,1H),4.33–4.30(s,4H),4.03–3.97(d,J＝13.4Hz,1H),3.94–3.89(d,J＝13.4Hz,1H),3.75–3.69(dd,J＝4.6,11.2Hz,1H),3.69–3.63(dd,J＝6.0,11.1Hz,1H),3.25–3.20(t,J＝5.3Hz,1H).
实施例42：(3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-L-丝氨酸乙酯
Figure BDA0003264578210000292
参照实施例40的合成方法，以3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苯甲醛为原料，将D-丝氨酸乙酯盐酸盐替换为L-丝氨酸乙酯盐酸盐。最终得到白色固体87mg，收率46.4％。HRMS(ESI)forC27H26BrN3O5S[M+H]+:calcd,584.0849；found,584.0831；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.99–8.96(s,1H),8.31–8.26(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),7.87–7.82(d,J＝8.2Hz,1H),7.70–7.68(dd,J＝1.0,7.3Hz,1H),7.68–7.65(d,J＝1.9Hz,1H),7.62–7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.37–7.33(dd,J＝1.9,8.2Hz,1H),7.23–7.18(m,2H),7.07–7.02(d,J＝8.2Hz,1H),4.87–4.83(t,J＝5.9Hz,1H),4.34–4.30(s,4H),4.13–4.08(qd,J＝2.4,7.1Hz,2H),3.82–3.77(d,J＝13.8Hz,1H),3.66–3.62(d,J＝13.8Hz,1H),3.62–3.59(t,J＝5.6Hz,2H),3.29–3.24(t,J＝5.2Hz,1H),1.23–1.20(t,J＝7.1Hz,3H).
实施例43：(3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-L-丝氨酸
Figure BDA0003264578210000301
参照实施例41的合成方法，以(3-溴-4-((7-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)苯并[d]异噻唑-3-基)氨基)苄基)-L-丝氨酸乙酯原料，通过与氢氧化锂发生水解反应，最终得到淡黄色固体47mg，收率82.3％。HRMS(ESI)forC25H22BrN3O5S[M+H]+:calcd,556.0536；found,556.0524；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.02–8.99(s,1H),8.31–8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.95–7.90(d,J＝8.2Hz,1H),7.80–7.77(s,1H),7.71–7.67(d,J＝7.3Hz,1H),7.64–7.58(t,J＝7.7Hz,1H),7.47–7.42(d,J＝8.3Hz,1H),7.22–7.18(m,2H),7.07–7.03(d,J＝8.1Hz,1H),4.34–4.29(s,4H),4.02–3.96(d,J＝13.3Hz,1H),3.93–3.87(d,J＝13.4Hz,1H),3.73–3.68(dd,J＝4.7,11.1Hz,1H),3.68–3.62(dd,J＝6.0,11.3Hz,1H),3.22–3.18(t,J＝5.4Hz,1H).
本发明化合物的生物活性评价：
通过均相时间分辨荧光(HomogenousTime-ResolvedFluorescence,HTRF)技术来测定本发明化合物抑制PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用的能力。
检测试剂盒购买于Cisbio公司(CAT#64ICP01PEG)，该试剂盒包含Tag1-PD-L1、Tag2-PD-1、抗-Tag1-Eu3+、抗-Tag2-XL665、稀释剂和检测缓冲剂。
实验原理：抗-Tag1-Eu3+作为HTRF供体，抗-Tag2-XL665作为HTRF受体，当Tag1-PD-L1和Tag2-PD-1发生相互作用时，会使抗-Tag1-Eu3+和抗-Tag2-XL665相互靠近。当供体受到能量激发后，会将部分能量转移到受体，从而产生665nm的发射光。当加入化合物阻断PD-1/PD-L1相互作用时，只会产生620nm的发射光。通过比较信号665nm/信号620nm比值的大小，最终可以确定化合物的抑制PD-1/PD-L1相互作用能力的大小。
实验步骤：待检测化合物用稀释剂进行3X的梯度稀释，从初始浓度开始稀释，最终稀释至8个浓度梯度。使用稀释剂分别将Tag1-PD-L1和Tag2-PD-1稀释成工作浓度为25nM和250nM。抗-Tag1-Eu3+用检测缓冲剂按1:100进行稀释，抗-Tag2-XL665用检测缓冲剂按1:25进行稀释，分别取等体积的上述稀释后的检测试剂进行混合。在白色384孔板中先加入2μl化合物、再分别加入4μlTag1-PD-L1和4μlTag2-PD-1，于室温下孵育15分钟。加入10μl预先混合的检测试剂，于室温下孵育2小时。用
Figure BDA0003264578210000302
500多功能酶标仪检测665nm和620nm处的荧光信号，得到HTRF率＝(信号665nm/信号620nm)×104，根据荧光信号比值计算化合物对蛋白结合的抑制率。用PrismGraphd7.0拟合IC50曲线。
化合物抑制PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用的活性范围或IC50如表1所示。
其中，A：IC50≦100nM；B：100nM<IC50≦1000nM；C：1000nM<IC50≦10000nM。
表1：本发明化合物对PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用的抑制活性
Figure BDA0003264578210000311
HTRF测试结果表明，本发明化合物(特别是，上述实施例化合物)在分子水平可显著抑制PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用。因此，本发明化合物(特别是，上述实施例化合物)具有可以通过抑制PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用治疗PD-1/PD-L1信号通路相关疾病的潜力。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (10)

1.通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
Figure FDA0004111772540000011
其中，
环A选自无取代或被1-3个R1取代的苯基，
Figure FDA0004111772540000012
Figure FDA0004111772540000013
R1独立地选自卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、氰基、羟基、羧基或氨基；
环B选自：
Figure FDA0004111772540000014
其中，Y1、Y2、Y3和Y4独立地为CH或N；
R2和R3各自独立地选自氢、(C1-C4)烷基、甲氧基(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基、羟基(C1-C4)烷基、氨基(C1-C4)烷基、氨基甲酰基(C1-C4)烷基、羧基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧甲酰基(C1-C4)烷基、四氢吡喃-4-基、氧杂环丁烷-3-基、吗啉-4-(C1-C4)烷基或N-甲基哌嗪-4-(C1-C4)烷基；
所述(C1-C4)烷基、甲氧基(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基、羟基(C1-C4)烷基、氨基(C1-C4)烷基、氨基甲酰基(C1-C4)烷基、羧基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧甲酰基(C1-C4)烷基、四氢吡喃-4-基、氧杂环丁烷-3-基、吗啉-4-(C1-C4)烷基、N-甲基哌嗪-4-(C1-C4)烷基任选被1-3个R8取代；
R4、R5、R6和R7分别独立地选自氢、卤素、羟基、(C1-C4)烷基或(C1-C4)烷氧基；
R8独立地选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基、羧基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧甲酰基(C1-C4)烷基或(C1-C4)酰基。
2.如权利要求1所述的通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
其中，
环A选自无取代或被1-3个卤素、甲基或甲氧基取代的苯基，
Figure FDA0004111772540000021
3.如权利要求1或权利要求2所述的通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
其中，
环B选自
Figure FDA0004111772540000022
Y1、Y2、Y3和Y4分别独立地选自CH或N；
R4、R5、R6和R7分别独立地选自氢、卤素、羟基、甲基或甲氧基。
4.如权利要求1所述的通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物其药学上可接受的盐，其特征在于：
其中，
Figure FDA0004111772540000031
选自：
Figure FDA0004111772540000032
5.如权利要求1所述的通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物选自以下：
Figure FDA0004111772540000033
Figure FDA0004111772540000041
Figure FDA0004111772540000051
6.一种药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包含治疗上有效量的活性组分和药学上可接受的辅料；所述活性组分包含权利要求1-5中任何一项所述的通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物或其药学上可接受的盐。
7.权利要求1-5中任何一项所述的通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求6所述的药物组合物在制备PD-1/PD-L1蛋白-蛋白相互作用抑制剂中的应用。
8.权利要求1-5中任何一项所述的通式Ι所示的苯并异噻唑类化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求6所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗与PD-1/PD-L1信号通路相关的疾病。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述与PD-1/PD-L1信号通路相关的疾病选自癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述癌症选自肺癌、皮肤癌、血液肿瘤、胶质瘤、消化***肿瘤、乳腺癌、淋巴瘤、神经***肿瘤、黑色素瘤；所述自身免疫性疾病选自器官特异性或自身免疫病或***性自身免疫病；所述感染性疾病选自细菌感染或病毒感染，其中，所述器官特异性自身免疫病选自慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、溃疡性结肠炎或急性特发性多神经炎，所述***性自身免疫病选自类风湿性关节炎、***性红斑狼疮、***性血管炎或自身免疫性溶血性贫血。
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