CN113717891A - 一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法:菌种的富集:用接种环划取一环斜面保藏的植物乳杆菌,接种至50mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中过夜培养。然后,按接种量的1%吸取种子培养液加入新鲜的MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h。培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥,大豆分离蛋白质肽的制备:在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH 7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶500‑1000U/g,在50℃下水解4‑6h,本申请解决了发酵菌剂中乳酸菌存活率低,稳定性差等问题,并将乳酸菌的存活率提高到94.7%以上,提供了一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及技术领域,具体为一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法,属于食品加工领域。
背景技术
植物乳杆菌是乳酸菌的一种,最适生长温度为30~38摄氏度厌氧或兼性厌氧菌种为直或弯的杆状,单个、有时成对或成链状,属于同型发酵乳酸菌;植物乳杆菌作为我国***公布的可用于食品的益生菌菌种之一,能够有效耐受人体的消化***,在肠道内大量存活,发挥调节肠道菌群平衡、促进人体消化吸收等作用;同时,植物乳杆菌还具有降胆固醇、预防心血管疾病、控制体重等益生保健功能;因此新型益生菌正日益受到国内外的重视,逐步成为海内外研究开发的热点;
但是目前现有技术存在培育的菌剂菌种存活率不高,储藏稳定性差等问题;市面迫切需要一种新的微生物发酵菌剂的制备方法。
本发明内容
本发明的目的在于提供了一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法。该方法制备的菌剂菌种具有存活率高,储藏稳定性强等优点,这为我国微生物发酵菌剂的制备提供了新的思路,为开发高品质的产品提供了保障。
本发明的目的是解决发酵菌剂中乳酸菌存活率低,稳定性差等问题,提供了一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法。
本发明提供的一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法,其特征在于:
菌种的富集:用接种环划取一环斜面保藏的植物乳杆菌,接种至50mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中过夜培养。然后,按接种量的1%吸取种子培养液加入新鲜的MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h。培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥。
大豆分离蛋白质肽的制备:在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH 7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶500-1000U/g,在50℃下水解4-6h。酶解结束后,升温至90℃灭酶20min。灭酶后,通过冷冻干燥法回收酶解后的大豆蛋白水解物。
冷冻干燥制备菌剂:按质量分数配置3%大豆蛋白水解物,5%海藻糖,5%抗性糊精的保护剂。100mL培养液富集的菌泥添加10-20mL保护剂,混合均匀。然后,置于5℃预冷15-30min。然后,将预冷后的菌悬液置于-80℃预冻2-6h,把冷冻后的菌置于冷冻干燥机(真空度<50Pa)中冻干24-36h。冻干结束后,研磨成粉末并真空包装,保藏于4℃。
有益效果:
本申请解决了发酵菌剂中乳酸菌存活率低,稳定性差等问题,并将乳酸菌的存活率提高到94.7%以上,提供了一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法。
附图说明:
图1:碱性蛋白酶量对菌剂制备的影响变化示意图;
图2:酶解时间对菌剂制备的影响变化示意图;
图3:保护剂添加量对菌剂制备的影响变化示意图;
图4:预冷时间对菌剂制备的影响变化示意图;
图5;预冻时间对菌剂制备的影响变化示意图;
图6:冷冻干燥时间对菌剂制备的影响变化示意图。
具体实施方式
实施案例一:
(1)碱性蛋白酶量对菌剂制备的影响:
用接种环将斜面的植物乳杆菌接种至50mL MRS液体培养基中并在37℃中过夜培养。然后,吸取100uL培养液加入100mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h。培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥;
在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶500,750,1000U/g,在50℃下水解4h。酶解结束后,升温至90℃灭酶20min。灭酶后,通过冷冻干燥法回收酶解后的大豆蛋白水解物;
按质量分数配置3%大豆蛋白水解物,5%海藻糖,5%抗性糊精的保护剂。100mL培养液富集的菌泥添加15mL保护剂,混合均匀。然后,置于5℃预冷15min。然后,将预冷后的菌悬液置于-80℃预冻2h,把冷冻后的菌置于冷冻干燥机(真空度<50Pa)中冻干24h。冻干结束后,研磨成粉末并真空包装,保藏于4℃。
酶量(U) | 500 | 750 | 1000 |
植物乳杆菌(×10<sup>11</sup>CFU/mL) | 7.10 | 7.93 | 7.56 |
成活率(%) | 94.7 | 96.7 | 95.1 |
水分含量(%) | 3.4 | 3.5 | 3.7 |
实施案例二:
(2)酶解时间对菌剂制备的影响:
用接种环将斜面的植物乳杆菌接种至50mL MRS液体培养基中并在37℃中过夜培养。然后,吸取100uL培养液加入100mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h。培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥;
在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶750U/g,在50℃下水解2,4,6h。酶解结束后,升温至90℃灭酶20min。灭酶后,通过冷冻干燥法回收酶解后的大豆蛋白水解物;
按质量分数配置3%大豆蛋白水解物,5%海藻糖,5%抗性糊精的保护剂。100mL培养液富集的菌泥添加15mL保护剂,混合均匀。然后,置于5℃预冷15min。然后,将预冷后的菌悬液置于-80℃预冻2h,把冷冻后的菌置于冷冻干燥机(真空度<50Pa)中冻干24h。冻干结束后,研磨成粉末并真空包装,保藏于4℃。
实施案例三:
(3)保护剂添加量对菌剂制备的影响:
用接种环将斜面的植物乳杆菌接种至50mL MRS液体培养基中并在37℃中过夜培养。然后,吸取100uL培养液加入100mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h。培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥;
在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶750U/g,在50℃下水解4h。酶解结束后,升温至90℃灭酶20min。灭酶后,通过冷冻干燥法回收酶解后的大豆蛋白水解物;
按质量分数配置3%大豆蛋白水解物,5%海藻糖,5%抗性糊精的保护剂。100mL培养液富集的菌泥添加10-20mL保护剂,混合均匀。然后,置于5℃预冷15min。然后,将预冷后的菌悬液置于-80℃预冻2h,把冷冻后的菌置于冷冻干燥机(真空度<50Pa)中冻干24h。冻干结束后,研磨成粉末并真空包装,保藏于4℃。
实施案例四:
(4)预冷时间对菌剂制备的影响:
用接种环将斜面的植物乳杆菌接种至50mL MRS液体培养基中并在37℃中过夜培养。然后,吸取100uL培养液加入100mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h。培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥;
在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶750U/g,在50℃下水解4h。酶解结束后,升温至90℃灭酶20min。灭酶后,通过冷冻干燥法回收酶解后的大豆蛋白水解物;
按质量分数配置3%大豆蛋白水解物,5%海藻糖,5%抗性糊精的保护剂。100mL培养液富集的菌泥添加15mL保护剂,混合均匀。然后,置于5℃预冷0-30min。然后,将预冷后的菌悬液置于-80℃预冻2h,把冷冻后的菌置于冷冻干燥机(真空度<50Pa)中冻干24h。冻干结束后,研磨成粉末并真空包装,保藏于4℃。
实施案例五:
(5)预冻时间对菌剂制备的影响:
用接种环将斜面的植物乳杆菌接种至50mL MRS液体培养基中并在37℃中过夜培养。然后,吸取100uL培养液加入100mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h。培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥;
在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶750U/g,在50℃下水解4h。酶解结束后,升温至90℃灭酶20min。灭酶后,通过冷冻干燥法回收酶解后的大豆蛋白水解物;
按质量分数配置3%大豆蛋白水解物,5%海藻糖,5%抗性糊精的保护剂。100mL培养液富集的菌泥添加15mL保护剂,混合均匀。然后,置于5℃预冷15min。然后,将预冷后的菌悬液置于-80℃预冻2-6h,把冷冻后的菌置于冷冻干燥机(真空度<50Pa)中冻干24h。冻干结束后,研磨成粉末并真空包装,保藏于4℃。
预冻时间(h) | 2 | 4 | 6 |
植物乳杆菌(×10<sup>11</sup>CFU/mL) | 9.79 | 10.22 | 10.11 |
成活率(%) | 94.1 | 93.0 | 92.2 |
水分含量(%) | 2.9 | 2.8 | 2.9 |
实施案例六:
(6)冷冻干燥时间对菌剂制备的影响:
用接种环将斜面的植物乳杆菌接种至50mL MRS液体培养基中并在37℃中过夜培养。然后,吸取100uL培养液加入100mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h。培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥;
在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶750U/g,在50℃下水解4h。酶解结束后,升温至90℃灭酶20min。灭酶后,通过冷冻干燥法回收酶解后的大豆蛋白水解物;
按质量分数配置3%大豆蛋白水解物,5%海藻糖,5%抗性糊精的保护剂。100mL培养液富集的菌泥添加15mL保护剂,混合均匀。然后,置于5℃预冷15min。然后,将预冷后的菌悬液置于-80℃预冻2h,把冷冻后的菌置于冷冻干燥机(真空度<50Pa)中冻干24-36h。冻干结束后,研磨成粉末并真空包装,保藏于4℃。
实施案例七:
(7)保藏过程中菌剂中活菌数的变化:
制备好的菌剂置于4℃冰箱中保藏30-90天。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (4)
1.一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法,其特征在于:具体制备步骤如下:
步骤一:用接种环划取一环斜面保藏的植物乳杆菌,接种至50mL MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中过液培养;
步骤二:按接种量的1%吸取种子培养液加入新鲜的MRS液体培养基中,在37℃的培养箱中培养24h;
步骤三:培养结束后,用高速冷冻离心机在4℃,8000g条件下离心10min,收集菌体,并用无菌生理盐水洗涤两次,得到植物乳杆菌菌泥;
步骤四:在100mL磷酸缓冲液(50mM,pH7.5)中添加10g大豆分离蛋白,再添加碱性蛋白酶500-1000U/g,在50℃下水解4-6h。酶解结束后,升温至90℃灭酶20min。灭酶后,通过冷冻干燥法回收酶解后的大豆蛋白水解物;
步骤五:按质量分数配置3%大豆蛋白水解物,5%海藻糖,5%抗性糊精的保护剂。
2.根据权利要求1所述的一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法,其特征在于:100mL培养液富集的菌泥添加10-20mL保护剂,混合均匀之后,置于5℃预冷15-30min。
3.根据权利要求1所述的一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法,其特征在于:将预冷后的菌悬液置于-80℃预冻2-6h,把冷冻后的菌置于冷冻干燥机(真空度<50Pa)中冻干24-36h。
4.根据权利要求1所述的一种高活性植物乳杆菌菌剂及其制备方法,其特征在于:冻干结束后,研磨成粉末并真空包装,保藏于4℃。
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- 2021-09-06 CN CN202111037144.0A patent/CN113717891A/zh active Pending
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