CN113702561B - 一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法 - Google Patents
一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113702561B CN113702561B CN202110968613.4A CN202110968613A CN113702561B CN 113702561 B CN113702561 B CN 113702561B CN 202110968613 A CN202110968613 A CN 202110968613A CN 113702561 B CN113702561 B CN 113702561B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phase
- detection
- chiral
- polypeptide
- impurities
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 46
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 42
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 42
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 239000012535 impurity Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 38
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims abstract description 4
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- -1 [ (S) -1- (D-phenylalanyl-D-leucyl-D-lysyl) pyrrolidin-3-yl ] borate Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 25
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 102000048260 kappa Opioid Receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020001588 κ-opioid receptors Proteins 0.000 description 6
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 3
- 108010093625 Opioid Peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000001490 Opioid Peptides Human genes 0.000 description 3
- 102000003840 Opioid Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108090000137 Opioid Receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000003399 opiate peptide Substances 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100244562 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) oprD gene Proteins 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 108700023159 delta Opioid Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000048124 delta Opioid Receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 102000051367 mu Opioid Receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 108020001612 μ-opioid receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 108010065372 Dynorphins Proteins 0.000 description 1
- 108010049140 Endorphins Proteins 0.000 description 1
- 102000009025 Endorphins Human genes 0.000 description 1
- 108010092674 Enkephalins Proteins 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N Leu-enkephalin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010038678 Respiratory depression Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 206010013663 drug dependence Diseases 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- JMNJYGMAUMANNW-FIXZTSJVSA-N dynorphin a Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 JMNJYGMAUMANNW-FIXZTSJVSA-N 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229940124636 opioid drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/89—Inverse chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法，包括以下步骤：S1)多肽药物样品溶解后过滤制得检测样品溶液；S2)采用反相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，无机盐水溶液为A相，甲醇或乙腈为B相，对检测样品溶液进行梯度洗脱，实现非对映异构体杂质与主成分的分离。该反相色谱分析方法主要解决了常规分析方法无法有效检测出非对映异构体杂质，无法准确进行该药物的定性定量检测，为有效控制产品有关物质，监测产品质量水平提供了检测手段保障。
Description
技术领域
本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法。
背景技术
阿片样物质受体是一类主要的G蛋白偶联受体，是内源性阿片肽以及阿片类药物结合靶点，广泛存在于中枢神经***和外周神经***。阿片受体激活后对神经***免疫以及内分泌***具有调节作用，是目前最强且常用的中枢镇痛药。内源性阿片肽是哺乳动物体内天然生成的阿片样活性物质，目前已知的内源性阿片肽大致分为脑啡肽、内啡肽、强啡肽和新啡肽几类。中枢神经***中存在其相应的阿片受体，即μ、δ和κ受体。μ受体镇痛活性最强，成瘾性也最强，是产生副作用的主要原因。δ受体成瘾性小，镇痛作用也不明显。κ受体(KOR)镇痛活性介于前两者之间。多肽类KOR激动剂能在不进入中枢的情况下在外周发挥镇痛作用，不会导致呼吸抑制和便秘等毒副作用，且成瘾性更低，因此具有药物成瘾治疗的潜力。
专利CN111233974B报道了一系列具有优异的激动活性的新型KOR激动剂，包括结构如式I-1所示的化合物(化学名：[(S)-1-(D-苯丙氨酰-D-苯丙氨酰-D-亮氨酰-D-赖氨酰)吡咯烷-3-基]硼酸盐酸盐)。化合物I-1的粗品中含有多种工艺杂质、降解杂质以及最难分离的手性异构体杂质(式I-2，化学名：[(R)-1-(D-苯丙氨酰-D-苯丙氨酰-D-亮氨酰-D-赖氨酰)吡咯烷-3-基]硼酸盐酸盐)，这些异构体杂质与主成分的极性差异特别小，理化性质极其类似，在HPLC检测中极难被有效分离，给检测分析带来了极大的挑战，无法有效监测并指导生产获得符合临床所需的样品。因此，开发一种简便、重现性好，稳定可靠的分析方法，监测这些杂质特别是手性非对映异构体杂质的问题，以确保药物开发过程中的质量可控性问题，是目前亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法，通过色谱条件的合理优化，能使常规检测条件无法检测的非对映异构体杂质被有效检出，从而为保障多肽类药物的质量水平提供了有效监测手段。
为达到上述目的，本发明提供了一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1)多肽药物样品溶解后过滤制得检测样品溶液；
S2)采用反相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，无机盐水溶液为A相，甲醇或乙腈为B相，对检测样品溶液进行梯度洗脱，实现非对映异构体杂质与主成分的分离。
本发明采用HPLC反相色谱法检测该非对映异构体杂质，提供了有效的监测手段，可以准确的进行该药物的定性定量分析，有效保障了该手性多肽类药物的质量。
本发明中，所述多肽药物为[(S)-1-(D-苯丙氨酰-D-苯丙氨酰-D-亮氨酰-D-赖氨酰)吡咯烷-3-基]硼酸盐酸盐粗品(如上式I-1所示)，其中含有[(R)-1-(D-苯丙氨酰-D-苯丙氨酰-D-亮氨酰-D-赖氨酰)吡咯烷-3-基]硼酸盐酸盐杂质(如上式I-2所示)。
本发明所述多肽药物为通过固相或液相合成法获得的多肽化合物。
本发明优选的，所述多肽药物样品溶解的溶剂为极性亲水溶剂。进一步优选为水、甲醇、乙醇、乙腈中的一种或多种。更优选为甲醇、水或者二者的混合液。
所述多肽药物样品在上述极性亲水溶剂中的溶解性为溶解至极易溶解。
本发明优选的，所述检测样品溶液的浓度为≤5mg/ml。更优选为0.5～1mg/ml。
本发明采用反相色谱法，对检测样品溶液进行梯度洗脱，实现非对映异构体杂质与主成分的分离。
所述反相色谱法的反相色谱柱优选为反相C18液相色谱柱或其他柱效相当的色谱柱。更优选为YMC-Pack ODS-AQ或AerisTM PEPTIDE XB-C18色谱柱。进一步优选为YMC-PackODS-AQ，4.6*150mm，3μm或AerisTM PEPTIDE XB-C18液相色谱柱(4.6×250mm，3.6μm)。
本发明优选的，所述A相为硫酸铵水溶液。
所述硫酸铵水溶液的浓度优选为5mM～20mM；进一步优选为5mM。
所述硫酸铵水溶液的pH值优选为1.5～2.5，进一步优选为2.0～2.5。
本发明优选采用硫酸调节硫酸铵水溶液的pH值。
本发明优选的，所述B相为甲醇或乙腈，进一步优选为甲醇。
本发明优选的，所述反相色谱法的条件为：
流速为0.8～1.2ml/min；柱温30～45℃；检测波长220nm；进样量10～100μl。
所述流速进一步优选为0.8、1.0或1.2ml/min；最优选为1.0ml/min。
所述柱温进一步优选为35～45℃，最优选为45℃。
所述检测波长优选为220nm。
所述进样量进一步优选为10～20μl。
在本发明的一些具体实施例中，所述色谱条件如表1所示：
表1本发明色谱条件示例
本发明优选的，所述梯度洗脱具体为：
A相0-10min维持75％，10.01～25min间A相由75％降低至70％，25.01min～35min间A相由70％降低至68％，35.01min～55min间A相由68％降至50％并维持至65min，65.01min～75min流动相A恢复75％进行色谱柱平衡。
本发明通过大量的实验摸索开发了一种独属于手性多肽类药物的非对映异构体的检测方法。实验结果表明，按照上述检测方法获得的检测图谱中，所述的非对映异构体杂质位于主成分药物之前，其相对手性多肽药物的保留时间(RRT)约为0.96。
与现有技术相比，本发明提供了一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法，包括以下步骤：S1)多肽药物样品溶解后过滤制得检测样品溶液；S2)采用反相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，无机盐水溶液为A相，甲醇或乙腈为B相，对检测样品溶液进行梯度洗脱，实现非对映异构体杂质与主成分的分离。该反相色谱分析方法主要解决了常规分析方法无法有效检测出非对映异构体杂质，无法准确进行该药物的定性定量检测，为有效控制产品有关物质，监测产品质量水平提供了检测手段保障。
附图说明
图1为多肽药物粗品的常规HPLC图谱；
图2为实施例1的HPLC分析检测图谱；
图3为实施例2的HPLC分析检测图谱；
图4为比较例1的HPLC分析检测图谱；
图5为比较例2的HPLC分析检测图谱。
具体实施方式
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法进行详细描述。
以下实施例中手性多肽药物粗品按照专利CN111233974B实施例2公开的方法制备得到。
实施例1
一种检测手性多肽类药物非对映异构体的方法，包括：
(1)供试品溶液：取手性多肽药物粗品50mg，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，摇匀，再用0.22um的有机系滤膜过滤，得到粗品滤液待用。
(2)色谱条件：使用YMC-Pack ODS-AQ，4.6*150mm，3μm色谱柱；以硫酸铵缓冲液(5mmol/L硫酸铵，用硫酸调节pH至2.5)为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min；柱温45℃；检测波长220nm；进样量20μl。
(3)检测，按下表2梯度运行：
表2实施例1梯度洗脱条件
图1为多肽药物粗品常规HPLC图谱，可以看出，手性非对映异构体和主峰重叠。
本实施例的HPLC分析检测图谱见附图2，主成分保留时间104.273min，手性非对映异构体杂质保留时间98.000min。经过计算：本实施例的非对映异构体杂质与主成分能够有效分离，分离度为1.46。
实施例2
一种检测手性多肽类药物非对映异构体的方法，包括：
(1)供试品溶液：取手性多肽药物粗品50mg，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，摇匀，再用0.22um的有机系滤膜过滤，得到粗品滤液待用。
(2)色谱条件：使用AerisTM PEPTIDE XB-C18液相色谱柱(4.6×250mm，3.6μm)；以硫酸铵缓冲液(5mmol/L硫酸铵，用硫酸调节pH至2.2)为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min；柱温45℃；检测波长220nm；进样量20μl。
(3)检测，按下表3梯度运行：
表3实施例2梯度洗脱条件
经过计算：本实施例的非对映异构体杂质与主成分能够完全有效分离，分离度为1.45。
HPLC分析检测图谱见附图3。
比较例1
一种检测手性多肽类药物非对映异构体的方法，包括：
(1)供试品溶液：取手性多肽药物粗品50mg，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，摇匀，再用0.22um的有机系滤膜过滤，得到粗品滤液待用。
(2)色谱条件：使用AQ-C18液相色谱柱(4.6×250mm，5μm)；以氯化铵缓冲液(10mmol/L硫酸铵，用盐酸调节pH至2.5)为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min；柱温40℃；检测波长220nm；进样量10μl。
(3)检测，按下表4梯度运行：
表4比较例1梯度洗脱条件
经过计算：本比较例的检测方法能检出非对映异构体杂质，很显然在洗脱梯度没有变化，仅更换流动相，色谱柱等其他色谱条件的情况下，其与主成分不能够完全有效分离，分离度仅为1.0，不能实现准确积分与定量要求。
HPLC分析检测图谱见附图4。
比较例2
一种检测手性多肽类药物非对映异构体的方法，包括：
(1)供试品溶液：取手性多肽药物粗品50mg，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，摇匀，再用0.22um的有机系滤膜过滤，得到粗品滤液待用。
(2)色谱条件：使用DAISOPAK SP-ODS-P(C18)液相色谱柱(4.6×250mm，5μm)；以硫酸铵缓冲液(5mmol/L硫酸铵，用硫酸调节pH至2.5)为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速为1.2ml/min；柱温30℃；检测波长220nm；进样量20μl。
(3)检测，按下表5梯度运行
表5比较例2梯度洗脱条件
经过计算：本实施例的检测方法能检出非对映异构体杂质，很显然在洗脱梯度、流动相没有变化，仅更换色谱柱、流速、柱温等其他色谱条件的情况下，其与主成分不能够完全有效分离，分离度仅为0.7，不能实现准确积分与定量要求。
HPLC分析检测图谱见附图5。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (5)
1.一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1)多肽药物样品溶解后过滤制得检测样品溶液；
S2)采用反相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，硫酸铵水溶液为A相，甲醇或乙腈为B相，对检测样品溶液进行梯度洗脱，实现非对映异构体杂质与主成分的分离；
所述多肽药物为[(S)-1-(D-苯丙氨酰-D-苯丙氨酰-D-亮氨酰-D-赖氨酰)吡咯烷-3-基]硼酸盐酸盐粗品，其中含有[(R)-1-(D-苯丙氨酰-D-苯丙氨酰-D-亮氨酰-D-赖氨酰)吡咯烷-3-基]硼酸盐酸盐杂质；
所述反相色谱法的反相色谱柱为YMC-Pack ODS-AQ或AerisTM PEPTIDE XB-C18色谱柱；
所述反相色谱法的条件为：
流速为1.0ml/min；柱温35～45℃；检测波长220nm；进样量10～20μl；
所述梯度洗脱具体为：
A相0-10min维持75％，10.01～25min间A相由75％降低至70％，25.01min～35min间A相由70％降低至68％，35.01min～55min间A相由68％降至50％并维持至65min，65.01min～75min流动相A恢复75％进行色谱柱平衡。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述多肽药物样品溶解的溶剂为极性亲水溶剂。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述多肽药物样品溶解的溶剂选自水、甲醇、乙醇、乙腈中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测样品溶液的浓度为≤5mg/ml。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述硫酸铵水溶液的浓度为5mM～20mM；pH值为1.5～2.5。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110968613.4A CN113702561B (zh) | 2021-08-23 | 2021-08-23 | 一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110968613.4A CN113702561B (zh) | 2021-08-23 | 2021-08-23 | 一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113702561A CN113702561A (zh) | 2021-11-26 |
| CN113702561B true CN113702561B (zh) | 2024-03-22 |
Family
ID=78654075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110968613.4A Active CN113702561B (zh) | 2021-08-23 | 2021-08-23 | 一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113702561B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1664108A1 (en) * | 2003-08-21 | 2006-06-07 | Novo Nordisk A/S | Separation of polypeptides comprising a racemized amino acid |
| CN106290601A (zh) * | 2015-06-29 | 2017-01-04 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 多肽药物中氨基酸消旋和非对映异构体杂质的检测方法 |
| CN107290438A (zh) * | 2016-03-31 | 2017-10-24 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种多肽有关物质的高效液相色谱分析方法 |
| CN110658289A (zh) * | 2019-10-25 | 2020-01-07 | 苏州强耀生物科技有限公司 | 一种含有多个半胱氨酸的rgd肽的纯化方法 |
| CN110702819A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-01-17 | 浙江美测医药科技有限公司 | 一种用高效液相色谱法分离测定含多个手性中心的多肽手性异构体的方法 |
| CN111505161A (zh) * | 2020-05-11 | 2020-08-07 | 成都市科隆化学品有限公司 | 一种保护氨基酸对映异构体检测方法 |
-
2021
- 2021-08-23 CN CN202110968613.4A patent/CN113702561B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1664108A1 (en) * | 2003-08-21 | 2006-06-07 | Novo Nordisk A/S | Separation of polypeptides comprising a racemized amino acid |
| CN106290601A (zh) * | 2015-06-29 | 2017-01-04 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 多肽药物中氨基酸消旋和非对映异构体杂质的检测方法 |
| CN107290438A (zh) * | 2016-03-31 | 2017-10-24 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种多肽有关物质的高效液相色谱分析方法 |
| CN110658289A (zh) * | 2019-10-25 | 2020-01-07 | 苏州强耀生物科技有限公司 | 一种含有多个半胱氨酸的rgd肽的纯化方法 |
| CN110702819A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-01-17 | 浙江美测医药科技有限公司 | 一种用高效液相色谱法分离测定含多个手性中心的多肽手性异构体的方法 |
| CN111505161A (zh) * | 2020-05-11 | 2020-08-07 | 成都市科隆化学品有限公司 | 一种保护氨基酸对映异构体检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 关于合成多肽药物中非对映异构体杂质的研究;康建磊等;《中国现代应用药学》;第27卷(第5期);第387-389页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113702561A (zh) | 2021-11-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109470799B (zh) | Fmoc-Arg(Pbf)-OH的纯度及杂质定位检测方法 | |
| Ide et al. | New-generation bar adsorptive microextraction (BAμE) devices for a better eco-user-friendly analytical approach–Application for the determination of antidepressant pharmaceuticals in biological fluids | |
| CN110441449A (zh) | 盐酸法舒地尔原料或注射剂中有关物质的检测方法 | |
| CN113358804A (zh) | 一种测定艾曲泊帕乙醇胺中基因毒性杂质亚硝酸盐的离子色谱分析方法 | |
| CN113702561B (zh) | 一种手性多肽类药物非对映异构体杂质的检测方法 | |
| CN101685084B (zh) | 一种采用液相色谱法测定溴甲纳曲酮及其杂质的方法 | |
| CN110687229A (zh) | 一种双氯芬酸钠原料及其制剂中有关物质的分析方法 | |
| CN104678026B (zh) | 一种测定有机药物中四丁基溴化铵含量的方法 | |
| da Silva Gonçalves et al. | Development and validation of a fast HPLC method for methyldopa enantiomers using superficially porous particle based macrocyclic glycopeptide stationary phase | |
| CN101929985A (zh) | 一种用高效液相色谱法测定阿托伐他汀钙有关物质的方法 | |
| CN109900830A (zh) | 采用hplc分离测定塞来昔布中磺酰胺类杂质的方法及应用 | |
| CN107515255A (zh) | 利用高效液相色谱仪测定达格列净及其有关物质的方法 | |
| CN104007185B (zh) | 一种检测扎那米韦及含扎那米韦制剂中杂质的hplc测定方法 | |
| CN109239253B (zh) | 一种阿巴卡韦的杂质的高效液相检测方法 | |
| CN110927278A (zh) | 改进的盐酸咪达普利有关物质的分离方法 | |
| Scalia et al. | Determination of free bile acids in pharmaceutical preparations by packed column supercritical fluid chromatography | |
| CN104483400B (zh) | 一种用液相色谱法分离测定奥拉西坦及其中间体的方法 | |
| CN109265496B (zh) | 一种氨基糖苷类化合物的合成方法 | |
| CN113624898A (zh) | 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法 | |
| CN102375044B (zh) | 一种盐酸苯达莫司汀中间体z6有关物质的分析方法 | |
| Chang et al. | A Simple and Rapid High Performance Liquid Chromatographic Method with Fluorescence Detection for the Estimation of Amikacin in Plasma‐Application to Preclinical Pharmacokinetics | |
| CN109406685B (zh) | 一种分离卡非佐米和其异构体的高效液相色谱方法 | |
| CN109387594B (zh) | 一种分离和分析贝达喹啉光学异构体的方法 | |
| CN117871704A (zh) | 一种吡仑帕奈中间体有关物质的检测方法 | |
| CN107290453B (zh) | 盐酸帕洛诺司琼合成中间产物的hplc分析方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |