CN113662913A - 局部组合物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及局部组合物及其使用方法。本发明大体上涉及组合物及其使用方法。本发明的第一方面包含组合物，其包含第一增粘剂；至少一种多元醇；至少一种缓冲剂；至少一种防腐剂；第二增粘剂；至少一种有机溶剂；至少一种保湿剂；至少一种活性药物成分；和水，其中将所述组合物缓冲到大约3至大约11的pH。

Description

局部组合物及其使用方法

本申请是国际申请日为2014年2月28日的发明名称为“局部组合物及其使用方法”的PCT/US2014/019536号发明专利申请的分案申请，原申请进入中国国家阶段获得的国家申请号为201480023840.8。

相关申请

本申请要求2013年2月28日提交的美国临时申请序号No. 61/770,615的权益和优先权，其公开内容全文经此引用并入本文。

领域

本发明大体上涉及组合物及其使用方法。

背景

用各种药物组合物可局部治疗皮肤病。

本发明通过提供局部组合物和使用该局部组合物的方法解决本领域中先前的缺点。

概述

本发明的第一方面包含一种组合物，其包含第一增粘剂；至少一种多元醇；至少一种缓冲剂；至少一种防腐剂；第二增粘剂；至少一种有机溶剂；至少一种保湿剂；至少一种活性药物成分；和水，其中将所述组合物缓冲到大约3至大约11的pH。在一些实施方案中，所述组合物的pH可以为大约3至大约8。所述组合物是美观优雅的。

本发明的第二方面包含一种组合物，其包含以所述组合物的大约1重量%至大约30重量%的量存在的至少一种多元醇；以所述组合物的大约0.1重量%至大约5重量%的量存在的至少一种增粘剂；以所述组合物的大约70重量%至大约99重量%的量存在的水；以所述组合物的大约0.01重量%至大约2重量%的量存在的至少一种缓冲剂；和以所述组合物的大约0.01重量%至大约1重量%的量存在的至少一种防腐剂；其中将所述组合物缓冲到大约3至大约8的pH。所述组合物是美观优雅的。

本发明的另一方面包含一种药盒，其包含第一组合物和第二组合物，第一组合物包含以所述组合物的大约1重量%至大约30重量%的量存在的至少一种多元醇；以所述组合物的大约0.1重量%至大约5重量%的量存在的至少一种增粘剂；和以所述组合物的大约70重量%至大约99重量%的量存在的水；其中第二组合物是无水的。所述组合物是美观优雅的。

本发明的另一方面包含一种提高来自含有释放一氧化氮的活性药物成分的无水局部凝胶的一氧化氮释放的方法，其包括：使所述无水局部凝胶与具有大约4至大约6的pH的本发明的第一组合物（例如本发明的水凝胶）接触以提供合并的组合物。在一些实施方案中，可以将所述合并的组合物施加到对象的皮肤上。所述合并的组合物是美观优雅的。所述释放一氧化氮的活性药物成分可以是二醇二氮烯鎓（diazeniumdiolate）改性的大分子。

本发明的另一方面包含一种药物组合物，其包含：含湿敏活性药物成分的无水局部凝胶；和包含用于降低无水局部凝胶的pH的手段（means）的本发明的第一组合物（例如本发明的水凝胶）。所述湿敏活性药物成分可以是释放一氧化氮的活性药物成分且所述释放一氧化氮的活性药物成分可以是二醇二氮烯鎓改性的聚硅氧烷分子。

本发明的另一方面包含一种治疗寻常痤疮的方法，其包括将本发明的组合物局部施加到对象的皮肤上。可以施加治疗有效量的所述组合物。

本发明的另一方面包含一种减轻对象的炎性和/或非炎性损伤的方法，其包括将本发明的组合物局部施加到对象的皮肤上。可以施加治疗有效量的所述组合物。在一些实施方案中，所述组合物可以以所述组合物的大约0.5重量%至大约10重量%的量包含释放一氧化氮的活性药物成分。所述组合物可以储存和/或释放所述组合物的大约0.05重量%至大约3重量%的量的一氧化氮。与在相同时期内没有施加本发明的组合物的对象相比所述方法可以在指定时期内将炎性和/或非炎性损伤减轻大约10%或更多。在一些实施方案中，与没有施加包含释放一氧化氮的活性药物成分的组合物的对象相比所述方法可以在相同时期内减轻对象的炎性和/或非炎性损伤。所述对象可以在12周或更短时间内，在一些实施方案中在8周或更短时间内，和在另一些实施方案中在4周或更短时间内看出炎性和/或非炎性损伤的减轻。

本发明的另一方面包含一种降低对象的痤疮丙酸杆菌计数的方法，其包括将本发明的组合物局部施加到对象的皮肤上。可以施加治疗有效量的所述组合物。在一些实施方案中，所述组合物可以以所述组合物的大约0.5重量%至大约10重量%的量包含释放一氧化氮的活性药物成分。所述组合物可以储存和/或释放组合物的大约0.05重量%至大约3重量%的量的一氧化氮。与在相同时期内没有施加本发明的组合物的对象相比所述方法可以在指定时期内将痤疮丙酸杆菌计数降低大约10%或更多。在一些实施方案中，与没有施加包含释放一氧化氮的活性药物成分的组合物的对象相比所述方法可以在相同时期内降低对象的痤疮丙酸杆菌计数。所述对象可以在12周或更短时间内，在一些实施方案中在8周或更短时间内，和在另一些实施方案中在4周或更短时间内看出痤疮丙酸杆菌计数的降低。

现在参照本文中描述的另一些实施方案更详细描述本发明的上述和其它方面。应该认识到，本发明可以以不同形式具体实施并且不应被视为限于本文所述的实施方案。相反，提供这些实施方案以使本公开充分完全并向本领域技术人员充分传达本发明的范围。

附图简述

图1显示Nitricil™ NVN1局部凝胶浓度、水凝胶pH和水凝胶/Nitricil™ NVN1局部凝胶比率对混合物pH的影响的图。

图2显示在与未缓冲或缓冲的（0.1%柠檬酸）水凝胶（pH 4）混合时Nitricil™NVN1局部凝胶的体外pH测定图。

图3显示未缓冲或缓冲的pH 4水凝胶和8% w/w Nitricil™ NVN1局部凝胶的混合物的皮肤表面pH测定图。

图4显示Nitricil™ NVN1局部凝胶浓度和水凝胶比率对C_max的影响的图。

图5显示Nitricil™ NVN1局部凝胶浓度和水凝胶比率对累积一氧化氮（NO）释放的影响的图。

图6显示相对于Nitricil™ NVN1局部凝胶浓度，未缓冲的水凝胶pH和比率对混合物pH的影响的图。

图7显示2% Nitricil™ NVN1凝胶制剂随时间经过的体外一氧化氮释放曲线。

图8显示与pH 4的水凝胶混合后2%、6%和12% Nitricil™ NVN1凝胶制剂随时间经过的体外一氧化氮释放曲线。

图9显示基于协方差分析（ANCOVA）的随时间经过的痤疮丙酸杆菌计数（log/cm²）变化图。

图10显示在符合方案人群中非炎性损伤随时间经过的平均百分比降低的图。

图11显示在符合方案人群中炎性损伤随时间经过的平均百分比降低的图。

图12显示无水凝胶的2% Nitricil™ NVN1凝胶和含水凝胶的1% Nitricil™NVN1凝胶（凝胶/水凝胶比为1:1）的累积一氧化氮释放图。

详述

现在在下面更充分描述本发明。但是，本发明可以以不同形式具体实施并且不应被视为限于本文所述的实施方案。相反，提供这些实施方案以使本公开充分完全并向本领域技术人员充分传达本发明的范围。

本文中的发明描述中所用的术语仅用于描述具体实施方案且无意限制本发明。除非上下文清楚地另行指明，发明描述和所附权利要求书中所用的单数形式“一”和“该”也旨在包括复数形式。

除非另行指明，本文所用的所有术语（包括技术和科学术语）具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。要进一步理解，术语，如常用词典中定义的那些，应被解释为具有与它们在本申请上下文和相关领域中的含义相符的含义并且不应以理想化或过于正式的意义解释，除非本文中明确地如此定义。本文中的发明描述中所用的术语仅用于描述具体实施方案且无意限制本发明。本文中提到的所有出版物、专利申请、专利和其它参考资料全文经此引用并入本文。在术语冲突的情况下，以本说明书为准。

本文所用的“和/或”也是指并包括一个或多个相关列举项的任何和所有可能的组合，以及在以或者（“或”）解释时不包括组合。

除非文中另行指明，本文描述的本发明的各种特征特别意在以任何组合使用。此外，本发明还预计，在本发明的一些实施方案中，可以排除或省略本文所述的任何特征或特征组合。例如，如果说明书指出复合物包含组分A、B和C，特别预计可以省略和放弃A、B或C任一项或其组合。

本文所用的连接词“基本由...构成”（和语法变形）应被解释为包括所列材料或步骤和要求保护的发明的“不实质影响基本和新颖特征的那些”。参见In re Herz, 537 F.2d549, 551-52, 190 U.S.P.Q. 461, 463 (CCPA 1976)（着重号为原文所有）；也参见MPEP §2111.03。因此，本文所用的术语“基本由...构成”不应被解释为等于“包含”。

本文所用的术语“大约”在表示可测量值，如量或浓度等时，意在表示规定值的最多± 20%，例如但不限于规定值的± 10%、± 5%、± 1%、± 0.5%或甚至± 0.1%的变化以及该规定值。例如，“大约X”在X是可测量值时意在包括X以及X的± 20%、± 10%、± 5%、±1%、± 0.5%或甚至± 0.1%的变化。本文中为可测量值提供的范围可包括其中的任何其它范围和/或单个值。

根据本发明的一些实施方案，本文提供了局部组合物。本发明的组合物可包含至少两个部分。在一些实施方案中，本发明的组合物包含含第一组合物的第一部分和含第二组合物的第二部分。本发明的组合物的第二部分可包含释放一氧化氮的活性药物成分（释放NO的API）。在一些实施方案中，本发明的组合物可包含含水凝胶形式的第一组合物的第一部分。本文所用的“水凝胶”是指包含凝胶基质和水的亲水凝胶。在一些实施方案中，本发明的第一组合物包含至少一种多元醇、至少一种增粘剂和水。

在特定实施方案中，本发明的组合物包含、基本由或由本发明的第一组合物和第二组合物构成，其中第一组合物和第二组合物彼此相容以使它们可以混合和/或合并在一起以提供该组合物。本发明的组合物在一些实施方案中被称作合并的组合物。在另一些方面中，该合并的组合物适合局部施加到对象的皮肤上。

可存在于本发明的第一组合物中的示例性多元醇包括，但不限于，甘油、丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、三乙二醇、新戊二醇、丁二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、***糖醇、赤藓糖醇、HSH、异麦芽酮糖醇（isomalt）、乳糖醇、麦芽糖醇、甘露醇、木糖醇、苏糖醇、核糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇和它们的任何组合。在一些实施方案中，本发明的第一组合物包含甘油，例如但不限于，无水甘油。

多元醇可以以第一组合物的大约1重量%至大约30重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于第一组合物的按重量计大约1%至大约20%、大约1%至大约10%、或大约5%至大约15%的量存在于本发明的第一组合物中。在某些实施方案中，多元醇可以以第一组合物的按重量计大约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于本发明的第一组合物中。

可存在于本发明的第一组合物中的示例性增粘剂包括，但不限于，羧聚乙烯（carboxypolymethylene）；聚丙烯酸聚合物，如聚丙烯酸、聚丙烯酸酯聚合物、交联聚丙烯酸酯聚合物、交联聚丙烯酸及其混合物；纤维素醚，如羟烷基纤维素聚合物，如羟丙基甲基纤维素（HPMC）、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素及其混合物；甲基丙烯酸酯；聚乙烯基吡咯烷酮；交联聚乙烯基吡咯烷酮；聚乙烯基吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物；聚乙烯醇；聚环氧乙烷；聚乙二醇；聚乙烯基烷基醚-马来酸共聚物；羧基乙烯基聚合物；多糖；树胶，如海藻酸钠、角叉菜胶、黄原胶、金合欢树胶、***树胶、瓜尔胶、普鲁兰多糖、琼脂、甲壳质、壳聚糖、果胶、刺梧桐树胶、玉米醇溶蛋白、大麦醇溶蛋白、麦醇溶蛋白、刺槐豆胶、黄蓍胶及其混合物；蛋白质，如胶原、乳清分离蛋白、酪蛋白、乳蛋白、大豆蛋白、明胶及其混合物；淀粉，如麦芽糊精、直链淀粉、高直链淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉、大米淀粉、木薯淀粉、豌豆淀粉、甘薯淀粉、大麦淀粉、小麦淀粉、糯玉米淀粉、改性淀粉（例如羟丙基化高直链淀粉）、糊精、果聚糖、elsinan、麸质及其混合物；膨润土；硬脂酸钙；长角豆胶（ceratonia）；胶体二氧化硅；糊精；羟丙甲纤维素；聚卡波非；高岭土；皂石；山梨糖醇酐酯；蔗糖；芝麻油；黃蓍胶；海藻酸钾；聚维酮；羟基乙酸淀粉钠；磷脂类；和它们的任何组合。

在一些实施方案中，本发明的第一组合物包含羧聚乙烯，例如但不限于，以商品名Carbopol^®购自Wickliffe, Ohio的Lubrizol Corporation的那些。可存在于本发明的第一组合物中的示例性Carbopol^®聚合物包括，但不限于，Carbopol^® 974P NF聚合物，如A型、B型和/或C型均聚物；Carbopol^® Ultrez 10、20、21 NF聚合物；Carbopol^® 971P NF聚合物；Carbopol® 980 Homopolymer Type C聚合物、Carbopol® 980 NF聚合物、Carpobol^®980P聚合物、Carbopol^® ETD 2020 NF聚合物、Carbopol® 71 G NF聚合物、Carbopol^®981P NF聚合物、Carbopol^® 970P NF聚合物、Carbopol^® 981P NF聚合物、Carbopol^® 5984PNF聚合物、Carbopol^® 934P NF聚合物、Carbopol^® 940P NF聚合物、Carbopol^® 941P NF聚合物、Carbopol^® 13242 NF聚合物、 Carbopol^® AA-1 USP NF聚合物、Carbopol^® TR1 NF聚合物、Carbopol^® TR2 NF聚合物、Lubrizol Aqua CC聚合物和SF-2聚合物和它们的任何组合。

在一些实施方案中，本发明的第一组合物中存在的增粘剂可以是包含酸性基团，例如但不限于羧酸基的聚合物。该聚合物的酸性基团在本发明的第一组合物中可部分中和。在某些实施方案中，本发明的第一组合物中存在的增粘剂可以是羧聚乙烯。在一些实施方案中，本发明的第一组合物中存在的羧聚乙烯可部分中和。本发明的第一组合物可包含羧聚乙烯并具有大约3至大约7、大约3.5至大约6.5、大约3.5至大约6、或大约4至大约6的pH。在某些实施方案中，本发明的第一组合物可包含羧聚乙烯并具有大约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5或7的pH。

在本发明的第一组合物中可存在增粘剂。在一些实施方案中，本发明的组合物可包含至少两种可相同或不同的增粘剂。在一些实施方案中，第一增粘剂可以以第一组合物的大约0.01重量%至大约5重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第一组合物的按重量计大约0.05%至大约3%或大约0.1%至大约1.5%的量存在于本发明的第一组合物中。在某些实施方案中，第一增粘剂以第一组合物的按重量计大约0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%或5%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于本发明的第一组合物中。

水可以以第一组合物的大约70重量%至大约99重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第一组合物的按重量计大约75%至大约95%或大约80%至大约90%的量存在于本发明的第一组合物中。在某些实施方案中，水以第一组合物的按重量计大约70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于本发明的第一组合物中。

在一些实施方案中，本发明的第一组合物包含、基本由或由以第一组合物的大约1重量%至大约30重量%的量存在的至少一种多元醇、以第一组合物的大约0.1重量%至大约5重量%的量存在的至少一种增粘剂和以第一组合物的大约70重量%至大约99重量%的量存在的水构成。在某些实施方案中，增粘剂可以是羧聚乙烯。第一组合物可以是水凝胶。

本发明的第一组合物可包含防腐剂。防腐剂可以以第一组合物的大约0.01重量%至大约1重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第一组合物的按重量计大约0.01%至大约0.1%、大约0.05%至大约1%，或大约0.1%至大约1%的量存在于本发明的第一组合物中。在某些实施方案中，防腐剂以第一组合物的按重量计大约0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%或1%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于本发明的第一组合物中。可存在于本发明的第一组合物中的示例性防腐剂可包括，但不限于，山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、甲基氯异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、双咪唑烷基脲（diazolidinylurea）、氯丁醇、三氯生、苄索氯铵、对羟基苯甲酸酯、洗必泰、二葡糖酸盐、十六烷基三甲基溴化铵、醇、苯扎氯铵、硼酸、溴硝醇、对羟基苯甲酸丁酯、丁烯乙酸钙、氯化钙、乳酸钙、二氧化碳、阳离子剂（cationic）和膨润土、溴棕三甲铵、氯化十六烷基吡啶、洗必泰、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲苯酚、一水合柠檬酸、甲酚、二甲醚、对羟基苯甲酸乙酯、甘油、海克替啶、咪脲、异丙醇、乳酸、硫代甘油、喷替酸（pentetic acid）、酚、苯氧基乙醇、苯基乙基醇、醋酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、苯甲酸钾、焦亚硫酸钾、山梨酸钾、丙酸、没食子酸丙酯、丙二醇、乙酸钠、苯甲酸钠、硼酸钠、乳酸钠、亚硫酸钠、丙酸钠、焦亚硫酸钠、木糖醇、二氧化硫、二氧化碳和它们的任何组合。

本发明的第一组合物可包含中和剂。中和剂可以以足以提供所需pH，例如但不限于，大约3至大约11或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，大约3至大约8、大约4至大约7、或大约6至大约7、或大约6至11的pH的量存在于本发明的第一组合物中。

在一些实施方案中，中和剂可以以足以为第一组合物提供大约3至大约8的pH的量存在于第一组合物中。

在某些实施方案中，中和剂可以以足以在第一组合物和第二部分（例如第二组合物）合并后和/或在第一组合物和/或包含第一组合物和第二部分的组合物施加到对象的皮肤上后为本发明的组合物提供所需pH的量存在于本发明的第一组合物中。中和剂可以以足以为本发明的组合物（例如包含第一组合物和第二组合物的组合物）提供所需pH，例如但不限于大约3至大约11或其中的任何范围和/或单个值的pH的量存在于本发明的第一组合物中。

可以在本发明的组合物的第一部分和第二部分接触、合并和/或混合后在实现稳态pH后测定本发明的组合物的pH。或者或另外，可以在指定时期后，例如但不限于在大约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60分钟或更久后测定本发明的组合物的pH。可以在本发明的组合物的第一部分和第二部分接触、合并和/或混合后体外测量本发明的组合物的pH。或者或另外，可以在施加到对象上后测量本发明的组合物的pH，例如，可以在将本发明的组合物施加到对象的皮肤上后测量皮肤表面pH。

在一些实施方案中，中和剂调节第一组合物和/或本发明的组合物的pH。在本发明的某些实施方案中，中和剂以足以使第一组合物具有大约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或8或其中的任何范围和/或单个值的pH的量存在于本发明的第一组合物中。在本发明的一些实施方案中，中和剂以足以使该组合物具有大约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5或11或其中的任何范围和/或单个值的pH的量存在于本发明的组合物中。

可存在于本发明的第一组合物中的示例性中和剂可包括，但不限于，碱，如氢氧化钠、氢氧化钾及其混合物；酸，如盐酸、柠檬酸、乳酸、羟基乙酸、乙酸及其混合物；碳酸钠；三乙醇胺；氨丁三醇；氨基甲基丙醇；三异丙醇胺；氨基甲基丙醇；四羟丙基乙二胺； EDTA四钠；羟甲基甘氨酸钠（suttocide A）；和它们的任何组合。

中和剂可以以第一组合物的大约0.01重量%至大约1重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第一组合物的按重量计大约0.01%至大约0.1%、大约0.05%至大约1%，或大约0.1%至大约1%的量存在于本发明的第一组合物中。在某些实施方案中，中和剂可以以第一组合物的按重量计大约0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%或1%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于本发明的第一组合物中。

本发明的第一组合物可以是未缓冲或缓冲的。在一些实施方案中，本发明的第一组合物可以是未缓冲的。在另一些实施方案中，本发明的第一组合物可以是缓冲的。可存在于本发明的第一组合物中的示例性缓冲液包括，但不限于，乙酸/乙酸盐缓冲液；盐酸/柠檬酸盐缓冲液；柠檬磷酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液；柠檬酸/柠檬酸盐缓冲液；乳酸缓冲液；酒石酸缓冲液；苹果酸缓冲液；甘氨酸/HCl缓冲液；盐水缓冲液，如磷酸盐缓冲盐水（PBS）、Tris-缓冲盐水（TBS）、Tris-HCl、NaCl、Tween缓冲盐水（TNT）、磷酸盐缓冲盐水、Triton X-100（PBT）及其混合物；二甲胂酸盐缓冲液；巴比妥缓冲液；tris缓冲液；和它们的任何组合。

在某些实施方案中，本发明的第一组合物可包含缓冲剂。示例性缓冲剂包括，但不限于，柠檬酸、乙酸、乳酸、硼酸、琥珀酸、苹果酸和它们的任何组合。缓冲剂可以以第一组合物的大约0.01重量%至大约2重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第一组合物的按重量计大约0.01%至大约0.1%、大约0.05%至大约1%、大约0.1%至大约0.5%、或大约0.1%至大约2%的量存在于本发明的第一组合物中。在某些实施方案中，缓冲剂以第一组合物的按重量计大约0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%或2%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于本发明的第一组合物中。

在一些实施方案中，缓冲液（buffer）和/或缓冲剂（buffering agent）以足以使第一组合物具有大约3至大约8或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，大约3至大约6、大约3至大约5、大约4至大约7、大约5至大约7、或大约6至大约7的pH的量存在于本发明的第一组合物中。在本发明的某些实施方案中，缓冲液和/或缓冲剂可以以足以使第一组合物具有大约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或8或其中的任何范围和/或单个值的pH的量存在于本发明的第一组合物中。

在一些实施方案中，缓冲液和/或缓冲剂可以以足以为包含第一组合物和第二部分（例如第二组合物）的本发明的组合物提供所需pH的量存在于本发明的第一组合物中。例如，本发明的组合物可包含第二组合物和含缓冲液和/或缓冲剂的第一组合物，其中该缓冲液和/或缓冲剂以足以为该组合物提供大约3至大约11，例如但不限于，大约3至大约8、大约7至大约11、大约8至大约10、大约3至大约5、大约4至大约7、大约5至大约7、或大约6至大约7的pH的量存在。在本发明的某些实施方案中，缓冲液和/或缓冲剂可以以足以使该组合物具有大约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5或11或其中的任何范围和/或单个值的pH的量存在于本发明的第一组合物中。在一些实施方案中，缓冲液和/或缓冲剂可以以在将包含第一组合物和第二部分的本发明的组合物施加到对象的皮肤上后足以提供所需pH的量存在于本发明的第一组合物中。

在一些实施方案中，缓冲液、缓冲剂和/或中和剂可以以足以为本发明的组合物和/或本发明的第一组合物提供所需pH的量存在于本发明的第一组合物中。

在某些实施方案中，本发明的第一组合物包含以第一组合物的大约1重量%至大约30重量%的量存在的至少一种多元醇、以第一组合物的大约0.1重量%至大约5重量%的量存在的至少一种增粘剂、以第一组合物的大约70重量%至大约99重量%的量存在的水和第一组合物的大约0.01重量%至大约1重量%的量的至少一种防腐剂。可以将第一组合物缓冲至具有大约3至大约8、大约3至大约6、或大约6至大约8的pH。第一组合物可以是水凝胶。

在一些实施方案中，本发明的第一组合物可包含、基本由或由第一组合物的大约1重量%至大约30重量%的量的多元醇、第一组合物的大约0.01重量%至大约5重量%的量的增粘剂、第一组合物的大约70重量%至大约99重量%的量的水、任选第一组合物的大约0.001重量%至大约2重量%的量的缓冲剂、任选第一组合物的大约0.001重量%至大约1重量%的量的防腐剂和任选第一组合物的大约0.001重量%至大约1重量%的量的中和剂构成。第一组合物可具有大约3至大约5或大约5至大约7的pH。在某些实施方案中，第一组合物中存在的增粘剂可以是羧聚乙烯。在一些实施方案中，第一组合物是美观优雅的。第一组合物可以是水凝胶。

本领域技术人员根据本公开会认识到，本发明的第一组合物的性质可以赋予本发明的组合物和/或为本发明的组合物提供相同和/或类似的性质。例如，在一些实施方案中，本发明的第一组合物可包含以足以为第一组合物和/或本发明的组合物提供抗微生物活性的量存在的防腐剂。因此，在一些实施方案中，第一组合物和/或本发明的组合物可以是抗微生物的。

本发明的组合物和/或第一组合物可具有大约5,000 cP至大约25,000 cP或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，大约5,000 cP至大约20,000 cP或大约7,000 cP至大约15,000 cP的粘度。在某些实施方案中，本发明的组合物和/或第一组合物可具有大约5,000、5,500、6,000、6,500、7,000、7,500、8,000、8,500、9,000、9,500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、20,500、21,000、21,500、22,000、22,500、23,000、23,500、24,000、24,500或25,000 cP或其中的任何范围和/或单个值的粘度。

在一些实施方案中，本发明的组合物可包含具有能与该组合物的第二部分混合和/或合并的粘度的本发明的第一组合物。例如，本发明的第一组合物可具有适合和/或足以在人手中和/或在对象的皮肤上与本发明的组合物的第二部分混合和/或合并的粘度。粘度太低的第一组合物可能在混合和/或合并之前从对象的皮肤上流走。粘度太高的第一组合物可能难以与本发明的组合物的第二部分混合和/或难以在对象的皮肤上涂抹和/或施加合并的组合物。

本发明的组合物和/或第一组合物可包含活性药物成分（API）。在本发明的组合物和/或第一组合物中可包括任何合适的API或APIs组合。APIs的实例包括，但不限于，抗微生物剂、抗痤疮剂、抗炎剂、止痛剂、麻醉剂、抗组胺剂、防腐剂、免疫抑制剂、抗出血剂、血管扩张剂、创伤愈合剂、抗生物被膜剂和它们的任何组合。示例性的APIs包括，但不限于，国际申请公开No. WO 2013/006608中描述的那些，其全文经此引用并入本文。

在一些实施方案中，本发明的第一组合物可能不含API。在某些实施方案中，本发明的第一组合物不含释放一氧化氮（NO）的API。在一些实施方案中，本发明的第一组合物可能包含至少一种API，但第一组合物可能不含释放NO的API。

在某些实施方案中，本发明的第一组合物可包含API。第一组合物中的API可以是湿敏API。在一些实施方案中，本发明的第一组合物包含API（例如湿敏API）且本发明的组合物的第二部分和/或组合物包含第二API，其中第一组合物中的API和第二部分和/或组合物中的第二API在本发明的组合物中可能不化学相容和/或稳定。例如，第一组合物中的API和第二部分和/或组合物中的第二API一起储存在本发明的组合物中时可能不化学相容和/或稳定。

本发明的第一组合物可能适合与一种或多种，例如但不限于，2、3、4或更多种可能相同和/或不同的组合物一起使用和/或组合。在一些实施方案中，本发明的第一组合物可能适合与一种或多种药物组合物一起使用和/或组合。本发明的第一组合物可用作药物递送体系和/或药物释放体系。例如，本发明的第一组合物可配制（configured）成在本发明的第一组合物（例如本发明的水凝胶）和第二组合物接触时调节第二组合物中的API的释放。或者或另外，本发明的第一组合物可配制（configured）成在本发明的第一组合物（例如本发明的水凝胶）和第二组合物接触时调节第二组合物的pH。在一些实施方案中，本发明的第一组合物可配制（configured）成调节包含释放一氧化氮（NO）的API的第二组合物的pH和/或来自第二组合物中的释放NO的API的一氧化氮释放。

本文所用的“调节”及其语法变形是指与不存在本发明的第一组合物时第二组合物的pH和/或第二组合物中的API的释放相比提高或降低第二组合物的pH和/或第二组合物中的API的释放。本文所用的术语“提高”和类似的术语是指与不存在本发明的第一组合物时的pH和/或释放相比pH和/或释放提高至少大约5%、10%、25%、50%、75%、100%、150%、200%、300%、400%、500%或更多。本文所用的术语“降低”和类似术语是指与不存在本发明的第一组合物时的pH和/或释放相比pH和/或释放降低至少大约5%、10%、25%、35%、50%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或更多。

本文中关于本发明的第一组合物（例如本发明的水凝胶）和第二部分和/或组合物使用的“接触”是指第一组合物中的至少一种组分直接和/或间接暴露于第二部分和/或组合物。可以通过任何手段，例如但不限于，通过混合、搅拌、掺合、分散、研磨、均化、合并、施加到相同范围或区域等实现第一组合物和第二部分和/或组合物的接触，并在一些实施方案中可任选形成本发明的合并的组合物。例如，在局部施加到对象上之前、之中和/或之后，第一组合物可以与第二组合物直接接触，例如但不限于，通过混合和/或合并第一组合物和第二组合物以形成本发明的合并的组合物。第一组合物和第二组合物的直接接触可通过将一层或多层第二组合物施加到对象上、然后将一层或多层第一组合物施加到对象上或反过来实现，以形成本发明的合并的组合物。可通过将第二组合物施加到对象上、然后借助基底，例如但不限于，布、绷带、纱布等将第一组合物施加到对象上或反过来实现间接接触，以任选形成本发明的合并的组合物。

根据本发明的一些实施方案，在本发明的第一组合物和第二组合物接触后，本发明的第一组合物可配制（configured）成调节第二组合物中存在的API，例如但不限于，释放NO的API的释放。在一些实施方案中，本发明的第一组合物中存在的水和/或质子可接触第二组合物以调节第二组合物中存在的API，例如但不限于，释放NO的API的释放。或者或另外，在一些实施方案中，本发明的第一组合物与第二组合物的接触可调节第二组合物的pH，由此调节第二组合物中存在的API，例如但不限于，释放NO的API的释放。在一些实施方案中，本发明的第一组合物配制（configured）成向第二组合物供应水和/或质子和/或配制（configured）成调节第二组合物的pH。

本发明的发明人出乎意料地发现，本发明的实施方案可显著提高从包含释放NO的API的组合物中释放的一氧化氮的量和/或提供从包含释放NO的API的组合物中连续释放一氧化氮。例如，这可见于图12，其比较无本发明的第一组合物的组合物（即2% Nitricil™NVN1凝胶）和包含本发明的第一组合物的本发明的组合物（即1% Nitricil™ NVN1 凝胶）。2% Nitricil™ NVN1凝胶和含释放NO的API的1% Nitricil™ NVN1凝胶部分含有相同量的释放NO的API。图12证实1% Nitricil™ NVN1凝胶与2% Nitricil™ NVN1 凝胶相比具有明显更高的一氧化氮释放量以及提供一氧化氮经一段时间的连续释放。

尽管不希望受制于任何特定理论，但相信，包含本发明的第一组合物和释放NO的API的本发明的组合物可提供可实现从该组合物中高释放一氧化氮和/或从该组合物中连续释放一氧化氮的给质子体系。尽管不希望受制于任何特定理论，但该给质子体系可以是可由本发明的组合物（例如，包含本发明的第一组合物和如本文所述的第二组合物的组合物）和/或本发明的第一组合物（例如，本发明的水凝胶）形成的酸。本发明的组合物可提供和/或允许质子非常接近释放NO的API中的NO供体，由此使一氧化氮释放。本发明的组合物可提供和/或允许质子长时间接近NO供体以提供大约1个或更多个小时，例如但不限于2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个或更多个小时的连续NO释放。

可由本发明的第一组合物提供给质子体系。例如，可由包含酸性聚合物，例如但不限于羧聚乙烯的本发明的第一组合物提供给质子体系，其中该酸性聚合物部分中和且第一组合物具有大约3至大约8或其中的任何范围，例如但不限于，大约3至大约6、大约3至大约6、或大约5至大约7的pH。尽管不希望受制于任何特定理论，但该部分中和的酸性聚合物可以为第一组合物提供具有螺旋结构的聚合凝胶基质。该聚合凝胶基质的螺旋结构可以在质子接近本发明的组合物中的NO供体时提供和/或给出质子且该螺旋结构可防止一些质子（例如内部质子）与该组合物中的NO供体反应。随着聚合凝胶基质展开（例如，随着该组合物的pH变得更碱性和/或该聚合凝胶基质被中和），额外的质子（例如被保护的质子）可能接近NO供体，这可实现经更长时间从该组合物中释放一氧化氮和/或从该组合物中释放更高量的一氧化氮。

在特定实施方案中，本发明的第一组合物调节第二组合物的pH以在第一和第二组合物接触和/或施加到对象的皮肤上时，第二组合物和/或合并的组合物（即本发明的组合物）的pH小于大约11，在一些实施方案中小于大约10，在某些实施方案中小于大约8.5，在另一些实施方案中小于大约7，在再一些实施方案中为大约6至大约8。

在一些实施方案中，在将合并的组合物施加到对象的皮肤上后，本发明的合并的组合物的pH改变。在特定实施方案中，在将合并的组合物施加到对象的皮肤上后，皮肤的缓冲能力降低本发明的合并的组合物的pH。在一些实施方案中，在将合并的组合物施加到对象的皮肤上后本发明的合并的组合物的pH小于无第一组合物时施加到皮肤上的第二组合物的pH。在其中第二组合物中的API的释放动力学随pH改变的实施方案中，可以利用皮肤的缓冲能力调节释放，同时改进合并的组合物在合并后和在施加前的稳定性。因此，例如，包括释放一氧化氮的大分子的第二组合物的pH在混合前大于10，在混合后为9，在施加到皮肤上后为8。随着pH的每次降低，可以提高来自该大分子的一氧化氮释放。相应地，利用不断改变的pH和皮肤的缓冲能力可以提高本发明的合并的组合物的作用时间（例如混合和施加时间）。

在一些实施方案中，本发明的组合物可包含第二组合物且第二组合物可以是无水组合物。本文所用的“无水”是指在其制备时不将水直接添加到第二组合物中。但是，本领域技术人员会认识到，第二组合物和/或第二组合物中的一种或多种成分在第二组合物的制备、储存和/或使用过程中的任何时候可能物理和/或化学吸收水（即水间接添加到第二组合物中）。在一些实施方案中，术语“无水”是指第二组合物具有小于第二组合物的5重量%或其中的任何范围和/或单个值的水含量。第二组合物可具有第二组合物的按重量计小于5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1或0.5%或其中的任何范围的水含量。可通过本领域技术人员已知的方法，例如但不限于Karl Fischer滴定法测定水含量。在某些实施方案中，在与第二组合物接触时，本发明的组合物将水添加到第二组合物中和/或第二组合物从本发明的组合物中吸收水。

可以与本发明的第一组合物一起使用和/或接触的示例性的第二组合物包括，但不限于，国际申请公开No. WO 2013/006608中描述的那些，其全文经此引用并入本文。可以与本发明的第一组合物一起使用和/或接触以形成本发明的组合物（例如本发明的合并的组合物）的示例性的第二组合物可包含一种无水组合物，其包含以第二组合物的大约0.5重量%至大约30重量%的量存在于第二组合物中的至少一种增粘剂、以第二组合物的大约50重量%至大约90重量%的量存在于第二组合物中的至少一种有机溶剂和以第二组合物的大约2重量%至大约20重量%的量存在于第二组合物中的至少一种保湿剂。第二组合物可进一步包含至少一种拒水剂（water repelling agent），也被称作拒水剂（water repellant）。在某些实施方案中，第二组合物可包含表11中给出的组成。

用于第二组合物的示例性增粘剂包括，但不限于，羧甲基纤维素和丙烯酸的共聚物、N-乙烯基吡咯烷酮、聚烷撑二醇（例如聚(乙二醇)）、聚氧化烯（例如聚氧乙烯）、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚硅氧烷、聚(乙酸乙烯酯)、纤维素、衍生化纤维素、藻酸盐、它们的共聚物和它们的共混物。用于第二组合物的粘度剂的具体实例是羟丙基纤维素，如Klucel®羟丙基纤维素（例如Klucel^® MF Pharm等级）。增粘剂可以以第二组合物的大约0.1重量%至大约30重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第二组合物的按重量计大约0.5%至大约20%、大约1%至大约10%、或大约1%至大约5%的量存在于第二组合物中。在某些实施方案中，增粘剂可以以第二组合物的按重量计大约0.1%、0.25%、0.5%、0.75%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于第二组合物中。

用于第二组合物的示例性有机溶剂包括，但不限于，丙酮、甲基醇、乙醇、异丙醇、丁基醇、乙酸乙酯、异山梨醇二甲醚、丙二醇、甘油、乙二醇、聚乙二醇、二乙二醇单乙基醚或其混合物。在本发明的一些实施方案中，第二组合物中的有机溶剂可以是乙醇和/或异丙醇。有机溶剂可以以第二组合物的按重量计大约50%至大约90%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第二组合物的按重量计大约60%至大约90%、大约70%至大约90%、或大约75%至大约85%的量存在于第二组合物中。在某些实施方案中，有机溶剂可以以第二组合物的按重量计大约50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于第二组合物中。

用于第二组合物的示例性保湿剂包括，但不限于，二醇，如二乙二醇单乙基醚；甘油；糖多元醇，如山梨糖醇、木糖醇和麦芽糖醇；多元醇，如聚葡萄糖；quillaia、尿素及其共混物。在一些实施方案中，第二组合物中的保湿剂可包含烷撑二醇，例如己二醇。保湿剂可以以第二组合物的大约2重量%至大约20重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第二组合物的按重量计大约2%至大约15%、大约5%至大约15%、或大约15%至大约20%的量存在于第二组合物中。在某些实施方案中，保湿剂可以以第二组合物的按重量计大约2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于第二组合物中。

用于第二组合物的示例性拒水剂包括，但不限于，硅酮，如环甲基硅酮、二甲聚硅氧烷、西甲硅油、C26-28烷基二甲聚硅氧烷、C26-28烷基聚甲基硅氧烷、聚苯基倍半硅氧烷、三甲基甲硅烷氧基硅酸酯、和环五硅氧烷和二甲聚硅氧烷/乙烯基三甲基甲硅烷氧基硅酸酯的交联聚合物及其共混物。在一些实施方案中，第二组合物可包含环甲基硅酮。拒水剂可以以第二组合物的大约0.5重量%至大约15重量%或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于，第二组合物的按重量计大约0.5%至大约10%、大约1%至大约5%、或大约2%至大约5%的量存在于第二组合物中。在某些实施方案中，拒水剂可以以第二组合物的按重量计大约0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%或其中的任何范围和/或单个值的量存在于第二组合物中。

相应地，本发明的组合物可包含至少一种多元醇、第一增粘剂、至少一种防腐剂、至少一种缓冲剂、水、第二增粘剂、至少一种有机溶剂、至少一种保湿剂和任选拒水剂。

可以将本发明的组合物（例如本发明的第一组合物和第二组合物）缓冲到大约3至大约11，例如但不限于，大约3至大约9.5或大约3至大约8的pH。在一些实施方案中，本发明的组合物可具有9.5或更大的pH。在某些实施方案中，本发明的组合物包含至少一种API，例如但不限于，释放一氧化氮的活性药物成分。在一些实施方案中，本发明的组合物可包含含有释放一氧化氮的活性药物成分的第二组合物。

在一些实施方案中，本发明的组合物包含第二组合物，其中第二组合物包含湿敏API。第二组合物可以稳定储存湿敏API。在一些实施方案中，该湿敏API可包含释放NO的API，例如但不限于二醇二氮烯鎓改性的大分子。

本文所用的“释放一氧化氮的活性药物成分”和“释放NO的API”是指向对象的皮肤提供一氧化氮但不是气态一氧化氮的化合物或其它组合物。在一些实施方案中，释放NO的API包括释放一氧化氮的化合物，下文称作“释放NO的化合物”。释放NO的化合物包括至少一个NO供体，其是在某些条件下可释放一氧化氮的官能团。在一些实施方案中，释放NO的化合物的所述至少一个NO供体在与本发明的组合物接触时释放NO。在某些实施方案中，本发明的组合物调节从释放NO的化合物中释放的NO量和/或从释放NO的化合物中释放的NO速率。在一些实施方案中，本发明的组合物提高从释放NO的化合物中释放的NO量和/或从释放NO的化合物中释放的NO速率。

可以使用任何合适的释放NO的化合物。在一些实施方案中，该释放NO的化合物包括包含NO供体基团的小分子化合物。本文所用的“小分子化合物”被定义为具有小于500道尔顿的分子量的化合物并包括有机和/或无机小分子化合物。在一些实施方案中，该释放NO的化合物包括包含NO供体基团的大分子。“大分子”在本文中被定义为具有500道尔顿或更大的分子量的任何化合物。可以使用任何合适的大分子，包括交联或非交联聚合物、树枝状聚合物、金属化合物、有机金属化合物、无机基化合物和其它大分子支架。在一些实施方案中，该大分子具有大约0.1纳米至大约100微米的标称直径并可包含两个或更多个大分子的聚集体，由此该大分子结构进一步被NO供体基团改性。

在一些实施方案中，该释放NO的化合物包括二醇二氮烯鎓官能团作为NO供体。该二醇二氮烯鎓官能团可以在某些条件下，如在暴露在水中时产生一氧化氮。作为另一实例，在一些实施方案中，该释放NO的化合物包括亚硝基硫醇官能团作为NO供体。该NO供体可以在某些条件下，如在曝光时产生一氧化氮。其它NO供体基团的实例包括亚硝胺、羟基亚硝胺、羟基胺和羟基脲。在本文所述的第二组合物中也可以使用NO供体和/或释放NO的化合物的任何合适的组合。另外，可通过共价和/或非共价相互作用将NO供体并入小分子或大分子中或小分子或大分子上。

释放NO的大分子可以是释放NO的粒子形式，如美国申请公开No. 2009/0214618中描述的那些，其公开内容全文经此引用并入本文。释放NO的化合物的其它非限制性实例包括如美国专利公开Nos. 2006/0269620或2010/0331968中描述的释放NO的沸石；如美国专利申请公开Nos. 2010/0239512或2011/0052650中描述的释放NO的金属有机骨架（MOFs）；如名称为“Tunable Nitric Oxide-Releasing Macromolecules Having Multiple NitricOxide Donor Structures”的国际申请No. PCT/US2012/052350中描述的释放NO的多供体化合物；如美国公开No. 2009/0214618中描述的释放NO的树枝状聚合物或金属结构；如美国公开No. 2011/0086234中描述的释放一氧化氮的涂层；和如美国公开No. 2010/0098733中描述的化合物。这段中的各参考资料的公开内容全文经此引用并入本文。另外，可以如2012年1月20日提交的名称为“Temperature Controlled Sol-Gel Co-Condensation”的国际申请No. PCT/US2012/022048中所述制造释放NO的大分子，其公开内容全文经此引用并入本文。

例如，在本发明的一些实施方案中，释放一氧化氮的活性药物成分可包括载有NO的沉淀二氧化硅。所述载有NO的沉淀二氧化硅可以由一氧化氮供体改性的硅烷单体形成为共缩合硅氧烷网络。在本发明的一个实施方案中，一氧化氮供体是N-二醇二氮烯鎓。在本发明的一些实施方案中，该释放一氧化氮的活性药物成分可以包含、基本由或由包含二醇二氮烯鎓（例如N-二醇二氮烯鎓）的共缩合硅氧烷网络构成。

在一些实施方案中，可以通过预充（pre-charging）法由氨基烷氧基硅烷形成一氧化氮供体，并可以由包括烷氧基硅烷和该氨基烷氧基硅烷的硅烷混合物的缩合合成共缩合硅氧烷网络，以形成一氧化氮供体改性的共缩合硅氧烷网络。本文所用的“预充法”是指在与烷氧基硅烷共缩合之前用一氧化氮“预处理”或“预充”氨基烷氧基硅烷。在一些实施方案中，可通过化学方法实现一氧化氮的预充。在另一实施方案中，该“预充”法可用于制造被NO供体更密官能化的共缩合硅氧烷网络和材料。在本发明的一些实施方案中，该释放一氧化氮的活性药物成分可包含、基本由或由通过包含烷氧基硅烷和至少一种具有被二醇二氮烯鎓（例如N-二醇二氮烯鎓）取代的胺的氨基烷氧基硅烷的硅烷混合物的缩合合成的共缩合二氧化硅网络构成。

该共缩合硅氧烷网络可以是具有一致粒度的二氧化硅粒子、具有各种粒度的二氧化硅粒子集合、非晶二氧化硅、气相二氧化硅、纳米晶二氧化硅、陶瓷二氧化硅、胶体二氧化硅、二氧化硅涂层、二氧化硅膜、有机改性的二氧化硅、介孔二氧化硅、硅胶、生物活性玻璃，或二氧化硅的任何合适的形式或状态。

在一些实施方案中，烷氧基硅烷是具有式Si(OR)₄的四烷氧基硅烷，其中R是烷基。该R基团可以相同或不同。在一些实施方案中，选择原硅酸四甲酯（TMOS）或原硅酸四乙酯（TEOS）形式的四烷氧基硅烷。在一些实施方案中，氨基烷氧基硅烷具有式：R"-(NH-R')_n-Si(OR)₃，其中R是烷基，R'是亚烷基、支链亚烷基或亚芳烷基，n是1或2，且R"选自烷基、环烷基、芳基和烷基胺。

在一些实施方案中，氨基烷氧基硅烷可选自N-(6-氨基己基)氨基丙基三甲氧基硅烷（AHAP3）；N-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷（AEAP3）；(3-三甲氧基甲硅烷基丙基)二-亚乙基三胺（DET3）；(氨基乙基氨基甲基)苯乙基三甲氧基硅烷（AEMP3）；[3-(甲基氨基)丙基]三甲氧基硅烷（MAP3）；N-丁基氨基-丙基三甲氧基硅烷（n-BAP3）；叔丁基氨基-丙基三甲氧基硅烷（t-BAP3）；N-乙基氨基异丁基三甲氧基硅烷（EAiB3）；N-苯基氨基-丙基三甲氧基硅烷（PAP3）；和N-环己基氨基丙基三甲氧基硅烷（cHAP3）。

在一些实施方案中，氨基烷氧基硅烷具有式：NH[R'-Si(OR)₃]₂，其中R是烷基且R'是亚烷基。在一些实施方案中，氨基烷氧基硅烷可选自双(3-三乙氧基甲硅烷基丙基)胺、双-[3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基]胺和双-[(3-三甲氧基甲硅烷基)丙基]乙二胺。

在一些实施方案中，如本文中上文所述，将氨基烷氧基硅烷预充以供NO-释放且氨基被二醇二氮烯鎓取代。因此，在一些实施方案中，氨基烷氧基硅烷具有式：R"-N(NONO^-X⁺)-R'-Si(OR)₃，其中R是烷基，R'是亚烷基或亚芳烷基，R"是烷基或烷基胺，且X⁺是选自Na⁺、K⁺和Li⁺的阳离子。

可以改变硅氧烷网络的组成（例如氨基烷氧基硅烷的量或化学组成）和一氧化氮充入条件（例如溶剂和碱）以优化一氧化氮释放的量和持续时间。因此，在一些实施方案中，可以改变二氧化硅粒子的组成以调节从二氧化硅粒子释放NO的半衰期。

在另一实施方案中，用二醇二氮烯鎓取代氨基烷氧基硅烷的氨基，且该氨基烷氧基硅烷具有式R"-N(NONO^-X⁺)-R'-Si(OR)₃，其中：R是烷基，R'是亚烷基或亚芳烷基，R"是烷基或烷基胺，且X⁺是选自Na⁺和K⁺的阳离子。

在某些实施方案中，该释放NO的API可包含含有二醇二氮烯鎓化氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷（AEAP3）和原硅酸四甲酯（TMOS）的共缩合二氧化硅网络和/或含有二醇二氮烯鎓化氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷（AEAP3）和原硅酸四乙酯（TEOS）的共缩合二氧化硅网络。在一些实施方案中，该释放NO的API可包含含有二醇二氮烯鎓化甲基氨基丙基三甲氧基硅烷（MAP3）和原硅酸四甲酯（TMOS）的共缩合二氧化硅网络和/或含有二醇二氮烯鎓化甲基氨基丙基三甲氧基硅烷（MAP3）和原硅酸四乙酯（TEOS）的共缩合二氧化硅网络。

在本发明的一些实施方案中，释放NO的API的粒度可以为大约20纳米至大约20微米或其中的任何范围，例如但不限于，大约100纳米至大约20微米或大约1微米至大约20微米。可以调节粒度以最大程度降低和/或防止毒性和/或渗透表皮（或受损真皮）和渗入血管。在特定实施方案中，粒度分布在小于20微米或其中的任何范围的平均粒度附近，且该粒度能使粒子进入毛囊。在一些实施方案中，释放NO的API可具有分布在大约20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1微米的平均粒度附近的粒度。在另一些实施方案中，释放NO的API可具有分布在小于10微米或其中的任何范围，例如但不限于大约2微米至大约10微米或大约4微米至大约8微米的平均粒度附近的粒度。在另一些实施方案中，该粒度可分布在大于20微米或其中的任何范围的平均粒度附近，且该粒度可防止粒子进入毛囊。在另一些实施方案中，可以提供具有分布在两种或更多种平均粒度附近的平均粒度的粒子的混合物。可以将释放NO的API微粉化（例如球磨和/或喷射研磨）。用于提供所需粒度和/或微粉化的方法包括，但不限于，美国专利申请公开No. 2013/0310533中描述的那些，其全文经此引用并入本文。

释放一氧化氮的活性药物成分可以以该组合物的大约0.5重量%至大约10重量%，例如但不限于，大约1%至大约8%或大约2%至大约6%的量存在于本发明的组合物中。在某些实施方案中，释放一氧化氮的活性药物成分可以以大约0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%的量存在于本发明的组合物中。本发明的组合物可包含释放一氧化氮的活性药物组合物并可以储存和/或释放组合物的大约0.05重量%至大约3重量%，例如但不限于，大约0.15%至大约2%、大约0.15%至大约1%、大约0.3%至大约1.2%的量的一氧化氮。在某些实施方案中，本发明的组合物可包含释放一氧化氮的活性药物并可以储存和/或释放大约0.15%、0.3%、0.6%、0.9%、1%、1.2%、1.5%、1.75%、2%、2.25%、2.5%、2.75%或3%的量的一氧化氮。

在一些实施方案中，与不存在本发明的第一组合物时在相同时期内从该组合物中释放的NO量相比，本发明的第一组合物可提高从组合物（例如包含释放NO的API的第二组合物）中释放的NO量。在某些实施方案中，与不存在本发明的第一组合物时在相同时期内释放的NO量相比，本发明的第一组合物可以将从包含第一组合物和释放NO的API的本发明的组合物中释放的NO量提高至少大约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多或其中的任何范围和/或单个值。因此，本发明的组合物（例如包含本发明的第一组合物和含释放NO的API的第二组合物的组合物）可以释放的NO是不存在本发明的第一组合物时（例如仅第二组合物）在相同时期内释放的NO量的大约1.5至大约100倍，或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于大约2至10倍的NO或大约5至大约50倍的NO。

例如，在图7和8中可看出本发明的组合物对NO释放量的影响。图7显示具有如表1中所列的配方的2% Nitricil™ NVN1凝胶随时间经过的体外一氧化氮释放曲线。图8显示具有如表1中所列的配方的2% Nitricil™ NVN1凝胶和6%和12% Nitricil™ NVN1凝胶在与具有如表2中所列的配方的pH 4的本发明的第一组合物以1:3比率（凝胶:第一组合物）混合时随时间经过的体外一氧化氮释放曲线。从图7和8中可以看出，在与本发明的第一组合物接触时，2% Nitricil™ NVN1凝胶的累积NO释放提高。

表1: 2%、6%和12% Nitricil™ NVN1凝胶的组成

表2: pH 4的第一组合物的组成

组分	%w/w
		纯净水	89.1
甘油	10.0
		Carbopol<sup>®</sup> 974P	0.5
山梨酸	0.2
		三乙醇胺	0.2

本发明的组合物可包含本发明的第一组合物和如本文所述的第二组合物。本领域技术人员会认识到，本发明的组合物中的各组分的量或浓度可随该组合物中存在的第一组合物和第二组合物的量（例如该组合物中存在的第一组合物与第二组合物的比率）而变。在一些实施方案中，本发明的组合物中本发明的第一组合物与第二组合物的比率可以为大约5:1或更低，在另一些实施方案中大约4:1或更低，大约3:1或更低，大约2:1或更低，大约1:1或更低，大约0.5:1或更低，或大约0.2:1或更低。在特定实施方案中，该比率可以为大约3:1。在另一些实施方案中，该比率可以为大约1:1。

在一些实施方案中，本发明的组合物可包含、基本由或由该组合物的大约1重量%至大约10重量%的量的多元醇、该组合物的大约0.01重量%至大约3重量%的量的第一增粘剂、该组合物的大约30重量%至大约50重量%的量的水、该组合物的大约0.01重量%至大约10重量%的量的第二增粘剂、该组合物的大约30重量%至大约50重量%的量的有机溶剂、以该组合物的大约2重量%至大约10重量%的量存在于第二组合物中的保湿剂、该组合物的大约0.1重量%至大约10重量%的量的拒水剂、该组合物的大约0.5重量%至大约10重量%的量的释放NO的API、任选该组合物的大约0.001重量%至大约1重量%的量的缓冲剂、任选该组合物的大约0.001重量%至大约1重量%的量的防腐剂和任选中和剂构成。中和剂可以以足以为该组合物的第一部分提供大约3至大约8的pH的量存在。该组合物可具有小于大约11，例如但不限于，小于大约9.5、小于大约7或小于大约6的pH。第一和第二增粘剂可以相同和/或不同。在某些实施方案中，第一增粘剂可以是羧聚乙烯且第二增粘剂可以是纤维素，例如但不限于，羟丙基纤维素。在一些实施方案中，所述组合物是美观优雅的。

在一些实施方案中，本发明的组合物可包含、基本由或由该组合物的大约2重量%至大约7重量%的量的多元醇、该组合物的大约0.1重量%至大约1重量%的量的第一增粘剂、该组合物的大约40重量%至大约45重量%的量的水、该组合物的大约0.1重量%至大约1重量%的量的第二增粘剂、该组合物的大约35重量%至大约45重量%的量的有机溶剂、以该组合物的大约2重量%至大约7重量%的量存在于第二组合物中的保湿剂、该组合物的大约0.1重量%至大约5重量%的量的拒水剂、该组合物的大约0.5重量%至大约10重量%的量的释放NO的API、任选该组合物的大约0.01重量%至大约0.2重量%的量的缓冲剂、任选该组合物的大约0.01重量%至大约0.3重量%的量的防腐剂和任选中和剂构成。中和剂可以以足以为该组合物的第一部分提供大约4或大约6的pH的量存在。该组合物可具有小于大约11，例如但不限于，小于大约9.5、小于大约7或小于大约6的pH。第一和第二增粘剂可以相同和/或不同。在某些实施方案中，第一增粘剂可以是羧聚乙烯且第二增粘剂可以是纤维素，例如但不限于，羟丙基纤维素。在一些实施方案中，所述组合物是美观优雅的。在某些实施方案中，该组合物可包含如表13中所列的组成。

本发明的组合物可包含至少两种不同的增粘剂。一种增粘剂可存在于本发明的组合物的第一部分中，另一增粘剂可存在于该组合物的第二部分中。在一些实施方案中，本发明的组合物包含羧聚乙烯和纤维素，例如但不限于，羟丙基纤维素。羧聚乙烯可存在于本发明的第一组合物中且纤维素可存在于第二组合物中，它们合并形成本发明的组合物。包含至少两种不同增粘剂的本发明的组合物可提供包含API，例如但不限于，微粒API和/或不溶性API（例如水不溶和/或湿不溶性API，例如过氧化苯甲酰）的美观优雅的组合物。

本发明的组合物可提供适合悬浮API，例如但不限于，微粒API和/或不溶性API的结构。在一些实施方案中，本发明的组合物可包囊API，例如但不限于，微粒API和/或不溶性API。例如，本发明的组合物可以在至少一种增粘剂中包囊API和/或可提供适合包囊API的结构。本发明的组合物可防止和/或降低该组合物中的API附聚。尽管不希望受制于任何特定理论，但本发明的第一组合物可提供悬浮和/或包囊API和/或防止和/或降低该组合物中的API附聚的手段。例如，本发明的第一组合物可提供适合悬浮和/或包囊本发明的组合物中的API和/或防止和/或降低本发明的组合物中的API附聚的结构（例如凝胶基质）。

本发明的组合物可包含API、羧聚乙烯和纤维素并可以是美观优雅的组合物。该组合物不是砂质的和/或与不存在本发明的组合物的API相比具有降低的砂砾感。该组合物不发粘（即粘着）和/或与不存在本发明的组合物的API相比具有降低的粘手性（即粘性）。该组合物与不存在本发明的组合物的API相比可具有降低的和/或提高的刚度（即硬度）和/或可具有提高的均质性。在一些实施方案中，本发明的组合物可包含API并可以是美观优雅的均匀组合物。尽管不希望受制于任何特定理论，但本发明的第一组合物可提供用于提供美观优雅的均匀组合物的手段。例如，本发明的第一组合物可提供适合提供美观优雅的均匀组合物的结构（例如凝胶基质）。

本发明的组合物的第一部分和/或组合物和本发明的组合物的第二部分和/或组合物可以在该组合物的配混过程中接触（例如混合、搅拌、掺合、均化等）。本发明的组合物然后可以在第一部分和/或组合物和第二部分和/或组合物合并（例如在相同器皿和/或容器中）的情况下储存。

本发明的组合物可包含难配制的API，例如但不限于，难以作为局部组合物配制的API。例如，该API可以是微粒API、不溶性API（例如水不溶和/或湿不溶性API）、热不稳定API和/或光敏API。

根据本发明的实施方案，本发明的组合物的这两个分开的部分的制备可提供改进的组合物。包含至少两个部分的本发明的组合物可以在一个部分中制备API（例如难配制的API），稍后与第二部分合并以制备美观优雅的组合物和/或与在由一个部分形成和/或不存在本发明的组合物的组合物中制备的相同API相比包含更稳定的API的组合物。该API更稳定是体现在，该API与其在不存在本发明的组合物时的活性相比具有更高活性和/或该API与其在不存在本发明的组合物时的储存相比可储存更长时间。在一些实施方案中，包含API（例如难配制的API）的本发明的组合物可提供比在不存在本发明的组合物的组合物中的API更美观优雅的组合物。例如，包含微粒API和/或不溶性API的本发明的组合物可提供砂砾感更低的组合物和因此更美观优雅的组合物。

根据本发明的实施方案，可以提供一种药盒。在一些实施方案中，本发明的药盒可包含本发明的第一组合物和如本文所述的第二组合物。第一组合物可以是水凝胶。第一组合物可包含以第一组合物的大约1重量%至大约30重量%的量存在的至少一种多元醇、以第一组合物的大约0.1重量%至大约5重量%的量存在的至少一种增粘剂和以第一组合物的大约70重量%至大约99重量%的量存在的水。第二组合物可包含API，例如但不限于，释放NO的API。在一些实施方案中，第二组合物可包含以第二组合物的大约0.5重量%至大约30重量%的量存在于第二组合物中的至少一种增粘剂、以第二组合物的大约50重量%至大约90重量%的量存在于第二组合物中的至少一种有机溶剂和以第二组合物的大约2重量%至大约20重量%的量存在于第二组合物中的至少一种保湿剂。在特定实施方案中，第二组合物可包含含有如国际申请公开No. WO 2013/006608中所述的释放一氧化氮的聚硅氧烷大分子的无水醇凝胶。

在一些实施方案中，本发明的药盒包含水性组合物、有机组合物和在该水性组合物和/或有机组合物中稳定和/或可溶的API。本发明的药盒可构造成在分配和/或施加到对象上时混合这两种组合物和/或可构造成为合并的组合物提供与不存在这些组合物之一和/或合并的组合物时的API性能和/或活性相比提高的API性能和/或活性。

本发明的药盒可以分开储存本发明的第一组合物和第二组合物。在一些实施方案中，本发明的药盒可以在施加到对象上之前使第一组合物和第二组合物接触，例如但不限于，通过混合这些组合物。

可以将本发明的第一组合物（例如本发明的水凝胶）和第二组合物混合在一起，然后施加到对象的皮肤上。在另一些实施方案中，可以将第二组合物施加到对象的皮肤上，然后在第二组合物上施加第一组合物，或反之亦然。在一些实施方案中，施加到对象上的第一组合物与第二组合物的比率可以为大约5:1或更低，在另一些实施方案中大约4:1或更低，大约3:1或更低，大约2:1或更低或大约1:1。在特定实施方案中，该比率可以为大约3:1。在另一些实施方案中，该比率可以为大约1:1。

提供在施加到对象的皮肤上之后和/或过程中合并的第一组合物和第二组合物使得本发明的药盒的贮存寿命长于组合物混合在一起储存在药盒中。例如，第二组合物中的配方和API载量可提供具有长贮存寿命的稳定产品。因此，例如，可以调节第二组合物的pH和水含量以降低或将水活化的API的释放减至最低，从而提供在室温下稳定的组合物。然后可以将第一组合物与第二组合物合并以调节合并后的pH并提供水以活化API。第二组合物可以与第一组合物以不同比率合并以在合并的组合物中提供所需释放、pH和/或剂量。这种方法允许利用单个制备过程制备更复杂和昂贵的第二组合物，然后制备由与第二组合物混合的第一组合物的组成和/或量决定的特定产品。

本领域技术人员根据本公开会认识到，本发明的第一组合物（例如本发明的水凝胶）可提供用于调节药物组合物的pH的手段（means）以及用于活化药物组合物的API的手段（means）。在特定实施方案中，本发明的第一组合物可提供用于降低包含二醇二氮烯鎓改性的共缩合聚硅氧烷大分子的无水药物组合物的pH的手段（means）。在另一些实施方案中，本发明的第一组合物可提供用于从包含二醇二氮烯鎓改性的共缩合聚硅氧烷大分子的无水药物组合物中释放一氧化氮的手段（means）。

根据一些实施方案，本发明的方法可包括将本发明的组合物（例如本发明的第一组合物和如本文所述的第二组合物）和/或本发明的第一组合物（例如本发明的水凝胶）施加到对象的皮肤上。在某些实施方案中，可局部施加该组合物和/或第一组合物。该组合物可包含至少一种API，例如但不限于，释放一氧化氮的活性药物成分；第二增粘剂；至少一种有机溶剂；至少一种保湿剂；至少一种多元醇；第一增粘剂；至少一种防腐剂；和水。本发明的方法可包括在施加本发明的组合物之前和/或过程中形成混合物。可通过混合或合并包含至少一种API，例如但不限于释放一氧化氮的活性药物成分；第二增粘剂；至少一种有机溶剂；和至少一种保湿剂的组合物和包含至少一种多元醇；第一增粘剂；至少一种防腐剂；和水的组合物来制备混合物。

本发明的方法可包括将与第二组合物合并和/或混合的本发明的第一组合物局部施加到对象的皮肤上。第二组合物可包含释放一氧化氮的活性药物成分。

在一些实施方案中，本发明的方法包括向对象的皮肤递送治疗有效量的本发明的组合物。本文所用的术语“治疗有效量”是指引发对象中的治疗有效响应的本发明的组合物的量。本领域技术人员会认识到，治疗效果不需要是完全的或治愈的，只要为对象提供一定的益处。在一些实施方案中，治疗有效量的本发明的组合物可包括递送治疗有效量的该组合物的组分，例如但不限于，活性药物成分（例如释放一氧化氮的API）。因此，可以由本发明的组合物递送和/或施加治疗有效量的一氧化氮。

本发明可用于兽医和医疗用途。适合用本发明的方法实施方案治疗的对象包括，但不限于，禽类和哺乳动物对象。本发明的哺乳动物包括，但不限于，犬科动物、猫科动物、牛类、山羊、马、绵羊、猪、啮齿动物（例如大鼠和小鼠）、兔类动物、灵长类（例如类人猿和人）、非人灵长类（例如猴、狒狒、黑猩猩、大猩猩）等和在子宫中的哺乳动物。需要根据本发明治疗的任何哺乳动物对象都是合适的。可根据本发明治疗男性和女性和在任何发育期（即新生儿、婴儿、幼年、青少年、成年）的人类对象。在本发明的一些实施方案中，该对象是哺乳动物，在某些实施方案中，该对象是人。人类对象包括所有年龄的男性和女性，包括胎儿、新生儿、婴儿、幼年、青少年、成年和老年对象以及妊娠对象。在本发明的特定实施方案中，该对象是青少年和/或成年人类。

根据本发明的示例性禽类包括鸡、鸭、火鸡、鹅、鹌鹑、雉鸡、平胸鸟类（例如鸵鸟）和驯化鸟类（例如鹦鹉和金丝雀）和在卵内的鸟类。

还可以对动物对象，特别是哺乳动物对象，如小鼠、大鼠、狗、猫、家畜和马实施本发明的方法以用于兽医用途，和/或用于药物筛选和药物开发用途。

在本发明的特定实施方案中，该对象“需要”本发明的方法，例如该对象已被诊断为、有风险患上和/或被相信患有可用本发明的方法治疗的疾病或病症。在一些实施方案中，该对象具有皮肤病，例如但不限于，痤疮、雄激素性脱发、特应性皮炎、脂溢性皮炎、癣感染、念珠菌感染、细菌感染、寻常疣和/或牛皮癣。在本发明的一些实施方案中，该对象具有炎性皮肤病况或病症和/或感染（例如脓疱病、利什曼病等）。在一些实施方案中，本发明的组合物可用于治疗寻常痤疮。根据一些实施方案，本发明的组合物和/或方法可以降低对象的痤疮丙酸杆菌计数、炎性损伤和/或非炎性损伤。在一些实施方案中，本发明的组合物和/或方法可用于治疗适合用包含释放NO的API和醇赋形剂的组合物局部给药的任何疾病、病症和/或病况，例如但不限于，脱发（例如雄激素性脱发）和/或疣（例如寻常疣、跖疣、扁平疣、丝状疣、生殖器疣、马赛克样疣和/或甲周疣）。

本文所用的“治疗”（及其语法变形）是指给予对象益处的任何类型的治疗并可能意味着对象病况的严重程度降低、至少部分改善或减轻和/或实现至少一种临床症状的一定减轻、缓解或降低和/或延迟疾病、病症和/或病况的进程。在特定实施方案中，与不存在本发明的方法时皮肤病的严重程度相比，可以减轻对象的皮肤病（例如痤疮）的严重程度。在另一些实施方案中，本发明的方法可以预防和/或治疗感染。

本发明的组合物可以局部施加到对象皮肤的任何部分上。但是，在一些实施方案中，通过本文所述的方法处理对象的面部。此外，在一些实施方案中，通过本文所述的方法处理对象的躯干。在一些实施方案中，通过本文所述的方法处理对象的手、手指、足、脚、脚趾和/或生殖器。

根据本发明的一些实施方案，可以提供一种治疗寻常痤疮的方法，所述方法包括将本发明的组合物局部施加到对象的皮肤上。可以施加治疗有效量的该组合物。在一些实施方案中，该组合物可包含该组合物的大约0.5重量%至大约10重量%，例如但不限于，大约1%至大约8%或大约2%至大约6%的量的释放一氧化氮的活性药物成分。在某些实施方案中，该组合物可包含大约0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%,或10%的量的释放一氧化氮的活性药物成分。该组合物可以储存和/或释放组合物的大约0.05重量%至大约3重量%，例如但不限于，大约0.15%至大约2%、大约0.15%至大约1%、大约0.3%至大约1.2%的量的一氧化氮。在某些实施方案中，该组合物可以储存和/或释放大约0.15%、0.3%、0.6%、0.9%、1%、1.2%、1.5%、1.75%、2%、2.25%、2.5%、2.75%或3%的量的一氧化氮。

根据本发明的另一些实施方案，可以提供一种减轻对象的炎性和/或非炎性损伤的方法，其包括将本发明的组合物局部施加到对象的皮肤上。可以施加治疗有效量的该组合物。在一些实施方案中，该组合物可包含该组合物的大约0.5重量%至大约10重量%，例如但不限于，大约1%至大约8%或大约2%至大约6%的量的释放一氧化氮的活性药物成分。在某些实施方案中，该组合物可包含大约0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%的量的释放一氧化氮的活性药物成分。该组合物可以储存和/或释放组合物的大约0.05重量%至大约3重量%，例如但不限于，大约0.15%至大约2%、大约0.15%至大约1%、大约0.3%至大约1.2%的量的一氧化氮。在某些实施方案中，该组合物可以储存和/或释放大约0.15%、0.3%、0.6%、0.9%、1%、1.2%、1.5%、1.75%、2%、2.25%、2.5%、2.75%或3%的量的一氧化氮。

减轻炎性和/或非炎性损伤的方法可包括局部施加本发明的合并的组合物。在一些实施方案中，与在相同时期内没有施加本发明的组合物的对象相比该方法可以在指定时期内将炎性和/或非炎性损伤减轻大约10%或更多，例如但不限于，大约15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多。在某些实施方案中，与没有施加包含释放一氧化氮的活性药物成分的组合物的对象相比该方法可以在相同时期内减轻对象的炎性和/或非炎性损伤。

在一些实施方案中，可以提供一种减轻对象的炎性和/或非炎性损伤的方法，其包括将本发明的第一组合物局部施加到对象的皮肤上。第一组合物可能不包含API，例如但不限于，释放NO的API。可以施加治疗有效量的第一组合物。包括局部施加本发明的第一组合物的所述减轻炎性和/或非炎性损伤的方法与在相同时期内没有施加本发明的第一组合物的对象相比可以在指定时期内将炎性和/或非炎性损伤减轻大约10%或更多，例如但不限于，大约15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多。

在一些实施方案中，本发明的方法可包括局部施加包含释放一氧化氮的活性药物成分的本发明的组合物，其中与施加不含释放一氧化氮的活性药物成分的基本相同的组合物的对象相比该方法可以在指定时期内将炎性和/或非炎性损伤减轻大约10%或更多，例如但不限于，大约15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多。

在某些实施方案中，该对象可以在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13周或更长时间内看出炎性和/或非炎性损伤的减轻。在一些实施方案中，该方法可以在12周或更短时间内，在一些实施方案中在8周或更短时间内，和在另一些实施方案中在4周或更短时间内减轻对象皮肤中的炎性和/或非炎性损伤。

在一些实施方案中，本发明的方法可以降低施加和/或局部施加本发明的组合物的对象的痤疮丙酸杆菌计数。在某些实施方案中，与在相同时期内没有施加本发明的组合物的对象相比本发明的方法可以在指定时期内将痤疮丙酸杆菌计数降低大约10%或更多，例如但不限于大约15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多。在一些实施方案中，与没有施加包含释放一氧化氮的活性药物成分的组合物的对象相比该方法可以在相同时期内降低对象的痤疮丙酸杆菌计数。

在某些实施方案中，可以在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13周或更长时间内存在痤疮丙酸杆菌计数的降低。在一些实施方案中，本发明的方法可以在12周或更短时间内，在一些实施方案中在8周或更短时间内，和在另一些实施方案中在4周或更短时间内降低对象皮肤中的痤疮丙酸杆菌计数。

在下列非限制性实施例中更详细解释本发明。

实施例

实施例1

开发了pH值为3至7的未缓冲的水凝胶制剂。用不同含量的卡波姆Carbopol^® 974P制备几种pH 6水凝胶制剂以研究对粘度和凝胶流变性的影响。也研究了防腐剂，如山梨酸、苯甲酸和对羟基苯甲酸酯对未缓冲的水凝胶流变性和粘度的影响。使用制成的水凝胶制剂测量与包含异丙醇（IPA）和不同浓度的Nitricil™ NVN1的Nitricil™ NVN1局部凝胶制剂的混合物pH值（实施例2）和建立体外一氧化氮（NO）释放动力学（实施例3）。还配制使用Carpobol^® 980P的用0.1% w/w柠檬酸缓冲的pH 4水凝胶和使用Carbopol^® ETD 2020NF聚合物的用0.2% w/w 0.1M磷酸盐缓冲剂缓冲的pH 6水凝胶。

对于表3和4中提供的所有制剂，在0.5升或2升玻璃烧杯中使用IKA顶置混合器在环境温度下混合美国药典（USP）级的水和无水甘油。对于含防腐剂，如山梨酸、苯甲酸和对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的水凝胶制剂，将防腐剂添加到水和甘油溶液中并使用热板加热至70℃以实现完全溶解。一旦实现溶解，将该溶液冷却至环境温度。各实验中的下一步骤是将Carbopol^®聚合物缓慢转移到使用IKA T-18混合器以顶置搅拌和均化的组合在3-4的速度下不断搅拌的该烧杯中20-30秒。在20分钟后形成清澈溶液，表明聚合物完全溶解。在继续搅拌下，首先测量未中和的混合物的pH并以足以将pH调节到所需值和使水凝胶变稠的量（QS）使用三乙醇胺作为中和剂。最后，一旦获得所需pH，添加最后量的水以达到所需目标批量。对于批号112331，将二氧化钛作为掩蔽剂引入水凝胶中。

表3: 无防腐剂的未缓冲的水凝胶制剂

水凝胶制剂 [%w/w组合物]/成分	批号: 112333	批号: 112335	批号: 112337	批号: 112339	批号: 112345	批号: 112353
							无水甘油, ACS	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0
A型卡波姆均聚物, NF, Carbopol<sup>®</sup> 974P	1.0	0.5	0.2	0.3	0.4	0.5
							纯净水, USP	86.5	86.5	86.5	86.5	85.0	85.0
三乙醇胺, NF	QS至pH 7	QS至pH 6	QS至pH6	QS至pH 6	QS至pH 4	QS至pH 4
							纯净水, USP (调节)	QS	QS	QS	QS	QS	QS

表4: 含防腐剂的未缓冲的水凝胶制剂

根据聚合物浓度，含有阴离子Carbopol^®聚合物 974P的含和不含防腐剂的未中和混合物的pH为大约2.75-3。发现只有在添加少量三乙醇胺以将pH调节至3单位并因此未实现增稠作用时pH 3水凝胶的粘度才极低。为了完全中和Carbopol^® 974P聚合物，必须使用三乙醇胺将pH调节至6或7。但是，所得未缓冲的水凝胶的粘度在pH 6和7下极高。尽管不希望受制于任何特定理论，但为了分配，需要将Carbopol^® 974P聚合物的浓度从1% w/w降至0.3-0.5% w/w以降低在pH 6和7下的粘度。尽管不希望受制于任何特定理论，但使用小于0.3% w/w的Carbopol^® 974P聚合物浓度可能产生不够粘并在施加时可能从皮肤表面流走的水凝胶。

可以用0.5% w/w Carbopol^®配制pH 4未缓冲的水凝胶并具有足够的粘度和流变性质以便流动和由泵分配但在施加时不从皮肤表面流走。表5显示如表4中所述的几种含防腐剂的未缓冲的pH 4和pH 5水凝胶的粘度测量。

表5: 含防腐剂的未缓冲的水凝胶的粘度测量

含防腐剂的pH 4水凝胶具有7000-12500 cP的粘度。防腐剂的添加影响pH和因此使用三乙醇胺的中和（增稠）过程。不希望受制于任何特定理论，但虑及防腐剂的存在和防腐剂的各种浓度，可能需要相应地调节Carbopol^®聚合物的含量以获得用碱中和后的一致粘度。含防腐剂的未缓冲的水凝胶的pH提高到5导致粘度明显提高到大约20000 cP。

对于Carbopol^® 974P聚合物，使用几种缓冲酸，如柠檬酸、酒石酸和乳酸缓冲为pH4，但该水凝胶会立即解体到水中。发现Carbopol^® ETD 2020, NF聚合物不适合与1-3% w/w浓度的缓冲剂一起使用。

在USP水和无水甘油中使用0.2% w/w Carbopol^® ETD 2020 NF聚合物制备磷酸盐缓冲的pH 6水凝胶。添加0.2% w/w的0.1 M磷酸钾缓冲剂储液以将该水凝胶缓冲为pH 6单位。这种水凝胶与含有IPA和各种浓度的Nitricil™ NVN1的Nitricil™ NVN1局部凝胶一起使用以测定体外混合物pH（实施例2）。该pH 6磷酸盐缓冲的水凝胶具有在0.2%至8% w/w的几种不同的Nitricil™ NVN1浓度下将pH降低0.5个单位的作用。

在0.5千克规模下成功配混含有0.1% w/w苯甲酸和0.1%山梨酸以及1% w/wCarbopol^®聚合物980P的柠檬酸缓冲的pH 4水凝胶。该缓冲的柠檬酸水凝胶的组成列在表6中。测得这种缓冲的水凝胶（批号: 126335）具有7285 cP的粘度。使用制成的柠檬酸缓冲的水凝胶测定体外和皮肤表面pH（实施例2），包括建立体外一氧化氮释放曲线（实施例3）。

表6: 柠檬酸缓冲的pH 4水凝胶的成分表和组成

水凝胶成分(批号: 126335)	% w/w组合物
		无水甘油, ACS	10.0
苯甲酸, NF	0.1
		山梨酸, NF	0.1
柠檬酸	0.1
		C型卡波姆均聚物, NF, Carbopol 980P	1
纯净水, USP	70
		三乙醇胺, NF	QS至pH4
纯净水, USP (调节A)	10
		纯净水, USP (调节B)	QS

配制涵盖一定pH值范围的水凝胶制剂。配制的初始水凝胶是未缓冲的并与和不与防腐剂配混。使用苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯之类的防腐剂。发现对羟基苯甲酸酯与Nitricil™ NVN1 IPA局部凝胶反应。通过改变三乙醇胺（中和剂）添加量，调节水凝胶的pH。为了提高pH和粘度，提高中和剂添加量。在pH 6和7下，形成的无防腐剂的未缓冲的水凝胶的粘度高。为了降低水凝胶粘度，降低Carbopol^®聚合物浓度。防腐剂的添加也影响初始pH。相应地调节聚合物和中和剂的量以达到所需pH和获得不会低到造成从皮肤表面流走的问题并且不会高到造成产品流动和从双室分配装置泵出的问题的粘度。尝试以柠檬酸、乳酸和酒石酸作为缓冲剂制备使用Carpobol^® 974P和ETD 2020聚合物的缓冲的pH 4水凝胶，但这由于pH的快速变化而使该聚合物解体到水中。

通过换成Carbopol^® 980P（其是C型均聚物和更长链的聚合物），成功配制含山梨酸和苯甲酸的0.1%w/w柠檬酸缓冲的pH 4水凝胶。也用Carbopol^® ETD 2020聚合物成功配制用0.2% w/w的0.1 M磷酸盐缓冲剂缓冲的pH 6水凝胶。

实施例2

进行一系列实验以测定含有IPA并具有0.2-12% w/w的不同Nitricil™ NVN1浓度的Nitricil™ NVN1局部凝胶与具有4至6的pH的未缓冲和缓冲的水凝胶制剂在1:1至3:1（水凝胶 : Nitricil™ NVN1局部凝胶）的不同水凝胶/Nitricil™ NVN1局部凝胶比下的最终混合物pH。研究水凝胶pH、水凝胶与Nitricil™ NVN1 IPA局部凝胶的混合比和Nitricil™ NVN1浓度对最终混合物pH的影响。实验的目的是测定是否可获得6至8的最终混合物pH。

对于所有的体外混合物pH测量，使用1毫升塑料注射器将大约1克量的Nitricil™NVN1 Topical IPA凝胶分配到去皮重的称重皿中或从铝管中直接分配。一旦分配大约1克的量，将称重皿再去皮重。然后使用1毫升注射器将1至3克预定量的水凝胶分配到该称重皿中。然后使用pH探针（Beckman φ350 pH计）混合该混合物直至记录单一的稳态pH测量值。所有分配都基于重量进行。

如表7中所示使用pH 6磷酸盐缓冲的水凝胶、未缓冲的pH 4水凝胶和未缓冲的pH6水凝胶测定混合物pH值。

表7: 初始混合物pH测定中所用的水凝胶制剂

图1显示Nitricil™ NVN1局部凝胶强度、水凝胶pH和水凝胶/Nitricil™ NVN1IPA局部凝胶比对混合物pH的影响。混合物pH结果证实，为了实现8的最终混合物pH，可以与水凝胶pH 4以1:1或3:1比率结合使用具有等于或低于6% w/w Nitricil™ NVN1的Nitricil™ NVN1局部凝胶。在8% w/w Nitricil™ NVN1或更高的浓度下，Nitricil™NVN1的强缓冲性质开始在评估的水凝胶pH范围和比率范围内严重影响混合物的pH。在与pH4和pH 6水凝胶混合时，在大于4% w/w Nitricil™ NVN1浓度下观察到明显发泡（表明一氧化氮释放）。当使用pH 6水凝胶时，甚至在大于8的高混合物pH值下也观察到这一点。对于最多2% w/w Nitricil™ NVN1的Nitricil™ NVN1局部凝胶浓度，1:3比率的Nitricil™NVN1局部凝胶 : 缓冲为pH 6的水凝胶能使该混合物的所得pH保持在pH 8以下。在1:1和1:3的水凝胶 : Nitricil™ NVN1 IPA局部凝胶混合比下，用磷酸盐将该水凝胶缓冲为pH 6都有助于降低最终混合物pH。

进一步的实验研究了在调节到pH 4和pH 5的水凝胶制剂中以0.1%至0.2% w/w的浓度添加防腐剂（例如对羟基苯甲酸酯、山梨酸和苯甲酸）的影响。在2% w/w和8% w/w的Nitricil™ NVN1局部凝胶浓度下测量混合物pH。

表8显示使用2%和8% w/w Nitricil™ NVN1的混合物pH值。表8中的结果表明2%w/w Nitricil™ NVN1 IPA局部凝胶与含和不含防腐剂的pH 4水凝胶在1:1的比率下提供6至7的所得混合物pH。

表8: 含和不含防腐剂的不同pH水凝胶的混合物pH值

Nitricil™ NVN1 [%w/w]	水凝胶 pH	防腐剂	浓度[%w/w]	混合物pH
					2	4	对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯	0.25	6.61（凝胶混合物变成褐色）
2	4	山梨酸	0.2	5.89
					2	4	山梨酸	0.1	6.73
2	4	无防腐剂	-	6.78
					8	4	0.2%对羟基苯甲酸甲酯和0.5%对羟基苯甲酸丙酯	0.25	9.93
8	4	山梨酸	0.2	10.19
					8	4	山梨酸	0.1	10.27
8	4	无	-	8.25
					8	4	无	-	10.80
2	5	对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯	0.25	7.15（凝胶混合物变成褐色）
					2	5	山梨酸	0.2	6.81
2	5	山梨酸	0.1	6.94

使用对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂导致混合物变成褐色。不希望受制于任何特定理论，这表明形成降解产物。使用含不同防腐剂的pH 5水凝胶，混合物pH仅轻微提高到大约7。

也测量8% w/w Nitricil™ NVN1 Topical IPA凝胶与缓冲和未缓冲的pH 4水凝胶的混合物的表面皮肤pH。缓冲的pH 4水凝胶含有Carbopol^® 980P NF聚合物以及0.1% w/w柠檬酸。在柠檬酸缓冲的pH4配制水凝胶中也使用0.1% w/w的苯甲酸和山梨酸作为防腐剂。

用未缓冲的pH 4水凝胶（Carbopol^® 974P）和0.1%w/w柠檬酸缓冲的pH 4水凝胶（Carbopol^® 980P）以1:1比率进行进一步的体外混合物pH测量以证实由表8中的实验结果得出的观察。图2表明，在与未缓冲的pH 4水凝胶一起使用时，在6% w/w和8% w/w Nitricil™ NVN1浓度下，混合物pH为大约10并与之前的结果相当。0.1% w/w柠檬酸缓冲的pH 4水凝胶的使用具有在一定的Nitricil™ NVN1浓度范围内降低混合物pH的作用。

也进行体外皮肤表面pH测定研究。图3表明具有5至6的pH范围的皮肤提供一定程度的缓冲能力。与8% w/w Nitricil™ NVN1 IPA局部凝胶混合的未缓冲的pH 4水凝胶的施加使得皮肤pH略低于9。pH保持一致30分钟。但是，当用0.1%w/w柠檬酸缓冲的pH 4水凝胶（包括0.1% w/w苯甲酸和0.1% w/w山梨酸作为防腐剂）与8% w/w Nitricil™ NVN1 IPA局部凝胶一起使用时，皮肤表面pH为大约7.5。

不希望受制于任何特定理论，但实验证明，对于在1:1和3:1比率下的pH 4缓冲和未缓冲的水凝胶，在0.2% w/w至4% w/w的Nitricil™ NVN1浓度下，最终混合物pH可以保持在5至8之间。对于在3:1比率下的pH 4未缓冲的水凝胶，可以在最多8% w/w的Nitricil™NVN1浓度下使混合物pH保持在8单位以下。对于缓冲的pH 6水凝胶，可以在2% w/w或更低的Nitricil™ NVN1浓度下使pH保持在8以下。为了使混合物pH值保持在8以下，可以与未缓冲的pH 6水凝胶一起使用1% w/w Nitricil™ NVN1或更低的浓度。在水凝胶中使用防腐剂完全至几乎不影响混合物pH。以1:1的比率使用未缓冲和缓冲的pH 4水凝胶导致pH值高于8单位。但是，在施加到皮肤上时，由于皮肤提供一定的缓冲能力，表面的pH测量值降低。为了获得低于8单位的皮肤表面混合物pH，可以使用用0.1%w/w柠檬酸缓冲并含有0.1% w/w苯甲酸和山梨酸的pH 4水凝胶。但是，与来自体外测试结果的10单位的pH相比，未缓冲的pH 4水凝胶提供大于8.5的皮肤表面pH值。

实施例3

使用单通道和多通道一氧化氮分析仪进行体外释放试验。使用分析天平将Nitricil™ NVN1局部凝胶和水凝胶样品称重。将大约50毫克的Nitricil™ NVN1局部凝胶样品和~50毫克或~150毫克水凝胶样品转移到单个预切（pre-cut）称重皿中，不让样品之间接触。将这两个样品混合大约5秒，然后立即放入保持在37℃的洁净干燥的50毫升NO测量盒中。使用下列仪器参数测定来自合并的Nitricil™ NVN1局部凝胶/水凝胶样品的一氧化氮的实时体外释放：

1.潮湿氮气流速: 112 - 115 ml/min

2.样品温度: 37℃

3.检测: 通过化学发光检测一氧化氮

4.数据采集频率: 1 Hz, Irregular Sequential Alternating

5.持续时间: NO释放速率线性降低时的时间（NLT 8 hr）

6. 采集软件: NovanWare v 1.05。

通过测量由已知量的亚硝酸钠在碘化钾溶液中生成的一氧化氮以获取PPB-摩尔换算系数，实现从NO的十亿分率（PPB）到一氧化氮的摩尔数的换算。使用线性插值程序填充来自多通道操作的实时一氧化氮释放数据中的任何间隙。对于没有被测量到排出一氧化氮的任何样品，进行最后~5000秒释放的线性外推至零释放。然后将实时一氧化氮释放数据积分，以产生总一氧化氮累积曲线。由实时和总累积一氧化氮释放曲线计算一氧化氮释放参数，如C_max（即释放的NO的最大浓度）、T_max（即实现C_max的时间）、释放的累积一氧化氮（即每单位时间的所有数据点的总和）和达到总释放的一半的时间（T₅₀）（即释放累积NO的50%时的时间）。在定制的数据处理软件（NovanWare v 1.05）中自动进行所有上述计算。

来自体外释放试验的结果与混合物各自的pH一起概括在下表9中。

表9: Nitricil™ NVN1局部凝胶的pH和体外释放试验的结果概要

图4图解混合物的比率、水凝胶的pH和NVN1的浓度如何影响来自各混合物的C_max。一般而言，对于pH 4水凝胶，C_max随NVN1浓度提高而提高。对于含1:3 Nitricil™ NVN1 IPA局部凝胶:水凝胶的混合物，这一效应更显著。图5显示随Nitricil™ NVN1浓度提高，释放的累积一氧化氮增加。

在所有Nitricil™ NVN1浓度下，含有pH 4水凝胶的混合物通常以比pH 6水凝胶更高的C_max（图4）和更短的半衰期释放更多的一氧化氮负荷量。与在1:1和1:3比率下的pH 6水凝胶相比，对于pH 4水凝胶的1:3比率的混合物，这一效应更显著。图6显示相对于Nitricil™ NVN1局部凝胶浓度，未缓冲的水凝胶pH和比率对混合物pH的影响。使用含防腐剂的pH 4柠檬酸缓冲水凝胶进行进一步的体外研究。一式三份重复测量。在加载到测量盒中之前，将该混合物混合15秒。体外一氧化氮释放试验的结果显示在表10中。

表10: 使用柠檬酸pH 4缓冲水凝胶的Nitricil™ NVN1局部凝胶的pH和体外释放试验的结果概要

实施例4

在60名健康志愿者中进行1期、多剂量、单中心、观察者盲化、随机、平行组、安全性和皮肤耐受性研究。这一研究的目的是评估多种浓度的Nitricil™ NVN1的安全性和皮肤耐受性。

入选该研究的诊断和主要标准是具有如面部皮肤在伍德氏灯下的高荧光度证实的面部升高的痤疮丙酸杆菌计数的18岁和更大年龄的健康男性和女性志愿者。

在筛选/基线访问（Screening/Baseline visit）时符合入选标准的对象以1:1:1:1的比率随机分配到2% Nitricil™ NVN1局部凝胶、4% Nitricil™ NVN1局部凝胶、8%Nitricil™ NVN1局部凝胶或局部凝胶赋形剂（表11）。对象在工作日每天回来一次以在监督下施加分配的治疗。在清洗后在整个面部（总体表面积（TBSA）的3-4%）均匀施加大约0.5克，避开眼和口。在周六和周日，对象在家每天一次施加该治疗（无人监督）。连续四周每天一次局部施加大约0.5克的剂量。

表11: 试验制品（2% Nitricil™ NVN1局部凝胶、4% Nitricil™ NVN1局部凝胶和8% Nitricil™ NVN1局部凝胶）和参比（局部凝胶赋形剂）制剂

成分	2% Nitricil™ NVN1局部凝胶 (%w/w)	4% Nitricil™ NVN1局部凝胶 (%w/w)<sup>1</sup>	8% Nitricil™ NVN1局部凝胶 (%w/w)	局部凝胶赋形剂 (%w/w)
					异丙醇	83.50	82.0x	78.50	85.5
己二醇	10.00	10.0x	10.00	10.00
					环甲基硅酮	2.50	2.50	2.50	2.50
羟丙基纤维素	2.00	1.50	1.00	2.00
					Nitricil™NVN1	2.00	4.00	8.00	0

¹ "x"是指无效数字。

评估包括皮肤耐受性、血液化学和血液学、高铁血红蛋白分析、物理检查、尿妊娠试验（UPTs）、不良事件收集和生命体征，包括血压的收集。在基线、第2周和第4周收集来自前额中央的痤疮丙酸杆菌（P. acnes）培养物。志愿者在第2和第4周/提前终止（ET）时回来进行基线后评估。

耐受性和安全性评估包括皮肤耐受性评估、不良事件（AEs）、高铁血红蛋白测量、物理检查，包括生命体征，和实验室检查 [血液化学、血液学和尿妊娠试验（UPTs）]。

在基线（BL）、第2周和第4周通过拭子技术从前额中央收集痤疮丙酸杆菌培养物（Williamson 1965）。

这是初步研究并且没有检验（powered for）统计显著性。除非另行说明，使用SAS®进行所有统计处理。统计显著性基于零假设的双尾检验，以产生0.05或更小的p值。使用安全性人群进行安全性分析。

按治疗组和访问（treatment group and visit）分类和连续总结各皮肤耐受性等级。在分类汇总内，对各基线后评估进行使用修正ridits的Cochran-Mantel-Haenszel检验。

在基线和第2和4周/ET逐个报告血液化学和血液学值。另外，在第2周和第4周/ET报告自基线的改变。以SI单位报告Labs。

按治疗组和访问（treatment group and visit）分类和连续总结高铁血红蛋白。另外，按治疗组和访问（treatment group and visit）给出盒须图。盒须图显示平均值、中值、最小值、最大值、第一和第三四分位数，所有观察数据点叠加在盒须图上以使任何离群值容易视觉化。

记录在研究过程中发生的所有AEs并基于Medical Dictionary for RegulatoryAuthorities（MedDRA）术语分类。在该汇总和分析中包括在基线日期或在基线日期后到研究随访结束时发生的所有报告的AEs。如果在给予研究药物前发生一事件，其被视为病史并照此罗列和汇总。

不良事件总结包括报告至少一个AE的对象的数量和百分比和通过严重程度（severity）、严重性（seriousness）和与研究药物治疗的关系报告的事件数。也通过基于MEDDRA版本15.1的***器官分类（SOC）和首选术语（PT）给出不良事件的总结。对象在各SOC和PT下仅计数一次。

通过严重程度和与研究产品的关系总结不良事件SOCs和PTs。对于通过严重程度总结，对象仅为在最糟糕严重程度下的特定SOC或PT计数一次。严重程度被记为轻度、中度、重度或威胁生命。对于通过与研究产品的关系总结，对象仅为在最高关系下的特定SOC或PT计数一次。关系被记为肯定（definite）、很可能（probable）、可能（possible）、不可能（unlikely）、无关（unrelated）或不适用（not applicable）。对于关系的总结，肯定（definite）、很可能（probable）和可能（possible）被认为有关，不可能（unlikely）、无关（unrelated）和不适用（not applicable）被认为无关。

由对象、研究者给出的逐字详述、首选术语、***器官分类、开始日期、停止日期、严重程度、严重性和与研究产品的关系列出关于研究过程中记录的AEs的所有信息。也与随机化研究产品的首次给药日相关地（以天数）显示AE发作。还提供导致对象停止使用研究产品的不良事件的总结。

痤疮丙酸杆菌计数：

在基线和在第2和4周/ET从前额获得定量细菌培养物。根据Williamson和Kligman的技术的改良形式获得样品并培养7天（Williamson 1965）。在稀释后计数痤疮丙酸杆菌的集落形成单位（cfu），其含有10至100 cfu。计算痤疮丙酸杆菌的总密度并报告为每平方厘米的log10 cfu。

用平均值、中值、标准偏差、最小值、最大值和95%置信区间概括痤疮丙酸杆菌的描述性统计、从基线改变和从基线的改变百分比。使用下列公式计算在第2周和第4周从基线的降低百分比：

其中X = 初始对数值，且Y = 最终对数值。

安全性&耐受性：

在此研究中，证实Nitricil™ NVN1局部凝胶安全和耐受良好。Nitricil™ NVN1局部凝胶和赋形剂凝胶治疗组中的大部分对象在治疗期间没有发生红疹、鳞屑、干燥、瘙痒或烧灼/刺痛。非零的分数（Scores other than none）通常是轻度的，1名对象报告中度红疹。

Nitricil™ NVN1局部凝胶治疗组中的12名对象报告总共17例AEs，赋形剂凝胶治疗组中的4名对象（27%）报告4例AEs。最频繁报告的AEs是鼻塞和头痛。所有AEs在严重程度上为轻度或中度，被研究者判断为与研究药物治疗无关，不需要对研究药物治疗采取任何动作，并在研究结束时解决。AEs都不严重。

对于Nitricil™ NVN1局部凝胶治疗组，高铁血红蛋白水平在基线时平均为0.77-0.91%、在第2周为0.73-0.97%，在第4周为0.67-0.85%。对于赋形剂凝胶治疗组，高铁血红蛋白水平在基线、第2周和第4周时分别平均为0.77、0.91和0.83%。在研究过程中观察到的最高高铁血红蛋白（1.9%）是在用赋形剂凝胶治疗的对象中。

痤疮丙酸杆菌计数：

Nitricil™ NVN1治疗对象 vs局部凝胶赋形剂治疗组中的痤疮丙酸杆菌计数没有差别。在基线和第4周之间痤疮丙酸杆菌平均减少：57%（凝胶赋形剂）；58%（2% Nitricil™ NVN1）；54%（4% Nitricil™ NVN1）；和63%（8% Nitricil™ NVN1）。

Nitricil™ NVN1在此研究中安全和耐受良好。在治疗组之间没有发现耐受性、报告的不良事件、实验室结果（包括高铁血红蛋白浓度）或物理检查（包括生命体征）中的差别。在Nitricil™ NVN1局部凝胶治疗组和局部凝胶赋形剂之间，在第2周和第4周从基线的痤疮丙酸杆菌计数降低百分比没有差别。

实施例5

此研究是在具有升高的痤疮丙酸杆菌计数的30名健康志愿者中进行的1期、单中心、评定者盲化、随机、平行组、安全性和皮肤耐受性研究。该研究的目的是评估Nitricil™NVN1凝胶的安全性和皮肤耐受性。

在筛选和基线访问时符合入选标准的对象以2:1的比率随机分配到4% Nitricil™ NVN1凝胶或赋形剂凝胶（表12）。对象每天回来一次以在监督下施加分配的治疗。每天两次在整个面部（总体表面积（TBSA）的3-4%）施加大约1克，避开眼和口。

表12: 双室泵中的试验制品（4% Nitricil™ NVN1凝胶）和参比（赋形剂凝胶）制剂

¹ "x"是指无效数字

²足以为室B提供pH 4的量

³足以得出总量的量。

评估包括皮肤耐受性、高铁血红蛋白和血红蛋白分析、物理检查，包括生命体征，和不良事件收集。

在基线和治疗后（第1和2周）从前额中央收集痤疮丙酸杆菌培养物。对象在第1周和第2周/提前终止（ET）时回来进行基线后评估。

入选的诊断和主要标准是具有如面部皮肤在伍德氏灯下的高荧光度证实的面部升高的痤疮丙酸杆菌计数的18岁和更大年龄的健康男性和女性志愿者。

耐受性和安全性评估包括皮肤耐受性评估、不良事件（AEs）、血红蛋白和高铁血红蛋白测量和物理检查，包括生命体征。

在基线（BL）、第1周和第2周/ET通过拭子技术从前额中央收集痤疮丙酸杆菌培养物（Williamson 1965）。

这是初步研究并且没有检验（powered for）统计显著性。但是，样品量大到足以在任何皮肤耐受性评估中在α=0.05下以80% 效能（power）检测治疗组之间的平均0.75分数差异。除非另行说明，使用SAS®进行所有统计处理。除非另行规定，统计显著性基于零假设的双尾检验，以产生0.05或更小的p值。使用安全性人群进行安全性分析。

在第1周和第2周对各分数类别的每次评定中，以频率计数和百分比概括皮肤耐受性评估（红疹、鳞屑、干燥、瘙痒、烧灼/刺痛）。使用Cochran-Mantel-Haenszel（CMH）卡方检验以有序得分的MODRIDIT选项进行分数分布的治疗差异比较。

报告总血红蛋白；作为血红蛋白的百分比报告高铁血红蛋白。在筛选时和第1和2周由治疗组描述性总结血红蛋白和高铁血红蛋白并包括n、平均值、中值、标准偏差、最小值和最大值。另外，总结第1和2周血红蛋白和高铁血红蛋白从基线的改变。使用WilcoxonRank Sum检验进行血红蛋白和高铁血红蛋白从基线的改变的治疗差异比较。

在基线和在第1和2周从前额获得定量细菌培养物。根据Williamson和Kligman的技术的改良形式获得样品并培养7天（Williamson, B.A.；Kligman, A.M. A new methodfor the quantitative investigation of cutaneous bacteria. J. Invest. Dermatol. 1965, 45, 498-503）。在稀释后计数痤疮丙酸杆菌的集落形成单位（cfu），其含有10至100 cfu。计算痤疮丙酸杆菌的总密度并报告为每平方厘米的log₁₀ cfu。

用平均值、中值、标准偏差、最小值、最大值和95%置信区间概括痤疮丙酸杆菌的描述性统计、从基线改变和从基线的改变百分比。

使用下列公式计算在第1周和第2周从基线的降低百分比：

其中X = 初始对数值，且Y = 最终对数值。

在此研究中，证实Nitricil™ NVN1 4%凝胶安全和耐受良好。Nitricil™ NVN14%凝胶和赋形剂凝胶治疗组中的大部分对象在治疗期间没有发生红疹、鳞屑、干燥、瘙痒或烧灼/刺痛。

在此研究中没有报告不良事件。在基线和治疗终点之间没有看出血压、脉搏或物理检查结果的临床显著变化。没有发现高铁血红蛋白百分比或血红蛋白浓度的临床显著变化。

在治疗1周后，Nitricil™ NVN1 4%凝胶组的痤疮丙酸杆菌计数的平均对数减少为0.38，与此相比，赋形剂凝胶组为0.20。在2周后，用Nitricil™ NVN1 4%凝胶治疗的对象的痤疮丙酸杆菌计数平均减少0.51 log₁₀ cfu/cm²，与此相比，用赋形剂凝胶治疗的对象为0.26 log₁₀ cfu/cm²。使用Student’s T-检验，第2周的差异在统计上显著，p = 0.04。post-hocANCOVA也证明，在用Nitricil™ NVN1 4%凝胶和赋形剂凝胶治疗的对象中，痤疮丙酸杆菌的减少存在统计显著差异，p = 0.03。

Nitricil™ NVN1 4%凝胶在此研究中安全和耐受良好。Nitricil™ NVN1 4%凝胶治疗组和赋形剂凝胶治疗组之间在痤疮丙酸杆菌计数的降低百分比方面存在统计显著差异。

实施例6

此研究的主要目的是评估Nitricil™ NVN1 4%凝胶（含有水凝胶）在基线和第1和2周/ET时的皮肤耐受性。次要目的是评估Nitricil™ NVN1凝胶的安全状况。通过比较组之间的不良事件（包括物理检查和生命体征的临床显著变化）、血红蛋白和高铁血红蛋白百分比的变化，评估安全性。

进行效力的探索性分析，效力如通过痤疮丙酸杆菌的减少测得，这通过在基线访问、第1周和第2周/ET时来自培养物的生物体数量的改变测定。

该研究小组具有30名对象，他们是18岁和更大年龄的健康成年男性和女性并被痤疮丙酸杆菌定殖。小心筛选对象以确保无一在录取前4周内使用任何禁止的局部或全身抗生素。要求小组成员不使用任何药用洗发水。为该研究选择的志愿者在伍德氏灯下表现出面部皮肤的高荧光度，表明存在大量痤疮丙酸杆菌。基线痤疮丙酸杆菌计数为在面部皮肤上每平方厘米至少10,000个菌落。

所有对象符合下列入选/淘汰标准：

入选标准：

• 已签署书面知情同意书。

• 健康的成年男性或女性志愿者，18岁和更大年龄。

• 在伍德氏灯下表现出面部皮肤的高荧光度，表明存在大量痤疮丙酸杆菌。

• 没有任何重要的内科疾病（例如心血管病、肺病、肾病等）的既往或现病史。

• 如果是育龄女性（WOCBP），在基线时具有阴性尿妊娠试验结果（UPT）。

• 如果是WOCBP，同意在研究期间和在最后一次研究访问后30天使用有效的节育方法。服用激素类避孕药的女性必须在进入该研究之前服用同一类型至少3个月（90天）并且必须在研究期间不改变药物类型。过去使用激素类避孕药并停用的女性必须在研究开始前至少3个月停止使用。

• 同意避免使用抗微生物局部产品（洗发水、肥皂、痤疮制品等）。

• 服从并能如指示连续大约两周每天回来一次（周一-周五）。

淘汰标准：

对象如果符合下列淘汰标准的任一条，则不录取：

• 表现出任何急性或慢性皮肤病，包括牛皮癣、湿疹等。

• 具有在对面部施加任何面部护理（例如彩妆、肥皂、面膜、洗涤剂、防晒剂等）时发生明显烧灼或刺痛的历史。

• 怀孕、哺乳或计划在研究期间怀孕的女性对象。

• 不同意在研究全程性节制、避免捐精和/或使用阻隔物（男性避孕套）的男性对象。

• 在临基线访问前不到90天使用过***（例如Depogen、Depo-Testadiol、Gynogen、Valergen等）或口服避孕药，在基线前不到90天停用***或口服避孕药，或计划在治疗期间开始或停止使用这种疗法。

• 在前4周内用过已知影响痤疮丙酸杆菌计数的局部或全身抗生素，例如米诺环素、四环素、红霉素、克林霉素、强力霉素等。

• 在前6个月内使用可能影响皮肤表面痤疮丙酸杆菌水平的其它药物（例如类视黄醇类）。

• 同时使用***或其它一氧化氮供体药物。

• 在基线时具有临床显著性贫血（如由主要研究者确定）。

• 具有≥ 2.0%的筛选高铁血红蛋白值。

• 在筛选时具有如研究者确定的临床显著性贫血。

• 已知对研究产品中的任何组分过敏。

• 具有要求给予禁止的抗生素的并发疾病。

• 具有在研究者看来使该对象处于高风险下、可能混淆研究结果或可能明显干扰对象参与该研究的任何状况或情况。不应录取使用局部麻醉剂进行内窥镜检查的对象并应在内窥镜检查前退出研究。不应录取如研究者确定的具有临床显著性贫血的对象。

• 由于语言问题、心智发育不良或大脑功能受损而无法与研究者交流或协作。

• 在录取的30天内用过研究药物或装置或同时参与不同的研究。

志愿者可自由地在研究中的任何时刻撤销他们的同意并终止参与。

在录取前筛选候选人的资格。在确保合格并签署知情同意书后，获得痤疮丙酸杆菌的定量基线测量（在前额上）（见下文的“定量细菌学”部分）。

治疗计划：

治疗持续两周。每个工作日早晨，在Skin Study Center的技术人员监督下，志愿者洗脸，然后施加受试产品。在整个面部（4% TBSA）均匀施加大约1克Nitricil™ NVN1 4%凝胶或凝胶赋形剂（表12），避开眼和口。从双室泵通过按压泵3次分配研究产品。将分配的材料迅速（3-5秒）混合在一起，并以薄层施加到脸上，避开眼和口。然后将产品轻轻按摩到皮肤中大约30秒。对象在施加研究药物后洗手。小组成员晚上在家（无监督）进行这种洗脸、施加受试产品、然后洗手的程序。

所有治疗记录在对象日记中。

定量细菌学：

在基线(0)和在第1和2周从试验部位获得定量细菌培养物。根据Williamson和Kligman的技术（Williamson, P.和Kligman, A.M.: A new method for thequantitative investigation of cutaneous bacteria. Journal of InvestigativeDermatology 45: 498-503, 1965；Keyworth N., Millar, M.R.,和Holland, K.T.:Swab-Wash Method for Quantitation of Cutaneous Microflora.J.Clin.Microbiology, Vol. 28, 第941-943页, 1990）的改良形式获得样品。通过用浸透0.1% Triton-X-100的无菌纱布充分擦拭前额30秒以除去表面碎屑和细菌，清除该区域的表面细菌。然后用牢固固定到皮肤上的无菌塑料模板划定要培养的表面区域（4 cm²）。将无菌棉签浸到2毫升洗液（Bacto Letheen Broth, Difco, Sparks, MD, USA）中。然后用该棉签摩擦该区域30秒。然后将该棉签放回2毫升洗液中并在管侧边上挤干。然后再摩擦相同皮肤区域另外30秒，此后将该棉签再放回2毫升洗液中并在管侧边上挤干。然后将该棉签折断到该2毫升洗液中。随后如Williamson-Kligman方法中所述处理样品，即洗过的样品使用0.05% Tween-80（用0.075M磷酸盐缓冲液缓冲, pH 7.9）在4次10倍稀释中连续稀释。使用微量移液器，将0.05毫升各稀释液置于含有补充了酵母提取物、葡萄糖和半胱氨酸的布氏琼脂的琼脂板的指定区域上，每个板5滴稀释液。对各对象制备两份一样的板。使板干燥，置于带有BBL Gas Pak Plus厌氧***封套的厌氧罐中并在36.5-37.50C下厌氧培养7天。在稀释后计数痤疮丙酸杆菌的集落形成单位（cfu），其含有10至100 cfu。计算痤疮丙酸杆菌的总密度并报告为每平方厘米的log₁₀ cfu。

皮肤耐受性评估：

在基线、第1周和第2周，在治疗前由皮肤科医生进行皮肤耐受性评估。皮肤耐受性终点除非达到重度和/或导致对象退出该研究才被报告为AE。根据下列标度进行皮肤耐受性评估：

红疹

0-无 不存在红疹迹象

1-轻度 轻微粉色

2-中度 明确发红

3-重度 显著红疹，颜色为亮红色至暗红色

鳞屑

0-无 无鳞屑

1-轻度 在面部的有限区域存在轻微鳞屑，几乎不可察觉

2-中度 扩散至面部整个区域的轻微鳞屑

3-重度 在面部整个区域上的皮肤起屑和脱皮

干燥

0-无 无干燥

1-轻度 轻微但明确的粗糙

2-中度 中等粗糙

3-重度 显著粗糙

瘙痒

0-无 不痒

1-轻度 轻微发痒，不是非常困扰

2-中度 中等发痒，有点困扰

3-重度 严重发痒，明确不适并可能干扰睡眠

烧灼/刺痛

0-无 无烧灼/刺痛

1-轻度 轻微的温热、烧灼/刺痛感；不是非常困扰

2-中度 明确的温热、烧灼/刺痛感，有点困扰

3-重度 热、发麻感，造成明确不适并可能干扰睡眠。

实验室评估：

在基线和第1和2周/ET时使用Masimo Rainbow® SET® Rad-57™脉搏碳氧血氧仪（pulse co-oximeter）测量血红蛋白。血红蛋白量（g/dL）显示在脉搏碳氧血氧仪上并记录在CRF上。

在基线和第1和2周/ET时使用Masimo Rainbow® SET® Rad-57™脉搏碳氧血氧仪测量高铁血红蛋白。高铁血红蛋白百分比显示在脉搏碳氧血氧仪上并记录在CRF上。

所有WOCBP在基线和她们的最后一次评估随访（第2周/ET）时进行尿妊娠试验（UPT）。

在基线和第2周/ET时进行简短物理检查。

在基线和第1和2周/ET时收集收缩压和舒张压和脉搏。

数据处理：

培养物一式两份地以从100至104的10倍稀释接种。由该稀释获得细菌计数，此时集落形成单位（CFUs）明显分散，然后换算成每平方厘米的总数。在单独的列中提供各板的原始数据和平均数。分类模板基于Excel 2007试算表软件。将各期（session）的分类数据制表。

数据分析涉及配对T检验以将基线平均值与治疗点进行比较。使用Student’s T-检验比较这两个治疗的平均值。显著差异要求双尾p < 0.05。

为此研究筛选三十三（33）名小组成员并录取总共三十（30）名小组成员。二十九（29）名小组成员完成。一名小组成员因使用后发红而退出该研究。没有不良事件。

皮肤科医生在此研究过程中没有观察到红疹或鳞屑。如下记录轻微干燥、瘙痒和烧灼或刺痛。

使用Nitricil™ NVN1 4%凝胶（治疗A）的三名对象在第2周报告干燥。使用治疗A的两名对象在第1周报告瘙痒。在第1周，使用治疗A的一名对象报告烧灼/刺痛。

在此试验中，在B.I.D.治疗1和2周后评估4% Nitricil™ NVN1凝胶制剂的皮肤耐受性和全身安全性。此外，在治疗1和2周后进行痤疮丙酸杆菌（对寻常痤疮中的发炎负责的生物体）的体内减少的探索性分析。试验小组由30名痤疮丙酸杆菌水平为10⁴/cm²或更高的健康志愿者构成；20人用活性剂治疗，10人用赋形剂治疗。

受试剂及其赋形剂耐受极好。在第1周随访时，除1名小组成员的中度瘙痒和另一小组成员的轻度瘙痒外，没有看出刺激的客观迹象和瘙痒、烧灼或刺痛的主观症状。1名小组成员在第1周报告轻度烧灼/刺痛。3名小组成员在第2周看出轻度干燥。1名小组成员在第1天因担心受试试剂引起的生理血管舒张而退出。在这名小组成员中没有看出刺激迹象。

在基线与治疗终点之间没有看出血压、脉搏或物理检查结果的临床显著变化。没有发现高铁血红蛋白百分比或血红蛋白浓度的临床显著变化。

在治疗1周后，活性剂的平均对数减少为0.38，与此相比，赋形剂为0.20。在2周后，活性剂具有0.51的平均减少，与此相比，赋形剂为0.26。使用Student’s T-检验，第2周的差异在统计上显著（p = 0.04）。该响应在受试试剂中可变，2名小组成员在治疗2周后表现出大于1的对数减少，另外5名具有0.5或更大但小于1的对数减少，3名小组成员表现出小于赋形剂组中的平均减少。

协方差分析（ANCOVA）证明在第1周和第2周痤疮丙酸杆菌计数的统计显著差异（图9）。

受试试剂及其赋形剂耐受良好并且没有表现出皮肤或全身毒性迹象。看出对痤疮丙酸杆菌的可变体内抗菌作用，这在痤疮疗法中可能有益。

实施例7

此研究是用于比较两种浓度的Nitricil™ NVN1凝胶和赋形剂凝胶在治疗12周的具有寻常痤疮的对象中的效力、安全性和耐受性的多中心、随机、评定者盲化、赋形剂对照、平行组、三臂研究。录取符合研究入选标准的对象并随机分配为接受Nitricil™ NVN1 1%凝胶、Nitricil™ NVN1 4%凝胶或赋形剂凝胶的局部施用（表13）。对象以1:1:1的比率随机分配到Nitricil™ NVN1 1%凝胶、Nitricil™ NVN1 4%凝胶或赋形剂凝胶并被指示每天给药两次（早晚），持续12周（84天）。在基线访问时在研究点进行研究药物的首次施用。

表13: 在双室泵中的试验制品（Nitricil™ NVN1 1%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶）和参比（赋形剂凝胶）制剂

¹ "x"是指无效数字

²足以为室B提供pH 4的量

³足以得出总量的量。

在基线访问后，前四周大约每两周一次，接着后八周每四周一次进行研究访问。研究持续期直至治疗84天。

效力评估包括炎性（丘疹和脓疱）和非炎性（开放性和封闭性粉刺）损伤计数、结节和囊肿计数和研究者总体评估（Investigator’s Global Assessment）（IGA），它们在基线和第4、8和12周/提前终止（ET）时进行。

另一些评估包括照片和皮脂收集。在基线、第4周和第12周/ET时收集照片。在基线、第4周和第12周/ET时在两个研究点使用Sebutapes®从录用对象的前额中央收集皮脂。

耐受性和安全性评估包括皮肤耐受性评估、不良事件（AE）收集、物理检查，包括血压和脉搏率、高铁血红蛋白和血红蛋白测量和尿妊娠试验（UPTs）。在基线访问时首次施加研究药物之前和之后30分钟和在随后的每次访问时进行皮肤耐受性评估（红疹、鳞屑、干燥、瘙痒和烧灼/刺痛）。除基线外的访问的皮肤耐受性评估在施加研究药物后至少30分钟进行。在对象已签署知情同意书并完成任何研究评估后开始收集AEs直至最后一次研究访问结束。在基线（第1次访问/第0天）和第12周/ET时进行简短物理检查。在基线和第2、4、8和12周/ET时在给药前收集血压和脉搏率。在基线、第2周和第12周/ET时使用分析高铁血红蛋白和血红蛋白水平的Masimo Rainbow® SET® Rad-57™脉搏碳氧血氧仪测量高铁血红蛋白和血红蛋白。在基线时高铁血红蛋白值> 2.0%的对象和在基线时具有临床显著性贫血的对象不适合参与该研究。所有育龄妇女（WOCBP）在基线时必须经过UPT，如果结果呈阳性，不允许该对象参与该研究。WOCBP还要在第4、8和12周/ET进行UPT。要求提前终止的对象在提前终止时完成所有第12周/ET评定。

意向治疗人群中的对象数为：赋形剂凝胶组52名对象，Nitricil™ NVN1 1%凝胶组51名对象，Nitricil™ NVN1 4%凝胶组50名对象。但是，并非所有对象都完成该研究，因此赋形剂凝胶组有45名对象完成该研究，Nitricil™ NVN1 1%凝胶组有43名对象完成该研究，Nitricil™ NVN1 4%凝胶组有41名对象完成该研究。

该研究包括具有寻常痤疮的12至40岁（包括12和40岁）的任何种族的健康男性和女性。对象必须已有至少20但不大于40处炎性损伤（丘疹和脓疱）、25至70处非炎性损伤（开放性和封闭性粉刺）、不多于2个结节和2、3或4的研究者总体评估（IGA）。

通过每天两次（早晚）在整个面部均匀施加大约1克，施加Nitricil™ NVN1 1%凝胶、Nitricil™ NVN1 4%凝胶和赋形剂凝胶。从双室泵以1:1的比率同时分配活性凝胶（室A）和水凝胶（室B）并在施加前立即由对象混合。从双室泵同时分配赋形剂凝胶（室A）和水凝胶（室B）并在施加前立即由对象混合。

在基线和第4、8和12周/ET时，研究者计数对象面部，包括前额、右脸颊和左脸颊、下巴和鼻子上的非炎性损伤总数。在基线和第4、8和12周/ET时，研究者还计数对象面部，包括前额、右脸颊和左脸颊、鼻子和下巴上的炎性损伤总数。分开报告鼻子的损伤计数（炎性和非炎性）和结节和囊肿数，但为了分析，炎性损伤计数包括丘疹、脓疱和结节/囊肿的总数。

在基线和第4、8和12周/ET时进行IGA。基于寻常痤疮的总体征和症状的研究者评估确定IGA分数。以0（光洁）至4（严重）的标度将评估结果评分。

在基线、第4周和第12周/ET时收集照片。

在基线、第4周和第12周/ET时在两个研究点使用Sebutapes®从录用对象的前额中央收集皮脂。

除在每次研究访问时评估外，研究者在首次施加研究产品之前和之后30分钟评估对象的面部。除基线外的访问的皮肤耐受性评估应在施加研究药物后至少30分钟进行。皮肤耐受性评估包括红疹、鳞屑、干燥、瘙痒和烧灼/刺痛。

在基线、第2周和第12周使用分析高铁血红蛋白和血红蛋白水平的MasimoRainbow® SET® Rad-57™脉搏碳氧血氧仪测量高铁血红蛋白和血红蛋白。

在基线（第1次访问/第0天）和第12周/ET时进行简短物理检查。在基线和第2、4、8和12周/ET时在给药前收集血压和脉搏率。研究者在每次排定的研究访问时评估对象的AEs发生。

主要疗效终点是第12周包括鼻子的面部上的非炎性损伤计数与基线相比的绝对变化。

使用协方差分析（ANCOVA）以治疗和研究点和基线损伤计数的因子作为协变量进行第12周包括鼻子的面部上的非炎性损伤计数的绝对变化的主要终点的分析。也进行线性回归以测定剂量响应，其中跨过不同的治疗（1%和4%）评估斜率（β)且其中赋形剂凝胶被标作用于该回归的0%。零位检验在于β = 0 vs 替代方案（the alternative）在于β不等于0。具有正数β的零假设的剔除指示剂量响应。

次要疗效终点是：第12周炎性损伤计数与基线相比的绝对变化、第12周不包括鼻子的面部上的非炎性损伤计数与基线相比的绝对变化和第12周的对分（dichotomized）IGA。

炎性损伤计数包括丘疹、脓疱和结节/囊肿的总数。

第12周炎性损伤计数的绝对变化的分析使用对包括鼻子的非炎性损伤计数变化的主要疗效分析概述的相同方法。

第12周不包括鼻子的面部上的绝对非炎性损伤计数的分析使用对包括鼻子的面部上的非炎性损伤计数变化的主要疗效分析概述的相同方法。

使用逻辑回归模型分析第12周的对分（dichotomized）IGA分数，其中治疗和研究点是独立因子。作为该逻辑回归中的因变量，将该对分IGA分数再标作0（即失败）和1（即成功）。“成功”被定义为“光洁”（0）或“几乎光洁”（1）的分数并从基线改进至少2个等级。另外，使用通过研究点分层的Cochran-Mantel-Haenszel（CMH）检验比较治疗组。不考虑对多重性的控制，计算成对比较。

在每次评定时以频率计数和百分比概括皮肤耐受性评估（红疹、鳞屑、干燥、瘙痒和烧灼/刺痛）。以血红蛋白的百分比报告高铁血红蛋白。也报告总血红蛋白。在基线和第2和12周由治疗组描述性总结高铁血红蛋白和血红蛋白并包括样品量、平均值、中值、标准偏差（SD）、最小值和最大值。另外，总结第2和12周高铁血红蛋白和血红蛋白从基线的改变。

作出总结以描述报告的AEs的特征并包括报告至少一个AE的对象的数量和百分比和通过严重程度（severity）、严重性（seriousness）和与研究药物的关系报告的事件数。

用平均值、SD、最小值和最大值在基线、第2周、第4周、第8周和第12周/ET时总结血压和脉搏率以及治疗组在第12周/ET时从基线的改变。

对于ITT人群，Nitricil™ NVN1 1%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶对于绝对非炎性损伤（包括和不包括鼻子）的从基线的LSMean变化统计显著地比相应赋形剂凝胶对于绝对非炎性损伤（包括和不包括鼻子）的从基线的LSMean变化大的降低，但没有看出线性剂量响应。Nitricil™ NVN1 4%凝胶对于绝对炎性损伤从基线的LSMean变化统计显著地比赋形剂凝胶对于绝对炎性损伤从基线的LSMean变化大的降低，但Nitricil™ NVN1 1%凝胶对于绝对炎性损伤从基线的LSMean变化没有在统计上不同于赋形剂凝胶对于绝对炎性损伤从基线的LSMean变化。看出线性剂量响应。对于对分IGA，在治疗组之间没有看出差异。具体而言

·对于Nitricil™ NVN1 1%凝胶组，非炎性损伤（包括鼻子）从基线的LSMean绝对变化为-11.8个损伤，与此相比，赋形剂凝胶组为-0.7个损伤（p=0.022）。对于Nitricil™NVN1 4%凝胶组，非炎性损伤（包括鼻子）从基线的LSMean绝对变化为-11.1个损伤，与此相比，赋形剂凝胶组为-0.7个损伤（p=0.031）。在治疗组之间没有看出线性剂量响应（p=0.105）。对于Nitricil™ NVN1 1%凝胶组，炎性损伤从基线的LSMean绝对变化为-13.8个损伤，与此相比，赋形剂凝胶组为-9.4个损伤（p=0.088）。对于Nitricil™ NVN1 4%凝胶组，炎性损伤从基线的LSMean绝对变化为-15.5个损伤，与此相比，赋形剂凝胶组为-9.4个损伤（p=0.018）。在治疗组之间看出线性剂量响应（p=0.033）。

·对于Nitricil™ NVN1 1%凝胶组，非炎性损伤（不包括鼻子）从基线的LSMean绝对变化为-10.9个损伤，与此相比，赋形剂凝胶组为-1.3个损伤（p=0.032）。对于Nitricil™NVN1 4%凝胶组，非炎性损伤（不包括鼻子）从基线的LSMean绝对变化为-10.6个损伤，与此相比，赋形剂凝胶组为-1.3个损伤（p=0.039）。在治疗组之间没有看出线性剂量响应（p=0.118）。

·就对分IGA而言，Nitricil™ NVN1 1%凝胶组的0.0%（0/51）的对象被表征为成功，与此相比赋形剂凝胶组为1.9%（1/52）的对象（p≥0.317）。就对分IGA而言，Nitricil™NVN1 4%凝胶组的2.0%（1/50）的对象被表征为成功，与此相比赋形剂凝胶组为1.9%（1/52）的对象（p≥0.601）。

对于安全性人群，Nitricil™ NVN1 1%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶安全并通常耐受良好。没有严重的不良事件且Nitricil™ NVN1 1%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶表现出良好的皮肤耐受性。高铁血红蛋白和血红蛋白结果的审查没有识别出任何安全信号。生命体征结果的审查没有识别出任何安全信号。

对于PP人群，Nitricil™ NVN1 1%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶都表现出与赋形剂凝胶相比非炎性损伤随时间经过的平均百分比降低（图10）。图10显示，Nitricil™NVN1 1%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶组都在第4周发生与赋形剂凝胶组的分离。在第4周，赋形剂凝胶组具有6%的非炎性损伤的平均百分比降低，而Nitricil™ NVN1 1%凝胶组具有14%的非炎性损伤的平均百分比降低，且Nitricil™ NVN1 4%凝胶组具有24%的非炎性损伤的平均百分比降低。PP人群的非炎性损伤计数提供在表14中。

表14: 在对符合方案人群的每次评估时非炎性损伤数（包括鼻子）的概要

在PP人群中对Nitricil™ NVN1 1%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶都看出与赋形剂凝胶相比炎性损伤随时间经过的平均百分比降低（图11）。图11显示Nitricil™ NVN11%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶组都在第4周发生与赋形剂凝胶组的分离。在第4周，赋形剂凝胶组具有14%的炎性损伤的平均百分比降低，而Nitricil™ NVN1 1%凝胶组具有26%的炎性损伤的平均百分比降低，且Nitricil™ NVN1 4%凝胶组具有31%的炎性损伤的平均百分比降低。

对于PP人群，在第12周，炎性损伤的中值百分比降低如下：Nitricil™ NVN1 1%凝胶组为56%、Nitricil™ NVN1 4%凝胶组为66%、且赋形剂凝胶组为42%。因此，对于各组，PP人群的炎性损伤的中值百分比降低高于PP人群的炎性损伤的平均百分比降低。对于Nitricil™ NVN1 4%凝胶组，完成该研究的41名患者中的20名具有大于70%的炎性损伤降低。PP人群的炎性损伤计数提供在表15中。

表15: 在对符合方案人群的每次评估时炎性损伤数的概要

与赋形剂凝胶组相比，Nitricil™ NVN1 1%凝胶组有效降低非炎性和炎性损伤（包括和不包括鼻子）数，且Nitricil™ NVN1 4%凝胶组有效降低非炎性损伤（包括和不包括鼻子）和炎性损伤数。Nitricil™ NVN1 4%凝胶组表现出与赋形剂凝胶组相比统计显著的差异，Nitricil™ NVN1 4%凝胶组在主要和次要终点不同于赋形剂组。Nitricil™ NVN11%凝胶和Nitricil™ NVN1 4%凝胶都安全和耐受良好，并且没有识别出安全信号。

实施例8

三名有进行痤疮临床研究经验的美国皮肤病学委员会（American Board ofDermatology）认证的皮肤科医生基于实施例7中描述的研究进行post-hoc研究者总体评估（post-hoc Investigator’s Global Assessment（IGA））分析。这一分析的意图是让有进行美国批准的临床试验的经验的研究者评估治疗结果。在表16中提供用于实施例7和8的IGA评分描述。“成功”的定义是治疗结束时的分数为“0”（光洁）或“1”（几乎光洁）和从基线改变最少2个等级。

表16: 用于实施例7和8中描述的研究的IGA评分描述

等级	描述
		0	无炎性或非炎性损伤的光洁皮肤
1	几乎光洁；罕见非炎性损伤，不多于一个炎性损伤
		2	轻度严重程度；大于等级1；一些非炎性损伤，仅少数炎性损伤（仅丘疹/脓疱，无结节病变）
3	中等严重程度；大于等级2；多达许多非炎性损伤并可能具有一些炎性损伤，但不多于一个小结节病变
		4	严重；大于等级3；多达许多非炎性和炎性损伤，但仅少数结节病变

这三名委员会认证的皮肤科医生进行在基线和第12周获自对象的临床影像的盲态评审并将在基线和第12周获取的影像“评分”。结果提供在下表17中。所有三名皮肤科医生都判定Nitricil™ NVN1凝胶，特别是Nitricil™ NVN1 4%凝胶在寻常痤疮的治疗中具有活性。

表17: Post-hoc分析结果.

实施例9

制备包含过氧化苯甲酰的美观优雅的组合物。各组合物含有两个部分，第一部分是含有羧聚乙烯的过氧化苯甲酰凝胶，第二部分是含有纤维素的组合物。将各部分装入YonWoo 2 x 15 mL双室泵的一个室。在表18和19中提供过氧化苯甲酰凝胶制剂，并在表20中提供单独与这两种过氧化苯甲酰凝胶制剂之一合并的纤维素组合物。

表18: 过氧化苯甲酰凝胶制剂1.

成分	% w/w	g/批（计算值）
			水	35.0	175.0
乙醇，无水	30.0	150.0
			己二醇	12.0	60.0
过氧化苯甲酰, 75% (Luperox<sup>®</sup> A75FP)*	6.7	33.5
			Carbopol<sup>®</sup> 974P	1.0	5.0
EDTA二钠	0.1	0.5
			三乙醇胺	QS至pH 6	QS至pH 6
水	QS	QS
			总计	100.00	500.0

*调节过氧化苯甲酰的量以产生5%的最终浓度。

表19: 过氧化苯甲酰凝胶制剂2.

成分	% w/w	g/批（计算值）
			水	33.0	165.0
乙醇，无水	30.0	150.0
			Transcutol<sup>®</sup> P	12.0	60.0
过氧化苯甲酰, 75% (Luperox<sup>®</sup> A75FP)*	6.7	33.5
			Labrasol<sup>®</sup>	6.0	30.0
环甲基硅酮	5.0	25.0
			Klucel<sup>®</sup> MF Pharm	1.0	5.0
Carbopol<sup>®</sup> 974P	0.6	3.0
			苯氧基乙醇	1.0	5.0
EDTA二钠	0.1	0.5
			三乙醇胺	QS至pH 6	QS至pH 6
水	QS	QS
			总计	100.0	500.0

*调节过氧化苯甲酰的量以产生5%的最终浓度。

表20: 单独与各过氧化苯甲酰制剂合并的纤维素组合物

成分	% w/w
		异丙醇	85.5
己二醇	10.00
		环甲基硅酮	2.50
羟丙基纤维素	2.00

上文举例说明本发明而不应被视为其限制。由下列权利要求规定本发明，其中包括权利要求的等同物。本文引用的所有出版物、专利申请、专利、专利公开和其它参考资料就其与作出引用的句子和/或段落有关的教导全部经此引用并入本文。

Claims (10)

1.组合物，其包含：

水性组合物，其在与无水组合物的混合物中，其中所述水性组合物与所述无水组合物的比率为3:1或更低；

其中所述水性组合物是缓冲的水凝胶并且包含：

所述水性组合物的0.6重量%至5重量%的量的第一增粘剂，其中所述第一增粘剂是纤维素醚或羧聚乙烯；

所述水性组合物的1重量%至30重量%的量的至少一种多元醇；

至少一种缓冲剂；

水；和

任选地至少一种防腐剂；

其中所述无水组合物是醇凝胶并且包含：

所述无水组合物的0.5重量%至30重量%的量的第二增粘剂；

所述无水组合物的50重量%至90重量%的量的至少一种醇；

所述无水组合物的2重量%至20重量%的量的至少一种保湿剂；和

二醇二氮烯鎓改性的聚硅氧烷大分子，其包含共缩合硅氧烷网络。

2.权利要求1的组合物，其中所述水性组合物是以3:1的比率在与无水组合物的混合物中。

3.权利要求1的组合物，其进一步包含至少一种拒水剂。

4.权利要求1的组合物，其进一步包含至少一种中和剂。

5.权利要求1的组合物，其中所述组合物在局部施加到对象的皮肤上时具有3至8的pH。

6.权利要求1的组合物，其中在将所述组合物局部施加到对象的皮肤上后，所述二醇二氮烯鎓改性的聚硅氧烷大分子经大约3小时或更短时间释放至少50%的量的一氧化氮。

7.药盒，其包含：

具有3至6.5的范围内的pH的缓冲的水凝胶，其包含

以所述水凝胶的1重量%至30重量%的量存在的至少一种多元醇；

以所述水凝胶的0.6重量%至5重量%的量存在的第一增粘剂，其中所述第一增粘剂是纤维素醚或羧聚乙烯；

至少一种缓冲剂；和

水；和

无水醇凝胶，其包含：

二醇二氮烯鎓改性的聚硅氧烷大分子，其包含共缩合硅氧烷网络；

以所述无水醇凝胶的0.5重量%至30重量%的量存在于该无水醇凝胶中的第二增粘剂；

以所述无水醇凝胶的50重量%至90重量%的量存在于该无水醇凝胶中的至少一种醇；和

以所述无水醇凝胶的2重量%至20重量%的量存在于该无水醇凝胶中的至少一种保湿剂。

8.权利要求7的药盒，其中所述缓冲的水凝胶和无水醇凝胶分开储存。

9.权利要求1的组合物，其中所述水性组合物是以1:1的比率在与无水组合物的混合物中。

10.权利要求1的组合物，其中所述第一增粘剂包含羧聚乙烯，所述至少一种多元醇是甘油，所述至少一种缓冲剂是乳酸，和水以所述水性组合物的70重量%至99重量%的量存在。

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