CN113588602A - 一种甲状旁腺激素快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甲状旁腺激素快速检测方法，包括以下几个步骤，(1)纳米金溶液制备；(2)用DMSO将DSP配置成1nmol的浓度，使DSP分子吸附到金纳米粒子表面，得到DSP‑AUNPS溶液；(3)形成PTH抗体‑DSP‑AuNPs复合物；(4)采用表面等离子体仪进行波长偏移测量显示，表面等离子体仪通过光纤探针连接有金膜纳米孔SPR芯片，制作标准曲线；缩短检测时间，表面等离子体检测，无需荧光标记，避免了杂质蛋白，背景荧光，待测蛋白光解和光褪色的影响，使检测过程更加简便，检测结果更加准确。
Description
技术领域
本发明属于甲状旁腺激素检测的技术领域，特别是涉及一种甲状旁腺激素快速检测方法。
背景技术
甲状旁腺是人体的内分泌腺体，主要功能为分泌甲状旁腺激素(PTH)，动员骨钙入血，使血钙水平升高，血磷水平下降。术中快速测定PTH的含量与术前激素水平对比，及时采取处理，可有效减少甲状腺癌术后并发症的发生。
目前临床中检测PTH的方法主要为化学发光免疫分析法，检测需要4-6小时，由于PTH半衰期只有2-4分钟，化学发光法检测的主要是PTH代谢后的片段，无法真实反应手术后的PTH的即时浓度，
表面等离子体是一种在金属膜表面来回震荡的电子波。这种表面波可通过一束普通的白光激发，其透射光会失去一种颜色。金属膜表面即使只有微量的异物附着上去，这个失去的颜色会随着异物量的增加而发生漂移。我们通过探测这个微小颜色变化就可以灵敏地感知环境中异物的微小含量，是一种高灵敏度低探测极限的化学分子检测平台。如果事先将一种检测某种蛋白的抗体修饰在金膜表面，当金膜置于含有此种蛋白的溶液中，该蛋白会与抗体结合，而溶液中的其他任何物质不会和抗体结合。通过测试入射光失去的颜色相对于蛋白结合前的颜色漂移，并与校准值比较就可以测出该蛋白的含量
随着光纤表面等离子体技术的逐步成熟，其在蛋白检测中显示出非常好的检测灵敏度和特异性，利用纳米金粒子放大检测信号、双抗体夹心法结合血浆中游离的PTH，同时结合表面等离子体快速检测技术，开发了一种快速血液中PTH的方法，该方法的成功运用，可很好的解决PTH检测时间长，过程繁琐的问题，可在手术现场快速检测PTH，缩短检测时间，实现其即时检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种甲状旁腺激素快速检测方法，很好的解决PTH检测时间长，过程繁琐的问题，可在手术现场快速检测PTH，缩短检测时间，实现其即时检测。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：
一种甲状旁腺激素快速检测方法，包括以下几个步骤，
(1)纳米金溶液制备：将1mL 1％的氯金酸和99mL的去离子水在容器中加热至沸腾，然后加入4mL 1％的柠檬酸钠溶液，在沸腾的情况下继续搅拌15min结束，得到纳米金溶液；
(2)用DMSO将DSP配置成1nmol的浓度，取10ul加入10ml的纳米金溶液中，搅拌20min，使DSP分子吸附到金纳米粒子表面，4℃过夜，得到DSP-AUNPS溶液；
(3)取适量PTH抗体加入DSP-AuNPs溶液，室温搅拌20min，形成PTH抗体-DSP-AuNPs复合物。
(4)采用表面等离子体仪进行波长偏移测量显示，表面等离子体仪通过光纤探针连接有金膜纳米孔SPR芯片；
首先在金膜纳米孔SPR芯片传感区域通入PBS溶液，等基线平稳后，通入PTH抗体-DSP-AuNPs复合物溶液一段时间，待通入信号基线平稳后，由低到高通入PTH抗原浓度为0、1pmol、0.01nmol、0.1nmol、1nmol、0.01μmol、0.1μmol、1μmol的PTH-PTH抗体-DSP-AuNPs复合物溶液，记录波长偏移数值；制作标准曲线；
(5)待测PTH抗原浓度检测：将待测溶液通入金膜纳米孔SPR芯片传感区，检测波长偏移数值，根据波长偏移数值与标准曲线对照得出准确待测溶液中PTH抗原浓度。
进一步地，步骤(1)中纳米金粒子的直径约为17nm。
进一步地，所述金膜纳米孔SPR芯片包括玻璃基质，所述玻璃基质的检测面设置有金膜。
进一步地，所述金膜的等离子传感表面上，设置有自组装的苯甲酸酐。
本发明具有以下有益效果：
1缩短检测时间：目前最常用的PTH检测方法是化学发光法，检测时间需要4-6小时，而PTH本身易降解，化学发光免疫分析法测定的主要是PTH片段，无法真实反应手术后PTH的及时浓度，本发明可将检测时间缩短至5min以内，在PTH降解前检测其浓度，跟准确地反应PTH的变化。
2表面等离子体检测，无需荧光标记，避免了杂质蛋白，背景荧光，待测蛋白光解和光褪色的影响，使检测过程更加简便，检测结果更加准确。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1：本发明纳米金粒子投射电镜图。
图2：本发明金膜纳米孔SPR芯片的结构示意图
图3：本发明不同浓度PTH引起的波长漂移图。
图4：本发明PTH在1pM至1μM的线性范围图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“开孔”、“上”、“下”、“厚度”、“顶”、“中”、“长度”、“内”、“四周”等指示方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的组件或元件必须具有特定的方位，以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
一种甲状旁腺激素快速检测方法，其特征在于：包括以下几个步骤，
(1)纳米金溶液制备：将1mL 1％的氯金酸和99mL的去离子水在容器中加热至沸腾，然后加入4mL 1％的柠檬酸钠溶液，在沸腾的情况下继续搅拌15min结束，得到纳米金溶液；下图是合成金纳米的投射电镜图像，可以看出直径大约为17nm，如图2所示。
(2)用DMSO将DSP配置成1nmol的浓度，取10ul加入10ml的纳米金溶液中，搅拌20min，使DSP分子吸附到金纳米粒子表面，4℃过夜，得到DSP-AUNPS溶液；
其中，DMSO为二甲基亚砜，DSP为N-羟基琥珀亚胺酯。4℃过夜是在4℃冰箱中过夜，用于DSP和金纳米充分结合。
DMSO作为有机溶剂，又称为万能溶剂，DSP直接加入胶体金溶液不容易溶解，所以用DMSO先将DSP溶解后加入纳米金溶液。
(4)取适量PTH抗体加入DSP-AuNPs溶液，室温搅拌20min，形成PTH抗体-DSP-AuNPs复合物；如图1所示。
PTH为甲状旁腺激素，DSP-AuNPs溶液为吸附了N-羟基琥珀酸亚胺酯的纳米金溶液。
(4)采用表面等离子体仪进行波长偏移测量显示，表面等离子体仪通过光纤探针连接有金膜纳米孔SPR芯片；
首先在金膜纳米孔SPR芯片传感区域通入PBS溶液，等基线平稳后，通入PTH抗体-DSP-AuNPs复合物溶液一段时间(20分钟)，待通入信号基线平稳后，由低到高通入PTH抗原浓度为0、1pmol、0.01nmol、0.1nmol、1nmol、0.01μmol、0.1μmol、1μmol的PTH-PTH抗体-DSP-AuNPs复合物溶液，记录波长偏移数值；制作标准曲线；如图3-4所示。PBS溶液为磷酸盐缓冲液。
PBS是常用缓冲液，用来溶解和稀释标准蛋白及待测样本，同时作为空白对照设定零值。
(5)待测PTH抗原浓度检测：将待测溶液通入金膜纳米孔SPR芯片传感区，检测波长偏移数值，根据波长偏移数值与标准曲线对照得出准确待测溶液中PTH抗原浓度。
所述金膜纳米孔SPR芯片包括玻璃基质，所述玻璃基质的检测面设置有金膜。
所述金膜的等离子传感表面上，设置有自组装的苯甲酸酐。用于单层膜捕获PTH抗体。
苯甲酸酐上的羟基能够和PTH抗体蛋白末端的羧基发生酯化反应，从而帮助金膜捕获抗体。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (4)
1.一种甲状旁腺激素快速检测方法，其特征在于：包括以下几个步骤，
(1)纳米金溶液制备：将1mL1％的氯金酸和99mL的去离子水在容器中加热至沸腾，然后加入4mL1％的柠檬酸钠溶液，在沸腾的情况下继续搅拌15min结束，得到纳米金溶液；
(2)用DMSO将DSP配置成1nmol的浓度，取10ul加入10ml的纳米金溶液中，搅拌20min，使DSP分子吸附到金纳米粒子表面，4℃过夜，得到DSP-AUNPS溶液；
(3)取适量PTH抗体加入DSP-AuNPs溶液，室温搅拌20min，形成PTH抗体-DSP-AuNPs复合物；
(4)采用表面等离子体仪进行波长偏移测量显示，表面等离子体仪通过光纤探针连接有纳米金膜SPR芯片；
首先在纳米金膜SPR芯片传感区域通入PBS溶液，等基线平稳后，通入PTH抗体-DSP-AuNPs复合物溶液一段时间，待通入信号基线平稳后，由低到高通入PTH抗原浓度为0、1pmol、0.01nmol、0.1nmol、1nmol、0.01μmol、0.1μmol、1μmol的PTH-PTH抗体-DSP-AuNPs复合物溶液，记录波长偏移数值；制作标准曲线；
(5)待测PTH抗原浓度检测：将待测溶液通入金膜纳米孔SPR芯片传感区，检测波长偏移数值，根据波长偏移数值与标准曲线对照得出准确待测溶液中PTH抗原浓度。
2.根据权利要求1所述一种甲状旁腺激素快速检测方法，其特征在于：步骤(1)中纳米金粒子的直径约为17nm。
3.根据权利要求1所述一种甲状旁腺激素快速检测方法，其特征在于：所述金膜纳米孔SPR芯片包括玻璃基质，所述玻璃基质的检测面设置有金膜。
4.根据权利要求3所述一种甲状旁腺激素快速检测方法，其特征在于：所述金膜的等离子传感表面上，设置有自组装的苯甲酸酐。
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