CN113583892A - 一种会理链霉菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种链霉菌，其为链霉菌属的一个新种，命名为：Streptomyceshuiliensis sp.nov.，于2021年3月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2021298T。该菌株具有稳定广谱抑菌活性，对尖孢镰刀菌4号生理小种、尖孢镰刀菌1号生理小种、香蕉长形斑病菌、香蕉大灰斑病菌、草莓炭疽病菌、和香蕉炭疽病菌等多种常见作物病原真菌有较强的抑菌作用，其发酵粗提物可以有效抑制Foc TR4真菌的菌丝生长和孢子萌发，最低抑菌浓度为6.25μg/ml，具有潜在的应用价值，为枯萎病等多种植物病害的防治拓展新领域，具有良好的开发应用前景。

Description

一种会理链霉菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一种会理链霉菌及其应用。
背景技术
植物真菌病害严重威胁农作物生产的安全和稳定。全球每年因植物病害引起10％～16％农业产量损失，其中70％～80％是由病原真菌侵染所致(吴志明等，2018)。化学农药虽然对多种病害有较理想的防治效果，但对一些病害，尤其是土传真菌病害防效较差，而且长期使用化学农药会诱发病原菌的抗药性，同时对环境造成污染，并对人畜产生毒副作用。利用高效、低毒的微生物生防制剂控制植物病害的生物防治被认为是一种可行的替代方法(Asghar and Mohammad,2010)。
链霉菌是重要的生物防治资源，它们能产生数量众多、功能和结构各异的生物活性次生代谢产物，从而提高植物对于生物与非生物逆境的抵御能力。目前已知链霉菌产生9000多种具有生物活性物质，其中120多种得到了应用，占已得到应用的微生物来源的生物活性物质数量的75％(朱志炎等，2019)。然而，根据预测，超过90％的链霉菌生物活性代谢物有待被发现，链霉菌产生新类型的次级代谢的能力似乎是无穷无尽的(Berdy,2005)。新的拮抗链霉菌菌株的发现对开发新型微生物生防制剂提供了必要的条件。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种链霉菌属新种，会理链霉菌(Streptomyces huiliensis sp.nov.，具有稳定广谱拮抗活性，对尖孢镰刀菌等多种常见作物病原真菌有较强的抑菌作用。
本发明的第一个方面是提供一种链霉菌，其为链霉菌属的一个新种，命名为：Streptomyces huiliensis sp.nov.，(中文译名为会理链霉菌，实验室编号为SCA2-4T，下文简称“SCA2-4T”)，于2021年3月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM 2021298T。
本发明的第二个方面是提供本发明第一个方面所述的链霉菌在拮抗尖孢镰刀菌4号生理小种、和/或尖孢镰刀菌1号生理小种、和/或香蕉长形斑病菌、和/或香蕉大灰斑病菌、和/或草莓炭疽病菌、和/或香蕉炭疽病菌中的应用。
本发明的第三个方面是提供本发明第一个方面所述的链霉菌在制备防治尖孢镰刀菌4号生理小种、和/或尖孢镰刀菌1号生理小种、和/或香蕉长形斑病菌、和/或香蕉大灰斑病菌、和 /或草莓炭疽病菌、和/或香蕉炭疽病菌所致病害的生防制剂中的应用。
本发明的第四个方面是提供本发明第一个方面所述的链霉菌的发酵液、或发酵液的乙酸乙酯粗提物。
本发明的第五个方面是提供本发明第四个方面所述的发酵液、或发酵液的乙酸乙酯粗提物在拮抗尖孢镰刀菌4号生理小种、和/或尖孢镰刀菌1号生理小种、和/或香蕉长形斑病菌、和/ 或香蕉大灰斑病菌、和/或草莓炭疽病菌、和/或香蕉炭疽病菌中的应用。
本发明的第六个方面是提供本发明第四个方面所述的发酵液、或发酵液的乙酸乙酯粗提物在制备防治尖孢镰刀菌4号生理小种、和/或尖孢镰刀菌1号生理小种、和/或香蕉长形斑病菌、和/或香蕉大灰斑病菌、和/或草莓炭疽病菌、和/或香蕉炭疽病菌所致病害的生防制剂中的应用。
本发明的第七个方面是提供一种杀菌剂，其含有本发明第一个方面所述的会理链霉菌，或者含有本发明第四个方面所述的发酵液、或发酵液的乙酸乙酯粗提物。
本发明的SCA2-4T为链霉菌属的一个新种，具有稳定广谱抑菌活性，对尖孢镰刀菌4号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.Cubense Tropial Race 4，Foc TR4)、尖孢镰刀菌1号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.Cubense Tropical Race 1，Foc TR1)、香蕉长形斑病菌(falvularia fallax)、香蕉大灰斑病菌(Curvularia lunata)、草莓炭疽病菌(Colletotrichum fragariae)和香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)等多种常见作物病原真菌有较强的抑菌作用，而且其发酵粗提物可以有效抑制Foc TR4真菌的菌丝生长和孢子萌发，最低抑菌浓度(MIC)为6.25μg/ml，说明该菌株具有潜在的应用价值，为枯萎病等多种植物病害的防治拓展新领域，具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1为邻接法构建的基于完整16SrRNA基因序列的SCA2-4T菌株***发育树，括号中为基因的登录号，进化树节点值为自展百分率(基于1000个复制)，标尺指该长度的分支代表基因组的遗传变异度为0.002。
图2为邻接法构建的基于5个串联看家基因序列atpD、gyrB、recA、rpoB和trpB的菌株SCA2-4T***发育树，展示了菌株SCA2-4T在***发育邻居中的位置，进化树节点值为自展百分率(基于1000个复制)，标尺指该长度的分支代表基因组的遗传变异度为0.05。
图3为菌株SCA2-4T在YE培养基上28℃培养21天的扫描电镜图。A：气生菌丝发育良好，分枝较多，不能分化成孢子链；B：分枝的基质菌丝。
图4为菌株SCA2-4T在6种ISP培养基上的培养特征。
图5为菌株SCA2-4T抑制不同植物病原真菌菌丝生长。
图6为菌株SCA2-4T粗提物对Foc TR4菌丝生长的抑制作用。A：10％DMSO处理；B：菌株SCA2-4T粗提物(16×MIC)处理。
图7为菌株SCA2-4T粗提物对Foc TR4孢子萌发的影响。A：10％DMSO处理；B：菌株SCA2-4T粗提物(16×MIC)处理。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。
本发明提供了一种链霉菌，其为链霉菌属的一个新种，命名为：Streptomyceshuiliensis sp. nov.，(中文译名为会理链霉菌，实验室编号为SCA2-4T，下文简称“SCA2-4T”)，于2021年 3月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉，保藏编号为CCTCC M 2021298。本发明的会理链霉菌SCA2-4T从四川省会理县干热河谷地区采集的仙人掌根际土壤中分离、筛选得到。
1菌株SCA2-4T的分离
本研究于2014年1月在四川省会理县干热河谷地区采集了仙人掌根际土壤样品。将土样放置在室温下干燥并过孔径为0.425mm网筛后，将称取1克土壤样品放入9ml无菌水中混匀，并在55℃水浴中加热20分钟℃.用连续稀释技术将其稀释后取100μL涂布在淀粉酪蛋白琼脂板上(SCA培养基：10克可溶性淀粉，0.3克酪蛋白,2.0克KNO3,2.0克NaCl,2.0克K2HPO4, 0.05克MgSO4·7H2O，0.02克CaCO3，0.01克FeSO4·H2O,and 18克琼脂，1000毫升无菌水,pH 7.0–7.4)，培养基中添加K2Cr2O7(50mg/L)和制霉菌素(nystatin)(50mg/L)以抑制真菌和细菌的生长。平板放置在28℃培养7天。从这些平板上分离到菌株SCA2-4T，并在YE琼脂培养基(4克酵母粉,10克麦芽粉,4克葡萄糖，20克琼脂，1000毫升无菌水，pH 7.3) 上纯化。纯化后的菌株SCA2-4T在YE琼脂斜面上划线并4℃下贮存，同时用20％(v/v)甘油-80℃长期保藏。
2菌株SCA2-4T的***发育与基因组分析
按照Ahmad等人(2017)的方法提取基因组DNA。菌株SCA2-4T的全基因组测序和组装由上海美吉生物医药科技有限公司完成。从菌株SCA2-4T全基因组序列中提取完整的16SrRNA基因，将其与在EzTaxon server(Yoon et al.，2017)和NCBI数据库中相应的序列进行相似性比较。用MEGA 7.0程序，并采用邻接法(Neighbour-Joining Algorithms，NJ)、最大简约法(Maximum-parsimony Algorithms，MP)和最大似然法(Maximum LikelihoodAlgorithms, ML)三种方法构建***发育树，利用Kimura(1980)的双参数模型和1000个重复的自展值分析(Felsenstein,1985)分别计算了NJ***发育树的进化距离和置信度。从菌株SCA2-4T的全基因组序列中提取atpD(ATP合成酶，β亚基)、gyrB(DNA gyrase B亚基)、recA (重组酶A)、rpoB(RNA聚合酶，β亚基)和trpB(色氨酸合成酶，β亚基)等5个标准看家基因进行多位点序列分析(MLSA)(Brady et al.，2008)。16株相关菌株的5个看家基因从GenBank数据库下载。每个菌株的5个看家基因序列按顺序首尾相连并以fasta格式命名。用MEGA 7.0程序，并采用以上三种方法构建MLSA***发育树。使用在线OrthoANI计算基因组之间的平均核苷酸一致性(ANI)(Yoon et al.，2017b)。参考菌株的基因组从 EzBioCloud公共基因组数据库(https://www.ezbiocloud.net/search？tn＝Nocardioides)下载。
SCA2-4T菌株的完整16S rRNA基因序列的EzBioCloud比对表明该菌株属于链霉菌属。它与S.mobaraensis NBRC 13819T的序列相似性最高(99.17％)，与其他链霉菌属菌株相似性小于99％。而基于16S rRNA基因序列的NJ***发育树显示，菌株SCA2-4T与S.orinoci NBRC 13466T形成一个亚分支(相似性98.89％)，自展值为54％(图1)。MP***发育树支持NJ 的结果，然而，在ML***发育树中，菌株SCA2-4T形成了一个独立的分支。为进一步研究 SCA2-4T菌株的***发育地位，进行了基于atpD、gyrB、recA、rpoB和trpB基因的多位点序列分析，表1列出了16株链霉菌看家基因序列的GenBank登录号。上述三种算法的MLSA***发育树显示，菌株SCA2-4T与S.mobaraensis NBRC 13819T形成明显的分支，具有100％自展值(NJ法的MLSA***发育树见图2)。菌株SCA2-4T与S.orinoci NBRC 13466T、S.mobaraensis NBRC 13819T等链霉菌属相关模式菌株的MLSA距离为0.024-1.020(表2)，远高于Rong and Huang(2012)推荐的链霉菌属的种界线0.007。因此，跟据对16S rRNA基因序列与上述5个看家基因的EzBioCloud比较和***发育树分析结果，选择S.orinoci NBRC13466T(＝NRRL B-3379T，GenBank登录号:NZ_PHNC00000000.1)和S.m abaraensis NBRC13819T(＝DSM 40847T，GenBank登录号:NZ_VOKX00000000.1)两株菌的基因组与SCA2-4 T进行比较，计算ANI值。菌株SCA2-4T和上述两个菌株的基因组之间的ANI值分别为80.44％和90.76％，也远低于用于区分新物种的阈值95-96％(Richter and Rosselló-Móra，2009年；Chun 等人，2018年)。因此，这些基因型数据表明，菌株SCA2-4T是链霉菌属的一个新种。
表1用于本研究的链霉菌的等位基因序列登录号
Figure BDA0003107065610000051
Figure BDA0003107065610000061
表2用于本研究的链霉菌菌株之间的MLSA距离
Figure BDA0003107065610000062
菌株：1.Streptomyces huiliensis SCA2-4T，2.Streptomyces mobaraensisNBRC 13819T，3. Streptomyces abikoensis NBRC 13860T，4.Streptomyces orinoci NBRC13466T，5.Streptomyces angustmyceticus NRRL B-2347T，6.Streptomycesgriseocarneus(Streptomyces alboverticillatus) NRRL B-24281T，7.Streptomycescatenulae NRRL B-2342T，8.Streptomyces ochraceiscleroticus NRRL ISP-5594T，9.Streptomyces varsoviensis NRRL ISP-5346T，10.Streptomyces caniferus NBRC15389T，11.Streptomyces sioyaensis NRRL B-5408T，12.Streptomyces rimosussubsp.rimosus ATCC 10970T，13.Streptomyces libani subsp.libani NBRC 13452T，14.Streptomyces xinghaiensis S187 T，15.Streptomyces pseudoechinosporeus NBRC12518(NRRL B-16931)T，16.Streptomyces nigrescens NBRC AS 4.1410(12894)T，17.Streptomyces hiroshimensis NRRL B-1823(NBRC 3839)T
3菌株SCA2-4T表型特征分析
将菌株SCA2-4T接种于的YE培养基上28℃培养21天，使用扫描电子显微镜(ZEISS，德国)观察其微观形态，如Kumar等(2014)所述。同时将菌株SCA2-4 T接种在6种标准ISP 培养基(Shirling and Gottlieb,1966)上28℃培养14天，观察其培养特性。ISP培养基包括酵母提取物-麦芽提取物琼脂(ISP 2或YE)、燕麦提取物琼脂(ISP 3)、无机盐-淀粉琼脂(ISP4)、甘油-天门酰胺琼脂(ISP 5)、蛋白胨-酵母琼脂(ISP 6)和酪氨酸琼脂(ISP 7)。在ISP 6和ISP 7上观察黑色素的形成。基质菌丝、气生菌丝和可溶性色素的颜色与ISCC-NBS颜色图(Kelly,1964)进行比较判断。将SCA2-4T菌株接种到含NaCl(0-9％，间隔1％，w/v)的 YE板上28℃培养14天，检测该菌生长对盐的耐受性。接种在YE板上SCA2-4 T放置于温度不同温度(16-46℃，间隔1℃)下培养14天，测试该菌生长对温度的耐受性。SCA2-4 T接种在PH值为4-10(间隔1次)的NB肉汤(1.0g酵母粉，0.8g牛肉膏，2.0g酪蛋白，10.0g 甘油)为中，28℃培养7天，评价pH值对该菌生长的影响。生理生化特征的确定参照Shirling 和Gottlieb(1966)的方法和Williams等人(1983)的方法。
菌株SCA2-4T为有氧型，革兰氏阳性菌。扫描电镜分析表明，菌株产生了发育良好的分枝基质菌丝和气生菌丝，气生菌丝不能分化成孢子链(图3)。菌株SCA2-4T在所有ISP培养基上生长良好。在ISP2-4培养基上形成气生菌丝，颜色分别为灰白色、红褐色、浅黄色、土黄色，其余两种培养基上均未产生气生菌丝。其菌丝在ISP2-7培养基上的基质菌丝依次为深棕色、浅黄色、浅黄色、金色、铁灰色、深棕色。菌株SCA2-4 T在ISP3-5培养基上不产生可溶性色素，而在其余ISP培养基上形成棕色或浅棕色可溶性色素(图4)。这些特征与链霉菌属的特征一致。菌株SCA2-4T在pH为5.0～8.0(最适pH为7.0)、温度为21～45℃(最适温度为28℃)和NaCl为0～6％(w/v)条件下能生长。菌株SCA2-4T能降解Tween 80、酪氨酸、明胶和硝酸盐，而不能降解尿素、Tween 20、淀粉和纤维素。菌株SCA2-4T能产生黑色素，但不产生H2S。它可以利用L-***糖、D-果糖、D-葡萄糖、肌醇、D-棉子糖、L-鼠李糖和蔗糖等碳源，但不能利用纤维素、D-甘露醇和D-木糖。菌株SCA2-4T可以利用L-苯丙氨酸、硫酸铵、L-羟脯氨酸、L(+)-半胱氨酸、组氨酸、甘氨酸、缬氨酸和草酸铵作为氮源，不能以乙酸铵、硝酸铵、四水钼酸铵、L-精氨酸和谷氨酸为氮源。菌株SCA2-4 T对利福平敏感，对氨苄西林、氯霉素、链霉素、青霉素-g、庆大霉素、制霉菌素、四环素、硫酸新霉素和硫酸卡那霉素耐药。
4菌株SCA2-4T的广谱抗真菌活性测定
在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板上，采用常规斑点接种法(Qi等人，2019)评估了菌株SCA2-4T对尖孢镰刀菌4号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.Cubense Tropial Race4，Foc TR4)、尖孢镰刀菌1号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.Cubense TropicalRace 1，Foc TR1)、香蕉长形斑病菌(falvularia fallax)、香蕉大灰斑病菌(Curvularialunata)、草莓炭疽病菌 (Colletotrichum fragariae)和香蕉炭疽病菌(Colletotrichummusae)等6种植物病原真菌的广谱抗真菌活性，对这些真菌由中国热带农业科学院环境与植物保护研究所提供。在PDA平板的中心点和四个对称点分别接种一个和四个直径为5mm的供试真菌和SCA2-4T菌株的菌丝块。每个被测病原菌设三个重复。只接种被测病原菌的平板作为对照。将培养皿置于28℃，待对照培养皿覆盖满菌丝后，用交叉法测定目标病原菌菌落直径。抑菌带及抑菌率按下式计算：抑制带＝C-T，生长抑制率＝[(C-T)/C]×100％，其中，C和T分别代表对照板和处理板中被测病原菌菌落的平均直径(Aghighi等人,2004)。
结果显示菌株SCA2-4T对尖孢镰刀菌4号生理小种、尖孢镰刀菌1号生理小种、香蕉长形斑病菌、香蕉大灰斑病菌、草莓炭疽病菌和香蕉炭疽病菌等具有良好的抑菌活性。与对照试验病原菌生长直径(85.00mm±0.00)相比，菌株SCA2-4T对尖孢镰刀菌4号生理小种、尖孢镰刀菌1号生理小种、香蕉长形斑病菌、香蕉大灰斑病菌、草莓炭疽病菌和香蕉炭疽病菌的抑菌带分别为53.17±2.84mm、37.83±0.29mm、58.83±2.02mm、52.83±1.26mm、55.67±3.79mm、 53.83±1.76mm。菌丝抑制率分别为62.55％、44.51％、69.21％、62.15％、65.49％、63.33％(图 5，表3)。结果表明，菌株SCA2-4T具有潜在的生防价值。
表3菌株SCA2-4T对植物病原真菌的抑菌活性
Figure BDA0003107065610000081
Figure BDA0003107065610000091
5菌株SCA2-4T粗提物的提取及抗真菌活性评价
将SCA2-4T菌株在发酵培养基(15克玉米粉，10克葡萄糖，0.5克K2HPO4，0.5克NaCl，0.5克MgSO4，3克牛肉膏，10克酵母粉，10克可溶性淀粉，2克CaCO3，pH 7.2–7.4)中 150rpm，28℃，培养7天。用乙酸乙酯(v/v＝1:1)提取发酵液中的次生代谢产物。使用Whatman 1号滤纸去除菌体后，使用分液漏斗收集含有次生代谢物的有机溶剂，并使用旋转真空蒸发器蒸发(日本N-1300，EYLEA)。粗提物溶于10％二甲基亚砜(DMSO)中，最终浓度为20mg/ml。粗提物溶液通过0.22-μm无菌过滤器(Millipore,Bedford,MA,United States)过滤后，使用Tepe 等人(2005)描述的琼脂孔扩散法评估粗提物对Foc TR4的抑菌活性。使用经过灭菌的移液器吸头圆端(内径5mm)，在穿过平板中心的两条垂直线上的距离中心26mm四个点处钻四个孔，每个孔加入100μL粗提物溶液，同样体积的10％DMSO作为对照。在平板中心放置直径为5mm的Foc TR4菌丝块。28℃培养7d后测量Foc TR生长的直径。实验设置三个重复，按上述方法计算抑菌带及Foc TR生长抑制率。
菌株SCA2-4T粗提物对Foc TR4具有较强的抑菌活性(图6)，抑菌带和菌丝抑制率分别为31.83±2.36mm和42.47％。
6菌株SCA2-4T粗提物最小抑菌浓度(MIC)分析
如Wang等人(2013)所述，采用两倍连续稀释法将粗提物溶液稀释至100-0.781μg/ml的浓度范围，采用96孔板(Nunc MicroWell,untreated；Roskilde,Denmark)分析粗提物对Foc-TR4 的最小抑制浓度(MIC)。每孔加入80μl真菌培养基(Roswell Park MemorialInstitute,RPMI)、 100μl 1.0×10 5CFU/ml Foc-TR4真菌悬浮液和20μl粗提物稀释液。用100μl 10％的DMSO 代替粗提物稀释液作为阴性对照。100μl线菌酮或制霉菌素替代粗提物稀释液作为阳性对照。用塑料盖封闭的96孔板在150rpm、28℃下培养。24h后肉眼观察Foc-TR4的生长情况。粗提物稀释液的最低浓度(由于抑制Foc-TR4的可见生长而透明)被记录为MIC。按相同方法记录标准抗生素的MIC，阴性对照应该是混浊的。结果显示，粗提物以及放线菌酮、制霉菌素两种标准抗生素的MIC分别为6.25μg/ml、1.563μg/ml和6.25μg/ml。
7菌株SCA2-4T粗提物对Foc TR4孢子萌发的影响
采用光学显微镜(Axio Scope A1,Carl ZEISS,Germany)，参照陈等所述的方法(2018) 检测菌株SCA2-4T粗提物对Foc TR4孢子萌发的影响。使用无菌L型涂布棒和无菌蒸馏水收集接种7天后的Foc TR4孢子，并调整其浓度为1.0×105CFU/ml。将10μl粗提物稀释液(16 MIC)和等量的孢子悬浮液滴入载玻片凹槽中，混合均匀。实验设置了三个重复。将载玻片放置在湿润的培养皿，28℃培养20小时。每个玻片观察100个孢子，统计孢子萌发数(即孢子芽管数)。根据以下公式计算孢子萌发率和萌发抑制率：
萌发率＝(A或B)/100×100％，
孢子萌发抑制率＝(A-B)/A×100％，
其中A和B分别为对照组和处理组的萌发孢子数。
结果见图7，菌株SCA2-4T粗提物对Foc TR4孢子萌发有明显抑制作用，相比于对照组孢子萌发率为94.33±2.08％，处理组孢子萌发率为10.33±2.52％，抑制率约为89.08％。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (7)

1.一种链霉菌，其特征在于，其为链霉菌属的一个新种，命名为：Streptomyceshuiliensis sp.nov.，于2021年3月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2021298T。
2.如权利要求1所述的链霉菌在拮抗尖孢镰刀菌4号生理小种、和/或尖孢镰刀菌1号生理小种、和/或香蕉长形斑病菌、和/或香蕉大灰斑病菌、和/或草莓炭疽病菌、和/或香蕉炭疽病菌中的应用。
3.如权利要求1所述的链霉菌在制备防治尖孢镰刀菌4号生理小种、和/或尖孢镰刀菌1号生理小种、和/或香蕉长形斑病菌、和/或香蕉大灰斑病菌、和/或草莓炭疽病菌、和/或香蕉炭疽病菌所致病害的生防制剂中的应用。
4.权利要求1所述的链霉菌的发酵液、或发酵液的乙酸乙酯粗提物。
5.如权利要求4所述的发酵液、或发酵液的乙酸乙酯粗提物在拮抗尖孢镰刀菌4号生理小种、和/或尖孢镰刀菌1号生理小种、和/或香蕉长形斑病菌、和/或香蕉大灰斑病菌、和/或草莓炭疽病菌、和/或香蕉炭疽病菌中的应用。
6.如权利要求4所述的发酵液、或发酵液的乙酸乙酯粗提物在制备防治尖孢镰刀菌4号生理小种、和/或尖孢镰刀菌1号生理小种、和/或香蕉长形斑病菌、和/或香蕉大灰斑病菌、和/或草莓炭疽病菌、和/或香蕉炭疽病菌所致病害的生防制剂中的应用。
7.一种杀菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的会理链霉菌，或者含有权利要求4所述的发酵液、或发酵液的乙酸乙酯粗提物。
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