CN113567572A - 一种急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明申请提供了一种急性呼吸窘迫综合征风险的预测试剂盒及其使用方法，试剂盒中至少包含抗凝剂，内标剂，内标稀释液，乙酸铵水溶液，洗脱液，辅助液，固相萃取板，复溶剂。本发明申请通过基于血清甘露糖的水平对于ICU病人的急性呼吸窘迫综合征的风险进行预测，具有较高的灵敏度和特异度，为急性呼吸窘迫综合征的预测提供一种的新的方法和识别高危发病人群的标志物，具有优异的临床价值。
Description
技术领域
本发明涉及医学领域的一种急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒及其使用方法。
背景技术
急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是重症监护室(intensive care unit,ICU)较为常见的一类综合性危重症，其发病原因错综复杂，主要是由于肺内和或肺外原因引起的以顽固性低氧血症为显著临床特征的综合征，ARDS患者的死亡率依旧在40％左右。目前针对ARDS的有效治疗措施十分有限，因此尽早预测急重症患者的ARDS发生风险，是降低其死亡率的关键。
随着糖生物学的发展，某些糖类的抗炎生物学功能逐渐被认识。甘露糖为简单的己糖已被发现具有抗炎作用。甘露糖能抑制伤口愈合时的炎症反应，抑制中性粒细胞的氧化爆发，具有抗炎、抗氧化、减轻肺水肿等多方面作用。一些现有技术表明甘露糖受体(mannose receptor,MR)与肺损伤的发生发展与预后密切相关。但是，甘露糖对于ARDS发病风险的预测价值，仍处于空白阶段。
随着一些公共卫生安全事件在世界范围内的发生，ARDS的发病率和死亡率在近些年内不断的攀升，亟需一种能够有效地检测人体甘露糖水平的方法和工具，并与急性呼吸窘迫综合征的发病风险进行关联，构建一种稳定且高效的ARDS发病风险检测方法和工具，用于ARDS的预防。
发明内容
为了解决上述问题，本发明第一方面提供了一种急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，成分至少包括：抗凝剂，内标剂，内标稀释液，乙酸铵水溶液，洗脱液，辅助液，固相萃取板，复溶剂。
作为一种优选的方案，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸盐、草酸钠、肝素、枸缘酸钠中的至少一种。
作为一种优选的方案，所述内标剂为同位素内标剂；所述内标剂与内标稀释液和乙酸铵水溶液混合稀释后得到同位素内标工作液。
作为一种优选的方案，所述同位素内标工作液的浓度为0.1～10ng/mL。
作为一种优选的方案，所述洗脱液为甲酸乙腈水溶液；所述甲酸乙腈水溶液的质量浓度为0.1～10％。
作为一种优选的方案，所述辅助液为乙腈、甲醇、异丙醇中的至少一种。
作为一种优选的方案，所述内标稀释液为含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的甲醇溶液或含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的水溶液中的至少一种。
作为一种优选的方案，所述复溶剂为含有有机酸的水溶液；所述有机酸的质量浓度为0.1～1％；所述有机酸为甲酸、乙酸、丙酸中的至少一种。
作为一种优选的方案，所述急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其检测目标人群为重症监护室的急重症患者。
本发明第二方面提供了一种上述急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒的使用方法，步骤包含以下几步：(1)同位素内标工作液制备：移取浓度为0.1～1mg/mL的内标剂，使用内标稀释液进行二次稀释，直至内标剂的浓度为1～100ng/mL，之后使用20～100mmol/L的乙酸铵水溶液稀释至0.1～5ng/mL得同位素内标工作液，-80℃环境保存；(2)待测样品处理：将加入抗凝剂的待测全血高速离心，得血浆上清液；移取同位素内标工作液50～100uL至离心管，后加入100～200uL血浆上清液，1200～1400rpm涡旋混匀1～2分钟；向固相萃取板中加入洗脱液和乙酸铵水溶液活化处理固相萃取板，之后将离心管溶液转移至固相萃取板，依次使用乙酸铵水溶液和辅助液清洗，最后再次加入洗脱液进行洗脱，得洗出液，将洗出液室温氮气条件下烘干，使用复溶剂复溶而得复溶液；(3)结果测定：通过液相色谱质谱联用法特异性检测血清中甘露糖及其内标，将甘露糖与内标信号的比率与校准曲线的比率进行比较以确定血清中的甘露糖浓度。
有益效果：
1.本发明申请中，通过试剂盒检测目标群体(ICU急重症人群)的血清甘露糖的水平，并利用血清甘露糖水平预测ICU急重症患者发生急性呼吸窘迫综合征的风险。该法为急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测，提供一种新的生物标志物和模型，具有较高的灵敏度和特异度，临床价值显著。
2.本发明申请中，血清甘露糖水平作为ARDS发生风险生物标志物，检测方法简单易行，检测结果客观可靠。
3.本发明申请中，基于血清甘露糖水平生物标志物所构建的风险预测模型，预测ICU急重症患者在ICU住院期间发生ARDS的风险，从而提前预警，尽早防范。
附图说明
图1为基于实施例1中所得试剂盒和使用方法对于ICU急重症患者ARDS发生风险预测概率结果而绘制的受试者工作特征曲线图。
具体实施方式
参照以下有关本发明的优选实施方法的详述，以及包括的实施例，可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有科学与技术术语是本发明所属领域的通用术语，普通技术人员即可正确理解。若存在潜在矛盾，以本说明书中的定义为准。
说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本发明并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
为了解决上述问题，本发明第一方面提供了一种急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，成分至少包括：抗凝剂，内标剂，内标稀释液，乙酸铵水溶液，洗脱液，辅助液，固相萃取板，复溶剂。
在一些优选的实施方式中，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸盐、草酸钠、肝素、枸缘酸钠中的至少一种。
在一些优选的实施方式中，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid,EDTA)二钠。
在一些优选的实施方式中，所述内标剂为同位素内标剂；所述内标剂与内标稀释液和乙酸铵水溶液混合稀释后得到同位素内标工作液。
在一些优选的实施方式中，所述同位素内标工作液的浓度为0.1～10ng/mL。
在一些优选的实施方式中，所述同位素内标工作液的浓度为2～6ng/mL。
在一些优选的实施方式中，所述洗脱液为甲酸乙腈水溶液；所述甲酸乙腈水溶液的质量浓度为0.1～10％。
在一些优选的实施方式中，所述甲酸乙腈水溶液的质量浓度为1～4％。
在一些优选的实施方式中，所述辅助液为乙腈、甲醇、异丙醇中的至少一种。
在一些优选的实施方式中，所述辅助液为乙腈。
在一些优选的实施方式中，所述内标稀释液为含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的甲醇溶液或含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的水溶液中的至少一种。
在一些优选的实施方式中，所述内标稀释液为含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的甲醇溶液和含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的水溶液。
在一些优选的实施方式中，试剂的试剂盒使用过程中，含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的甲醇溶液和含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的水溶液依次使用稀释内标剂。
在一些优选的实施方式中，所述复溶剂为含有有机酸的水溶液；所述有机酸的质量浓度为0.1～1％；所述有机酸为甲酸、乙酸、丙酸中的至少一种。
在一些优选的实施方式中，所述复溶剂为含有乙酸的水溶液；所述乙酸浓度0.2～0.6％。
在一些优选的实施方式中，所述急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其检测目标人群为重症监护室的急重症患者。
在一些优选的实施方式中，所述重症监护室的急重症患者在试剂盒检测前，还收集了人口学特征和病理生理学指标。
在一些优选的实施方式中，所述人口学特征和病理生理学指标为ICU急重症病人的年龄，性别，脓毒症，肺炎，急性生理学和慢性健康状况评分***Ⅱ评分(APACHE II)。
本发明第二方面提供了一种上述急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒的使用方法，步骤包含以下几步：(1)同位素内标工作液制备：移取浓度为0.1～1mg/mL的内标剂，使用内标稀释液进行二次稀释，直至内标剂的浓度为1～100ng/mL，之后使用20～100mmol/L的乙酸铵水溶液稀释至0.1～5ng/mL得同位素内标工作液，-80℃环境保存；(2)待测样品处理：将加入抗凝剂的待测全血高速离心，得血浆上清液；移取同位素内标工作液50～100uL至离心管，后加入100～200uL血浆上清液，1200～1400rpm涡旋混匀1～2分钟；向固相萃取板中加入洗脱液和乙酸铵水溶液活化处理固相萃取板，之后将离心管溶液转移至固相萃取板，依次使用乙酸铵水溶液和辅助液清洗，最后再次加入洗脱液进行洗脱，得洗出液，将洗出液室温氮气条件下烘干，使用复溶剂复溶而得复溶液；(3)结果测定：通过液相色谱质谱联用法特异性检测血清中甘露糖及其内标，将甘露糖与内标信号的比率与校准曲线的比率进行比较以确定血清中的甘露糖浓度。
在一些优选的实施方式中，所述使用方法还包括风险预测步骤，具体操作为：将步骤(3)中检测到的待评估目标的血清甘露糖浓度以及其年龄，性别，脓毒症严重程度评分，肺炎严重程度评分和急性生理学和慢性健康状况评分***Ⅱ评分带入ARDS风险预测模型，预测ARDS的发生风险。
在一些优选的实施方式中，所述ARDS风险预测公式为：ARDS发生风险(概率)＝eX/(1+eX)；其中，X＝-6.2033+(-0.9074×血清甘露糖浓度)+(0.0905×年龄)+(-1.6683×性别)+(0.0689×脓毒症)+(0.6807×肺炎)+(0.0257×急性生理学和慢性健康状况评分***Ⅱ评分)；其中，性别为男性，则“性别＝1”，性别为女性，则“性别＝0”。
在一些优选的实施方式中，所述的ARDS风险预测模型中，患脓毒症，则“脓毒症＝1”，未患脓毒症，则“脓毒症＝0”；
在一些优选的实施方式中，所述的ARDS风险预测模型中，患肺炎，则“肺炎＝1”，未患肺炎，则“肺炎＝0”；
实施例
以下通过实施例对本发明技术方案进行详细的说明，但是本发明的保护范围不局限于所述的所有实施例。如无特殊说明，本发明的原料均为市售。
实施例1
实施例1第一方面提供了一种急性呼吸窘迫综合征发生风险预测试剂盒，包括EDTA二钠，同位素内标剂，内标稀释液，乙酸铵水溶液，甲酸乙腈水溶液，乙腈，固相萃取板，乙酸水溶液。
本实施例中，内标稀释液为含有0.5％质量浓度的抗坏血酸的甲醇溶液和含有0.5％质量浓度的抗坏血酸的水溶液。
本实施例中，甲酸乙腈水溶液的质量浓度为3％。
本实施例中，乙酸水溶液的质量浓度为0.4％。
本实施例中，试剂盒的检测预测目标人群为重症监护室的急重症患者；重症监护室的急重症患者在试剂盒检测前还收集了人口学特征和病理生理学指标，包括收集病人的年龄，性别，脓毒症，肺炎，急性生理学和慢性健康状况评分***Ⅱ评分。
脓毒症评价标准为：患脓毒症＝1，未患脓毒症＝0；肺炎评价标准为：患肺炎＝1，未患肺炎＝0；性别为男性，性别＝1，性别为女性，性别＝0。
本实施例第二方面提供了一种上述急性呼吸窘迫综合征风险的预测试剂盒的使用方法，步骤包含以下几步：(1)同位素内标工作液制备：移取浓度为0.5mg/mL的同位素内标剂，使用含有0.5％质量浓度的抗坏血酸的甲醇溶液和含有0.5％质量浓度的抗坏血酸的水溶液先后进行稀释，直至内标剂的浓度为50ng/mL，之后使用50mmol/L的乙酸铵水溶液稀释至4ng/mL得同位素内标工作液，-80℃环境保存；(2)待测样品处理：将加入EDTA二钠的待测全血高速离心，得血浆上清液；移取同位素内标工作液60uL至离心管，后加入150uL血浆上清液，1300rpm涡旋混匀1分钟；向固相萃取板中加入甲酸乙腈水溶液和乙酸铵水溶液活化处理固相萃取板，之后将离心管溶液转移至固相萃取板，依次使用乙酸铵水溶液和乙腈清洗，最后再次加入甲酸乙腈水溶液进行洗脱，得洗出液，将洗出液室温氮气条件下烘干，使用乙酸水溶液复溶得复溶液；(3)结果测定：通过液相色谱质谱联用法特异性检测血清中甘露糖及其内标，将甘露糖与内标信号的比率与校准曲线的比率进行比较以确定血浆中的甘露糖浓度；(4)将步骤(3)中检测到的待评估患者的血清甘露糖浓度，及其年龄，性别，脓毒症，肺炎，急性生理学和慢性健康状况评分***Ⅱ评分带入ARDS风险预测模型，估计该患者的ARDS发生风险。
本实施例中，模型所返回的结果为概率，0％代表不发生ARDS，100％代表发生ARDS。
本实施例中，ARDS发生风险预测模型为：ARDS发生风险概率＝eX/(1+eX)；其中，X＝-6.2033+(-0.9074×血清甘露糖水平)+(0.0905×年龄)+(-1.6683×性别)+(0.0689×脓毒症)+(0.6807×肺炎)+(0.0257×急性生理学和慢性健康状况评分***Ⅱ评分)。
实施例2
本实施例的具体实施方式同实施例1，不同之处在于：内标稀释液只采用含有0.5％质量浓度的抗坏血酸的甲醇溶液。
实施例3
本实施例的具体实施方式同实施例1，不同之处在于：甲酸乙腈水溶液的质量浓度为4％；乙酸水溶液的质量浓度为0.2％。
实施例4
本实施例的具体实施方式同实施例1，不同之处在于：同位素内标工作液被稀释后的浓度为2ng/mL。
性能评价
对所有实施例制得的试剂盒，检测出血清甘露糖水平，并通过相应的方法估计其急性呼吸窘迫综合征的发生风险。每个实施例测试5个试样，结果取平均值计入表1。并且通过ARDS发生风险预测概率结果而绘制的受试者工作特征曲线，观察预测结果的特异性、灵敏度和AUC(预测效果评估)，结果记入图1。
表1 ARDS发生风险预测结果
| 实施例 | ARDS发生风险(％) |
| 实施例1 | 81.52 |
| 实施例2 | 81.21 |
| 实施例3 | 79.19 |
| 实施例4 | 79.35 |
通过实施例1～4和表1可以得知，本发明提供的一种急性呼吸窘迫综合征发生风险预测试剂盒及其使用方法，具有良好的血清甘露糖检测的精确性和ARDS发生风险预测的准确性，有效填补了甘露糖水平在ARDS发生风险预测方面的空白，适宜在急诊和重症医学领域推广，具有广阔的发展前景。其中实施例1在具有最佳的试剂盒原料配比，制备方法和最佳的使用方法等因素下获得了最佳性能指数。
最后指出，以上所述实施例仅为本发明较佳的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所做任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其特征在于：成分至少包括：抗凝剂，内标剂，内标稀释液，乙酸铵水溶液，洗脱液，辅助液，固相萃取板，复溶剂。
2.根据权利要求1所述的急性呼吸窘迫综合征发生风险的预测试剂盒，其特征在于：所述抗凝剂为乙二胺四乙酸盐、草酸钠、肝素、枸缘酸钠中的至少一种。
3.根据权利要求1～2任一项所述的急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其特征在于：所述内标剂为同位素内标剂；所述内标剂与内标稀释液和乙酸铵水溶液混合稀释后得到同位素内标工作液。
4.根据权利要求3任一项所述的急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其特征在于：所述同位素内标工作液的浓度为0.1～10ng/mL。
5.根据权利要求1～4任一项所述的急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其特征在于：所述洗脱液为甲酸乙腈水溶液；所述甲酸乙腈水溶液的质量浓度为0.1～10％。
6.根据权利要求1～5任一项所述的急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其特征在于：所述辅助液为乙腈、甲醇、异丙醇中的至少一种。
7.根据权利要求1～6任一项所述的急性呼吸窘迫综合征风险的预测试剂盒，其特征在于：所述内标稀释液为含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的甲醇溶液或含有0.05～1％质量浓度的抗坏血酸的水溶液中的至少一种。
8.根据权利要求1～7任一项所述的急性呼吸窘迫综合征风险的预测试剂盒，其特征在于：所述复溶剂为含有有机酸的水溶液；所述有机酸的质量浓度为0.1～1％；所述有机酸为甲酸、乙酸、丙酸中的至少一种。
9.根据权利要求1所述的急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其特征在于：所述急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒，其检测目标人群为重症监护室的急重症患者。
10.一种根据权利要求1～9任意一项所述的急性呼吸窘迫综合征的发生风险预测试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤包含以下几步：(1)同位素内标工作液制备：移取浓度为0.1～1mg/mL的内标剂，使用内标稀释液进行二次稀释，直至内标剂的浓度为1～100ng/mL，之后使用20～100mmol/L的乙酸铵水溶液稀释至0.1～5ng/mL得同位素内标工作液，-80℃环境保存；(2)待测样品处理：将加入抗凝剂的待测全血高速离心，得血浆上清液；移取同位素内标工作液50～100uL至离心管，后加入100～200uL血浆上清液，1200～1400rpm涡旋混匀1～2分钟；向固相萃取板中加入洗脱液和乙酸铵水溶液活化处理固相萃取板，之后将离心管溶液转移至固相萃取板，依次使用乙酸铵水溶液和辅助液清洗，最后再次加入洗脱液进行洗脱，得洗出液，将洗出液室温氮气条件下烘干，使用复溶剂复溶而得复溶液；(3)结果测定：通过液相色谱质谱联用法特异性检测血清中甘露糖及其内标，将甘露糖与内标信号的比率与校准曲线的比率进行比较以确定血清中的甘露糖浓度。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009059322A1 (en) * | 2007-11-02 | 2009-05-07 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for predicting the development and resolution of acute respiratory distress syndrome |
| US20150157647A1 (en) * | 2013-12-10 | 2015-06-11 | Jules B. Puschett | Methods and compositions related to acute respiratory distress syndrome |
| CN108956792A (zh) * | 2017-05-29 | 2018-12-07 | 青岛大学附属医院 | 血清游离甘露糖和葡萄糖的高效液相色谱检测 |
| US20200023002A1 (en) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | The Uab Research Foundation | Therapeutic agents and methods for the treatment of acute respiratory distress syndrome and related conditions |
| CN112485344A (zh) * | 2020-11-04 | 2021-03-12 | 华测检测认证集团湖北有限责任公司 | 一种蜂蜜中甘露糖的超高效液相色谱检测方法 |
-
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009059322A1 (en) * | 2007-11-02 | 2009-05-07 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for predicting the development and resolution of acute respiratory distress syndrome |
| US20150157647A1 (en) * | 2013-12-10 | 2015-06-11 | Jules B. Puschett | Methods and compositions related to acute respiratory distress syndrome |
| CN108956792A (zh) * | 2017-05-29 | 2018-12-07 | 青岛大学附属医院 | 血清游离甘露糖和葡萄糖的高效液相色谱检测 |
| US20200023002A1 (en) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | The Uab Research Foundation | Therapeutic agents and methods for the treatment of acute respiratory distress syndrome and related conditions |
| CN112485344A (zh) * | 2020-11-04 | 2021-03-12 | 华测检测认证集团湖北有限责任公司 | 一种蜂蜜中甘露糖的超高效液相色谱检测方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| LIANG, HR等: "Quantitative determination of endogenous sorbitol and fructose in human nerve tissues by atmospheric-pressure chemical ionization liquid chromatography/tandem mass spectrometry", 《RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY》 * |
| LYNDSEY WHITE等: "LC–MS/MS determination of d-mannose in human serum as a potential cancer biomarker", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 * |
| 侯冰等: "高效液相色谱法测定卷烟主流烟气中甘露糖和葡萄糖含量", 《安徽农业科学》 * |
| 凌琳等: "急性呼吸窘迫综合征26例临床分析", 《华西医学》 * |
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