CN113493499B - 一种利用双歧杆菌的重组蛋白改善肠道炎症的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种利用两歧双歧H3‑R2的重组蛋白改善肠道炎症的方法，属于食品微生物及免疫调节技术领域。该方法利用无缝克隆技术成功在大肠杆菌M15中表达了H3‑R2的两种表面蛋白——GroEL和转醛醇酶(TAL)。采用20μg/mL脂多糖(LPS)诱导肠上皮细胞建立炎症模型，并将重组蛋白GroEL和TAL分别与20μg/mL的LPS共同作用于肠上皮细胞，检测重组蛋白对肠道炎症的作用。结果表明，当GroEL和TAL浓度分别为175μg/mL和125μg/mL时，炎症细胞因子IL‑8分泌量达到正常水平，具有抑制炎症发生的效果，拥有应用开发潜力。

Description

一种利用双歧杆菌的重组蛋白改善肠道炎症的方法
技术领域
本发明属于食品微生物及免疫调节技术领域，主要涉及一种利用双歧杆菌的重组蛋白改善肠道炎症的方法。
背景技术
乳酸菌能够定植于哺乳动物肠道，是肠道的潜在益生菌。特定乳酸菌可通过刺激宿主免疫***及抑制病原体粘附于黏液和上皮细胞增强胃肠道健康，并且乳酸菌对上皮细胞粘附能力及免疫调节能力已作为菌株益生的重要特征。乳酸菌中GroEL和转醛醇酶(TAL)与乳酸菌粘附能力和肠上皮细胞增殖有关。然而，双歧杆菌GroEL和TAL蛋白对肠道屏障作用还需进一步研究。
GroEL热休克蛋白是生物所必需的高度保守蛋白，起着分子伴侣的作用。GroEL存在于约氏乳杆菌表面并具有活性，有助于菌体附着于黏液和上皮细胞，刺激上皮细胞和巨噬细胞分泌细胞因子，为菌体的益生功能做出贡献。此外，动物双歧杆菌KLDS2.0603表面蛋白也包括GroEL，并且GroEL能够抑制致病菌对Caco-2细胞的粘附，有助于维持肠道的微生态平衡。TAL参与中心碳代谢，即非氧化戊糖磷酸途径。在肠道益生菌、共生菌和致病菌中，肠道定殖因子得到广泛研究，其中的定植因子包括TAL蛋白。TAL存在于益生菌细胞表面时，可以作为一个重要的定植因素，有利于建立肠道双歧杆菌菌群。长双歧杆菌的TAL在酸性pH值中产生不足，理论上，能够阻止其在胃部粘附，有助于通过胃部到达大肠部位。婴儿肠道内双歧杆菌TAL含量丰富，并且TAL在新生儿粪便中的优势可能与双歧杆菌的丰度较高有关。
发明内容
本发明提供一种具有抗炎能力的重组蛋白的制备方法及两种双歧杆菌的重组蛋白能够改善炎症的作用。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：一种利用双歧杆菌的重组蛋白改善肠道炎症的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)重组质粒的制备：将H3-R2的基因组DNA作为PCR扩增GroEL和TAL基因的反应模板，并将表达质粒pQE-30双酶切。通过无缝克隆技术重组质粒。(2)重组载体的诱导表达：将重组质粒pQE-30-GroEL和pQE-30-TAL导入大肠杆菌M15感受态，并加入IPTG至浓度为0.1mM进行诱导表达，分别在16℃和37℃诱导表达4h，并进行纯化浓缩。(3)脂多糖诱导肠上皮细胞炎症模型的建立：肠上皮细胞株(CCD 841CoN)按每孔4×105个细胞将细胞加到12孔板中进行培养。培养至细胞完全贴壁时，分别添加0、10、20、60、80μg/mL的LPS，继续培养48h，上清液用于测定IL-8的含量。(4)重组蛋白对肠道炎症的作用：将LPS添加到CCD 841CoN细胞进行刺激的同时，分别加入不同浓度的GroEL(75、100、125、150、175μg/mL)和TAL(75、100、125、150、175μg/mL)，培养48h后，上清液用于检测炎症因子IL-8的含量。
所述的菌株H3-R2为实验室自行分离菌株，PCR扩增使用的GroEL和TAL基因序列均属实验室所有。
所述的利用IPTG诱导重组载体表达的温度条件为37℃，诱导表达时间为4h。
所述的重组蛋白纯化后浓缩的重组蛋白GroEL浓度高达0.86mg/mL，重组蛋白TAL浓度高达1.02mg/mL。
所述的LPS诱导肠上皮细胞炎症模型的建立为：LPS浓度为20μg/mL时，IL-8分泌量最大，所以建立炎症模型LPS最佳添加量为20μg/mL。
所述的重组蛋白对肠道炎症的作用为：在相同的浓度下，重组蛋白TAL对炎症模型的干预作用较重组蛋白GroEL的效果好。GroEL和TAL浓度分别为175μg/mL和125μg/mL能够将炎症细胞的IL-8分泌量降到正常水平。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图；
图1为不同温度条件下重组蛋白质的表达；
图2为GroEL和TAL纯化蛋白电泳图及定量标准曲线；
图3为不同浓度脂多糖对细胞分泌IL-8的影响；
图4为不同浓度重组蛋白对炎症细胞分泌IL-8的影响；
具体实施方式
下面结合附图对本发明具体实施例进行详细描述。
一种利用双歧杆菌的重组蛋白改善肠道炎症的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)重组质粒的制备：将H3-R2的基因组DNA作为PCR扩增GroEL和TAL基因的反应模板，并将表达质粒pQE-30双酶切。通过无缝克隆技术重组质粒。(2)重组载体的诱导表达：将重组质粒pQE-30-GroEL和pQE-30-TAL导入大肠杆菌M15感受态，并加入IPTG至浓度为0.1mM进行诱导表达，分别在16℃和37℃诱导表达4h，并进行纯化浓缩。(3)脂多糖诱导肠上皮细胞炎症模型的建立：肠上皮细胞株(CCD 841CoN)按每孔4×105个细胞将细胞加到12孔板中进行培养。培养至细胞完全贴壁时，分别添加0、10、20、60、80μg/mL的LPS，继续培养48h，上清液用于测定IL-8的含量。(4)重组蛋白对肠道炎症的作用：将LPS添加到CCD 841CoN细胞进行刺激的同时，分别加入不同浓度的GroEL(75、100、125、150、175μg/mL)和TAL(75、100、125、150、175μg/mL)，培养48h后，上清液用于检测炎症因子IL-8的含量。
所述的菌株H3-R2为实验室自行分离菌株，PCR扩增使用的GroEL和TAL基因序列均属实验室所有。
所述的利用IPTG诱导重组载体表达的温度条件为37℃，诱导表达时间为4h。
所述的重组蛋白纯化后浓缩的重组蛋白GroEL浓度高达0.86mg/mL，重组蛋白TAL浓度高达1.02mg/mL。
所述的LPS诱导肠上皮细胞炎症模型的建立为：LPS浓度为20μg/mL时，IL-8分泌量最大，所以建立炎症模型LPS最佳添加量为20μg/mL。
所述的重组蛋白对肠道炎症的作用为：在相同的浓度下，重组蛋白TAL对炎症模型的干预作用较重组蛋白GroEL的效果好。GroEL和TAL浓度分别为175μg/mL和125μg/mL能够将炎症细胞的IL-8分泌量降到正常水平。
实施例1
将H3-R2的基因组DNA作为PCR扩增GroEL和TAL基因的反应模板，PCR反应条件：94℃×1min；94℃×10s，68℃×2min，72℃×10min，30个循环；4℃×∞；反应体系为dNTPMixture(2.5mM)5.0μL、模板0.5μL、正向引物(10μM)0.5μL、反向引物(10μM)0.5μL、LA Taq(5U/μL)0.5μL、10×LA Taq Buffer II 5.0μL、ddH2O 38.0μL。利用Kpn I和Hind III进行表达质粒pQE-30双酶切，通过无缝克隆技术，将目的基因的DNA片段***质粒的酶切位点，将重组质粒转化DH5α感受态，并进行重组质粒的菌落PCR鉴定。将重组质粒pQE-30-GroEL和pQE-30-TAL导入大肠杆菌M15感受态，将含有质粒的重组菌株大肠杆菌M15的单菌落分别接种到5mL含100μg/mL Amp和25μg/mL Kana的LB液体培养基中，在37℃条件下，150rpm震荡培养12h。按2％的接种量接种至含100μg/mL Amp和25μg/mL Kana的LB培养基中，37℃震荡培养约3h(150rpm)。当菌液OD600达到0.4～0.6时，加入IPTG至浓度为0.1mM进行诱导表达，分别在16℃和37℃诱导表达4h。培养的菌液12000rpm离心8min，将菌体沉淀置于冰上，使用缓冲液PBS洗涤2次后，再加入10mL PBS重悬菌体。超声处理菌液，4℃离心10min(12000rpm)，收集上清和沉淀，沉淀用PBS缓冲液重悬。向菌悬液和上清中加入等量的2×SDS-PAGE缓冲液，煮沸10min，冰上放置5min，放入-20℃冰箱备用，进行重组蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳，结果发现利用IPTG诱导两种重组载体表达时间为4h，最佳温度条件为37℃，结果见图1。
实施例2
采用了Ni-NTA对重组蛋白进行纯化，添加8mL破壁后的菌体溶液到Ni-NTA柱中，轻轻搅动，使树脂悬浮并混匀1h。静置约10min，缓慢吸出上清液。添加8mL Native WashBuffer到纯化柱中，重悬树脂并摇晃2min。静置约10min，缓慢吸出上清液，重复5次。竖直固定纯化柱，取下底部保护帽，用8～12mL Native Elution Buffer洗脱重组蛋白质。将透析袋在蒸馏水中煮10min后，冷却备用。用夹子夹住透析袋的一端，将重组蛋白从另一端加入透析袋中，放入PBS缓冲液中于4℃透析过夜。每隔12h更换透析液一次，连续透析72h。收集透析后的重组蛋白，透析袋使用蒸馏水冲洗干净后在50％的酒精中浸泡，4℃保存。采用超滤管Amicon Ultra-15对两种重组蛋白分别进行超滤浓缩。在超滤管中加入ddH2O，水完全将滤膜淹没，放入冰箱预冷。取出预冷的超滤管，倒出ddH2O加入重组蛋白溶液进行浓缩，采用6000rpm离心，离心时间根据蛋白浓缩情况确定，可短时多次离心。吸出蛋白浓缩液后，用ddH2O冲洗超滤管。加入0.2mol/L的NaOH溶液，浸泡30min去除超滤管中残留的蛋白质。最后用ddH2O冲洗干净，并将超滤管完全浸没在ddH2O中，于4℃保存，采用Bradford蛋白定量测定法测定重组蛋白的浓度，最终获得重组蛋白GroEL浓度高达0.86mg/mL，重组蛋白TAL浓度高达1.02mg/mL。结果见图2。
实施例3
将冻存的肠上皮细胞株(CCD 841CoN)复融后，接种于含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基中培养，待细胞繁殖至90％贴壁时，用胰酶消化贴壁细胞，按比例1:4进行传代。传代三次后，按每孔4×105个细胞将细胞加到12孔板中进行培养。培养至细胞完全贴壁时，分别添加0、10、20、60、80μg/mL的LPS，继续培养48h。培养结束后，收集培养液，离心除去细胞和菌体，上清液用于测定IL-8的含量。结果发现LPS浓度为20μg/mL时，IL-8分泌量最大，所以建立炎症模型LPS最佳添加量为20μg/mL。结果见图3。
实施例4
将20μg/mL LPS添加到CCD 841CoN细胞进行刺激的同时，分别加入不同浓度的GroEL(75、100、125、150、175μg/mL)和TAL(75、100、125、150、175μg/mL)，培养48h后，收集细胞培养液，离心取上清液用于检测炎症因子IL-8的含量。结果表明，在相同的浓度下，重组蛋白TAL对炎症模型的干预作用较重组蛋白GroEL的效果好。GroEL和TAL浓度分别为175μg/mL和125μg/mL能够将炎症细胞的IL-8分泌量降到正常水平。结果见图4。

Claims (1)

1.一种利用双歧杆菌的重组蛋白改善肠道炎症的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）重组质粒的制备：将双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)H3-R2的基因组DNA作为PCR扩增GroEL和TAL基因的反应模板，并将表达质粒pQE-30双酶切，通过无缝克隆技术重组质粒；
（2）重组载体的诱导表达：将重组质粒pQE-30-GroEL和pQE-30-TAL导入大肠杆菌M15感受态，并加入IPTG至浓度为0.1mM进行诱导表达，分别在16℃和37℃诱导表达4h，并进行纯化浓缩；
（3）脂多糖诱导肠上皮细胞炎症模型的建立：肠上皮细胞株CCD 841CoN按每孔4×105个细胞将细胞加到12孔板中进行培养，培养至细胞完全贴壁时，分别添加0、10、20、60、80μg/mL的LPS，继续培养48h，上清液用于测定IL-8的含量；
（4）重组蛋白对肠道炎症的作用：将LPS添加到CCD 841CoN细胞进行刺激的同时，分别加入不同浓度的GroEL和TAL，培养48h后，上清液用于检测炎症因子IL-8的含量；
所述重组载体的诱导表达为：当IPTG诱导表达时，温度为37℃诱导表达4h；所述重组蛋白纯化后浓缩的重组蛋白GroEL浓度高达0.86mg/mL，重组蛋白TAL浓度高达1.02mg/mL；所述LPS最佳添加量为20μg/mL；步骤（4）中所述GroEL和TAL的加入浓度分别为175μg/mL和125μg/mL；所述菌株H3-R2为实验室自行分离菌株，PCR扩增使用的GroEL和TAL基因序列均属实验室所有。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115011516B (zh) * 2022-06-13 2023-11-14 东北农业大学 一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法
CN116178509B (zh) * 2022-08-09 2024-05-28 东北农业大学 一种双歧杆菌表面蛋白的制备方法及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107873051A (zh) * 2015-04-15 2018-04-03 阿雷斯贸易股份有限公司 产生tslp或il‑25的乳酸乳球菌及其作为益生菌和治疗剂的用途
CN108220206A (zh) * 2018-03-12 2018-06-29 江南大学 一种长双歧杆菌及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107873051A (zh) * 2015-04-15 2018-04-03 阿雷斯贸易股份有限公司 产生tslp或il‑25的乳酸乳球菌及其作为益生菌和治疗剂的用途
CN108220206A (zh) * 2018-03-12 2018-06-29 江南大学 一种长双歧杆菌及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Shang Jiacui等.Bifidobacterium bifidum H3-R2 and Its Molecular Communication within the Context of Ulcerative Colitis.《Journal of Agricultural and Food Chemistry》.2022,第70卷(第37期),全文. *

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