CN113491239B - 一种多倍体大花萱草组织培养及培养基 - Google Patents

一种多倍体大花萱草组织培养及培养基 Download PDF

Info

Publication number
CN113491239B
CN113491239B CN202110993370.XA CN202110993370A CN113491239B CN 113491239 B CN113491239 B CN 113491239B CN 202110993370 A CN202110993370 A CN 202110993370A CN 113491239 B CN113491239 B CN 113491239B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture medium
culture
modified
medium
polyploid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110993370.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113491239A (zh
Inventor
陈曦
刘志洋
汪磊
王金刚
龚束芳
曲彦婷
周晔
鲁耀
刘鑫
李广忻
张立微
刘婧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Heilongjiang Huiyan Agricultural Development Co ltd
Harbin Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Heilongjiang Huiyan Agricultural Development Co ltd
Harbin Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Heilongjiang Huiyan Agricultural Development Co ltd, Harbin Academy of Agricultural Sciences filed Critical Heilongjiang Huiyan Agricultural Development Co ltd
Priority to CN202110993370.XA priority Critical patent/CN113491239B/zh
Publication of CN113491239A publication Critical patent/CN113491239A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113491239B publication Critical patent/CN113491239B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
    • A01G22/60—Flowers; Ornamental plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/10—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material
    • A01G24/12—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material containing soil minerals
    • A01G24/15—Calcined rock, e.g. perlite, vermiculite or clay aggregates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/20—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material
    • A01G24/28—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material containing peat, moss or sphagnum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G31/00—Soilless cultivation, e.g. hydroponics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/002—Culture media for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明提供一种多倍体大花萱草组织培养的方法及培养基，包括以下步骤：（1）外植体的选取与消毒处理；（2）不定芽的诱导培养，将消毒后的外植体接种至诱导培养基上；（3）不定芽的增殖培养，将不定芽接种于不同增殖培养基上；（4）不定芽的生根培养，当不定芽长至2‑3cm时，将不定芽分割成单个外植体，以1/2改性MS为基本培养基，添加NAA在生根培养基中；（5）炼苗及移栽；其中，所述培养基为改性MS培养基。本发明筛选出以多倍体大花萱草的分蘖茎段为外植体，直接诱导生成不定芽，缩短了成苗时间，降低了生产成本；加快了多倍体大花萱草繁殖速度，同时能打破季节局限，进而可大批量生产以满足市场需求，实现育苗工厂化生产。

Description

一种多倍体大花萱草组织培养及培养基
技术领域
本发明属于花卉培育技术领域，具体涉及一种多倍体大花萱草组织培养及培养基。
背景技术
随着社会经济的飞速发展，人们物质文化生活水平的提高，对周围生存环境的要求也随之提高。因此，对园林绿化、庭院景观园林的观赏性也随之提高，不仅要求园林花卉美观、赏心悦目，还要栽培简单，管理方便，抗性强。所以，近年来，萱草属植物在园林市场开始走俏，不仅因其花大色美，颜色丰富，其栽培简单，管理方便，且春季萌发较早，绿叶成丛，无论是在绿荫下，还是道路旁，丛植、孤植都可形成观赏价值极高的景观。
多倍体大花萱草极耐寒、耐旱、对土壤要求不严，可在盐碱地上生长开花。花色鲜艳、俏丽、花期长，从6月中旬开到入冬；花叶呈丛状生长，花萼高10-15公分，在花叶上方开花。无论观叶还是观花都具有极高的观赏价值。可片植、花茎、花坛、上盆。无论多么寒冷的冬天均可安全越冬，原产美国，引入中国时间较短。多倍体大花萱草由于定向选用了花色艳丽，花姿优美、花朵硕大以及着花率高等性状的良种作亲本进行杂交繁殖，所得F1代种苗绝大多数具有生长势旺，花色更加绚丽等优良的杂交优势。因此，各商家纷纷由国外引种进行繁殖，但成本较高，且资源有限，造成市场供不应求现象的发生。
目前，大花萱草受到了世界各国园艺届的重视。在发达国家，近十几年来大花萱草已广泛应用到公共绿地、公园、广场和庭院的绿化美化和防止水土流失中，已取得了较高的绿化、美化效果。由于其优异的特性和广阔的市场发展前景，吸引了中国的投资商进行种质收集、育种和种苗的生产，目前已投入到市场的品种已超过了一千余个。我国目前已充分认识到了大花萱草是一优秀地被植物，我国资源丰富，开展萱草的品种选育和繁育工作，具有重要的经济和社会效益。70年代中国科学院植物研究所在北京和广州进行品种选育试验，最终选育出了一百多个能在我国园林广泛栽培的品种，大花萱草就是其中一种。大量试验证明，大花萱草是一种优良的花卉植物材料。
目前，多倍体萱草繁殖主要以分株为主，1株萱草每年仅能繁殖4-5株，不仅需要大片的土地和栽培母株，而且繁殖系数低、周期长，限制了新品种的应用速度。采用组织培养方法可以大大地提高繁殖系数，短时间内就可以生产出大量的种苗投放市场，加快了新品种的应用步伐。
中国专利(CN201310405775：一种多倍体大花萱草组培方法及培养基)通过组织培养，可快速繁殖多倍体大花萱草，生产周期只需2个月左右，但其并未关注到组织培养时不定芽的诱导率、增殖率以及生根率等问题，只对后续移栽率做统计。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种多倍体大花萱草组织培养的方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体的选取与消毒处理：选取多倍体大花萱草各品种的健壮的分蘖茎段作为外植体材料，将采取的分蘖茎段切成1-2cm的留芽小段，先用洗衣粉清洗材料，再用流水冲洗60min后，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞灭菌处理8min，无菌水冲洗4次，整个消毒过程不断震荡消毒液；
(2)不定芽的诱导培养：将消毒后的外植体接种至诱导培养基上，进行光照培养；
(3)不定芽的增殖培养：将不定芽接种于增殖培养基上，进行光照培养；
(4)不定芽的生根培养：当不定芽长至2-3cm时，将不定芽分割成单个外植体，接种在生根培养基中，30天后测量根长，并进行移栽；
(5)炼苗及移栽：待根长到2-3cm时，打开组培瓶盖，在室温下炼苗3-4天接受太阳光照射，然后洗尽根部残留的培养基，用0.1％多菌灵药水洗根后直接移栽到草炭土：蛭石＝1：1的营养钵里，浇足定根水，以后每天用喷雾法浇水1次，温度控制在20℃-30℃，湿度在80％-90％，得到成品；
所述诱导培养基和增殖培养基均为改性MS培养基+6-BA+NAA；
所述生根培养基为1/2改性MS培养基+NAA；
所述改性MS培养基浓度为mg/L，包括以下组分：
MS培养基、异噻唑、苯并咪唑、稀释1000倍的粉锈宁、10％噻虫嗪。
其中，所述改性抗菌剂的制备方法为：将0.1-0.5份的苯并咪唑和0.1-0.5份的异噻唑加入100mL的无水乙醇中，搅拌溶解，随后加入5-10份的活性炭，在60℃下反应1-2h，反应完成后进行过滤，烘干，得到改性抗菌剂。
优选的，所述多倍体大花萱草的品种为红宝石、红运、橘黄色、肉粉色、大金杯、金娃娃中的一种。
优选的，步骤(2)中所述诱导培养基为改性MS培养基1L+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L。
优选的，所述步骤(2)中诱导培养基还包括添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH值调至6-7。
优选的，所述步骤(2)中培养温度为20℃-30℃，空气相对湿度控制在40％～60％，光照强度为1000-2000lx，培养时间为15-20天。
优选的，步骤(3)中所述增殖培养基为改性MS培养基1L+6-BA1-2mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L，还添加了壳聚糖气凝胶。
优选的，所述壳聚糖气凝胶碱性通过以下步骤制得：将20质量份的壳聚糖溶于1000体积份质量浓度为2％的乙酸溶液中，75℃旋转蒸发浓缩至100体积份，将得到的壳聚糖乙酸溶液倒入容器内，随后加入10体积份的椰乳，搅拌均匀，于-20℃预冻24h，取出后在-55℃冷冻干燥36h，得到壳聚糖气凝胶。
优选的，所述步骤(3)中光照强度为2000-3000lx，温度为25℃，培养时间为15-20天。
优选的，所述步骤(4)中生根培养基为1/2改性MS培养基1L+NAA 0.1-0.3mg/L。
优选的，所述改性MS培养基中每升MS培养基中添加1-5g改性抗菌剂、5-10g稀释1000倍的粉锈宁和50-100mg 10％噻虫嗪。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明通过对MS培养基进行改性，加入改性抗菌剂，其中，改性抗菌剂中的活性炭能够提供暗环境，避免培养基中的营养物质和调节物质发生分解，以确保其稳定性和活性，并能够吸附离体培养中的酚类物质，使多酚氧化酶和过氧化酶失活，以防止植株发生褐化；同时，负载于活性炭中的苯并咪唑和异噻唑能起到杀菌作用，减少不定芽在诱导生长、增殖生长和生根生长过程中的污染率，提高其成活率。培养基中加入粉锈宁和噻虫嗪作为杀虫剂，可以使药剂在不定芽成长过程中进入到大花萱草体内，减少后期移栽至室外后感染病虫害。
(2)本发明三个培养阶段均加入了NAA，其中NAA是高效的植物生长调节剂，毒副作用小，NAA能够提高植株内叶绿素、蛋白质、核酸的含量和光合效率，并能提高过氧化物酶及硝酸还原酶的活性，促进植株的碳、氮代谢，促进植物细胞的***和伸长，从而增强植株对养分的吸收和干物质的积累，促进大花萱草的生长。本发明的培养基在不同阶段配方不同，是培养多倍体大花萱草大量扩繁的最佳组合，可以快速大量的繁殖组培苗，适应园林绿化市场需求。
(3)本发明在增殖培养中的培养基中加入改性壳聚糖气凝胶，其中，壳聚糖本身作为有机抗菌剂，本身具有的抗菌性能进一步减少培养基的污染率；同时，加入的椰乳作为有机添加物，能够为植物生长提供必要的生理活性物质及微量成分，椰乳作为完善植物组织培养再生体系的添加剂，它可以在植株组织培养的增殖阶段起到显著提高分化率、再生苗苗高和壮苗的作用。
(4)本发明筛选出以多倍体大花萱草的分蘖茎段为外植体，可直接诱导生成不定芽，加快了多倍体大花萱草繁殖速度，同时能打破季节局限，进而可大批量生产以满足市场需求，实现育苗工厂化生产。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)改性MS培养基的制备：将0.1g的苯并咪唑和0.1g的异噻唑加入100mL的无水乙醇中，搅拌溶解，随后加入5g的活性炭，在60℃下反应1h，反应完成后进行过滤，烘干，得到改性抗菌剂；随后取1L MS培养基，加入1g改性抗菌剂、5g稀释1000倍的20％粉锈宁乳油和50mg 10％噻虫嗪，混合均匀即得改性MS培养基。
(2)外植体的选取与消毒处理：选取红宝石多倍体大花萱草的健壮的分蘖茎段作为外植体材料，将采取的分蘖茎段切成1cm的留芽小段，先用洗衣粉清洗材料，再用流水冲洗60min后，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞灭菌处理8min，无菌水冲洗4次，整个消毒过程不断震荡消毒液。
(3)不定芽的诱导培养：将消毒后的外植体接种至诱导培养基上，每瓶3个外植体，接种10瓶，诱导培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，同时添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH值调至6，培养温度为20℃，空气相对湿度控制在40％，光照强度为1000lx，培养15天。
(4)不定芽的增殖培养：将改性壳聚糖气凝胶放入增殖培养基中，随后再将不定芽接种于增殖培养基上，每瓶3芽，接种10瓶，增殖培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，光照培养20天，光照强度为2000lx，温度为25℃。
(5)不定芽的生根培养：当不定芽长至2cm时，将不定芽分割成单个外植体，接种至生根培养基上，每瓶3株培养苗，接种10瓶，生根培养基配方为1/2改性MS培养基1L+NAA0.1mg/L，30天后测量根长，并进行移栽。
(6)炼苗及移栽：待根长到2cm时，打开组培瓶盖，在室温下炼苗3天接受太阳光照射，然后洗尽根部残留的培养基，用0.1％多菌灵药水洗根后直接移栽到草炭土：蛭石＝1：1的营养钵里，浇足定根水，以后每天用喷雾法浇水1次，温度控制在20℃，湿度在80％，得到成品。
实施例2
一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)改性MS培养基的制备：将0.2g的苯并咪唑和0.2g的异噻唑加入100mL的无水乙醇中，搅拌溶解，随后加入8g的活性炭，在60℃下反应1.5h，反应完成后进行过滤，烘干，得到改性抗菌剂；随后取1L MS培养基，加入2g改性抗菌剂、7g稀释1000倍的20％粉锈宁乳油和60mg 10％噻虫嗪，混合均匀即得改性MS培养基。
(2)外植体的选取与消毒处理：选取红运多倍体大花萱草的健壮的分蘖茎段作为外植体材料，将采取的分蘖茎段切成1cm的留芽小段，先用洗衣粉清洗材料，再用流水冲洗60min后，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞灭菌处理8min，无菌水冲洗4次，整个消毒过程不断震荡消毒液。
(3)不定芽的诱导培养：将消毒后的外植体接种至诱导培养基上，每瓶3个外植体，接种10瓶，诱导培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，同时添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH值调至6.5，培养温度为25℃，空气相对湿度控制在50％，光照强度为1500lx，培养15天。
(4)不定芽的增殖培养：将改性壳聚糖气凝胶放入增殖培养基中，随后再将不定芽接种于不同增殖培养基上，每瓶3芽，接种10瓶，增殖培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA1.2mg/L+NAA 0.12mg/L，光照培养20天，光照强度为2500lx，温度为25℃。
(5)不定芽的生根培养：当不定芽长至2.5cm时，将不定芽分割成单个外植体，接种至生根培养基上，每瓶3株培养苗，接种10瓶，生根培养基配方为1/2改性MS培养基1L+NAA0.15mg/L，30天后测量根长，并进行移栽。
(6)炼苗及移栽：待根长到2.5cm时，打开组培瓶盖，在室温下炼苗3天接受太阳光照射，然后洗尽根部残留的培养基，用0.1％多菌灵药水洗根后直接移栽到草炭土：蛭石＝1：1的营养钵里，浇足定根水，以后每天用喷雾法浇水1次，温度控制在25℃，湿度在85％，得到成品。
实施例3
一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)改性MS培养基的制备：将0.4g的苯并咪唑和0.4g的异噻唑加入100mL的无水乙醇中，搅拌溶解，随后加入9g的活性炭，在60℃下反应2h，反应完成后进行过滤，烘干，得到改性抗菌剂；随后取1L MS培养基，加入4g抗菌剂、9g稀释1000倍的20％粉锈宁乳油和80mg10％噻虫嗪，混合均匀即得改性MS培养基。
(2)外植体的选取与消毒处理：选取橘黄色多倍体大花萱草的健壮的分蘖茎段作为外植体材料，将采取的分蘖茎段切成2cm的留芽小段，先用洗衣粉清洗材料，再用流水冲洗60min后，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞灭菌处理8min，无菌水冲洗4次，整个消毒过程不断震荡消毒液。
(3)不定芽的诱导培养：将消毒后的外植体接种至诱导培养基上，每瓶3个外植体，接种10瓶，诱导培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，同时添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH值调至6.5，培养温度为28℃，空气相对湿度控制在55％，光照强度为1500lx，培养15天。
(4)不定芽的增殖培养：将改性壳聚糖气凝胶放入增殖培养基中，随后再将不定芽接种于不同增殖培养基上，每瓶3芽，接种10瓶，增殖培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA1.5mg/L+NAA 0.15mg/L，光照培养20天，光照强度为2500lx，温度为25℃。
(5)不定芽的生根培养：当不定芽长至2.5cm时，将不定芽分割成单个外植体，接种至生根培养基上，每瓶3株培养苗，接种10瓶，生根培养基配方为1/2改性MS培养基1L+NAA0.25mg/L，30天后测量根长，并进行移栽。
(6)炼苗及移栽：待根长到2.5cm时，打开组培瓶盖，在室温下炼苗4天接受太阳光照射，然后洗尽根部残留的培养基，用0.1％多菌灵药水洗根后直接移栽到草炭土：蛭石＝1：1的营养钵里，浇足定根水，以后每天用喷雾法浇水1次，温度控制在25℃，湿度在85％，得到成品。
实施例4
一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)改性MS培养基的制备：将0.5g的苯并咪唑和0.5g的异噻唑加入100mL的无水乙醇中，搅拌溶解，随后加入10g的活性炭，在60℃下反应2h，反应完成后进行过滤，烘干，得到改性抗菌剂；随后取1L MS培养基，加入5g改性抗菌剂、10g稀释1000倍的20％粉锈宁乳油和100mg 10％噻虫嗪，混合均匀即得改性MS培养基。
(2)外植体的选取与消毒处理：选取金娃娃多倍体大花萱草的健壮的分蘖茎段作为外植体材料，将采取的分蘖茎段切成2cm的留芽小段，先用洗衣粉清洗材料，再用流水冲洗60min后，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞灭菌处理8min，无菌水冲洗4次，整个消毒过程不断震荡消毒液。
(3)不定芽的诱导培养：将改性壳聚糖气凝胶放入增殖培养基中，随后再将消毒后的外植体接种至诱导培养基上，每瓶3个外植体，接种10瓶，诱导培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，同时添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH值调至7，培养温度为30℃，空气相对湿度控制在60％，光照强度为2000lx，培养15天。
(4)不定芽的增殖培养：将不定芽接种于不同增殖培养基上，每瓶3芽，接种10瓶，增殖培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L，光照培养20天，光照强度为3000lx，温度为25℃。
(5)不定芽的生根培养：当不定芽长至3cm时，将不定芽分割成单个外植体，接种至生根培养基上，每瓶3株培养苗，接种10瓶，生根培养基配方为1/2改性MS培养基1L+NAA0.3mg/L，30天后测量根长，并进行移栽。
(6)炼苗及移栽：待根长到3cm时，打开组培瓶盖，在室温下炼苗4天接受太阳光照射，然后洗尽根部残留的培养基，用0.1％多菌灵药水洗根后直接移栽到草炭土：蛭石＝1：1的营养钵里，浇足定根水，以后每天用喷雾法浇水1次，温度控制在25℃，湿度在85％，得到成品。
对比例1
一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体的选取与消毒处理：选取红宝石多倍体大花萱草的健壮的分蘖茎段作为外植体材料，将采取的分蘖茎段切成1cm的留芽小段，先用洗衣粉清洗材料，再用流水冲洗60min后，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞灭菌处理8min，无菌水冲洗4次，整个消毒过程不断震荡消毒液。
(2)不定芽的诱导培养：将消毒后的外植体接种至诱导培养基上，每瓶3个外植体，接种10瓶，培养基配方为MS培养基1L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，同时添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH值调至6，培养温度为20℃，空气相对湿度控制在40％，光照强度为1000lx，培养15天。
(3)不定芽的增殖培养：将不定芽接种于不同增殖培养基上，每瓶3芽，接种10瓶，培养基配方为MS培养基1L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，光照培养20天，光照强度为2000lx，温度为25℃。
(4)不定芽的生根培养：当不定芽长至2cm时，将不定芽分割成单个外植体，接种至生根培养基上，每瓶3株培养苗，接种10瓶，生根培养基配方为1/2MS培养基1L+NAA 0.1mg/L，30天后测量根长，并进行移栽。
(5)炼苗及移栽：待根长到2cm时，打开组培瓶盖，在室温下炼苗3天接受太阳光照射，然后洗尽根部残留的培养基，用0.1％多菌灵药水洗根后直接移栽到草炭土：蛭石＝1：1的营养钵里，浇足定根水，以后每天用喷雾法浇水1次，温度控制在20℃，湿度在80％，得到成品。
对比例2
一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)改性MS培养基的制备：取将0.1g的苯并咪唑和0.1g的异噻唑加入100mL的无水乙醇中，搅拌溶解，随后加入5g的活性炭，在60℃下反应1h，反应完成后进行过滤，烘干，得到改性抗菌剂；随后1L MS培养基，加入1g改性抗菌剂、5g稀释1000倍的20％粉锈宁乳油和50mg 10％噻虫嗪，混合均匀即得改性MS培养基。
(2)外植体的选取与消毒处理：选取红宝石多倍体大花萱草的健壮的花蕾作为外植体材料，先用洗衣粉清洗材料，再用流水冲洗60min后，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞灭菌处理8min，无菌水冲洗4次，整个消毒过程不断震荡消毒液。
(3)不定芽的诱导培养：将消毒后的外植体接种至诱导培养基上，每瓶3个外植体，接种10瓶，诱导培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，同时添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH值调至6，培养温度为20℃，空气相对湿度控制在40％，光照强度为1000lx，培养15天。
(4)不定芽的增殖培养：将改性壳聚糖气凝胶放入增殖培养基中，随后再将不定芽接种于不同增殖培养基上，每瓶3芽，接种10瓶，增殖培养基配方为改性MS培养基1L+6-BA1mg/L+NAA 0.1mg/L，光照培养20天，光照强度为2000lx，温度为25℃。
(5)不定芽的生根培养：当不定芽长至2cm时，将不定芽分割成单个外植体，接种至生根培养基上，每瓶3株培养苗，接种10瓶，生根培养基配方为1/2改性MS培养基1L+NAA0.1mg/L，30天后测量根长，并进行移栽。
(6)炼苗及移栽：待根长到2cm时，打开组培瓶盖，在室温下炼苗3天接受太阳光照射，然后洗尽根部残留的培养基，用0.1％多菌灵药水洗根后直接移栽到草炭土：蛭石＝1：1的营养钵里，浇足定根水，以后每天用喷雾法浇水1次，温度控制在20℃，湿度在80％，得到成品。
将上述实施例和对比例在培养过程中的情况进行统计，计算不定芽诱导、增殖系数和生根率情况，按以下公式计算：
诱导率(％)＝成功诱导不定芽数/接种培养基总数×100％
增殖系数＝增殖苗数/接种苗数
生根率＝生根苗数/接种小苗数×100％
具体数据如下表1：
表1多倍体大花萱草组织培养的诱率、增殖系数及生根率
项目 诱导率 增殖系数 生根率
实施例1 80％ 3.8 94％
实施例2 76％ 4.2 95％
实施例3 90％ 4.6 98％
实施例4 78％ 4.3 94％
对比例1 67％ 1.4 87％
对比例2 70％ 2.1 88％
从表1中可以看出，实施例1-4的诱导率、增殖系数和生根率均优于对比例1和对比例2，对比例1使用的培养基为普通MS培养基，说明本发明的的培养基在不同阶段配方不同，是培养多倍体大花萱草大量扩繁的最佳组合，可以快速大量的繁殖组培苗；同时，培养基中的抗菌剂和杀虫剂的加入，减少对组织培养过程中培养基的污染率，从而促进了诱导率、增殖系数的增加；对比例2选取的外植体为花蕾，从对比例2中可以看出，本发明筛选出以多倍体大花萱草的分蘖茎段为外植体，可直接诱导生成不定芽，加快了多倍体大花萱草繁殖速度和繁殖率，是本发明中最佳的外植体选择。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体的选取与消毒处理：选取多倍体大花萱草各品种的健壮的分蘖茎段作为外植体材料，将采取的分蘖茎段切成1-2cm的留芽小段，先用洗衣粉清洗材料，再用流水冲洗60min后，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞灭菌处理8min，无菌水冲洗4次，整个消毒过程不断震荡消毒液；
(2)不定芽的诱导培养：将消毒后的外植体接种至诱导培养基上，进行光照培养；
(3)不定芽的增殖培养：将不定芽接种于增殖培养基上，进行光照培养；
(4)不定芽的生根培养：当不定芽长至2-3cm时，将不定芽分割成单个外植体，接种在生根培养基中，30天后测量根长，并进行移栽；
(5)炼苗及移栽：待根长到2-3cm时，打开组培瓶盖，在室温下炼苗3-4天接受太阳光照射，然后洗尽根部残留的培养基，用0.1％多菌灵药水洗根后直接移栽到草炭土：蛭石＝1：1的营养钵里，浇足定根水，以后每天用喷雾法浇水1次，温度控制在20℃-30℃，湿度在80％-90％，得到成品；
所述诱导培养基和增殖培养基均为改性MS培养基+6-BA+NAA；
所述生根培养基为1/2改性MS培养基+NAA；
所述改性MS培养基浓度为mg/L，包括以下组分：
MS培养基、改性抗菌剂、稀释1000倍的粉锈宁、10％噻虫嗪；
其中，所述改性抗菌剂的制备方法为：将0.1-0.5份的苯并咪唑和0.1-0.5份的异噻唑加入100mL的无水乙醇中，搅拌溶解，随后加入5-10份的活性炭，在60℃下反应1-2h，反应完成后进行过滤，烘干，得到改性抗菌剂；
其中步骤(3)中所述增殖培养基为改性MS培养基1L+6-BA 1-2mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L，还添加了改性壳聚糖气凝胶；
所述改性MS培养基中每升MS培养基中添加1-5g改性抗菌剂、5-10g稀释1000倍的粉锈宁和50-100mg10％噻虫嗪；
所述改性壳聚糖气凝胶通过以下步骤制得：将20质量份的壳聚糖溶于1000体积份质量浓度为2％的乙酸溶液中，75℃旋转蒸发浓缩至100体积份，将得到的壳聚糖乙酸溶液倒入容器内，随后加入10体积份的椰乳，搅拌均匀，于-20℃预冻24h，得到改性壳聚糖气凝胶；
所述多倍体大花萱草的品种为红宝石、红运、金娃娃中的一种。
2.根据权利要求1所述一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，步骤(2)中所述诱导培养基为改性MS培养基1L+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L。
3.根据权利要求1所述一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(2)中诱导培养基还包括添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH值调至6-7。
4.根据权利要求1所述一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(2)中培养温度为20℃-30℃，空气相对湿度控制在40％～60％，光照强度为1000-2000lx，培养时间为15-20天。
5.根据权利要求1所述一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(3)中光照强度为2000-3000lx，温度为25℃，培养时间为15-20天。
6.根据权利要求1所述一种多倍体大花萱草组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(4)中生根培养基为1/2改性MS培养基1L+NAA 0.1-0.3mg/L。
CN202110993370.XA 2021-08-27 2021-08-27 一种多倍体大花萱草组织培养及培养基 Active CN113491239B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110993370.XA CN113491239B (zh) 2021-08-27 2021-08-27 一种多倍体大花萱草组织培养及培养基

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110993370.XA CN113491239B (zh) 2021-08-27 2021-08-27 一种多倍体大花萱草组织培养及培养基

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113491239A CN113491239A (zh) 2021-10-12
CN113491239B true CN113491239B (zh) 2022-01-11

Family

ID=77996974

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110993370.XA Active CN113491239B (zh) 2021-08-27 2021-08-27 一种多倍体大花萱草组织培养及培养基

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113491239B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115517172B (zh) * 2022-11-25 2023-01-20 云南植虫药生物科技有限公司 一种萱草的四倍体育苗方法

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH104811A (ja) * 1996-06-19 1998-01-13 Gunze Ltd ヘメロカリス属植物の大量増殖方法
CN101869062A (zh) * 2009-04-24 2010-10-27 上海上房园林植物研究所 金晃常绿大花萱草的组织培养方法
CN102172224A (zh) * 2011-03-24 2011-09-07 黑龙江生态工程职业学院 红花萱草组培配方及其培养方法
CN102265785A (zh) * 2010-06-02 2011-12-07 上海上房园艺有限公司 大花萱草圣诞红的组织培养方法
CN103430850A (zh) * 2013-09-09 2013-12-11 中邦园林股份有限公司 一种多倍体大花萱草组培方法及培养基
CN103461135A (zh) * 2013-09-18 2013-12-25 宁波市农业科学研究院 一种大花萱草的繁殖方法
CN103609444A (zh) * 2013-11-17 2014-03-05 浙江大学 常绿萱草的组织培养法
CN105340752A (zh) * 2015-12-02 2016-02-24 上海上房园艺有限公司 一种大花萱草美人红的组织离体培养方法
CN105483005A (zh) * 2015-12-18 2016-04-13 华南理工大学 壳聚糖气凝胶碱性培养基的制备和使用方法
CN109717075A (zh) * 2017-10-27 2019-05-07 上海市农业科学院 一种通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法
CN112913683A (zh) * 2021-03-18 2021-06-08 黑龙江卉研农业发展有限公司 行走式机械增加萱草授粉率的技术

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105340754A (zh) * 2015-12-04 2016-02-24 定州市绿谷农业科技发展有限公司 大花萱草适于工厂化繁殖的方法

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH104811A (ja) * 1996-06-19 1998-01-13 Gunze Ltd ヘメロカリス属植物の大量増殖方法
CN101869062A (zh) * 2009-04-24 2010-10-27 上海上房园林植物研究所 金晃常绿大花萱草的组织培养方法
CN102265785A (zh) * 2010-06-02 2011-12-07 上海上房园艺有限公司 大花萱草圣诞红的组织培养方法
CN102172224A (zh) * 2011-03-24 2011-09-07 黑龙江生态工程职业学院 红花萱草组培配方及其培养方法
CN103430850A (zh) * 2013-09-09 2013-12-11 中邦园林股份有限公司 一种多倍体大花萱草组培方法及培养基
CN103461135A (zh) * 2013-09-18 2013-12-25 宁波市农业科学研究院 一种大花萱草的繁殖方法
CN103609444A (zh) * 2013-11-17 2014-03-05 浙江大学 常绿萱草的组织培养法
CN105340752A (zh) * 2015-12-02 2016-02-24 上海上房园艺有限公司 一种大花萱草美人红的组织离体培养方法
CN105483005A (zh) * 2015-12-18 2016-04-13 华南理工大学 壳聚糖气凝胶碱性培养基的制备和使用方法
CN109717075A (zh) * 2017-10-27 2019-05-07 上海市农业科学院 一种通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法
CN112913683A (zh) * 2021-03-18 2021-06-08 黑龙江卉研农业发展有限公司 行走式机械增加萱草授粉率的技术

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
5个新品种多倍体萱草离体快繁技术的研究;宋雪莲;《中国优秀博硕士论文全文数据库（硕士）农业科技辑》;20111215;第18-19页第3.1.1.1.2节 *
6种多倍体大花萱草组织培养研究;陈曦等;《安徽农业科学》;20200109;第48卷(第1期);第106-109页 *
Effects of the growth retardant Paclobutrazol on large-scale micropropagation of daylily (Hemerocallis spp.);Chen, JX等;《IN VITRO CELLULAR & DEVELOPMENTAL BIOLOGY-PLANT 》;20050130;第41卷(第1期);第59页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113491239A (zh) 2021-10-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103190347B (zh) 一种茶壶枣组织培养方法
CN112931202B (zh) 一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法
CN112889672B (zh) 一种白芨种苗优质高产的培育方法
CN111616052A (zh) 一种苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法、应用
CN109392712A (zh) 一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法
CN106577273A (zh) 一种铁甲秋海棠叶片离体再生体系建立的方法
CN107162722A (zh) 一种绿萝的栽培方法
CN101578960A (zh) 一种减少八仙花组培苗气生根的方法
CN109618927A (zh) 一种圆锥铁线莲的组织培养方法
CN100361570C (zh) 一种鲜切花百合的高效离体繁殖方法
CN113491239B (zh) 一种多倍体大花萱草组织培养及培养基
CN113243295B (zh) 朱顶红组培繁育方法
CN107660464B (zh) 一种北美红杉优良种苗的组培快繁方法
CN103155868B (zh) 樱桃砧木zy-1组培快速育苗方法
CN110604060B (zh) 一种浙江红山茶花药离体培养获得再生植株的方法
CN110100740B (zh) 一种二歧鹿角蕨的组培快繁方法
CN100360008C (zh) 花榈木快速繁殖的方法
CN101743908A (zh) 红花银桦组培快繁及栽培方法
CN109156350B (zh) 一种抗风桐繁芽与生根培养基及促进抗风桐离体快速繁殖的方法
CN110720389A (zh) 一种微型月季盆花无土栽培方法
CN110999782A (zh) 一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法
CN111919751B (zh) 一种千里香种子组织培养的方法
CN112243860B (zh) 一种云南梧桐组培快繁方法
CN112106664B (zh) 一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法
CN108739403A (zh) 一种黄花梨木的组培快繁方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant