CN113474345B

CN113474345B - 作为ret抑制剂的含氮螺环衍生物

Info

Publication number: CN113474345B
Application number: CN202080009403.6A
Authority: CN
Inventors: 王健松; 付志飞; 罗志波; 罗妙荣; 张杨; 蔡亚磊; 朱武; 黎健; 陈曙辉; 鲍颖霞; 王玮; 谢周凡
Original assignee: Guangzhou Baiyunshan Pharmaceutical Holdings Co ltd Baiyunshan Pharmaceutical General Factory
Current assignee: Guangzhou Baiyunshan Pharmaceutical Holdings Co ltd Baiyunshan Pharmaceutical General Factory
Priority date: 2019-04-03
Filing date: 2020-04-03
Publication date: 2023-04-18
Anticipated expiration: 2040-04-03
Also published as: WO2020200314A1; EP3950688A4; CN113474345A; EP3950688A1; US20220204507A1; JP2022529086A; JP7198386B2

Abstract

公开了一系列带有含氮螺环结构的化合物，及其在制备RET激酶抑制剂中的应用。具体公开了式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐。

Description

作为RET抑制剂的含氮螺环衍生物

本申请主张如下优先权：

CN201910270287.2，申请日2019.04.03；

CN201910937884.6，申请日2019.09.29；

CN201910980684.9，申请日2019.10.15；

CN202010199443.3，申请日2020.03.19。

技术领域

本发明涉及一系列带有含氮螺环结构的化合物，及其在制备RET激酶抑制剂的应用。具体涉及式(I)和式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐。

背景技术

RET蛋白是一个受体酪氨酸激酶RTK，同时也是一个跨膜的糖蛋白，由位于10号染色体上的原癌基因RET(REarranged during Transfection)表达，在胚胎阶段的肾脏和肠神经***的发育中起着重要作用，另外在多种组织内稳态也很关键，如神经元、神经内分泌、造血组织和男性生殖细胞等。和其他的RTK不同，RET并不是直接结合到配体分子：如神经导向素(artemin)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、neurturin和persephin，这些都是属于GNDF家族配体(GFLs)。这些配体GFLs通常结合到GDNF家族受体α(GFRα)，形成的GFLs-GFRα复合物介导了RET蛋白的自二聚化，引起胞内结构域上酪氨酸的反式自磷酸化反应，招募相关接头蛋白，激活细胞增殖等信号传导的级联反应，相关的信号通路包括MAPK、PI3K、JAK-STAT、PKA、PKC等等。

RET的致癌激活机制主要有两个：一是染色体的重排产生了新的融合蛋白，通常是RET的激酶结构域和包含自二聚化结构域的蛋白融合；二就是RET突变直接或间接的激活了RET的激酶活性。这些体细胞或生殖细胞水平的改变涉及多种癌症的发病机制。5％-10％的***状甲状腺癌患者存在RET染色体重排；而在髓样性甲状腺髓样癌中发现有60％存在RET点突变；在所有NSCLC患者中，大概有1-2％的具有RET融合蛋白，其中KIF5B-RET最为多见。

总之，在多种肿瘤和胃肠道紊乱如过敏性肠道综合症中均发现异常的RET表达或激活。因此RET抑制剂在肿瘤或肠道紊乱疾病中具有潜在的临床价值。

发明内容

本发明提供式(Ⅰ)所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，

其中，

R₁选自H、F、Cl、Br、I和C_1-6烷基，所述C_1-6烷基任选被1、2或3个R_a取代；

R₂选自H、F、Cl、Br、I和C_1-6烷基，所述C_1-6烷基任选被1、2或3个R_b取代；

R₃选自H、F、Cl、Br、I和C_1-6烷基，所述C_1-6烷基任选被1、2或3个R_c取代；

R₄选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂和C_1-3烷基，所述C_1-3烷基任选被1、2或3个R_d取代；

D₁选自-CH₂CH₂-，所述-CH₂CH₂-任选被1、2或3个R_e取代；

D₂选自-CH₂CH₂-，所述-CH₂CH₂-任选被1、2或3个R_f取代；

D₃选自-CH₂-和

所述-CH₂-任选被1或2个R_g取代；

D₄选自-CH₂CH₂-和-CH₂CH₂CH₂-，所述-CH₂CH₂-和-CH₂CH₂CH₂-任选被1、2或3个R_h取代；

R_a、R_b、R_c、R_d分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH₂和CH₃；

R_e、R_f、R_g、R_h分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH₃；

带“*”碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在。

本发明还提供式(ⅠI)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，

T选择CH和N；

D₁选自-CH₂CH₂-，所述-CH₂CH₂-任选被1、2或3个R_e取代；

D₂选自-CH₂CH₂-，所述-CH₂CH₂-任选被1、2或3个R_f取代；

D₃选自-CH₂-和

所述-CH₂-任选被1或2个R_g取代；

D₄选自-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-和-O-CH₂CH₂-，所述-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-和-O-CH₂CH₂-任选被1、2或3个R_h取代；

R_e、R_f、R_g、R_h分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH₃；

在本发明的一些方案中，所述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中，R₁选自H、F、Cl、Br、I、CH₃、CH₂CH₃、

所述CH₃、CH₂CH₃、

任选被1、2或3个R_a取代，其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₁选自H、F、Cl、Br、I、CH₃、CF₃、CH₂CH₃、CH₂CF₃、

其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₁选自CH₃，其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₂选自H、F、Cl、Br、I、CH₃、CH₂CH₃、

所述CH₃、CH₂CH₃、

任选被1、2或3个R_b取代，其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₂选自H、F、Cl、Br、I、CH₃、CF₃、CH₂CH₃、CH₂CF₃、

其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₂选自CH₃，其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₃选自H、F、Cl、Br、I、CH₃、CH₂CH₃、

所述CH₃、CH₂CH₃、

任选被1、2或3个R_c取代，其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₃选自H、F、Cl、Br、I、CH₃、CF₃、CH₂CH₃、CH₂CF₃、

其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₃选自CH₃，其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₄选自H、F、Cl、Br、I、CH₃、CF₃、CH₂CH₃、CH₂CF₃、

其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述R₄选自F，其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述结构单元

选自

其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述结构单元

选自

其他变量如本发明所定义。

在本发明的一些方案中，所述结构单元

选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，其选自：

其中，R₁、R₂、R₃和R₄如本发明所定义；

本发明还有一些方案是由上述变量任意组合而来。

本发明还提供了下式所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐：

本发明还提供了下式所示化合物或其药学上可接受的盐：

本发明还提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的上述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

本发明还提供了上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐或上述组合物在制备RET激酶抑制剂的应用。

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的1酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。

本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：

扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。

本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。

除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。

除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。

除非另有说明，“(D)”或者“(+)”表示右旋，“(L)”或者“(-)”表示左旋，“(DL)”或者“(±)”表示外消旋。

除非另有说明，用楔形实线键

和楔形虚线键

表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键

和直形虚线键

表示立体中心的相对构型，用波浪线

表示楔形实线键

或楔形虚线键

或用波浪线

表示直形实线键

和直形虚线键

本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valencetautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2,4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变，，亚胺-烯胺异构化的具体实例是

除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。

除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。

可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。

本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(³H)，碘-125(¹²⁵I)或C-14(¹⁴C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。

“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。

当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)₀-，表示该连接基团为单键。

当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。

当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。

当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，

中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成

也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成

所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

除非另有规定，术语“C_1-6烷基”用于表示直链或支链的由1至6个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C_1-6烷基包括C_1-5、C_1-4、C_1-3、C_1-2、C_2-6、C_2-4、C₆和C₅烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C_1-6烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)、丁基(包括n-丁基，，异丁基，s-丁基和t-丁基)、戊基(包括n-戊基，异戊基和新戊基)、己基等。

除非另有规定，术语“C_1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C_1-3烷基包括C_1-2和C_2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C_1-3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。

除非另有规定，C_n-n+m或C_n-C_n+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C_1-12包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、和C₁₂，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C_1-12包括C_1-3、C_1-6、C_1-9、C_3-6、C_3-9、C_3-12、C_6-9、C_6-12、和C_9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。

除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。

术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。

术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：eq代表当量、等量；M代表mol/L；DMSO代表二甲亚砜；EtOH代表乙醇；Boc代表叔丁氧羰基；TFA代表三氟乙酸；p.o.表示口服给药；BID表示一天给药两次。

化合物依据本领域常规命名原则或者使用

软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

技术效果

本发明化合物对野生型、V804M突变型RET都展现出较好的抑制活性。本发明化合物具有优异的药代动力学性质。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。

实施例1

合成路线：

步骤1化合物001-02的合成

向瓶中加入001-02B(473.30mg,5.50mmol,1.1eq)，001-02A(1.0g,5.00mmol,4.99mL,1.0eq)，碳酸钾(1.73g,12.50mmol,2.5eq)，N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，在90℃下搅拌16hr。反应液加入5mL二氯甲烷稀释过滤，固体用5mL二氯甲烷浸泡，在50℃下搅拌15min，后趁热过滤，两次滤液合并浓缩，加入20mL的乙酸乙酯稀释,后加入20mL的饱和硫酸钠洗涤，洗涤三次。有机相用无水硫酸钠干燥30min。后旋干得到化合物001-02。

步骤2：化合物001-03的合成

在10mL的瓶中加入001-01(150mg,731.04μmol,1eq)，001-02(278.93mg,1.10mmol,1.5eq)，四异丙醇钛(2mL)，氰基硼氢化钠(229.70mg,3.66mmol,5.0eq)，乙二醇二甲醚(10mL)，在70℃下搅拌10小时。加入20mL水，过滤除去不溶物，滤液分液得到有机相旋干得到粗产品，粗产品柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-33％)纯化得到化合物001-03.LCMS:MS(ESI)m/z:444.2[M+1]⁺

步骤3：化合物001-04的合成

在50mL的瓶中加入001-03(160mg,338.18μmol,1eq)，后加入氯化氢/二氧六环(1mL)，在25℃下搅拌6小时。旋干得到粗产品001-04.LCMS:MS(ESI)m/z:344.1[M+1]⁺

步骤4：化合物001、化合物002的合成

在50mL的瓶中加入001-05(50mg,223.55μmol,1.0eq)，001-04(115.17mg,335.33μmol,1.5eq)，二异丙基乙胺(130.01mg,1.01mmol,175.22μL,4.5eq)，异丙醇(2mL)，在120℃下微波反应1小时。反应液旋干得到粗产品，粗产品柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0-5％)初步纯化得到001-h，001-h经过手性制备柱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AS(250mm×30mm,10μm)；流动相:[A:CO₂B:0.1％氨水乙醇]；B％:50％-50％)得到目标化合物化合物001、化合物002。

化合物001(出峰位置：0.949min)

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.16-1.46(m,5H)1.55(br s,3H)1.67(br s,3H)2.19(s,3H)2.31(s,2H)2.36(br s,2H)2.64(br s,1H)3.44-3.68(m,3H)3.71-3.86(m,2H)4.64(s,2H)6.06(br s,1H)6.22(br s,1H)7.68(d,J＝4.27Hz,1H)7.89-7.98(m,2H)8.40(s,1H)8.50(d,J＝4.27Hz,1H)

LCMS:MS(ESI)m/z:531.1[M+1]⁺

化合物002(出峰位置：2.405min)

LCMS:MS(ESI)m/z:531.1[M+1]⁺

实施例2

合成路线：

步骤1：化合物003-02的合成

化合物001-02(200mg,832.15μmol,1.5eq)，003-01(113.83mg,554.77μmol,1eq)，氰基硼氢化钠(104.59mg,1.66mmol,3eq)加入到钛酸四异丙酯(5mL)二氯乙烷(5mL)中，抽去反应体系内的空气并充入氮气保护，在70℃下搅拌3.5小时。加入20mL水，过滤除去不溶物，滤液分液得到有机相，旋干得粗品。粗品经层析柱(二氯甲烷/甲醇＝1/0～20/1)纯化。得到化合物003-02.LCMS(ESI)m/z:430.2[M+1]⁺

步骤2：化合物003-03的合成

将化合物003-02(220mg,512.19μmol,1eqeq)加入到二氯甲烷(2.5mL)中，然后加入三氟乙酸(1.36g,11.89mmol,880.00μL,23.21eq)，在25℃条件下搅拌反应1.5小时。反应液直接旋干，加入10mL二氯甲烷旋干，重复3次。无进一步纯化。得到化合物003-03。LCMS(ESI)m/z:330.1[M+1]⁺

步骤2：化合物003、化合物004的合成

将化合物003-03(120mg,364.28μmol,2eq)，化合物001-05(40.74mg,182.14μmol,1eq)加入到正丁醇(3mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(1.11g,8.61mmol,1.50mL,47.28eq)，在130℃条件下加热搅拌反应16小时。反应液直接旋干得粗品。粗品经层析柱(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化后得到003-h，再经手性拆分(柱子:DAICEL CHIRALCEL OJ-H(250mm×30mm,5μm)；流动相:[A:CO₂B:0.1％氨水EtOH]；B％:35％-35％)拆分。得到目标化合物化合物003、化合物004.

化合物003(出峰位置：4.488min)

LCMS(ESI)m/z:517.1[M+1]⁺

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇))δppm 1.45(d,J＝6.53Hz,3H)1.60(q,J＝6.02Hz,4H)1.70-1.82(m,2H)2.19(s,3H)2.28(s,3H)2.40(d,J＝9.29Hz,1H)2.47-2.62(m,2H)2.72-2.83(m,1H)3.57-3.71(m,2H)3.73-3.93(m,2H)6.04(s,1H)5.92-6.08(m,1H)6.15(s,1H)7.69(d,J＝4.02Hz,1H)7.86-8.02(m,2H)8.39(d,J＝1.25Hz,1H)8.51(d,J＝4.27Hz,1H)

化合物004(出峰位置：4.755min)

LCMS(ESI)m/z:517.1[M+1]⁺

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.45(d,J＝6.53Hz,3H)1.60(q,J＝6.19Hz,4H)1.69-1.81(m,2H)2.19(s,3H)2.28(s,3H)2.39(d,J＝9.79Hz,1H)2.45-2.60(m,2H)2.73-2.83(m,1H)3.60-3.70(m,2H)3.73-3.93(m,2H)6.04(s,1H)5.92-6.08(m,1H)6.14(s,1H)7.67-7.72(m,1H)7.89-8.00(m,2H)8.39(d,J＝1.51Hz,1H)8.51(dd,J＝4.52,0.75Hz,1H)

实施例3

合成路线：

步骤1：化合物005-01的合成

将化合物001-02溶于二氯甲烷(5mL)和甲醇(10mL)中，接着在20℃加入硼氢化钠(276.57mg,7.31mmol,3eq)，反应0.5小时。将反应液在43℃减压浓缩。将浓缩物溶解在30mL水和30mL二氯甲烷中，萃取分层，同时水相用二氯甲烷(30mL×3)萃取。合并有机相旋干得到粗品。粗品经层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化，用于下一步反应。得到化合物005-01。

步骤2：化合物005-02的合成

将化合物005-01溶解到二氯甲烷(5mL)，在0℃下滴加二溴亚砜(5.02g,24.13mmol,1.87mL,10eq)，混合物在50℃搅拌3小时。将反应液在43℃减压浓缩。将浓缩物溶解10mL二氯甲烷中减压浓缩。这样重复三次。通过层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化。得到化合物005-02。LCMS(ESI)m/z:269.8[M+1]⁺

步骤3：化合物005-04的合成

0℃条件下将化合物005-03(155.36mg,610.88μmol,1.1eq)，氢化钠(26.65mg,666.42μmol,60％纯度,1.2eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，抽去反应体系内的空气并充入氮气保护，在搅拌10分钟后加入化合物005-02(150mg,555.35μmol,1eq)，然后在20℃条件下搅拌反应2.5小时。反应液10mL加水，用10mL乙酸乙酯萃取水相3次，收集有机相用无水硫酸钠干燥后旋干得粗品。粗品经层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化。得到化合物005-04.LCMS(ESI)m/z:344.3[M-Boc+1]⁺

步骤4：化合物005-05的合成

将化合物005-04(100mg,225.47μmol,1eq)加入到二氯甲烷(5mL)中，然后加入三氟乙酸(2.57g,22.51mmol,1.67mL,99.84eq)，在25℃条件下搅拌反应1.5小时。反应液直接旋干，加入10mL二氯甲烷旋干，重复3次。无进一步纯化。得到化合物005-05。LCMS(ESI)m/z:344.4[M+1]⁺

步骤5：化合物005和006的合成

将化合物005-05(50mg,145.60μmol,1eq)，化合物001-05(32.57mg,145.60μmol,1eq)加入到正丁醇(3mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(742.00mg,5.74mmol,1mL,39.43eq)，在130℃条件下加热搅拌反应16小时。反应液直接旋干得粗品。粗品送高效液相色谱柱(色谱柱:Waters Xbridge BEH C18 150×25mm,5μm；流动相:[水(10mM碳酸氢铵)-乙腈]；乙腈％:37％-67％,9.5min)纯化。得到得到005-h，再经手性制备柱分离条件：(DAICEL CHIRALPAK AS-H(250mm×30mm,5μm)；流动相:[A：CO₂,B：0.1％氨水-乙醇]；B％:50％-50％)得到目标化合物化合物005、化合物006.

005-h

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.42(d,J＝13.80Hz,1H)1.48-1.57(m,1H)1.62(d,J＝7.28Hz,3H)1.85(qd,J＝12.51,4.39Hz,2H)2.01-2.16(m,2H)2.20(s,3H)2.26(s,3H)3.04-3.21(m,3H)3.43-3.60(m,1H)4.51-4.69(m,2H)5.42(q,J＝6.94Hz,1H)5.87-6.45(m,2H)7.69(d,J＝4.02Hz,1H)7.86-7.91(m,1H)7.91-7.97(m,1H)8.37(d,J＝1.76Hz,1H)8.51(d,J＝4.27Hz,1H)

目标化合物005(出峰位置：4.323)

LCMS(ESI)m/z:531.5[M+1]⁺

目标化合物006(出峰位置：5.494)

LCMS(ESI)m/z:531.5[M+1]⁺

实施例4

合成路线：

步骤1：化合物007-03的合成

在10mL的瓶中加入007-01(323.96mg,2.50mmol,1.2eq)，N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)，氮气抽换三次，在0℃下加入氢化钠(125.03mg,3.13mmol,60％纯度,1.5eq)，后在25℃下搅拌30分钟，在加入005-02(500mg,2.08mmol,1eq)搅拌6小时。反应液加入10mL的水洗涤，后用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干得到粗产物，柱层析得到化合物007-03.LCMS:MS(ESI)m/z:358.4[M-Boc+1]⁺

步骤2：化合物007-04的合成

在10mL的瓶中加入007-03(140mg,305.98μmol,1eq)，盐酸/二氧六环溶液(4M,764.96μL,10eq)，二氧六环(0.5mL)在25℃下搅拌6小时。反应液旋干得到粗产品007-04。

LCMS:MS(ESI)m/z:358.3[M+1]⁺

步骤3：化合物007-06的合成

在50mL的瓶中加入001-05(62.58mg,279.78μmol,1.0eq)，007-04(100mg,279.78μmol,1.0eq)，二异丙基乙胺(162.71mg,1.26mmol,219.29μL,4.5eq)，异丙醇(2mL)在120℃下微波搅拌30分钟。反应液旋干送制备色谱纯化(色谱柱Agela ASB 150×25mm×5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％:25％-45％,10min。得到007-06，经过手性制备柱分离(分离条件：色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AS(250mm×30mm,10μm)；流动相:[A:CO₂B:0.1％氨水EtOH]；B％:55％-55％)得到目标化合物007、化合物008.。

目标化合物007(出峰位置：4.002min)

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.57(br s,1H)1.60(d,J＝7.28Hz,3H)1.65(brs,1H)1.76-1.94(m,3H)1.99-2.09(m,2H)2.09-2.20(m,2H)2.22(s,3H)2.28(s,3H)2.92-3.01(m,1H)3.21-3.30(m,2H)3.34-3.39(m,1H)4.41-4.54(m,2H)5.98(q,J＝7.28Hz,1H)6.06-6.23(m,1H)7.71(d,J＝4.27Hz,1H)7.82-7.89(m,1H)7.91-7.97(m,1H)8.35(d,J＝2.26Hz,1H)8.52(d,J＝4.52Hz,1H)。

LCMS:MS(ESI)m/z:545.0[M+1]⁺

目标化合物008(出峰位置：6.072min)

LCMS:MS(ESI)m/z:545.4[M+1]⁺

实施例5

合成路线：

步骤1：化合物009-03的合成

氮气氛围-78℃下将009-1(20g,93.35mmol,1eq)溶解在四氢呋喃(100mL)，缓慢滴加二异丙基氨基锂(2M,51.34mL,1.1eq)，后在0℃下搅拌1小时，后冷却到-78℃下加入溴丙腈(18.76g,140.02mmol,11.51mL,1.5eq)在25℃下搅拌16小时。反应液加入50mL的饱和氯化铵溶液。用100mL乙酸乙酯萃取，萃取三次，合并有机相旋干得到粗产品。粗产品柱层析纯化得到009-03。LCMS:MS(ESI)m/z:[M+1]⁺268.2

步骤2：化合物009-04的合成

在1L的氢化瓶中加入009-03(12g,44.89mmol,1eq)，甲醇(100mL)，雷尼镍(384.57mg,4.49mmol,0.1eq)，碳酸钾(18.61g,134.67mmol,3.0eq)维持45psi氢气压力，在45℃下反应16小时。反应液过滤除去不溶物。滤液旋干得到粗产品，粗产品柱层析纯化得到009-04。LCMS:MS(ESI)m/z:226.1[M+1]⁺

步骤3：化合物009-06的合成

在0℃下加入009-04(2.2g,9.77mmol,1eq)，氢化钠(468.70mg,11.72mmol,60％纯度,1.2eq)，N,N-二甲基甲酰胺(10mL)搅拌30分钟，后加入005-02(2.95g,10.94mmol,1.12eq)。在25℃下搅拌16小时。反应液油泵旋干，加入50mL水，用乙酸乙酯50mL萃取，萃取三次合并有机相旋干得到粗产品。粗产品柱层析纯化得到009-06.LCMS:MS(ESI)m/z:415.1[M+1]⁺

步骤4：化合物009-07的合成

将009-06(3.5g,8.44mmol,1eq)溶解在四氢呋喃(20mL)中，加入盐酸(12M,7.04mL,10eq)，在45℃下搅拌4小时。反应加入100mL饱和碳酸钠溶液条件pH＝9-10，后用100mL二氯甲烷萃取，萃取三次。萃取三次合并有机相旋干得到粗产品。粗产品柱层析纯化得到009-07。LCMS:MS(ESI)m/z:371.0[M+1]⁺

步骤5：化合物009-09的合成

在-78℃氮气氛围下加入009-07，加入四氢呋喃(40mL)，缓慢滴加二异丙基氨基锂(1M,5.67mL,1.4eq)，反应液搅拌30分钟后加入009-08，继续搅拌16小时。反应液加入20mL饱和氯化胺淬灭，后用50mL二氯甲烷萃取，萃取三次合并有机相。粗产品柱层析纯化得到009-09。LCMS:MS(ESI)m/z:503.1[M+1]⁺

步骤6：化合物009-10的合成

在100mL的瓶中加入009-09(1.63g,3.24mmol,1eq)，双联嚬哪醇硼酸酯(823.75mg,3.24mmol,1eq)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(397.36mg,486.59μmol,0.15eq)，醋酸钾(318.36mg,3.24mmol,1eq)，二氧六环(20mL)，氮气抽换气三次在110℃下反应16小时。反应液过滤除去不溶物，滤液旋干粗产品柱层析纯化得到009-10。LCMS:MS(ESI)m/z:480.9[M+1]⁺

步骤7：化合物009-12的合成

在100mL的瓶中加入009-10(500mg,1.04mmol,1eq)，001-05(246.76mg,1.10mmol,1.06eq)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(85.00mg,104.00μmol,0.1eq)，碳酸钾(431.20mg,3.12mmol,3.0eq)二氧六环(5mL)水(1.25mL)，氮气抽换气三次在80℃下搅拌2小时。反应液过滤除去不溶物，滤液旋干，加入5mL的甲醇溶解后经制备高效液相色谱分离，分离条件：column:Boston Green ODS 150×30mm×5μm；流动相:[水(0.075％三氟乙酸)-乙腈]:乙腈％:25％-55％,12min。得到009-12。LCMS:MS(ESI)m/z:542.2[M+1]⁺

步骤8：化合物009-13和14的合成

将009-12(130mg,240.02μmol,1eq)送手性柱分离，分离条件：柱子:DAICELCHIRALPAK AS-H(250mm×30mm,5μm)；流动相:[A:CO₂,B:0.1％氨水-甲醇]；B％:45％-45％。得到009-13和14。

013LCMS:MS(ESI)m/z:542.2[M+1]⁺

014LCMS:MS(ESI)m/z:542.2[M+1]⁺

步骤9：化合物009-15和009-16的合成

在100mL的氢化瓶中加入009-13(51mg,94.16μmol,1eq)，钯碳(0.5mg,10％纯度,1.00eq)，甲醇(2mL)，维持45psi氢气压力，在45℃下反应16小时。反应液过滤除去不溶物。滤液旋干得到粗产品，粗产品柱层析纯化得到化合物009-15或化合物009-16。

在100mL的氢化瓶中加入009-14(51mg,94.16μmol,1eq)，钯碳(0.5mg,10％纯度,1.00eq)，甲醇(2mL)，维持45psi氢气压力，在45℃下反应16小时。反应液过滤除去不溶物。滤液旋干得到粗产品，粗产品柱层析纯化得到化合物009-16或化合物009-15。

009-15LCMS:MS(ESI)m/z:544.3[M+1]⁺

009-16LCMS:MS(ESI)m/z:544.3[M+1]⁺

步骤10：化合物009、010、011和012的合成

将009-15(51mg,94.16μmol,1eq)送手性分离，分离条件柱子:DAICEL CHIRALPAKIC(250mm×30mm,10μm)；流动相:[A:CO₂,B:0.1％氨水-EtOH]:B％:50％-50％。得到化合物009、化合物010。

009LCMS:MS(ESI)m/z:544.5[M+1]⁺

010LCMS:MS(ESI)m/z:544.5[M+1]⁺

将009-16(71.0mg,130.60μmol,1eq)送手性分离，分离条件柱子:DAICELCHIRALPAK AS(250mm×30mm,10μm)；流动相:[A:CO₂,B:0.1％氨水-甲醇]:B％:40％-40％。得到化合物011、化合物012。

011LCMS:MS(ESI)m/z:544.5[M+1]⁺

012LCMS:MS(ESI)m/z:544.5[M+1]⁺

目标化合物009(SFC出峰位置：2.230)

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.22-1.34(m,2H)1.47(d,J＝7.03Hz,3H)1.64(br d,J＝4.77Hz,2H)1.67-1.79(m,3H)2.05-2.12(m,2H)2.15(s,3H)2.23(s,3H)2.35(brdd,J＝19.95,10.16Hz,2H)2.65(br s,1H)2.73-2.91(m,1H)3.11-3.31(m,3H)5.93(br d,J＝6.02Hz,1H)6.48-6.76(m,1H)7.57(d,J＝4.27Hz,1H)7.69-7.89(m,2H)8.23(s,1H)8.39(d,J＝4.27Hz,1H)

目标化合物010(SFC出峰位置：3.943)

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.30-1.37(m,6H)1.62(d,J＝7.28Hz,3H)1.73-1.95(m,7H)2.01-2.24(m,4H)2.30(s,2H)2.35(s,2H)2.78(br s,1H)2.87-3.01(m,1H)6.01-6.36(m,1H)6.74(br s,1H)7.71(d,J＝3.76Hz,1H)7.80-8.03(m,2H)8.37(s,1H)8.53(d,J＝4.52Hz,1H)

目标化合物011(SFC出峰位置：1.763)

目标化合物012(SFC出峰位置：4.660)

实施例6

合成路线：

步骤1：化合物013-02的合成

氮气保护下，在0℃条件将化合物013-01(53g,247.37mmol,1eq)溶于四氢呋喃(250mL)中，加入六甲基二硅氨基锂(1M,371.05mL,1.5eq)后，搅拌反应1小时，在0℃下通入氧气，搅拌反应2小时。反应液加入250mL亚硫酸钠淬灭后，加入250mL乙酸乙酯萃取水相4次，收集有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩。经层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝1/0～4/1)纯化。得到化合物013-02。

步骤2：化合物013-03的合成

0℃条件下，将化合物013-02(9.2g,39.96mmol,1eq)溶于氮氮二甲基甲酰胺(70mL)中，加入钠氢(3.20g,79.91mmol,60％纯度,2eq)，搅拌反应0.5小时后，缓慢滴加入3-溴丙烯(14.50g,119.87mmol,3eq)，然后升温到20℃，搅拌反应1小时。将反应液用饱和氯化铵50mL淬灭后，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩。柱层析(硅胶，乙酸乙酯：石油醚＝1：20～1：5)分离纯化。得到化合物013-03。

步骤3：化合物013-04的合成

将化合物013-03(20g,73.99mmol,1eq)溶于二氯甲烷(85mL)和甲醇(15mL)中，加入碳酸氢钠(9.32g,110.98mmol,4.32mL,1.5eq)后，降温到-78℃，通入臭氧(3.55g,73.99mmol,1eq)后，压力15psi，搅拌反应0.5小时，溶液变蓝，继续通氧气致蓝色消失，加入三苯基膦(23.29g,88.78mmol,1.2eq)后，升温到20℃，搅拌反应1小时。将反应液直接减压浓缩后，柱层析(硅胶，乙酸乙酯：石油醚＝1：10～1：1)分离纯化。得到化合物013-04。

步骤4：化合物013-05的合成

0℃条件下，将N,N-二苄基胺(4.97g,25.21mmol,4.83mL,0.8eq)溶于1,2-二氯乙烷(80mL)中，加入醋酸硼氢化钠(10.02g,47.27mmol,1.5eq)后，加入化合物013-04(13g,31.51mmol,1eq)后，升至20℃，搅拌反应1小时。将反应液用饱和碳酸氢钠50mL淬灭后，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩。柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1：20～1：1)分离纯化，得到化合物013-05。¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δ＝7.37(d,J＝7.3Hz,4H),7.32-7.26(m,4H),7.24-7.18(m,2H),4.11(q,J＝7.3Hz,2H),3.92(s,4H),3.65(s,4H),3.40(t,J＝6.0Hz,2H),2.67(t,J＝6.0Hz,2H),1.99-1.86(m,4H),1.76(dt,J＝5.8,12.2Hz,2H),1.61-1.52(m,2H),1.19(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤5：化合物013-06的合成

将化合物013-05(10.6g,23.37mmol,1eq)溶于甲醇(100mL)中，加入钯/炭(1g,23.37mmol,10％纯度,1.00eq)和碳酸钾(6.46g,46.74mmol,2eq)后，通入氢气(94.42mg,46.74mmol,2eq)，保持压力45psi，温度45℃，搅拌反应10小时。将反应液滤过一层硅藻土，用二氯甲烷洗涤，滤液减压浓缩。将得到的残留物溶于甲醇(90mL)和水(30mL)中，加入碳酸钾(6.46g,46.76mmol,2eq)后，20℃下，搅拌反应2小时。薄层硅胶板(硅胶板，乙酸乙酯：石油醚＝1：0，Rf＝0.30)显示原料反应完全，生成极性变小的目标化合物。将反应液减压浓缩，除去甲醇，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩。无需纯化，可直接用于下一步反应。得到化合物013-06。¹H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝7.03(br s,1H),3.94(s,4H),3.83(t,J＝5.0Hz,2H),3.39(br t,J＝6.0Hz,2H),2.24-2.11(m,2H),1.94(br d,J＝13.3Hz,2H),1.83(dt,J＝4.1,13.5Hz,2H),1.62(br d,J＝13.1Hz,2H).

步骤6：化合物013-07的合成

0℃条件下，将化合物013-06(1.7g,7.48mmol,1eq)溶于氮氮二甲基甲酰胺(17mL)中，加入钠氢(448.79mg,11.22mmol,60％纯度,1.5eq)后，搅拌1小时后，加入化合物005-02(2.22g,8.23mmol,1.1eq)后，升温到20℃，继续搅拌反应1小时。将反应液用饱和氯化铵20mL淬灭后，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得化合物013-07。

步骤7：化合物013-08的合成

将化合物013-07(3.12g,7.49mmol,1eq)溶于四氢呋喃(60mL)中，加入盐酸水溶液(1M,74.92mL,10eq)后，升温到45℃，搅拌反应1小时。将反应液用饱和碳酸氢钠淬灭后，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥，过滤，减压浓缩。柱层析(硅胶柱，乙酸乙酯：石油醚＝1：1～2：1)分离纯化。得到化合物013-08。

步骤8：化合物013-09的合成

-78℃条件下，将化合物013-08(2g,5.37mmol,1eq)溶于四氢呋喃(20mL)中，缓慢加入六甲基二硅基胺钾(1M,7.52mL,1.4eq)，搅拌反应0.5小时后，加入化合物009-08(2.53g,6.44mmol,1.2eq)后，继续搅拌反应1小时。将反应液在-78℃条件下，用饱和氯化铵20mL淬灭后，升温到20℃，水相用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。柱层析(硅胶，乙酸乙酯：石油醚＝1:10～1:3)分离纯化，得到化合物013-09。

步骤9：化合物013-10的合成

将化合物013-09(2.48g,4.92mmol,1eq)和双联嚬哪醇硼酸酯(1.25g,4.92mmol,1eq)溶于二氧六环(25mL)中，加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).二氯甲烷(401.48mg,491.62μmol,0.1eq)和醋酸钾(1.45g,14.75mmol,3eq)后，氮气置换三次，升温到110℃，搅拌反应1小时。待反应液冷却后，直接减压浓缩，经柱层析(硅胶，乙酸乙酯：石油醚＝1：10～1：1，Rf＝0.80)分离纯化，得到化合物013-10。

步骤10：化合物013-11的合成

将化合物013-10(1g,2.07mmol,1eq)和化合物001-05(510.06mg,2.28mmol,1.1eq)溶于二氧六环(12mL)和水(3mL)后，加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(151.69mg,207.32μmol,0.1eq)和磷酸钾(1.32g,6.22mmol,3eq)后，氮气置换3次，升温到90℃，搅拌反应1小时。将反应液用二氯甲烷200mL稀释，用饱和食盐水(30mL×3)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩。柱层析(硅胶，二氯甲烷：甲醇＝100：0～20：1)分离纯化，得到化合物013-11。LCMS:MS(ESI)m/z:544.4[M+1]⁺

步骤11：化合物013-12的合成

在氢化瓶中加入化合物013-11(500mg,919.80μmol,1eq)，钯碳(100mg，91.98μmol,10％纯度,0.1eq),甲醇(5mL)在45℃下45psi氢气(919.80μmol)加热搅拌16小时。反应液过滤除去钯碳，滤液旋干得到化合物013-12.LCMS:MS(ESI)m/z:546.4[M+1]⁺

步骤12：化合物013、014、015、016的合成

化合物013-12(420mg,769.78μmol,1eq)过手性制备柱分离得到目标化合物013、014、015和016.分离条件：柱子:DAICEL CHIRALPAK AD(250mm×30mm,10μm)；流动相:[A：CO₂,B:0.1％氨水-异丙醇]:B％:45％-45％.

目标化合物：013(SFC出峰位置：0.746)

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.48(br d,J＝7.13Hz,3H)1.67(br s,2H)1.81-2.02(m,6H)2.16(s,3H)2.20(s,3H)2.64(br s,1H)2.76-2.97(m,1H)3.23-3.41(m,1H)3.54-3.95(m,2H)5.81(q,J＝6.92Hz,1H)6.09(br s,1H)6.56(br s,1H)7.57(d,J＝4.13Hz,1H)7.66-7.91(m,2H)8.23(s,1H)8.37(d,J＝4.25Hz,1H)。LCMS:MS(ESI)m/z:546.4[M+1]⁺

目标化合物：014(SFC出峰位置：0.997)

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.48(br d,J＝7.13Hz,3H)1.67(br s,2H)1.81-2.02(m,6H)2.16(s,3H)2.20(s,3H)2.64(br s,1H)2.76-2.97(m,1H)3.23-3.41(m,1H)3.54-3.95(m,2H)5.81(q,J＝6.92Hz,1H)6.09(br s,1H)6.56(br s,1H)7.57(d,J＝4.13Hz,1H)7.66-7.91(m,2H)8.23(s,1H)8.37(d,J＝4.25Hz,1H)。

LCMS:MS(ESI)m/z:546.4[M+1]⁺

目标化合物：015(SFC出峰位置：0.595)

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.61(d,J＝7.03Hz,3H)1.65-1.81(m,2H)1.91-2.12(m,2H)2.23–22.37(m,9H)2.91-3.07(m,2H)3.37(s,1H)3.42-3.52(m,1H)3.74-3.98(m,2H)5.93(q,J＝7.03Hz,1H)6.16-6.90(m,2H)7.70(d,J＝4.02Hz,1H)7.83-7.98(m,2H)8.38(s,1H)8.51(d,J＝4.27Hz,1H)。LCMS:MS(ESI)m/z:546.4[M+1]⁺

目标化合物：016(SFC出峰位置：0.610)

实施例7

合成路线：

步骤1：化合物017-02的合成

0℃下将化合物017-01(10g,38.57mmol,1eq)，钠氢(3.08g,77.13mmol,60％纯度,2eq)加入到N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中，搅拌0.25小时后加入3-溴丙烯(23.33g,192.83mmol,5eq)，在20℃条件下搅拌反应3小时。反应液加入20mL饱和氯化铵溶液，然后用30mL乙酸乙酯萃取水相3次，收集有机相旋取大部分乙酸乙酯。剩余部分用40mL饱和食盐水洗涤6次，有机相旋干得粗产物。经层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化。得到得到化合物017-02。LCMS:MS(ESI)m/z:300[M+1]⁺

步骤2：化合物017-03的合成

将化合物017-02(19g,63.47mmol,1eq)，碳酸氢钠(8.00g,95.20mmol,3.70mL,1.5eq)加入到二氯甲烷(85mL)甲醇(15mL)，在-78℃通入臭氧(3.34mmol)30分钟，溶液变蓝后通入氮气吹至蓝色消失，后加入三苯基膦(18.31g,69.82mmol,1.1eq)，在25℃下搅拌反应0.5小时。通完臭氧后，通入氧气直至反应液由淡蓝色褪去，然后加入三苯基磷，反应0.5小时后，反应液直接旋干得粗品。粗品经层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝1～0～6/1～5/1)纯化。得到化合物017-03。LCMS:MS(ESI)m/z:302[M+1]⁺

步骤3：化合物017-04的合成

20℃条件下，将化合物017-03(14.5g,48.12mmol,1eq)和N,N-二苄基胺(7.59g,38.50mmol,7.37mL,0.8eq)溶于二氯乙烷(70mL)中，加入醋酸硼氢化钠(12.24g,57.74mmol,1.2eq)后，搅拌反应5分钟。向反应液中加入饱和氯化铵20mL淬灭反应，用二氯甲烷(40mL×2)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩。经层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝1/0～5/1)纯化。得到化合物017-04。LCMS:MS(ESI)m/z:483[M+1]⁺

步骤4：化合物017-05的合成

将化合物017-04(6.1g,12.64mmol,1eq)加入到甲醇(60mL)的氢化瓶中，再加入钯/炭(0.6g,10％)，用氩气置换氢化瓶的空气4次后，持续通入氢气(45psi)，在45℃下搅拌反应12小时。用硅藻土过滤反应液后，用甲醇洗涤硅藻土3次，收集有机相旋干得粗产物。粗产物加入到甲醇(30mL)、水(10mL)中，然后加入碳酸钾(6.37g,46.10mmol,3eq)，钯/炭(1.2g,10％纯度)，换气后在25℃，氢气(45psi)条件下搅拌反应3小时。反应液用硅藻土过滤反应液，再用20mL甲醇洗涤硅藻土3次，收集有机相，旋干后粗品再次加入到甲醇(50mL)的氢化瓶中，用氩气置换氢化瓶里的空气后，在氢气(50psi)，60℃条件下搅拌反应24小时。反应液用硅藻土过滤反应液，再用20mL甲醇洗涤硅藻土3次，收集有机相，旋干得到化合物017-05。

步骤5：化合物017-06的合成

将化合物017-05(1.5g,5.20mmol,1eq)加入N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后加入二异丙基乙胺(2.02g,15.61mmol,2.72mL,3eq)，丙基磷酸酐(8.28g,13.01mmol,7.73mL,50％纯度,2.5eq)，在25℃条件下搅拌反应0.5小时。反应液加1M盐酸2mL，然后加入水5mL，用10mL乙酸乙酯萃取水相3次，收集有机相用20mL饱和食盐水洗涤有机相4次，有机相用无水硫酸钠干燥后旋干得化合物017-06。

步骤6：化合物017-07的合成

0℃条件下，将化合物017-06(1.2g,4.44mmol,1eq)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入钠氢(213.06mg,5.33mmol,60％纯度,1.2eq)后，搅拌0.2小时后，加入化合物005-02(1.26g,4.66mmol,1.05eq)后，升温到20℃，继续搅拌反应0.5小时。将反应液倒入10mL水中，过滤得滤饼，滤饼用10mL水洗涤，再用5mL石油醚洗涤，滤饼收集减压旋干。得到化合物017-07。

步骤7：化合物017-08的合成

将化合物017-07(1.9g,4.13mmol,1eq)加入到二氯甲烷(20mL)中，然后加入三氟乙酸(6.16g,54.03mmol,4mL,13.07eq)，在25℃条件下搅拌反应0.5小时。反应液直接旋干，加入20mL二氯甲烷旋干，重复3次。得到化合物017-08的三氟乙酸盐。

步骤8：化合物017-h的合成

将化合物017-08的三氟乙酸盐(787.08mg,3.52mmol,0.85eq)，化合物001-05(1.96g,4.14mmol,1eq,TFA)加入到正丁醇(10mL)中,然后加入二异丙基乙胺(1.61g,12.42mmol,2.16mL,3eq)，在130℃条件下加热搅拌反应16小时。反应液直接旋干得粗品。粗品经层析柱(二氯甲烷/甲醇＝1/0～4％甲醇)纯化,再送高效色谱纯化(柱子:VenusilASBPhenyl150×30mm×5μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:30％-60％,9min)纯化。得到化合物017-h。LCMS:MS(ESI)m/z:547[M+1]⁺

步骤9：化合物017或018的合成

将化合物017-h(0.75g,1.37mmol,1eq)经手性拆分.(柱子:DAICEL CHIRALPAK AS(250mm×50mm,10μm)；流动相:[A：CO₂,B:0.1％氨水-乙醇]；B％:50％-50％)得到化合物017和化合物018。

目标化合物：017(SFC出峰位置：3.645)

¹H NMR(400MHz,氘代甲醇)δppm 1.62(d,J＝6.8Hz,3H)1.86–1.93(m,2H)2.09–2.13(m,2H)2.22(s,3H)2.28(s,3H)3.02–3.20(m,3H)3.46-3.48(m,1H)3.87-3.97(m,2H)4.58–4.61(m,2H)4.90(m,1H)5.89-5.94(m,1H)6.11-6.22(m,1H)7.70(d,J＝4Hz,1H)7.87-7.96(m,2H)8.38(s,1H)8.52(d,J＝4.4Hz,1H)。LCMS:MS(ESI)m/z:547[M+1]⁺

目标化合物：018(SFC出峰位置：4.906)

生物测试数据：

实验例1：野生型、V804M突变型激酶体外抑制活性评价

采用³³P同位素标记激酶活性测试(Reaction Biology Corp)测定IC₅₀值来评价受试化合物对人野生型、V804M、V804L突变型RET的抑制能力。

缓冲液条件：20mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸(Hepes)(pH 7.5),10mM MgCl2,1mM乙二醇双氨乙基醚四乙酸(EGTA),0.02％聚氧乙烯十二烷醚(Brij35),0.02mg/ml BSA,0.1mMNa₃VO₄,2mM二硫苏糖醇(DTT),1％DMSO。

化合物处理：将测试化合物溶于100％DMSO中并由Integra Viaflo Assist用DMSO连续稀释至特定浓度。

试验步骤：将底物溶解在新配制的缓冲液中，向其中加入受测激酶并轻轻混合均匀。利用声学技术(Echo 550)将溶有受试化合物的DMSO溶液加入上述混匀的反应液中，并在室温下孵育20分钟。反应液中化合物浓度为3μM,1μM,0.333μM,0.111μM,0.0370μM,0.0123μM,4.12nM,1.37nM,0.457nM,0.152nM。孵化15分钟后，加入³³P-ATP(活度0.01μCi/μL，Km浓度)开始反应。反应在室温下进行120分钟后，通过过滤器结合方法检测放射性。激酶活性数据用含有受试化合物的激酶活性和空白组(仅含有DMSO)的激酶活性的比对表示，通过Prism4软件(GraphPad)进行曲线拟合得到IC₅₀值，实验结果如表1所示。

表1：本发明化合物体外筛选试验结果

注：“ND”代表未检测；

结论：本发明化合物对野生型、V804M、V804L突变型RET都展现出较好的抑制活性。

实验例2：化合物药代动力学评价

实验目的：测试化合物在小鼠体内药代动力学

实验材料：CD-1小鼠(雄性)

实验操作：以标准方案测试化合物静脉注射及口服给药后的啮齿类动物药代特征，实验中候选化合物配成澄清溶液，给予小鼠单次静脉注射及口服给药。静注、口服溶媒均为10％PEG400(聚乙二醇400)+90％(10％羟丙基-β-环糊精)。收集24小时内的全血样品，所有血样均加入预先加好0.5M K2-EDTA抗凝剂标记好的塑料离心管。血样采集后，4℃，3000g离心10分钟吸取上清血浆，迅速置于干冰中，保持-20℃或更低温度，以LC-MS/MS分析方法定量分析血药浓度，并计算药代参数，如达峰浓度，达峰时间，清除率，半衰期，药时曲线下面积，生物利用度等。

实验结果如表2所示。

表2：本发明化合物药代动力学测试结果

结论：本发明化合物小鼠药代动力学指标良好。

实验例3：化合物在Ba/F3KIF5B-RET-V804L肿瘤细胞异体移植模型中药效评价

1.实验目的：

在NPSG小鼠上建立工程细胞株Ba/F3KIF5B-RET-V804L肿瘤细胞异体移植模型，并验证受试药物在NPSG小鼠异体移植模型上的单独用药药效。

2.实验设计：

1).复苏Ba/F3KIF5B-RET-V804L细胞，体外培养，获得5×10⁷细胞。

2).45只6-8周龄雌性小鼠品系小鼠经1周适应性饲养，称重。

3).在小鼠右侧肩胛处皮下接种Ba/F3KIF5B-RET-V804L肿细胞，建立工程细胞株Ba/F3KIF5B-RET-V804L肿瘤细胞异体移植模型。接种条件(见表3)

表3：接种信息

4).接种后，每周测量1次肿瘤体积及体重，当平均肿瘤体积达到124.5mm³，选择肿瘤体积介于82.9mm³至145.4mm³之间的小鼠，依据肿瘤体积和体重随机分组，每组6只。分组后随即开始给药。给药开始日期视为第0天。给药及分组信息见表4。

表4：分组及给药信息

注：NA代表没有给药；Day 0-Day 9代表第0天到第9天。

5).给药开始后，小鼠连续给药9天，在第3、6、9天测量体重及肿瘤体积。

6).数据统计采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)方法进行分析。先检测数据方差齐性差异，若方差齐性无差异，采用LSD方法进行分析；若方差齐性有差异，则选择Dunnett’s T3进行数据分析。所有的数据使用SPSS 17.0。p值小于0.05被认为是有显著差异。

3.实验结果：

3.1体重数据

各组体重在不同时间点的平均体重如表5所示。

表5：实验中各组小鼠体重变化

3.2肿瘤生长抑制情况

各组肿瘤生长抑制情况见表6。

表6：各组小鼠的抑瘤效果

注：a平均值±标准误；b使用One-way ANOVA方法分析，由于方差不齐，事后分析采用邓尼特T3方法；TGI代表肿瘤生长抑制率，数值为1-ΔT/ΔC；ΔT代表实验组肿瘤体积增长；ΔC代表对照组肿瘤体积增长。结论：在工程细胞株BA/F3KIF5B-RET-V804L小鼠异体移植模型上连续给予9天，本发明化合物呈现较强药效。

实验例4：化合物在工程细胞株Ba/F3KIF5B-RET的雌性NPSG异体移植模型中的药效评价

1.实验目的：

验证受试药在工程细胞株Ba/F3KIF5B-RET的NPSG小鼠异体移植模型上的单独用药药效。

2.实验设计：

1).复苏BA/F3KIF5B-RET，体外培养，获得4×10⁷细胞。

2).60只6-8周雌性NPSG经1周适应性饲养，称重。

3)依据预试验所得的接种条件(见表7)在小鼠右侧肩胛处皮下接种BA/F3KIF5B-RET细胞，建立BA/F3KIF5B-RET肿瘤细胞NPSG小鼠异体移植模型。

表7：接种信息

4).接种后，每周测量1次肿瘤体积及体重，当平均肿瘤体积达到104mm³时，依据肿瘤体积和体重随机分组，每组6只。分组后随即开始给药。给药开始日期视为第0天。给药及分组信息见表8。

表8：分组及给药信息

注：NA代表没有给药；Day 0-Day 10代表第0天到第10天。

5).给药开始后，实验期内分别在分别为第0、3、6、10天测量体重及肿瘤体积。

6).对于两组的实验，采用T-Test分析方法，对于三个以上的组相互比较，采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)方法进行分析。对于比较潜在的协同效应，采用双因素方差分析(Two-Way ANOVA)。所有的数据使用SPSS 17.0。p值小于0.05被认为是有显著差异，p值小于0.01视为有极显著差异。

3.实验结果：

3.1体重数据：

各组体重在不同时间点的平均体重如表9所示。

表9：各组体重变化

3.2肿瘤生长抑制情况

各组肿瘤生长抑制情况见表10。

表10：各组受试药的抑瘤效果

注：a平均值±标准误；b数据使用Oneway ANOVA方法分析，由于方差不齐，事后分析采用邓尼特T3方法；TGI代表肿瘤生长抑制率，数值为1-ΔT/ΔC；ΔT代表实验组肿瘤体积增长；ΔC代表对照组肿瘤体积增长。

结论：实验表明，在工程细胞株Ba/F3KIF5B-RET小鼠异体移植模型上连续给予10天，本发明化合物呈现较强药效。