CN113425639B

CN113425639B - 一种抗氧化组合物及其应用、产品

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Publication number: CN113425639B
Application number: CN202110728933.2A
Authority: CN
Inventors: 戴跃锋; 何广文; 颜少慰; 吕孙良
Original assignee: Syoung Cosmetics Manufacturing Co Ltd
Current assignee: Syoung Cosmetics Manufacturing Co Ltd
Priority date: 2021-06-29
Filing date: 2021-06-29
Publication date: 2022-07-12
Anticipated expiration: 2041-06-29
Also published as: CN113425639A

Abstract

本发明涉及护肤品技术领域，尤其涉及一种抗氧化组合物及其应用、产品。该抗氧化组合物由灵芝发酵液和蒲公英提取物组成。本发明将灵芝发酵液和蒲公英提取物按照一定的比例配合使用，可使氧化过程中的链式反应中断，破坏氧化过程，同时抑制自由基的生成，表现出有显著的抗氧化功效。实验表明，本发明组合物的抗氧化效果显著优于单独灵芝发酵液或蒲公英提取物，在相同的DPPH自由基抑制能力下，活性成分的用量明显低于单独，说明本发明抗氧化组合物中灵芝发酵液和蒲公英提取物在抗氧化方面具有协同增效的作用，二者缺一不可。另外，该组合物对皮肤祛红、舒缓方面的效果也明显优于单剂使用的效果。

Description

一种抗氧化组合物及其应用、产品

技术领域

本发明涉及护肤品技术领域，尤其涉及一种抗氧化组合物及其应用、产品。

背景技术

太阳辐射、环境污染、内部炎症等等都会在皮肤中产生活性氧和自由基。这种氧化还原状态的失衡是许多病理疾病的根本原因，包括皮肤老化损伤、皮肤癌等。基于氧化还原的失衡，过量的自由基在体内以链式反应的方式不断氧化、造成细胞损伤。此外，过量的自由基会增加酪氨酸酶活性，加快色素合成过程，让黑素颗粒难以分解代谢，逐步累积。过量的自由基也会参与到皮肤炎症的过程中，参与一系列的信号传导，上调炎症因子表达，从而加剧炎症反应。皮肤外在观感上，也会产生明显的变化：皱纹、弹性降低、色素沉积、肤色黯淡、皮肤敏感等等。

人体无时无刻不暴露在自由基之下，氧化还原的状态是皮肤正常的生理状态。但有时因为外部的影响、内源性的疾病等，会使得这一平衡被打破，从而对皮肤造成损伤。通常，此类氧化性物质有活性氧、活性氮、羟基自由基、超氧阴离子、单线态氧、过氧化氢、次氯酸、臭氧等等，通过由电子转移、自由基加成反应等方式，造成氧化应激、脂质过氧化等诸多问题。

再者，皮肤氧化还原状态的不平衡性所带来的活性氧和自由基不仅仅会诱发老化，同时也会引起其他的皮肤问题。过量自由基有利于黑素合成过程中多巴像氧化产物的转化，从而促进真黑素的形成。局部的自由基富集也可能会造成局部的炎症，进而影响皮肤的生理学状态。

皮肤作为人体和外部接触的表面，在保护和维持人体正常循环代谢起着非常重要的作用。皮肤衰老的最大诱因在于皮肤光老化。皮肤光老化是指皮肤长期受紫外线辐射引起的皮肤老化。紫外线可通过诱导活性氧和脂质过氧化物丙二醛生成，诱导金属蛋白酶类表达等途径诱发皮肤光老化。针对光老化的发病机制采用各种天然抗氧化剂能够有效的预防和缓解皮肤光损伤。因此，抗氧化的首要目的就是预防光老化，延缓肌肤衰老。

鉴于此，可以发现抗氧化能够从根源上解决诸多皮肤问题，适应性广。通过皮肤外用高效的抗氧化剂，能够有效的清除过量自由基，从而防止自由基所引发的一系列皮肤损伤。用抗氧化剂治疗皮肤是一种对抗自由基引起的皮肤损伤的临床有效方法。早期研究发现，维生素E和C等常见抗氧化剂可预防皮肤的光老化、光免疫抑制和光癌变。近年来，研究焦点逐步转移至天然植物上，含有强大植物抗氧化剂的植物提取物具有更高的安全性和低刺激性，在对抗自由基损伤皮肤方面具有优势。因此，天然植物类抗氧化剂在现代护肤品中越来越普遍，需求也越来越大，提供一种抗氧化效果显著的天然护肤组合物具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种抗氧化组合物及其应用、产品。该组合物具有显著的抗氧化作用，兼具皮肤祛红、舒缓功效，且安全性良好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种抗氧化组合物，由灵芝发酵液和蒲公英提取物组成；所述灵芝发酵液和蒲公英提取物的质量比为(3～7)：(3～7)。

灵芝发酵液富含灵芝多糖，而蒲公英提取物则含有黄酮类物质，本发明将二者按照特定比例复配后可使氧化过程中的链式反应中断，破坏氧化过程；同时抑制自由基的生成，表现出有显著的抗氧化功效。实验表明，本发明组合物的抗氧化效果显著优于单独灵芝发酵液或蒲公英提取物，在相同的DPPH自由基抑制能力下，活性成分的用量明显低于单独，不仅节约了成本而且说明本发明抗氧化组合物中灵芝发酵液和蒲公英提取物在抗氧化方面具有协同增效的作用，二者缺一不可。另外，该组合物对皮肤祛红、舒缓方面的效果也明显优于单剂使用的效果。

一些实施方案中，所述灵芝发酵液和蒲公英提取物的质量比为(3～5):(5～7)。

一些具体实施例中，所述灵芝发酵液和蒲公英提取物的质量比为3：7。

本发明所述抗氧化组合物中，蒲公英提取物为蒲公英的水提物，可市售获得。本发明具体实施例中，蒲公英提取物通过市售获得。

本发明中，灵芝发酵液的制备方法为基于液体深层发酵技术来生产灵芝菌丝体发酵液，培养基配方为：玉米粉1％，葡萄糖3％，酵母粉0.5％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％，pH自然。接种量为10％，搅拌速度220r/min，发酵前期通气量为0.5vvm，生长旺盛期加大通气量，控制为0.8vvm，温度控制为26℃，培养6天(5-7天)，菌液清澈透明，充满菌丝球，即可终止发酵。离心去除灵芝菌丝体后即可得到灵芝发酵液。其中灵芝发酵液主要活性成分为0.3％灵芝多糖。

本发明还提供了所述抗氧化组合物在制备具有抗氧化、祛红和/或舒缓作用的化妆品中的应用；所述化妆品包括化妆水、乳液和面霜。

具体地，所述抗氧化包括清除DPPH自由基和/或抑制DPPH自由基生成。

本发明还提供一种具有抗氧化、祛红和/或舒缓作用的化妆品，包括本发明所述的抗氧化组合物和化妆品中可接受的助剂。

一些实施方案中，所述化妆品中可接受的助剂为水、基础物质、保湿剂、防腐剂中的至少一种。

一些实施方案中，所述基础物质为PEG/PPG-14/7二甲基醚和甘油葡糖苷中的至少一种；

所述保湿剂为透明质酸钠和/或甜菜碱；

所述防腐剂为苯氧乙醇和/或对羟基苯乙酮。

一些实施方案中中，所述化妆品为化妆水，所述水包括本发明所述的抗氧化组合物、水、基础物质、保湿剂和防腐剂；其中，所述基础物质为PEG/PPG-14/7二甲基醚和甘油葡糖苷；所述保湿剂为透明质酸钠和甜菜碱；所述防腐剂为苯氧乙醇和对羟基苯乙酮。

一些实施方案中，所述化妆水由如下质量分数的原料组成：

一些具体实施例中，所述化妆水由如下质量分数的原料组成：

本发明将灵芝发酵液和蒲公英提取物按照一定的比例配合使用，可使氧化过程中的链式反应中断，破坏氧化过程，同时抑制自由基的生成，表现出有显著的抗氧化功效。实验表明，本发明组合物的抗氧化效果显著优于单独灵芝发酵液或蒲公英提取物，在相同的DPPH自由基抑制能力下，活性成分的用量明显低于单独，说明本发明抗氧化组合物中灵芝发酵液和蒲公英提取物在抗氧化方面具有协同增效的作用，二者缺一不可。另外，该组合物对皮肤祛红、舒缓方面的效果也明显优于单剂使用的效果。

附图说明

图1示不同配比的抗氧化组合物对DPPH自由基的抑制能力；

图2示不同浓度的抗氧化组合物的自由基清除能力；

图3志愿者皮肤L值变化；

图4志愿者皮肤a值变化；

a值主要代表真皮中的血红蛋白含量，皮肤越红，a值越高。测试过程中分别记录使用产品前、使用14天和使用28天后皮肤a值；以使用产品前的数值为基线，分别计算14天和28天后a值的降低比率；

图5志愿者皮肤b值变化；b值主要反应皮肤的黄色程度，受皮肤黑色素、胡萝卜素等多种因素的影响；在测试过程中分别记录使用产品前、使用14天和使用28天后皮肤b值，以使用产品前的数值为基线，分别计算14天和28天后b值的降低比率；

图6志愿者皮肤黑色素变化；降低黑色素合成或预防色素沉着能够带来较好的美白提亮效果；测试过程中分别记录使用产品前、使用14天和使用28天后皮肤黑色素值；以使用产品前的数值为基线，分别计算14天和28天后黑色素值的降低比率；

图7志愿者皮肤血红素变化；测试过程中分别记录使用产品前、使用14天和使用28天后皮肤血红素含量；以使用产品前的数值为基线，分别计算14天和28天后b值的降低比率。

具体实施方式

本发明提供了一种抗氧化组合物及其制备方法、应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

如无特殊说明，本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

其中，蒲公英提取物购自西安绿天生物有限公司，为含有0.5％黄酮的蒲公英水提物。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1～3和对比例1～2

实施例1～3和对比例1～2的组成如表1所示，实施例1～3为本发明抗氧化组合物。

表1

组分	对比例1	实施例1	实施例2	实施例3	对比例2
						灵芝发酵液	10	7	5	3	0
蒲公英提取液	0	3	5	7	10

测试例1不同抗氧化剂组合物的自由基清除能力

(1)取0.002gDPPH溶于50mL乙醇，配制0.1mM的DPPH溶液，避光保存。

(2)分别配置灵芝发酵液和蒲公英提取液，设置质量比10:0、7:3、5:5、3:7与0:10组。超声分散和搅拌后，均匀混合两种溶液。

(3)在96孔板中分别加入不同组别下的样品组、对照组、空白组。

(样品组)：样品溶液100uL+DPPH醇溶液100uL(每个浓度3个孔)；

(空白组)：样品溶液100uL+无水乙醇100uL(每个浓度3个孔)；

(对照组)：DPPH醇溶液100uL+水100uL。

配置各组后，室温下避光孵育30分钟。

测定517nm处的吸光度，取平均值，通过下列公式计算每个浓度的样品的DPPH清除率：

清除率＝(1-(A_sample-A_blank)/A_control)*100％，其中A_sample为样品组的吸光值，A_blank为空白组的吸光值，A_control为对照组的吸光值。

从表1和图1中的结果可见，单独的灵芝发酵液和蒲公英提取液(稀释10倍，约10％原提取液浓度)，其DPPH自由基抑制率分别为47.09％和55.93％，蒲公英提取物的抗氧化能力略强。当对二者进行组合后发现，其质量比在7:3时，抑制率达到55.49％；质量比为5:5时，抑制率为60.52；质量比为3:7时，抑制率为67.18。通过两者的组合，可见在质量比5:5和3:7组合下，其自由基抑制能力要强于单一成分。其中，质量比为3:7的条件下，其抗氧化能力最强。这一结果表明，通过合理复配两种天然的植物抗氧化剂，能够实现协同增效，从而提高整体的抗氧化效果。

表2.实施例1～3和对比例1～2的组合物对DPPH自由基的抑制能力

测试例2不同浓度下抗氧化组合物的自由基清除能力

(1)取0.002gDPPH溶于50mL乙醇，配制0.1mM的DPPH溶液，避光保存。

(2)分别配置灵芝发酵液和蒲公英提取液(稀释10倍，约10％原始浓度)，设置质量比10:0、7:3、5:5、3:7与0:10组。超声分散和搅拌后，均匀混合两种溶液。

(3)在上述不同组别的溶液中加入去离子水，分别稀释至5％、2.5％、1.25％和0.625％。

(4)在96孔板中分别加入不同浓度下的样品组、对照组、空白组。

(样品组)：样品溶液100uL+DPPH醇溶液100uL(每个浓度3个孔)；

(空白组)：样品溶液100uL+无水乙醇100uL(每个浓度3个孔)；

(对照组)：DPPH醇溶液100uL+水100uL。

配置各组后，室温下避光孵育30分钟。

从表2和图2的实验结果可以发现，不同配比下的天然抗氧化剂组合均表现出浓度依赖的抗氧化特性。从纵向来看，当提取液浓度由10％稀释至0.625％后，灵芝发酵液的DPPH自由基抑制能力由48.65％降至29.32％；7:3组合中由56.49％降至30.68％；5:5组合中由60.88％降至32.22％；3:7组合中由70.83％降至33.84％；蒲公英提取液的抑制率则从54.92％降至23.97％。相比于灵芝发酵液，蒲公英提取液随着浓度的降低，其DPPH自由基抑制能力下降更为明显。

从横向来看，不同浓度下，二者复配后的效果均优于单独使用其中的一种成分。在所选取的三个组别中，7:3组的抑制能力在不同浓度下略高于单独使用灵芝发酵液与蒲公英提取液；而3:7组别在选取的三个复配组合中具有最强的协同增效效果，在实验选取的5个浓度梯度下均表现出最强的DPPH自由基抑制率。进一步计算了五个组别的IC50值，可以发现，质量比3:7组的IC50值为2.62％，小于其他两个复配组别。同时，各复配组别的IC50值也均小于独立使用单个成分。总结来看，两种成分复配后，能够表现协同抗氧化效果，且灵芝发酵液：蒲公英提取液质量比为3:7时效果最佳。

表3.不同浓度抗氧化组合物的自由基清除能力

表4.不同组别的IC50值

指标	对比例1	实施例1	实施例2	实施例3	对比例2
						IC50	15.85％	6.93％	3.80％	2.62％	8.34％

实施例4和对比例3～4

按照下表配制实施例4和对比例3～4的化妆品水剂。其中，实施例4的化妆品由实施例3的抗氧化组合物组成，灵芝发酵液和蒲公英提取液的质量比为3:7。

表5.配方表

按如下方法合成：

(1)称取PEG/PPG-14/7二甲基醚、甘油葡糖苷、甜菜碱、加入一部分去离子水加热至约50℃，以250～300r/min，搅拌溶解20min；

(2)加入苯氧乙醇、对羟基苯乙酮，保持温度为50℃，搅拌溶解15min；

(3)加入灵芝提取物、蒲公英提取液，温度下降为35～45℃，搅拌溶解15min，100r/min搅拌15min，然后冷却至室温制得护肤品。

测实施例3功效测评

(1)人员招募：采用人体实验测定皮肤血红素变化，测试对象选择18-30岁符合要求的志愿者为受试对象30人。招募标准：肌肤脆弱，受温差/换季等环境影响易泛红，测试前面部已经有泛红的情况。

(2)受试者要求：

(i)已签订知情同意书，自愿参加本测试所有的受试者都依照当地法规、规程接受口头和纸质的知情同意。知情同意解释了研究的性质、目的和参与研究的潜在风险，并强调参与测试的自愿性，受试者可以随时出于任何理由退出研究。所有的受试者都可以就研究进行提问，在签署前给与充分的时间考虑。所有的知情同意签署必须是在研究开始前进行。

(ii)入选标准①中国人②年龄18～30岁(试验开始时刻)③受试者应当对常用化妆品不敏感④受试者近三个月来没有参加别的临床研究3.3.排除标准①实验期间有外出旅行计划者②近一周使用抗组胺药或近一个月使用过免疫抑制剂御家肌肤研究院2③近两个月受试部位使用任何抗炎药物④胰岛素依赖糖尿病患者⑤正在接受治疗的呼吸道疾病患者⑥哺乳期或妊娠期妇女⑦过敏体质、过敏性皮肤炎等人群，有皮肤病或疾病史⑧正在接受皮肤科治疗的人群，或一个月内服用羟基酸类、美白类以及抗衰老类药物的受试者⑨测试区域有大面积胎记、抓痕、白斑、色素痣、疤痕疙瘩等影响试验的皮肤表征。

(iii)限制事项①试验期间，禁止对被测部位进行影响测试的治疗②试验期间，禁止在测试部位使用其他护肤产品及其它影响测试的产品③试验期间，沐浴液、香皂、洗发露等日用品类要跟试验开始前用的一致，禁止更换。

(iv)目标例数入选合格受试者30人，确保最终完成30人；

(v)筛选失败，受试者脱落和替换规整未入组受试者，即受试者签署了知情同意书，但是因为不满足入组标准/排除标准而未能入组。受试者经过随机化或分配入组后离开，即脱落。受试者因为任何原因没有完成研究被认为是脱落，这种情况不再增补。

脱落准则：

-受试者脱落同意：受试者可以随时因为任何原因退出。(依据Helsinki宣言)；

-不良事件/严重不良事件：任何研究者认为的继续进行试验对受试者不利；

-不遵循方案；

-受试者失访；

-其他原因：其他受试者退出的原因。

在其它情况，研究者认为，继续参与试验对受试者不利；CRF表格必须填写至筛选不合格或者脱落。所有提早结束试验的受试者都必须由研究者或者研究团队在流程表上记录，最后一页“结束研究”，不良事件表和/或联合治疗表也同样适用。

(2)测试环境条件：测试环境温度为22℃±1℃，湿度为50％±5％，并且进行实时动态检测。

(3)测试流程：

(i)先用较为温和的氨基酸洁面洗脸，然后静坐30min；

(ii)30min后测试第一次，用VISIA-CR拍摄测定L-a-b值、使用Mexameter测试3次取平均值，测定测试区域的黑色素和血红素含量；

(iii)使用产品后，14天/28天后分别测试第二/三次；

(v)用image-pro-plus分析面部区域的L、a、b值，左右脸各取4个矩形区域，记录数据取平均值，依次记录三次测试的数据，以第一次测试作为基础值计算改善率。

表6.不同配方的化妆品改善皮肤亮度的效果

由表6和图3可知单一灵芝和蒲公英提取物在使用后对于面部皮肤L值的提升效果有限。而当这两种成分以3:7比例复配使用后，在14天和28天均能观察到明显的L值上升，且28天效果要高于14天效果。L值升高，说明皮肤亮度增加。这一结果表明，复配后的成分对于皮肤亮度的提升要强于使用单一的原料。在同等成分含量下，本发明组合物效果更好，说明本发明组合物的配比更为合理得当。

由图4可知，单一使用灵芝和蒲公英提取物时，其皮肤红度的改善非常有限；而使用灵芝与蒲公英提取物复配后的活性成分后，无论14天还是28天下皮肤红度均有明显的改善，说明在同等成分含量下该复配组合具有更好的综合功效。

由图5测试结果来看，单一使用灵芝和蒲公英提取物时，皮肤黄度基本没有得到改善。单一使用灵芝提取物时，b值略有升高；而使用蒲公英提取物，b值有轻微的降低；而使用实施例4灵芝+蒲公英提取物复配后的试实验组，、无论14天还是28天下皮肤黄度均有明显的降低，说明在同等成分含量下该复配组合具有更好的改善皮肤黄度的作用。

从图6结果来看，在14天时，单独的功效物质与复方组合的改善效果相当，没有明显差异；而当使用至28天后，单一的功效物质对于黑色素含量的改善没有发生明显改变，但灵芝与蒲公英复配组合则进一步降低黑色素含量。这一结果也与L-a-b值中的色度变化趋势相同。

从图7结果可以看出，在14天时，灵芝与蒲公英提取物的混合功效组合使得皮肤血红素有了明显的下降，远高于灵芝和蒲公英单独使用的情况；而当使用至28天后，灵芝和蒲公英提取物的混合功效组合进一步改善情况有限，但依然优于使用单独成分。这一结果表明，在同等成分含量下该复配组合具有更好的血红素改善作用，说明本发明抗氧化组合物具有一定祛红、舒缓作用。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种抗氧化组合物，其特征在于，由灵芝发酵液和蒲公英提取物组成；所述灵芝发酵液和蒲公英提取物的质量比为(3～7)：(3～7)；

蒲公英提取物为蒲公英水提物；所述灵芝发酵液的制备方法为:

将灵芝菌接种至发酵培养基中，在搅拌速度220r/min、26℃下培养5-7天，至菌液清澈透明，充满菌丝球，终止发酵，离心去除灵芝菌丝体，得到灵芝发酵液；

所述发酵前期通气量为0.5vvm，发酵期间控制为0.8vvm，

所述发酵培养基的配方为：玉米粉1％，葡萄糖3％，酵母粉0.5％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％，pH自然。

2.根据权利要求1所述的抗氧化组合物，其特征在于，所述灵芝发酵液和蒲公英提取物的质量比为(3～5):(5～7)。

3.根据权利要求1所述的抗氧化组合物，其特征在于，所述灵芝发酵液和蒲公英提取物的质量比为3：7。

4.权利要求1～3任一项所述抗氧化组合物在制备具有抗氧化、祛红和/或舒缓作用的化妆品中的应用；所述化妆品包括化妆水、乳液或面霜。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抗氧化包括清除DPPH自由基和/或抑制DPPH自由基生成。

6.一种具有抗氧化、祛红和/或舒缓作用的化妆品，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的抗氧化组合物和化妆品中可接受的助剂。

7.根据权利要求6所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中可接受的助剂为水、保湿剂、防腐剂中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中可接受的助剂还包括PEG/PPG-14/7二甲基醚和甘油葡糖苷中的至少一种；

所述保湿剂为透明质酸钠和/或甜菜碱；

所述防腐剂为苯氧乙醇和/或对羟基苯乙酮。

9.根据权利要求6～8任一项所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品为化妆水，所述化妆水由如下质量分数的原料组成：