CN113418994B - 闪蒸-气相色谱/质谱法结合微反应装置测定人体毛发中***和***含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种利用闪蒸‑气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置测定人体毛发中的***和***的含量的方法，该方法将闪蒸技术与离线衍生化技术实现了有效地结合，毛发中的***类化合物闪蒸释放后，于微反应装置中被乙酰化试剂离线衍生化，衍生化产物通过裂解器进样，被载气带入气相色谱***分离，从所得到的产物色谱图和质谱图来分析毛发样品中毒品的组成及含量；该方法同时测定MAMP、AMP、MDMA、MDA的含量，具有对样品形态无要求、前处理简单、样品用量少等优点，在固态的复杂样品的快速分析中发挥着越来越重要的作用，用于人体毛发中***和***含量的测定，具有操作简单、分析速度快、准确度高的特点。

Description

闪蒸-气相色谱/质谱法结合微反应装置测定人体毛发中*** 和***含量的方法
技术领域
本发明涉及一种测定人体毛发中***和***含量的方法，特别涉及一种闪蒸-气相色谱/质谱法结合微反应装置测定人体毛发中***和***含量的方法。
背景技术
***，又称去氧麻黄碱，其主要成分为甲基***(MAMP)。***外型为白色结晶体，似冰，因其用药方式多为“烫吸”，吸食***者俗称“溜冰”。甲基***在被人体吸收代谢后的产物为***(AMP)。***是一种中枢兴奋药及抗抑郁症药。因静脉注射具有成瘾性，而被列为毒品。***的主要成分为3,4-亚甲二氧基甲基***(MDMA)，它是***类药物衍生物，在服用后能使人兴奋如狂，摇头不止。3,4-亚甲基二氧基甲基***的代谢产物为3,4-亚甲基二氧基***(MDA)。作为一种致幻剂、精神***，在大多数国家，MDA都是一种受到严格管控的药物。
***和***能刺激神经突触间的多巴胺和去甲肾上腺素含量增加，使人处于兴奋状态。长期吸食***会使额叶皮层、海马、纹状体等脑区神经元受损，基本认知能力和社会认知能力也受到损伤，同时伴随着情绪失控、暴躁、心肌梗塞、出血性中风等危害。
目前，针对毛发中***和***含量测定的方法有：气相色谱法、液相色谱法、气相色谱/质谱法、毛细管电泳法等。这些方法均需要复杂耗时的前处理过程，同时需要20-100mg的毛发样本，当嫌疑人本身毛发稀少或是为了逃避检查进行全身脱毛时，这些分析方法就显得捉襟见肘了。此外一些文献报道的关于毛发中***和***含量的测定方法往往仅将MAMP、MDMA作为目标物。然而MAMP与MDMA在人体中会分别被代谢为AMP、MDA，导致其含量降低，因此同时测定MAMP、AMP、MDMA和MDA的含量才是测定人体毛发中***和***含量的严谨做法。
闪蒸技术将微量样品在惰性气氛中快速加热而释放出产物。衍生化方法能很好地改善色谱行为，解决闪蒸气相色谱质谱法中***类化合物色谱峰拖尾、AMP与MDA受严重基质干扰而无法定性定量的问题，有效提高灵敏度。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置对人体毛发中的MAMP、AMP、MDMA、MDA进行定性、定量分析的方法，并在此基础上优化了色谱分离条件、闪蒸温度和时间条件、衍生化条件等。
采用所设计的微反应装置，闪蒸技术与离线衍生化技术实现了有效地结合。毛发中的***类化合物闪蒸释放后，于微反应装置中被乙酰化试剂离线衍生化。衍生化产物通过裂解器进样，被载气带入气相色谱***分离，从所得到的产物色谱图和质谱图来分析毛发样品中毒品的组成及含量。该方法同时测定MAMP、AMP、MDMA、MDA的含量，具有对样品形态无要求、前处理简单、样品用量少等优点，在固态的复杂样品的快速分析中发挥着越来越重要的作用。
本发明所开发的检测方法用于人体毛发中***和***含量的测定，具有操作简单、分析速度快、准确度高的特点。
本发明的技术方案如下：
一种利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置测定人体毛发中的***和***的含量的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)样品前处理
取毛发样品，先浸没于0.1wt％十二烷基磺酸钠水溶液中振荡洗涤(5min)，再浸没于去离子水中振荡洗涤(5min)，晾干后剪碎(剪成1～2mm段，置于避光阴凉处保存)，完成前处理；
(2)配制标准工作溶液
分别精确称取MAMP、AMP、MDMA、MDA的标准品，以乙酸乙酯为溶剂，先配制成混合标准贮备液，再用乙酸乙酯稀释，配制成系列标准工作溶液；
所述标准工作溶液中，MAMP、AMP、MDMA、MDA的浓度范围均在0.3～30mg/L；
(3)标准样品检测
按照步骤(1)前处理方法准备阴性毛发样品，精密称定后装入一端封口的毛细玻璃管(长5cm，内径1.1～1.3mm)中，吸取步骤(2)配制的标准工作溶液于毛细玻璃管中，得到标准样品；
利用微反应装置对标准样品进行离线衍生化处理；所述微反应装置包括基座(不锈钢材质)和设于基座上的玻璃管支架，玻璃管支架内设有O型圈用于固定毛细玻璃管；所述离线衍生化处理的方法为：
将微反应装置的基座和玻璃管支架预先放入液氮中冷却，然后将装有标准样品的毛细玻璃管置于玻璃管支架上，用火焰灼烧使毛细玻璃管密封，将密封的毛细玻璃管置于样品杯中，将样品杯固定在进样杆上装入裂解器，在230～290℃下闪蒸0.5～3min(优选270℃，0.5min，样品中的目标物被迅速释放出来)，取下毛细玻璃管，自然冷却后割开一端封口，加入衍生化试剂三氟乙酸酐(TFAH)；
所述衍生化试剂三氟乙酸酐与标准工作溶液的体积比为0.5～3：1，优选2：1；所述衍生化试剂三氟乙酸酐的体积用量以阴性毛发样品的质量计为1.5～10μL/mg，优选6～8μL/mg；
将微反应装置的基座和玻璃管支架预先放入液氮中冷却，然后将添加有衍生化试剂的毛细玻璃管置于玻璃管支架上，用火焰灼烧使毛细玻璃管密封，将密封的毛细玻璃管置于60℃下反应30min，之后自然冷却，割开一端封口，在50℃下挥干(挥干玻璃管内剩余的衍生化试剂和溶剂)，完成离线衍生化处理；
将干燥后的毛细玻璃管置于样品杯中，将样品杯固定在进样杆上装入裂解器进样，同时启动气相色谱/质谱仪进行分离测定；
气相色谱质谱条件：色谱柱为TG-1MS(30m×0.25mm i.d.×0.25μm，100％聚二甲基硅氧烷)，升温程序为初始温度50℃，以10℃/min升到250℃，保持10min；进样口温度为250℃，传输线温度为250℃，离子源温度为230℃；电离源为EI，电子能量为70eV；分流比为30：1，载气为高纯氮，纯度>99.999％，载气线速度为36.3cm/s，扫描模式为SIM，选择离子m/z：77，91，110，118*，135*，140，154*，162(“*”代表定量离子)；
裂解器条件：裂解炉温度230～290℃，裂解器与气相色谱质谱仪接口温度为250℃；
通过在阴性毛发样品中分别加入不同浓度的系列标准工作溶液进行检测，以选择离子流图中的m/z 154、m/z 118、m/z 154、m/z 135分别作为MAMP、AMP、MDMA、MDA的定量离子，以定量离子峰面积为纵坐标，MAMP、AMP、MDMA、MDA相对于阴性毛发样品的含量为横坐标，分别建立对应的标准工作曲线；
所述MAMP、AMP、MDMA、MDA的含量(质量浓度)，可通过阴性毛发样品的质量、标准工作溶液的浓度和体积换算得出；
(4)待测样品检测
按照步骤(1)前处理方法准备待测毛发样品，精密称定后装入一端封口的毛细玻璃管，然后按照步骤(3)中的方法，先利用微反应装置进行离线衍生化处理，再用气相色谱/质谱仪进行分离测定，得到样品的总离子流图、选择离子流图和质谱图，通过与标准品谱图对照进行定性，通过将定量离子m/z 154、118、154、135的峰面积分别代入到步骤(3)建立的标准工作曲线中，计算得到样品中MAMP、AMP、MDMA、MDA的含量。
本发明具有如下优点：
1、与现有技术相比，本发明无需复杂的样品前处理过程，开发的闪蒸-气相色谱质谱法结合微反应装置操作简便、环保，能够有效节约分析时间、简化实验步骤。
2、本发明消耗的样品量少，一次处理仅需一根毛发(0.3mg)，能够大大减低取样的难度。
3、离线衍生化方法改善了MAMP、AMP、MDMA、MDA的色谱行为，提高了方法的灵敏度。
4、本发明能同时测定MAMP、AMP、MDMA、MDA的含量，对于毛发中***和***含量的测定在方法上更为严谨。
附图说明
图1为不同闪蒸温度下，时间对MAMP、AMP、MDMA和MDA的释放的影响；(a)为230℃下，时间对MAMP、AMP、MDMA和MDA的释放的影响；(b)250℃下，时间对MAMP、AMP、MDMA和MDA的释放的影响；(c)270℃下，时间对MAMP、AMP、MDMA和MDA的释放的影响；(d)290℃下，时间对MAMP、AMP、MDMA和MDA的释放的影响。
图2为不同闪蒸温度和对应其最佳闪蒸时间下MAMP、AMP、MDMA和MDA释放曲线。
图3为1000mg/L的MAMP、AMP、MDMA和MDA的混合标准溶液与1000mg/L MAMP、AMP、MDMA和MDA混合标准溶液与TFAH离线衍生化后的总离子流图；(a)MAMP、AMP、MDMA和MDA混合标准溶液的总离子流图，(b)MAMP、AMP、MDMA和MDA混合标准溶液与TFAH衍生化反应的总离子流图。
图4为MAMP、AMP、MDMA和MDA的选择离子峰面积与衍生化时间的曲线关系图。
图5为MAMP、AMP、MDMA和MDA的选择离子峰面积与衍生化温度的曲线关系图。
图6为MAMP、AMP、MDMA和MDA的选择离子峰面积与衍生化试剂浓度的曲线关系图。
图7为MAMP、AMP、MDMA和MDA的选择离子峰面积与衍生化试剂用量的曲线关系图。
图8为100mg/L MAMP、AMP、MDMA和MDA标准溶液和2μL TFAH衍生化产物的质谱图；(a)100mg/L MAMP标准溶液和2μL TFAH衍生化产物的质谱图；(b)100mg/L AMP标准溶液和2μL TFAH衍生化产物的质谱图；100mg/L MDMA标准溶液和2μL TFAH衍生化产物的质谱图；100mg/L MDA标准溶液和2μL TFAH衍生化产物的质谱图。
图9为微反应装置处理样品示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施例进一步描述本发明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1毛发中MAMP、AMP、MDMA和MDA释放的闪蒸温度和时间考察
毛发样本目标物质的释放情况受到闪蒸温度和闪蒸时间的共同影响，因此同时考察闪蒸温度和闪蒸时间对毛发中MAMP、AMP、MDMA和MDA的释放情况的影响。分别考察了裂解炉温度为230℃、250℃、270℃和290℃时，时间对MAMP、AMP、MDMA和MDA释放的影响，结果见图1。由图1可知，在闪蒸温度为230℃的条件下，最佳的闪蒸时间为1min；在闪蒸温度为250℃的条件下，最佳的闪蒸时间为1min；在闪蒸温度为270℃的条件下，最佳的闪蒸时间为0.5min；在闪蒸温度为290℃的条件下，最佳的闪蒸时间为0.5min。
为了综合考虑闪蒸温度和时间对MAMP、AMP、MDMA和MDA释放的影响，将不同闪蒸温度对应其最佳的闪蒸时间下，4种***类目标物的响应进行比较，结果见图2。由图2可知，闪蒸温度为270℃，闪蒸时间为0.5min为最优条件。
实施例2衍生化效果的考察
取1μL 1000mg/L的MAMP、AMP、MDMA和MDA 4种目标物混合标准溶液直接进样分析；1μL 1000mg/L的4种目标物混合标准溶液与2μL 100％TFAH衍生化反应后进样分析。分别得到总离子流图，结果见图3。由图3可知，4种***类目标物和TFAH的衍生化产物的色谱峰相比于未衍生化的色谱峰，响应均有效果不错的提高，且解决了原本4种***类目标物色谱峰拖尾的问题。同时，TFAH在挥干后剩余的相关色谱峰不会干扰4种***类目标物的检测，也不会产生副产物，说明TFAH对MAMP、AMP、MDMA和MDA有较好的衍生化效果。
实施例3衍生化时间的选择
取0.30mg阳性毛发样本与2μL 100％TFAH在60℃温度下分别反应10min、20min、30min、40min和50min，得出不同衍生化时间下4种***类目标物和TFAH的衍生化产物的色谱峰响应，结果见图4。由图4可知，当衍生化时间由10min上升到50min时，4种***类目标物和TFAH的衍生化产物的色谱峰面积基本不变。因此，选择衍生化反应的时间为30min。
实施例4衍生化温度的选择
取0.30mg阳性毛发样本和2μL 100％TFAH进行30min的衍生化反应，分别考察衍生化温度为40℃、50℃、60℃、70℃和80℃的条件下4种***类目标物与TFAH衍生化产物的色谱峰响应，结果见图5。由图5可知，当温度由40℃上升到80℃时，4种***类目标物与TFAH衍生化产物的色谱峰面积基本不变。因此，选择衍生化反应的温度为60℃。
实施例5衍生化试剂浓度的选择
取0.30mg阳性毛发样本和2μL TFAH在60℃条件下进行30min的衍生化反应，分别考察衍生化试剂浓度(溶剂为乙酸乙酯)为10％、25％、50％、75％和100％时衍生化产物的色谱峰响应，结果见图6。由图6可知，当TFAH的浓度由10％增加到25％时，4种***类目标物和TFAH的衍生化产物的色谱峰面积增大；当TFAH的浓度继续增加到100％，4种***类目标物和TFAH的衍生化产物的色谱峰面积基本不变。因此，选择衍生化试剂(TFAH)的浓度为100％。
实施例6衍生化试剂用量的选择
取0.30mg的阳性毛发样本，分别考察了与0.5μL、1μL、2μL和3μL 100％TFAH衍生化试剂在80℃衍生化反应后，衍生化产物的色谱峰响应，结果见图7。由如图7可知，当TFAH的用量由0.5μL增加到2μL时，4种***类目标物和TFAH的衍生化产物的色谱峰面积略有增大；当TFAH的用量继续增加到3μL，4种***类目标物和TFAH的衍生化产物的色谱峰面积略有减小。因此，选择衍生化试剂(TFAH)的用量为2μL。
实施例7 MAMP、AMP、MDMA和MDA的定性定量离子选择
采用闪蒸-气相色谱/质谱法结合微反应装置，对1μL 100mg/L的MAMP、AMP、MDMA和MDA混合标准溶液与2μL 100％TFAH的衍生化产物进行全扫描分析，得到MAMP、AMP、MDMA和MDA混合标准溶液与TFAH的衍生化产物的质谱图，结果见图8。分别选择响应最大的m/z110，118和154作为MAMP的定性离子，其中m/z 154为定量离子；m/z 91，118和140作为AMP的定性离子，其中m/z 118为定量离子；m/z 135，154和162作为MDMA的定性离子，其中m/z 154为定量离子；m/z 77，135和162作为MDA的定性离子，其中m/z 135为定量离子。
实施例8方法学考察
仪器与试剂：
PY-3030D裂解器，GCMS-QP2010 SE气相色谱/质谱连用仪。
实验方法：
(1)称取毛发样品，依次用10mL 0.1％十二烷基磺酸钠水溶液和10mL去离子水超声振荡洗涤5min，取出毛发于室温下晾干，用清洁无污染的剪刀剪成约1-2mm的小段，置于避光阴凉处保存；
所述0.1wt％十二烷基磺酸钠水溶液的配置方法为：称取0.10g十二烷基磺酸钠，用水溶解，定容至100mL容量瓶，摇匀即得；
(2)精确称取MAMP、AMP、MDMA和MDA标准品以乙酸乙酯为溶剂，配制成混合标准贮备液，再用乙酸乙酯稀释，配置成系列标准工作溶液。
所述混合标准储备液中，MAMP、AMP、MDMA和MDA的浓度均为1000mg/L；
所述系列标准工作溶液的浓度为0.3mg/L、0.6mg/L、1.5mg/L、3mg/L、6mg/L、15mg/L和30mg/L；
(3)精确称取阴性毛发样品0.30mg，置于一端密封毛细玻璃管中，再加入1μL按照步骤(2)方法配置的浓度均为30mg/L的MAMP、AMP、MDMA和MDA标准品的标准工作溶液。将微反应装置的不锈钢的基座和玻璃管支架预先放入液氮中冷却，然后将毛细玻璃管封口段朝下置于玻璃管支架上，用火焰灼烧距离玻璃管开口端1cm左右处的位置，使之自然融化断裂，完成末端的密封。
将密封的毛细玻璃管置于表面经惰性化处理的不锈钢样品杯中，将其固定在进样杆上，装入裂解器，待仪器稳定后，将样品杯推入到裂解器的加热区，玻璃管中的样品在裂解炉温度为250℃下闪蒸30s，毛发中的目标物被迅速释放出来。取下毛细玻璃管，待自然冷却后割开一端封口处，用微量进样器加入2μL 100％的衍生化试剂三氟乙酸酐(TFAH)。
将微反应装置的不锈钢的基座和玻璃管支架预先放入液氮中冷却，然后将毛细玻璃管封口段朝下置于玻璃管支架上，用火焰灼烧距离玻璃管开口端1cm左右处的位置，使之自然融化断裂，完成末端的密封。将密封的玻璃管置于60℃的水浴中反应30min，待衍生化反应完成后取出毛细玻璃管，自然冷却后割开一端封口处，放入恒温干燥器中，在50℃的环境下挥干玻璃管内剩余的衍生化试剂和溶剂。
将干燥后的毛细玻璃管置于样品杯中，将其固定在进样杆上，装入裂解器，当炉温达到250℃时进样，检测得到MAMP、AMP、MDMA和MDA标准品的总离子流图、选择离子流图和质谱图，作为定性分析的依据通过GC/MS进行分离分析；
通过分别加入不同浓度的系列标准工作溶液进行检测，以选择离子流图中的m/z154、m/z 118、m/z 154、m/z 135分别作为MAMP、AMP、MDMA和MDA的定量离子，以定量离子峰面积为纵坐标，MAMP、AMP、MDMA和MDA分别相对于阴性样品的含量为横坐标，分别建立对应的标准工作曲线；所述MAMP、AMP、MDMA和MDA分别相对于阴性样品的含量可通过阴性样品的质量、标准工作溶液的浓度和体积换算得出；
气相色谱质谱条件：色谱柱为TG-1MS(30m×0.25mm i.d.×0.25μm，100％聚二甲基硅氧烷)，升温程序为初始温度50℃，以10℃/min升到250℃，保持10min；进样口温度为250℃，传输线温度为250℃，离子源温度为230℃；电离源为EI，电子能量为70eV；分流比为30:1，载气为高纯氮，纯度>99.999％，载气线速度为36.3cm/s，扫描模式为SIM，选择离子m/z：77，91，110，118*，135*，140，154*，162；
裂解器条件：裂解炉温度250℃，裂解器与气相色谱质谱仪接口温度为250℃；
(4)称取步骤(1)准备好的待测样品，精密称定0.30mg，装入一端封口的毛细玻璃管，按照步骤(3)所述的微反应装置的使用方法和色谱条件进行闪蒸、离线衍生化、进样操作，得到样品的总离子流图、选择离子流图和质谱图，通过与标准品谱图对照进行定性，通过分别将定量离子m/z 154、118、154、135的峰面积代入到步骤(3)所得的标准工作曲线中，计算得到MAMP、AMP、MDMA和MDA的含量。
结果与讨论
考察该方法的线性、检出限和定量限等参数，结果见表1。从表1中可以看到，MAMP、MDMA、MDA在1～100ng/mg，AMP在2～100ng/mg范围内线性良好，MAMP、AMP、MDMA和MDA的r分别为0.9995、0.9966、0.9996、0.9994，RSD分别为0.63～8.02％、1.95～7.61％、1.26～4.96％、2.13～7.67％。
表1 MAMP、AMP、MDMA和MDA的线性、检出限和定量限结果
考察该方法的重现性和精密度。对MAMP、AMP、MDMA和MDA在5ng/mg、20ng/mg和50ng/mg的浓度下分别进行日内(n＝6)和日间(n＝12)的精密度考察，结果见表2。MAMP、AMP、MDMA和MDA的日内和日间精密度均小于9.98％。
表2 MAMP、AMP、MDMA和MDA的日内和日间精密度
考察该方法的加标回收率，结果见表3。阳性毛发样本加标量为测得量的0.5、1.0和1.5倍。从表3可知，MAMP、AMP、MDMA和MDA的加标回收率为92.7～115.2％。
表3 MAMP、AMP、MDMA和MDA的加标回收率
结合表1、2和3的结果，认为该方法准确性良好，可以用来测定MAMP、AMP、MDMA和MDA。
实施例9实际毛发中MAMP、AMP、MDMA和MDA含量的测定
阴性毛发样品为志愿者提供，阳性毛发样品(***)由某强制戒毒中心提供。
称取0.30mg毛发样本，精密称定，置于一端密封的毛细玻璃管中。利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合微反应装置分析，分别得到MAMP的m/z 110，118和154；AMP的m/z 91，118，140；MDMA的m/z 135，154，162；MDA的m/z 77，135，162的选择离子流图；与标准品的选择离子流图中的保留时间和丰度比进行对比定性，采用外标法定量，得到结果见表4。
表4实际样本检测结果
对比例
闪蒸-气相色谱/质谱法结合微反应装置和离线乙酰化-气相色谱/质谱法的线性方程、线性范围、检出限和定量限对比见表5。
表5闪蒸-气相色谱/质谱法结合微反应装置和离线乙酰化-气相色谱/质谱法的对比
由表5可知，相比于离线乙酰化-气相色谱质谱法，本发明方法的技术优势：
1.本方法样品用量少。
2.无需萃取操作，减少了萃取溶剂对目标物溶解能力不同的影响。本方法能直接反应MAMP、AMP、MDMA、MDA在毛发中的含量。
3.本方法的检出限、定量限更低。

Claims (6)

1.一种利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置测定人体毛发中的***和***的含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)样品前处理
取毛发样品，先浸没于0.1wt％十二烷基磺酸钠水溶液中振荡洗涤，再浸没于去离子水中振荡洗涤，晾干后剪碎，完成前处理；
(2)配制标准工作溶液
分别精确称取MAMP、AMP、MDMA、MDA的标准品，以乙酸乙酯为溶剂，先配制成混合标准贮备液，再用乙酸乙酯稀释，配制成系列标准工作溶液；
(3)标准样品检测
按照步骤(1)前处理方法准备阴性毛发样品，精密称定后装入一端封口的毛细玻璃管中，吸取步骤(2)配制的标准工作溶液于毛细玻璃管中，得到标准样品；
利用微反应装置对标准样品进行离线衍生化处理；所述微反应装置包括基座和设于基座上的玻璃管支架，玻璃管支架内设有O型圈用于固定毛细玻璃管；所述离线衍生化处理的方法为：
将微反应装置的基座和玻璃管支架预先放入液氮中冷却，然后将装有标准样品的毛细玻璃管置于玻璃管支架上，用火焰灼烧使毛细玻璃管密封，将密封的毛细玻璃管置于样品杯中，将样品杯固定在进样杆上装入裂解器，在230～290℃下闪蒸0.5～3min，取下毛细玻璃管，自然冷却后割开一端封口，加入衍生化试剂三氟乙酸酐；
将微反应装置的基座和玻璃管支架预先放入液氮中冷却，然后将添加有衍生化试剂的毛细玻璃管置于玻璃管支架上，用火焰灼烧使毛细玻璃管密封，将密封的毛细玻璃管置于60℃下反应30min，之后自然冷却，割开一端封口，在50℃下挥干，完成离线衍生化处理；
将干燥后的毛细玻璃管置于样品杯中，将样品杯固定在进样杆上装入裂解器进样，同时启动气相色谱/质谱仪进行分离测定；
气相色谱质谱条件：色谱柱为TG-1MS，升温程序为初始温度50℃，以10℃/min升到250℃，保持10min；进样口温度为250℃，传输线温度为250℃，离子源温度为230℃；电离源为EI，电子能量为70eV；分流比为30：1，载气为高纯氮，纯度>99.999％，载气线速度为36.3cm/s，扫描模式为SIM，选择离子m/z：77，91，110，118*，135*，140，154*，162；
裂解器条件：裂解炉温度230～290℃，裂解器与气相色谱质谱仪接口温度为250℃；
通过在阴性毛发样品中分别加入不同浓度的系列标准工作溶液进行检测，以选择离子流图中的m/z 154、m/z 118、m/z 154、m/z 135分别作为MAMP、AMP、MDMA、MDA的定量离子，以定量离子峰面积为纵坐标，MAMP、AMP、MDMA、MDA相对于阴性毛发样品的含量为横坐标，分别建立对应的标准工作曲线；
(4)待测样品检测
按照步骤(1)前处理方法准备待测毛发样品，精密称定后装入一端封口的毛细玻璃管，然后按照步骤(3)中的方法，先利用微反应装置进行离线衍生化处理，再用气相色谱/质谱仪进行分离测定，得到样品的总离子流图、选择离子流图和质谱图，通过与标准品谱图对照进行定性，通过将定量离子m/z 154、118、154、135的峰面积分别代入到步骤(3)建立的标准工作曲线中，计算得到样品中MAMP、AMP、MDMA、MDA的含量。
2.如权利要求1所述利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置测定人体毛发中的***和***的含量的方法，其特征在于，步骤(2)所述标准工作溶液中，MAMP、AMP、MDMA、MDA的浓度范围均在0.3～30mg/L。
3.如权利要求1所述利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置测定人体毛发中的***和***的含量的方法，其特征在于，所述毛细玻璃管长5cm，内径1.1～1.3mm。
4.如权利要求1所述利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置测定人体毛发中的***和***的含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，闪蒸的温度为270℃，时间为0.5min。
5.如权利要求1所述利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置测定人体毛发中的***和***的含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述衍生化试剂三氟乙酸酐与标准工作溶液的体积比为0.5～3：1。
6.如权利要求1所述利用闪蒸-气相色谱/质谱法结合离线衍生化微反应装置测定人体毛发中的***和***的含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述衍生化试剂三氟乙酸酐的体积用量以阴性毛发样品的质量计为1.5～10μL/mg。
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