CN113398026B - 一种具有抗氧化能力的金耳人参发酵浸提液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗氧化能力的金耳人参发酵浸提液。以金耳菌株为发酵菌种，将种子液接种至以农产品为发酵基质且含有人参提取物的培养基中，固态发酵培养，发酵结束后得到富含生物活性物质的产物，发酵产物用纯净水进行浸提，且经加热匀浆后得到具有抗氧化能力的浸提液(图1)。本发明方法制备的金耳人参发酵浸提液具有抗氧化性，总抗氧化能力为2.06mmolTE/L，过氧化氢酶活力为7.11U/mL，抑制羟自由基能力为107.32U/mL，总氧自由基清除能力为5383.31μmol/L。本发明方法制备的金耳人参发酵浸提液显示出良好的抗氧化能力，可应用于制备具有抗氧化能力，防衰老功能的保健品。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有抗氧化能力的金耳人参发酵浸提液，属于微生物发酵技术领域。
背景技术
金耳(Tremella aurantialba)，是银耳属的一种胶体食药用菌。由于其优良的营养价值和生物活性，是我国一种罕见的食药用菌，常被作为传统药材和食品使用。研究表明，金耳的发酵液含有人体必需的氨基酸，通过热水浸提获得的多糖具有一定的抗氧化及降血糖的的效果，是一种营养绿色的保健食品。人参属珍贵植物，素有“中药之王”的美誉，人参皂苷是人参各种药理和生物活性的主要药效成分。稀有人参皂苷因其较小的分子量以及少数量的糖基比主要人参皂苷具有更强的生物活性，在内分泌***疾病、抗肿瘤、抗衰老等方面具有广泛良好的药用和保健功能价值。
以往关于金耳抗氧化活性的专利研究多集中于皮肤护理方面。研究者李卫旗发明了一种含天然金耳多糖的新型补水抗衰老产品。研究者邓超等人发明了一种金耳发酵美白液的制备方法。有关金耳可食用的抗氧化剂的发明研究还处于起步阶段。研究者邓超等人发明了一种具有抗氧化活性的金耳发酵液多糖的制备方法，但该方法集中于金耳多糖的制备，并未提及其他的生物活性物质。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是提供一种具有抗氧化能力的金耳人参发酵浸提液。
[技术方案]
本发明提供一种制备具有抗氧化能力的浸提液的方法，是利用金耳与人参提取物混合固态发酵并对发酵基质进行浸提，可以获得富含多种生物活性物质并具有抗氧化能力的浸提液。
所述人参提取物是从五加科植物人参的根、茎叶中提取精制而成，富含人参皂甙。
所述固态发酵是以麸皮、大豆皮、玉米皮为发酵基质，并添加人参提取物，利用金耳为发酵菌种。
所述方法为先将金耳活化得到种子液，再转接至固态发酵培养基静置发酵后，将固态发酵基质破碎浸提获得浸提液。
在一种实施方式中，种子液的发酵条件为，将金耳以体积比5～25％的接种量接种至种子培养基，24-28℃、160-200r/min培养3-7d。
在一种实施方式中，种子液的发酵条件为，以体积比10％的接种量，25℃、180r/min培养5d。
在一种实施方式中，固态发酵的条件为，将种子液按体积比15-25％的接种量接种到固态发酵培养基中，24-28℃静置培养8-15d。
在一种实施方式中，固态发酵的条件为，将种子液按体积比20％的接种量接种到固态发酵培养基中，25℃静置培养10天。
在一种实施方式中，固态发酵结束后，向发酵基质中添加8-11倍体积的水后在室温下进行破碎。
在一种实施方式中，固态发酵结束后，向发酵基质中添加10倍体积的水后在室温下进行破碎。
在一种实施方式中，破碎后的发酵基质经30-90℃、200-300r/min加热匀浆20-45min。
在一种实施方式中，破碎后的发酵基质经60℃、300r/min加热匀浆30min。
在一种实施方式中，固态发酵培养基中人参提取物的投料量为0.05-0.2g/g发酵基质。
在一种实施方式中，固态发酵培养基中人参提取物的投料量为0.05g/g发酵基质。
在一种实施方式中，固态发酵培养基的初始含水量为50～70％。
在一种实施方式中，固态发酵培养基的初始含水量为60％
本发明还提供利用上述方法制备得到的浸提液。
本发明还提供上述方法制备得到的浸提液在制备食品、保健品或护肤品领域中的应用。
有益效果：
本发明利用金耳与人参提取物混合固态发酵制备抗氧化浸提液，发酵方法采用农业废弃物对金耳进行固态发酵，为含多种生物活性物质的循环生物经济生产提供了参考，并为开发利用金耳人参发酵浸提液制备多种高价值健康产品提供了参考。
附图说明
图1：制备金耳人参抗氧化发酵浸提液的流程图。
图2：金耳菌丝固态发酵人参提取物的HPLC图。
具体实施方式
人参提取物的来源：购买自陕西天行健生物科技有限公司。
HPLC检测人参皂苷的方法：色谱仪器为安捷伦1260，色谱设备与条件是GP-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱温为30℃；进样量为10μL；流速为1mL·min-1；检测波长为203nm；梯度洗脱流动相为水(A)-乙腈(B)，其洗脱梯度为0～30min 30％B，30～45min 55％B，45～60min 70％B。
总抗氧化能力(ABTS法)：购自南京建成研究所的总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)。
过氧化氢酶活力：购自南京建成研究所的过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒测定样品的过氧化氢酶活力。
抑制羟自由基能力：购自南京建成研究所的羟自由基测试试剂盒测定样品的抑制羟自由基能力。
总氧自由基清除能力：参考文献中的总氧自由基清除能力的测定方法：魏春雨,朱道洋, 上官修蕾,余晓斌.不同酿酒酵母对黑果腺肋花楸酒成分的影响[J/OL].食品与发酵工业:1-9[2021-06-23]。
实施例1：
(1)一级种子液的制备：以金耳为发酵菌种，挑取5块黄豆大小的菌块加入50mLPDA液体培养基为种子液培养基，接种量5％(v/v)，24℃、160r/min培养5d，获得一级种子液。
(2)二级种子液的制备：以步骤(1)的一级种子液为发酵菌种，制备二级种子液，制备方法同步骤(1)中一级种子液的制备方法。
(3)固态发酵：将步骤(2)的二级种子液按15％(v/v)的接种量接种到15g固态发酵培养基中，固态发酵培养基的发酵基质为麸皮、大豆皮和玉米皮，麸皮、大豆皮和玉米皮质量比为1:1:1，人参提取物的投料量为0.05g/g发酵基质。在24-28℃、初始含水量50％的条件下静置培养8天。
(4)浸提：发酵结束后，发酵基质以1:8的比例用纯净水在室温下进行组织破碎。破碎液经30℃、200r/min加热匀浆20min，再经10000r/min离心30min得到抗氧化浸提液。
实施例2：
(1)一级种子液的制备：以金耳为发酵菌种，挑取5块黄豆大小的菌块加入50mLPDA液体培养基为种子液培养基，接种量20％(v/v)，28℃、200r/min培养7d，获得一级种子液。
(2)二级种子液的制备：以步骤(1)的一级种子液为发酵菌种，制备二级种子液，制备方法同步骤(1)中一级种子液的制备方法。
(3)固态发酵：将步骤(2)的二级种子液按25％(v/v)的接种量接种到25g固态发酵培养基中，固态发酵培养基的发酵基质为麸皮、大豆皮和玉米皮，麸皮、大豆皮和玉米皮质量比为1:1:1，人参提取物的投料量为0.2g/g发酵基质，在28℃、初始含水量70％的条件下静置培养15天。
(4)浸提：发酵结束后，发酵基质以1:11的比例用纯净水在室温下进行组织破碎。破碎液经90℃、300r/min加热匀浆45min，再经10000r/min离心30min得到抗氧化浸提液。
实施例3：
(1)一级种子液的制备：以金耳为发酵菌种，挑取5块黄豆大小的菌块加入50mLPDA液体培养基为种子液培养基，接种量10％(v/v)，25℃、180r/min培养7d，获得一级种子液。
(2)二级种子液的制备：以步骤(1)的一级种子液为发酵菌种，制备二级种子液，制备方法同步骤(1)中一级种子液的制备方法。
(3)固态发酵：将步骤(2)的二级种子液按20％(v/v)的接种量接种到20g固态发酵培养基中，固态发酵培养基的发酵基质为麸皮、大豆皮和玉米皮，麸皮、大豆皮和玉米皮质量比为1:1:1，人参提取物的投料量为0.1g/g发酵基质，在25℃、初始含水量60％的条件下静置培养10天。
(4)浸提：发酵结束后，发酵基质以1:10的比例用纯净水在室温下进行组织破碎。破碎液经60℃、300r/min加热匀浆30min，再经10000r/min离心30min得到抗氧化浸提液。
实施例4：
以实施例1为基础，仅调整不同的浸提方式并检测浸提液中的生物活性物质(图2)。结果如表1所示。当发酵后的发酵基质经破碎获得的破碎液在60℃、300r/min加热匀浆30min，再经10000r/min离心30min，得到的抗氧化浸提液的生物活性物质含量最高，且在相同浸提方式下相比未经发酵的发酵基质生物活性物质含量均显著增加。
表1：不同浸提方式的生物活性物质检测
表2
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种制备具有抗氧化能力的浸提液的方法，其特征在于，是利用金耳为发酵菌种与人参提取物混合固态发酵并对发酵基质进行浸提，所述固态发酵培养基含有人参提取物、发酵基质。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，先将金耳活化得到种子液，再转接至固态发酵培养基静置发酵后，将发酵基质破碎浸提获得浸提液。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述固态发酵是以麸皮、大豆皮、玉米皮为发酵基质，并添加人参提取物，利用金耳为发酵菌种。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，种子液的发酵条件为，将金耳以体积比5~25%的接种量接种至种子培养基，24-28℃、160-200r/min培养3-7d。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，固态发酵的条件为，将种子液按体积比15-25%的接种量接种到固态发酵培养基中，24-28℃静置培养8-15d。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，固态发酵结束后，向发酵基质中添加8~11倍体积的水后再进行破碎。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，破碎后的发酵基质经30-90℃、200-300r/min加热匀浆20-45min。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，固态发酵培养基中人参提取物的投料量为0.05-0.2g/g发酵基质。
9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，固态发酵培养基的初始含水量为50-70%。
10.权利要求1~9任一所述的方法制备得到的浸提液在制备食品、保健品或护肤品领域中的应用。
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