CN113355322B - 一种光热控制的dna折纸合成方法以及dna折纸在生理环境中的原位组装方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种光热控制的DNA折纸合成方法以及DNA折纸在生理环境中的原位组装方法,通过将合成DNA折纸的原料链与具备光热转化能力的硫化铜纳米粒子混合,采用980nm激光器以0.25~0.75W/cm2的功率密度照射1~6min形成局部高温,即可形成高产率正确组装的DNA折纸结构。本发明利用CuS纳米粒子介导近红外光热转换,产生局部热使溶液中的DNA折纸原料链热变性,打开其内部结构,在去除激光照射后随着溶液的自然冷却,DNA折纸会按照设定的结构组装。由于本发明使用的DNA折纸合成方法通过远程控制的光热效应实现,只会引起局部高温,因此还能进一步用于生理环境中的DNA折纸结构的原位组装。
Description
技术领域
本发明涉及DNA折纸合成领域,具体涉及一种光热控制的DNA折纸合成方法以及DNA折纸在生理环境中的原位组装方法。
背景技术
DNA折纸结构具有可编程性、空间寻址性和结构复杂性等独特优势,在生物传感、仿生、生物分子距离调节、生物成像和生物计算等生物医学领域受到广泛关注。因此,在生理环境中实现DNA折纸结构的原位组装是非常需要的。尽管如此,DNA折纸纳米结构通常由长的DNA单链支架和数百条短的DNA订书钉链组成,因此它们的组装需要一个热变性过程来打开不正确的二级结构(在动力学陷阱中)。这一过程包括在非生理温度(通常是90℃)下变性退火,这限制了在生命***中进行DNA折纸原位组装的可能性。近年来,在生理温度下合成DNA/RNA纳米结构的研究取得了很大进展。例如,单链DNA/RNA(ss-DNA/RNA)纳米结构已被设计用于自折叠甚至是协同转录折叠;类转录激活因子效应蛋白(TALEs)这样的DNA结合蛋白已被用来折叠双链DNA(ds-DNA)分子,使其形成特定的纳米结构;在噬菌体中,RNA模板反转录成ssDNA链,使得细胞内能够组装DNA Tile结构。然而,与DNA折纸结构相比,这些DNA/RNA纳米结构的设计性和复杂性仍然受到限制。
发明内容
本发明的目的是提供一种光热控制的DNA折纸合成方法以及DNA折纸在生理环境中的原位组装方法,从而解决现有技术无法在生理环境中实现DNA折纸结构的原位组装的问题。
根据本发明的第一方面,提供一种光热控制的DNA折纸合成方法,通过将合成DNA折纸的原料链与具备光热转化能力的硫化铜纳米粒子混合,采用980nm激光器以0.25~0.75W/cm2的功率密度照射1~6min形成局部高温,即可形成高产率的正确组装的DNA折纸结构。
最优选地,所述硫化铜纳米粒子的粒径大小为10nm,水合粒径为15nm。
最优选地,激光照射的功率密度为0.5W/cm2,照射时间为4min。
根据本发明的优选方案,所述DNA折纸结构可以是一维的六螺旋形,也可以是二维的方形、十字形、梭形、凹形,还可以是三维的四面体形等等。
根据本发明的一个优选方案,提供一种光热控制的DNA折纸合成方法,包括以下步骤:以二水氯化铜(CuCl2·2H2O)和硫代乙醇酸(TGA)为原材料混合反应,然后在悬浮液中逐滴加入氢氧化钠水溶液,调节溶液pH为9;加入硫代乙酰胺(TAA)水溶液,在60℃下反应2h,反应结束后,离心,用去离子水洗涤得到硫化铜纳米粒子;配置10×TAE-Mg2+缓冲溶液,其组成为:400mM Tris,20mM EDTA-NH2,125mM MgAc·4H2O,200mM HAc,pH 8.0;取适量10×TAE-Mg2+缓冲溶液,向其中加入所述硫化铜纳米粒子溶液;再向其中加入M13mp18 ss-DNA,以及DNA订书钉链,混合均匀,使用980nm激光器在0.25~0.75W/cm2的功率密度下照射1~6min,即可在硫化铜纳米粒子的光热效应下形成正确组装的DNA折纸结构。
根据本发明的一个特别优选方案,该光热控制的DNA折纸合成方法包括以下步骤:1)将二水氯化铜(CuCl2·2H2O,1mM,80mL)与硫代乙醇酸(TGA,12μL)混合反应10min,然后在悬浮液中逐滴加入氢氧化钠(NaOH,10mM)水溶液,调节溶液pH为9;2)加入硫代乙酰胺(TAA)水溶液(5mM,20mL),在60℃下反应2h,反应结束后,离心3次(15000r/min,10min),用去离子水洗涤得到硫化铜纳米粒子(CuS NPs);3)将三(羟甲基)氨基甲烷(Tris,48.46g)、乙二胺四乙酸(EDTA-NH2,7.4448g)、四水乙酸镁(MgAc·4H2O,26.806g)、乙酸(HAc,11.4mL)溶于去离子水(150mL)中配置10×TAE-Mg2+缓冲溶液(400mM Tris,20mM EDTA-NH2,125mM MgAc·4H2O,and 200mM HAc,pH 8.0,20μL);4)取3)中10×TAE-Mg2+缓冲溶液(10μL)溶于(2)中合成的硫化铜纳米粒子溶液中(24nM,80μL)中;5)取M13mp18 ss-DNA(100nM,2μL)溶于4)中混合溶液;6)取DNA订书钉链(250nM,8μL)溶于5)中混合溶液;7)将6)中混合溶液在1.5mL离心管中混合均匀,并使用980nm激光器在0.5W/cm2的功率密度下照射4分钟;8)缓慢降温到室温后,离心分离纯化后在使用前储存在4℃。
根据本发明的第二方面,提供一种光热控制的DNA折纸在生理环境中的原位组装方法,该方法包括:在细胞裂解液或细胞培养液中,通过将合成DNA折纸的原料链与具备光热转化能力的硫化铜纳米粒子混合,采用980nm激光器以0.25~0.75W/cm2的功率密度照射1~6min形成局部高温,即可实现在生理环境中DNA折纸结构的原位组装,所述生理环境包括细胞裂解液或细胞培养液。
其中,细胞裂解液中DNA折纸结构的原位组装方法包括:将HepG2细胞经胰蛋白酶处理后重悬于PBS溶液中,通过超声裂解和离心获得细胞裂解液,获得的细胞裂解液随后与合成DNA折纸所需DNA链以及硫化铜纳米粒子混合,形成悬浮液,然后以0.25~0.75W/cm2的功率密度用980nm激光局部照射混合物溶液1~6min,即可实现细胞裂解液中DNA折纸结构的原位组装。
根据本发明的一个优选方案,细胞裂解液中DNA折纸结构的原位组装方法包括:将HepG2细胞经胰蛋白酶处理后重悬于PBS溶液中,通过5分钟超声裂解和10分钟离心(10000r/min)获得细胞裂解液,获得的细胞裂解液随后与合成DNA折纸所需DNA链以及硫化铜纳米粒子混合,形成一个100μL的悬浮液,组分包括M13mp18 ss-DNA(2nM),订书钉链(20nM),1×TAE-Mg2+buffer(40mM Tris,2mM EDTA-NH2,12.5mM MgAc·4H2O,and 20mMHAc,pH 8.0),and CuS NPs(24nM),然后用980nm激光照射混合物溶液(0.5W/cm2,4min),采用1%琼脂糖凝胶在1×TAE-Mg2+缓冲液中进行DNA折纸分离,运行电压为100V,运行时间为1h,凝胶用gel red染色,紫外光引导琼脂糖凝胶割胶分离。通过AFM成像对切除的样品进行表征。
其中,细胞培养液中DNA折纸结构的原位组装方法包括:在原位组装前,将HepG2细胞接种于24孔板中,与DMEM一起培养20~28h,随后加入合成DNA折纸所需DNA链以及硫化铜纳米粒子得到混合溶液;然后以0.25~0.75W/cm2的功率用980nm激光局部照射混合物溶液1~6min,即可实现细胞培养液中DNA折纸结构的原位组装。
根据本发明的一个优选方案,细胞培养液中DNA折纸结构的原位组装方法包括:在原位组装前,将HepG2细胞接种于24孔板中,与DMEM一起培养24h,随后加入合成DNA折纸所需DNA链以及硫化铜纳米粒子得到一个500μL的混合溶液,组分包括M13mp18 ss-DNA(2nM),订书钉链(20nM),1×TAE-Mg2+buffer(40mM Tris,2mM EDTA-NH2,12.5mM MgAc·4H2O,and20mM HAc,pH 8.0),硫化铜纳米粒子(24nM);然后用980nm激光(0.5W/cm2,4min)局部照射混合溶液;另外无硫化铜或无激光照射的操作作为对照组,所提取得到的产物用AFM成像来表征。
应当理解的是,本发明中所涉及的DNA折纸的构造属于本领域现有技术,本发明的关键发明点不在于此,而重点在于利用CuS纳米粒子介导近红外光热转换,产生局部热使溶液中的DNA折纸准备链热变性,打开其内部结构,在去除激光照射后,随着溶液的自然冷却,DNA折纸会按照设定的结构进行组装。激光照射发生DNA折纸原料链的热变性在4分钟内即可完成,且正确组装的产率非常高,这也是本发明相对现有技术的优点所在。不仅如此,本发明使用的折纸合成方法是通过远程控制的光热效应实现的,只会引起局部的高温,因此能够进一步用于生理环境中的DNA折纸结构的原位组装。综上所述,本发明不仅提供了一种光热控制的DNA折纸合成方法,还提供了一种光热控制的DNA折纸在生理环境中的原位组装方法。
附图说明
图1为本发明制备的硫化铜纳米粒子的基本表征;
图2为本发明光热介导合成的三角形DNA折纸结构的AFM成像图;
图3为本发明光热介导合成的三角形DNA折纸结构的琼脂糖凝胶电泳图;
图4为本发明制备的硫化铜纳米粒子的光热效应;
图5为本发明链交换实验图;
图6为本发明金纳米介导的光热效应及其介导合成的三角形DNA折纸结构的AFM成像图;
图7为本发明不同功率密度和光照时间下光热介导合成的三角形DNA折纸结构的AFM成像图;
图8为本发明正对照组用的热孵育法合成的三角形DNA折纸结构的AFM成像图和面积分布;
图9为本发明0.25W/cm2,1~6min条件下光热介导合成的三角形DNA折纸结构的AFM成像图和面积分布;
图10为本发明0.5W/cm2,1~6min条件下光热介导合成的三角形DNA折纸结构的AFM成像图和面积分布;
图11为本发明0.75W/cm2,1~6min条件下光热介导合成的三角形DNA折纸结构的AFM成像图和面积分布;
图12为本发明不同功率密度和照射时间下正确折叠的三角形DNA折纸的产率的热图;
图13为本发明不同功率密度和照射时间下溶液温度热图;
图14为本发明设计的FRET对在三角形DNA折纸上的定点修饰示意图;
图15为本发明设计的FRET对在三角形DNA折纸上的定点修饰的具体的剖面图;
图16为本发明光热介导合成的FRET对修饰的三角形DNA折纸结构的单分子成像图;
图17为本发明光热介导合成的FRET对修饰的三角形DNA折纸结构的单分子成像定量图;
图18为本发明光热介导合成的FRET对修饰的三角形DNA折纸结构的荧光成像图;
图19为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构的动态组装荧光即时成像图;
图20为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构的动态组装过程的AFM成像图;
图21为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构的动态组装过程的琼脂糖凝胶电泳图;
图22为本发明设计的梭形折纸结构的剖面图;
图23为本发明设计的凹形折纸结构的剖面图;
图24为本发明光热介导合成的6种不同DNA折纸结构的AFM成像图和琼脂糖凝胶电泳图;
图25为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构在细胞裂解液中原位合成的示意图;
图26为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构在细胞裂解液中原位合成的AFM成像图;
图27为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构在细胞裂解液中原位合成的琼脂糖凝胶电泳图;
图28为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构在细胞培养液中原位合成的示意图;
图29为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构在细胞培养液中原位合成的AFM成像图;
图30为本发明光热介导的三角形DNA折纸结构在细胞培养液中原位合成后细胞死活染色图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明进行详细说明。
实施例1 DNA折纸结构的合成
1.硫化铜纳米粒子溶液的制备:
将二水氯化铜(CuCl2·2H2O,1mM,80mL)与硫代乙醇酸(TGA,12μL)混合反应10min,然后在悬浮液中逐滴加入氢氧化钠(NaOH,10mM)水溶液,调节溶液pH为9;加入硫代乙酰胺(TAA)水溶液(5mM,20mL),在60℃下反应2h。反应结束后,离心3次(15000r/min,10min),用去离子水洗涤得到硫化铜纳米粒子(CuS NPs)。
如图1所示,TEM结果显示合成的硫化铜纳米形态均匀尺寸约为10nm;DLS结果显示合成的硫化铜纳米材料水合粒径约为15nm;XRD验证了硫化铜纳米材料成功合成;UV-VIR-NIR光谱结果显示合成的硫化铜纳米材料在红外区域有很强的吸收,具有非常好的光热转化前景。
2.DNA折纸的原位组装:
将三(羟甲基)氨基甲烷(Tris,48.46g)、乙二胺四乙酸(EDTA-NH2,7.4448g)、四水乙酸镁(MgAc·4H2O,26.806g)、乙酸(HAc,11.4mL)溶于去离子水(150mL)中配置10×TAE-Mg2+缓冲溶液(400mM Tris,20mM EDTA-NH2,125mM MgAc·4H2O,and 200mM HAc,pH 8.0,20μL);
取10×TAE-Mg2+缓冲溶液(10μL)溶于硫化铜纳米粒子溶液中(24nM,80μL)中,取M13mp18 ss-DNA(100nM,2μL)溶于其中;取DNA订书钉链(250nM,8μL)加入;将混合溶液在1.5mL离心管中混合均匀,并使用980nm激光器在0.5W/cm2的功率密度下照射4分钟;缓慢降温到室温后,离心分离纯化后在使用前储存在4℃。其中所使用的DNA订书钉链可参考文献(Rothemund,P.W.K.Folding DNA to create nanoscale shapes and patterns.Nature2006,440(7082),297-302.)。
如图2、3所示,AFM成像和琼脂糖凝胶电泳图结果证明了硫化铜的光热效应成功实现了三角折纸结构的正确组装。
如图4-6所示,热成像、链交换实验和AFM成像共同证明了在近红外区域具有较强光热转化效果的硫化铜可以产生局部高温,能够打开折纸原料链的二级结构,实现DNA折纸的组装。而在近红外区域的光热转化效果较差的金纳米只能产生较低的温度,无法实现DNA折纸的组装。说明折纸的组装是靠热效应完成的,而非纳米材料本身。
实施例2 DNA折纸合成效率的优化
本实施例2是在实施例1的基础上对上述硫化铜的光热效应介导的DNA折纸合成方法使用的980nm激光器的功率密度和照射时间进行调整以期获得最佳合成效率,其中,功率密度分别采用了0.25W/cm2,0.50W/cm2,0.75W/cm2,照射时间分别采用了1min,2min,3min,4min,5min,6min。
如图7-13所示,AFM成像图和热图显示激光功率密度为0.50W/cm2,光照时间为4分钟是一个临界的条件,这个条件折纸合成产率大于80%。超过这个功率密度和照射时间,折纸的合成产率并无明显增加,而低于这个功率密度和照射时间,折纸合成产率大大降低。因此本发明以(0.5W/cm2,4min)作为最佳的合成条件用于后续研究。
实施例3 DNA折纸合成动态组装过程的研究
我们把合成三角形DNA折纸中用到的A43,B43,C43标记上5’-Cy3(Cy3-ACTAGAAATATATAACTATATGTACGCTGAGA;Cy3-CACGCATAAGAAAGGAACAACTAAGTCTTTCC;Cy3-ACGTTGTATTCCGGCACCGCTTCTGGCGCATC)。A43,B43,C43标记上3’-Cy5(TCAATAATAGGGCTTAATTGAGAATCATAATT-Cy5;ATTGTGTCTCAGCAGCGAAAGACACCATCGCC-Cy5;CCAGGGTGGCTCGAATTCGTAATCCAGTCACG-Cy5)用以研究DNA折纸的动态组装过程。
如图14-21所示,单分子TIRF成像图、荧光成像图、AFM成像图和琼脂糖凝胶电泳图共同反映了DNA折纸的动态组装过程。在激光照射的4分钟内,折纸并未形成,此时局部高温帮助DNA折纸原料链的热变性打开其错误的内部结构;自然冷却的4分钟内,折纸开始慢慢组装;冷却4分钟后,DNA折纸组装基本结束,我们可以见到高产率的正确组装的三角形DNA折纸结构。
实施例4 合成不同DNA折纸结构的普适性研究
除了三角形DNA折纸结构,我们还设计了六螺旋(一维)、方形(二维)、十字形(二维)、梭形(二维)、凹形(二维)和四面体(三维)等6种不同折纸结构用于研究硫化铜光热效应介导的DNA折纸合成方法的普适性,应当理解的是,这些不同形状的DNA折纸结构的设计对于本领域技术人员来说通过常规技术手段即可实现,这些不同形状的DNA折纸结构的设计并不属于本发明的创新点所在,因此本文不再赘述。
如图22-24所示,AFM成像图和琼脂糖凝胶电泳图共同证明了硫化铜光热效应介导的DNA折纸合成方法具有普适性。
实施例5 硫化铜光热效应介导的DNA折纸在细胞环境中的原位合成
1.细胞裂解液中DNA折纸结构的原位组装方法
将HepG2细胞经胰蛋白酶处理后重悬于PBS溶液中,通过5分钟超声裂解和10分钟离心(10000r/min)获得细胞裂解液,获得的细胞裂解液随后与合成DNA折纸所需DNA链以及硫化铜纳米粒子混合,形成一个100μL的悬浮液,组分包括M13mp18 ss-DNA(2nM),订书钉链(20nM),1×TAE-Mg2+buffer(40mM Tris,2mM EDTA-NH2,12.5mM MgAc·4H2O,and 20mMHAc,pH 8.0),and CuS NPs(24nM),然后用980nm激光照射混合物溶液(0.5W/cm2,4min),采用1%琼脂糖凝胶在1×TAE-Mg2+缓冲液中进行DNA折纸分离,运行电压为100V,运行时间为1h,凝胶用gel red染色,紫外光引导琼脂糖凝胶割胶分离。通过AFM成像对切除的样品进行表征。
2.细胞培养液中DNA折纸结构的原位组装方法
在原位组装前,将HepG2细胞接种于24孔板中,与DMEM一起培养24h,随后加入合成DNA折纸所需DNA链以及硫化铜纳米粒子得到一个500μL的混合溶液,组分包括M13mp18 ss-DNA(2nM),订书钉链(20nM),1×TAE-Mg2+buffer(40mM Tris,2mM EDTA-NH2,12.5mM MgAc·4H2O,and 20mM HAc,pH 8.0),硫化铜纳米粒子(24nM);然后用980nm激光(0.5W/cm2,4min)局部照射混合溶液;另外无硫化铜或无激光照射的操作作为对照组,所提取得到的产物用AFM成像来表征。
如图25-27所示,AFM成像图和琼脂糖凝胶电泳图共同证明了硫化铜光热效应可以实现DNA折纸在细胞裂解液中的原位合成。
如图28-30所示,AFM成像图和细胞死活实验证明了硫化铜光热效应可以实现DNA折纸在细胞培养液中的原位合成,且这种合成方法只会诱发局部的细胞损伤,对整体的生理环境都是比较安全的。
以上所述的,仅为本发明的较佳实施例,并非用以限定本发明的范围,本发明的上述实施例还可以做出各种变化。凡是依据本发明申请的权利要求书及说明书内容所作的简单、等效变化与修饰,皆落入本发明专利的权利要求保护范围。本发明未详尽描述的均为常规技术内容。
Claims (9)
1. 一种光热控制的DNA折纸合成方法,其特征在于,通过将合成DNA折纸的原料链与具备光热转化能力的硫化铜纳米粒子混合,采用980nm激光器以0.5~0.75 W/cm2的功率密度照射4~6 min形成局部高温,即可形成高产率的正确组装的DNA折纸结构;所述DNA折纸合成方法具体包括以下步骤:
S1:制备硫化铜纳米粒子:以二水氯化铜和硫代乙醇酸为原材料混合反应,然后在悬浮液中逐滴加入氢氧化钠水溶液,调节溶液pH为8~9;向其中加入硫代乙酰胺水溶液,在58~62℃下反应1.5~2.5h,反应结束后,离心,用去离子水洗涤得到硫化铜纳米粒子溶液;
S2:配制10× TAE-Mg2+缓冲溶液,取适量10× TAE-Mg2+缓冲溶液,向其中加入所述硫化铜纳米粒子溶液;
S3:向步骤S2所得溶液中加入M13mp18 ss-DNA,以及DNA订书钉链,混合均匀,使用980nm激光器在0.5~0.75 W/cm2的功率密度下照射4~6 min,即可在硫化铜纳米粒子的光热效应下形成正确组装的DNA折纸结构。
2. 根据权利要求1所述的DNA折纸合成方法,其特征在于,所述硫化铜纳米粒子的粒径大小为10 nm,水合粒径为15 nm。
3. 根据权利要求1所述的DNA折纸合成方法,其特征在于,激光照射的功率密度为0.5W/cm2,照射时间为4 min。
4.根据权利要求1所述的DNA折纸合成方法,其特征在于,所述DNA折纸结构包括:一维的六螺旋形,二维的方形、十字形、梭形、凹形,以及三维的四面体形。
5.根据权利要求1所述的DNA折纸合成方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)取80 mL,1 mM的二水氯化铜与12 μL硫代乙醇酸混合反应10 min,然后在悬浮液中逐滴加入10 mM氢氧化钠水溶液,调节溶液pH为9;
2)加入20 mL,5 mM的硫代乙酰胺水溶液,在60℃下反应2 h,反应结束后,15000 r/min,10 min离心3次,用去离子水洗涤得到硫化铜纳米粒子;
3)配制10× TAE-Mg2+缓冲溶液,其组成为400 mM Tris, 20 mM EDTA-NH2, 125 mMMgAc·4H2O, and 200 mM HAc, pH 8.0, 20 μL;
4)取步骤3)中10 μL 10× TAE-Mg2+缓冲溶液溶于步骤2)中合成的80 μL,24 nM硫化铜纳米粒子溶液中;
5)取2 μL,100 nM M13mp18 ss-DNA ,溶于步骤4)中的混合溶液;
6)取8 μL,250 nM DNA订书钉链溶于步骤5)中的混合溶液;
7)将步骤6)中混合溶液在1.5 mL离心管中混合均匀,并使用980nm激光器在0.5W/cm2的功率密度下照射4分钟;
8)缓慢降温到室温后,离心分离纯化后在使用前储存在4℃。
6. 根据权利要求1所述的DNA折纸合成方法,其特征在于,在细胞裂解液或细胞培养液中,通过将合成DNA折纸的原料链与具备光热转化能力的硫化铜纳米粒子混合,采用980nm激光器以0.5~0.75 W/cm2的功率密度照射4~6 min形成局部高温,即可实现在生理环境中DNA折纸结构的原位组装,所述生理环境包括细胞裂解液或细胞培养液。
7. 根据权利要求6所述的方法,其特征在于,细胞裂解液中DNA折纸结构的原位组装方法包括:将HepG2细胞经胰蛋白酶处理后重悬于PBS溶液中,通过超声裂解和离心获得细胞裂解液,获得的细胞裂解液随后与合成DNA折纸所需DNA链以及硫化铜纳米粒子混合,形成悬浮液,然后以0.5~0.75 W/cm2的功率密度用980 nm激光局部照射混合物溶液4~6 min,即可实现细胞裂解液中DNA折纸结构的原位组装。
8. 根据权利要求6所述的方法,其特征在于,细胞培养液中DNA折纸结构的原位组装方法包括:在原位组装前,将HepG2细胞接种于24孔板中,与DMEM一起培养20~28 h,随后加入合成DNA折纸所需DNA链以及硫化铜纳米粒子得到混合溶液;然后以0.5~0.75 W/cm2的功率密度用980 nm激光局部照射混合物溶液4~6 min,即可实现细胞培养液中DNA折纸结构的原位组装。
9. 根据权利要求7或8所述的方法,其特征在于,DNA折纸结构原位组装完成后,采用1%琼脂糖凝胶在1×TAE-Mg2+缓冲液中进行DNA折纸分离,运行电压为100 V,运行时间为1 h,凝胶用gel red染色,紫外光引导琼脂糖凝胶割胶分离,所提取得到的产物用AFM成像来表征。
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