CN113337410A - 一种防治百香果黑斑病的药剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种防治百香果黑斑病的药剂及其制备方法,所述的药剂由壳聚糖、海藻酸钠、海洋酵母R.paludigenum、精氨酸和甘油制备而得,为涂膜液,使用时涂膜于百香果果实表面即可。本发明的药剂采用天然产物制备而得,不会产生残留造成污染,也不会对人体产生危害,同时还添加了海洋酵母R.paludigenum抑制病原菌链格孢菌的生长,添加精氨酸促进该拮抗酵母分泌几丁质酶的活力,从而增强药剂对病原菌的抑制作用,更好的防治百香果黑斑病。
Description
技术领域
本发明属于水果保鲜技术领域,特别涉及一种防治百香果黑斑病的药剂及其制备方法。
背景技术
百香果果实酸甜可口,风味浓郁,芳香怡人,制成果汁或饮料,很受消费者的欢迎。百香果黑斑病又称褐斑病,主要为害果实和叶片。果实发病,初生暗绿色、水渍状病斑,后扩展为圆形、近圆形、或不规则形稍凹陷的病斑,病斑黑褐色或褐色。病果最终干缩,大部分脱落,病叶也大部分干枯脱落,不仅影响果实的味道,同时果实外观难看,难以销售;甚至影响果实采摘后的贮存与运输,造成很大的经济损失。
目前防治百香果黑斑病的主要措施为在幼果期至成熟期用药,大部分为化学药剂,但是频繁使用化学药剂容易使病原菌产生抗药性,导致药效越来越差;另外化学药剂不易分解,残留在土壤和果实表面,造成百香果产品上的农药残留严重超标,危害人体健康,造成环境污染。
发明内容
针对上述问题,本发明提供一种防治百香果黑斑病的药剂及其制备方法,可以有效的防治百香果黑斑病扩散,降低药剂对环境和果实的污染。
本发明是通过以下技术方案实现的:
一种防治百香果黑斑病的药剂,由以下重量份数比组分组成:壳聚糖10~14份、海藻酸钠5~7份、海洋酵母R.paludigenum、精氨酸、甘油8~10份。
所述的防治百香果黑斑病药剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)称取2~14份壳聚糖溶解于1%(v/v)的醋酸中,加入1~7份海藻酸钠和8~10份甘油,在80℃下搅拌混合1h,放入超声清洗机进行消泡,得到膜液;
(2)将海洋酵母R.paludigenum在NYDA斜面培养基中进行活化,划线接种后置于培养箱中28℃培养48h,重复传代两次,得到活化的酵母菌;将活化的酵母菌用接种环接入NYDB种子培养基中,在200rpm、28℃条件下培养24h至浓度为1×108cells/mL,得到菌液;
(3)按照膜液:菌液:精氨酸=(10~12):(0.5~1):(0.05~0.2)的体积比,将三者混合均匀成粘稠状,即得到防治百香果黑斑病的药剂。
本发明的的药剂为涂抹剂,使用时将药剂在百香果果实表面进行涂膜,常温下晾干后即可成膜覆盖在果实表面,从而对百香果果实进行保护。本发明以壳聚糖、海藻酸钠制备成涂膜药剂,两者均为天然产物,可以食用且不会对人体产生危害,涂膜成膜后可以减缓果实的呼吸作用,减缓果实腐败,另一方面壳聚糖具有抑菌作用,可以抑制链格孢菌的生长,从而减少黑斑病的产生。在涂膜液中加入海洋酵母R.paludigenum,利用海洋酵母R.paludigenum的拮抗作用,与病原菌开展营养和空间竞争,从而达到抑菌的作用。同时,以壳聚糖膜液为基质负载海洋酵母R.paludigenum,不仅为海洋酵母R.paludigenum提供了很大的生长空间,同时海洋酵母R.paludigenum能以壳聚糖、海藻酸钠为生长原料进行生长,从而在细胞内积累更高水平的海藻糖,促进几丁质酶的分泌,该酶可以水解真菌细胞壁,从而显著增强拮抗效力。添加精氨酸可以从今分泌几丁质酶的活性,从而更好的抑制病原菌链格孢菌的生长,进而避免黑斑病的发生。
作为本发明的进一步改进,所述的NYDA培养基的组分如下:葡萄糖10g、牛肉浸膏8g、酵母粉5g,定容至1000mL蒸馏水中,然后在121℃下灭菌20min,即得。
作为本发明的进一步改进,所述的精氨酸的浓度为100~400μmol/L。
作为本发明的进一步改进,所述的壳聚糖脱乙酰度为90%,分子量为200~500kDa,浓度为0.2%(w/v)。
本发明的有益效果如下:
1、本发明以天然产物制备涂膜药剂用于防治百香果黑斑病,药剂天然无害不会产生残留和污染,使百香果保鲜得到了安全保障。
2、本发明的药剂添加海洋酵母R.paludigenum抑制病原菌链格孢菌的生长,从而避免黑斑病的产生,酵母分泌的几丁质酶可以分解真菌细胞壁,但是对人体和百香果果实有益,进一步提高了本发明药剂的安全性。
3、本发明的的药剂可以为海洋酵母R.paludigenum提供营养,促进其分泌几丁质酶,添加精氨酸进一步提高分泌的几丁质酶的活性,从而更好的抑制病原菌的生长,达到更好的防治黑斑病的效果,精氨酸是人体、海洋酵母R.paludigenum生长的必须氨基酸,无毒无害,也不会污染环境,进一步提高了本发明药剂的安全性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
一种防治百香果黑斑病的药剂,由以下组分组成:壳聚糖、海藻酸钠、海洋酵母R.paludigenum、精氨酸和甘油。
所述的防治百香果黑斑病药剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)称取10份壳聚糖溶解于1%(v/v)的醋酸中,加入5份海藻酸钠和8份甘油,在80℃下搅拌混合1h,放入超声清洗机进行消泡,得到膜液;
(2)将海洋酵母R.paludigenum在NYDA斜面培养基中进行活化,划线接种后置于培养箱中28℃培养48h,重复传代两次,得到活化的酵母菌;将活化的酵母菌用接种环接入NYDB种子培养基中,在200rpm、28℃条件下培养24h至浓度为1×108cells/mL,得到菌液;
所述的NYDA培养基的组分如下:葡萄糖10g、牛肉浸膏8g、酵母粉5g,定容至1000mL蒸馏水中,然后在121℃下灭菌20min,即得;
(3)按照膜液:菌液:精氨酸=12:1:0.2的体积比,将三者混合均匀成粘稠状,即得到防治百香果黑斑病的药剂。
所述的精氨酸的浓度为400μmol/L。
所述的壳聚糖脱乙酰度为90%,分子量为500kDa,浓度为0.2%(w/v)。
实施例2
一种防治百香果黑斑病的药剂,由以下组分组成:壳聚糖、海藻酸钠、海洋酵母R.paludigenum、精氨酸和甘油。
所述的防治百香果黑斑病药剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)称取14份壳聚糖溶解于1%(v/v)的醋酸中,加入7份海藻酸钠和10份甘油,在80℃下搅拌混合1h,放入超声清洗机进行消泡,得到膜液;
(2)将海洋酵母R.paludigenum在NYDA斜面培养基中进行活化,划线接种后置于培养箱中28℃培养48h,重复传代两次,得到活化的酵母菌;将活化的酵母菌用接种环接入NYDB种子培养基中,在200rpm、28℃条件下培养24h至浓度为1×108cells/mL,得到菌液;
所述的NYDA培养基的组分如下:葡萄糖10g、牛肉浸膏8g、酵母粉5g,定容至1000mL蒸馏水中,然后在121℃下灭菌20min,即得;
(3)按照膜液:菌液:精氨酸=10:0.5:0.05的体积比,将三者混合均匀成粘稠状,即得到防治百香果黑斑病的药剂。
所述的精氨酸的浓度为100μmol/L。
所述的壳聚糖脱乙酰度为90%,分子量为200kDa,浓度为0.2%(w/v)。
实施例3
一种防治百香果黑斑病的药剂,由以下组分组成:壳聚糖、海藻酸钠、海洋酵母R.paludigenum、精氨酸和甘油。
所述的防治百香果黑斑病药剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)称取12份壳聚糖溶解于1%(v/v)的醋酸中,加入6份海藻酸钠和9份甘油,在80℃下搅拌混合1h,放入超声清洗机进行消泡,得到膜液;
(2)将海洋酵母R.paludigenum在NYDA斜面培养基中进行活化,划线接种后置于培养箱中28℃培养48h,重复传代两次,得到活化的酵母菌;将活化的酵母菌用接种环接入NYDB种子培养基中,在200rpm、28℃条件下培养24h至浓度为1×108cells/mL,得到菌液;
所述的NYDA培养基的组分如下:葡萄糖10g、牛肉浸膏8g、酵母粉5g,定容至1000mL蒸馏水中,然后在121℃下灭菌20min,即得;
(3)按照膜液:菌液:精氨酸=11:0.8:0.1的体积比,将三者混合均匀成粘稠状,即得到防治百香果黑斑病的药剂。
所述的精氨酸的浓度为250μmol/L。
所述的壳聚糖脱乙酰度为90%,分子量为300kDa,浓度为0.2%(w/v)。
应用例1
1.抑菌试验
选取刚刚长有黑斑病的百香果20个随机分成4组,每组5个,其中三组分别使用实施例1~3制备的药剂进行涂膜,另外一组用市售的75%百菌清WP1000倍液喷洒,处理完的百香果自然晾干,放置于恒温恒湿培养箱中(无包装),温度设置为25±1℃、相对湿度设置为70%~80%;每3天取一次样,测定黑斑病的发病斑圈的大小(取平均值),至第15天结束,测定结果见表1。
表1百香果抑菌试验结果
由表1数据可知,使用本发明制备的药剂处理百香果,可以有效的抑制黑斑病的持续扩散。
2.保鲜试验
选取成熟度较为一致的百香果随机分成5个处理组,每组5个百香果,其中3个处理组分别使用实施例1~3制备的药剂进行涂膜,另外一组用市售的75%百菌清WP1000倍液喷洒,最后一组采用生理盐水进行喷洒作为对照;处理完的百香果自然晾干,称重并记录数据,然后放置于恒温恒湿培养箱中(无包装),温度设置为25±1℃、相对湿度设置为70%~80%;每3天取一次样,测定皱缩指数和失重率,至第15天结束。
皱缩指数:每次观察5个百香果皱缩面积,通过对比确定其皱缩度。皱缩度按等级分类可分为5个等级(0:无皱缩;1:0%~25%皱缩;2:25%~50%皱缩;3:50%~75%皱缩;4:75%~100%皱缩)。
计算公式为:皱缩指数=(Σ皱缩度×该程度百香果个数)/百香果总数。
失重率:分别称重待测百香果样品贮藏前的质量(M0)与贮藏一段时间后的质量(M1)。
按下式计算:失重率(%)=[(M0—M1)/M0]×100式中:M0、M1分别为百香果贮藏前、后的质量(单位g)。
最终结果见表2。
表2百香果保鲜处理结果
由表1数据可以,使用本发明制备的药剂对百香果进行保鲜具有很好的效果,相比于使用市售的药剂,使用本发明制备的药剂后,百香果的皱缩指数和失重率明显下降,可见本发明制备的药剂对百香果保鲜具有很好的效果。
以上实施例仅为本发明的示例性实施例,不用于限制本发明,本发明的保护范围由权利要求书限定。本领域人员可以在本发明的实质和保护范围内,对本发明做出各种修改或等同替换,这种修改或等同替换也应视为落在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种防治百香果黑斑病的药剂,其特征在于,由以下重量份数比组分组成:壳聚糖10~14份、海藻酸钠5~7份、海洋酵母R.paludigenum、精氨酸、甘油8~10份。
2.根据权利要求1所述的防治百香果黑斑病药剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)称取10~14份壳聚糖溶解于1%(v/v)的醋酸中,加入5~7份海藻酸钠和8~10份甘油,在80℃下搅拌混合1h,放入超声清洗机进行消泡,得到膜液;
(2)将海洋酵母R.paludigenum在NYDA斜面培养基中进行活化,划线接种后置于培养箱中28℃培养48h,重复传代两次,得到活化的酵母菌;将活化的酵母菌用接种环接入NYDB种子培养基中,在200rpm、28℃条件下培养24h至浓度为1×108cells/mL,得到菌液;
(3)按照膜液:菌液:精氨酸=(10~12):(0.5~1):(0.05~0.2)的体积比,将三者混合均匀成粘稠状,即得到防治百香果黑斑病的药剂。
3.根据权利要求2所述的防治百香果黑斑病药剂的制备方法,其特征在于:所述的NYDA培养基的组分如下:葡萄糖10g、牛肉浸膏8g、酵母粉5g,定容至1000mL蒸馏水中,然后在121℃下灭菌20min,即得。
4.根据权利要求2所述的防治百香果黑斑病药剂的制备方法,其特征在于:所述的精氨酸的浓度为100~400μmol/L。
5.根据权利要求2所述的防治百香果黑斑病药剂的制备方法,其特征在于:所述的壳聚糖脱乙酰度为90%,分子量为200~500kDa,浓度为0.2%(w/v)。
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