CN113273613A - sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明公布了一种sn‑2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物及其制备方法与用途，所述组合物中的不饱和脂肪酸包括油酸、亚油酸、二十二碳六烯酸和花生四烯酸；所述组合物中sn‑2位油酸的含量为2.5‑30wt％，sn‑2位亚油酸的含量为2.5‑30wt％，sn‑2位二十二碳六烯酸的含量为0.075‑10wt％，sn‑2位花生四烯酸的含量为0.075‑10wt％。本发明根据母乳脂肪中sn‑2位不饱和脂肪酸的整体富集特点和营养学特征，针对sn‑2位不饱和脂肪酸的组成研究一种功能性结构脂组合物，对sn‑2长链不饱和脂肪酸进行组合优化，不但接近母乳组成，提高了不饱和脂肪酸的抗氧化性，且更加具有营养学优势，提高了生物利用率，能更好的发挥不饱和脂肪酸的生理功效。

Description

sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物及其制备方法与用途

技术领域

本发明属于食品技术领域，具体涉及一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物及其制备方法与用途。

背景技术

婴幼儿配方奶粉用油的母乳化是近年的研究热点。为使婴幼儿配方奶粉中脂肪酸的含量和位置分布接近于人乳脂肪，很多研究集中于母乳脂肪类似物的研究，母乳化结构油脂是一种模仿母乳中脂肪酸组成和位置分布，添加于婴儿配方奶粉的甘油三酯混合物，是采用现代酶技术对油脂进行改性，改变普通婴幼儿配方奶粉植物油中棕榈酸的位置，使之大量被酯化到甘油碳链的sn-2位，并将其与富含不饱和脂肪酸的植物油混合，生产出棕榈酸结构与含量接近母乳的新型婴幼儿配方奶粉。

碳链越长的脂肪酸越难吸收，饱和脂肪酸较不饱和脂肪酸难吸收，因为长碳链脂肪酸和饱和脂肪酸的熔点较高，乳化程度较低，难以被小肠绒毛细胞吸收。然而脂肪酸通常是被酯化在甘油中以甘油三酯(TAG)的形式被吸收，因此甘油三酯中脂肪酸的不饱和度和位置分布对其消化吸收具有重要影响。

脂质在人体内的消化为胰脂肪酶特异水解甘油三酯1、3位酯键，生成2-单甘酯及游离脂肪酸，单甘酯能被肠道上皮细胞完整吸收并进入淋巴细胞，部分进入血液发挥抗菌抗病毒作用。脂肪在体内吸收过程中，单甘酯途径起主导作用。单甘酯即甘油一酯(Monoacylglycerols，MAGs)，是一类同时含有亲水基团和疏水基团的化合物，是一种非离子型乳化剂，被广泛应用于食品、医药及相关行业中。研究表明，长碳链脂肪酸位于甘油骨架2位的单甘酯在人体中的吸收利用率显著高于其位于1，3位的吸收利用率，2-单甘酯是人体内主要的吸收途径，如DHA-2-MAG是DHA位于sn-2位的TAG在体内的消化产物，对于婴幼儿，2-MAG型DHA可更好地被吸收和利用。

事实上，大量母乳的检测数据表明，母乳中10-15％的油酸和亚油酸都被酯化在sn-2位，另一个显著特点是对婴幼儿成长发育至关重要的LC-PUFA，如二十碳四烯酸(arachidonic acid，C20∶4n-6，ARA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，C22∶6n-3，DHA)也有相当大的比例位于甘油三酯的sn-2位，且2位DHA也具有富集效应，47-81％的DHA位于2位，其波动范围因母亲的生长环境和饮食差异而异。

营养学研究结果表明，含有长链不饱和脂肪酸的2-MAGs多具有类似的生理活性，如油酸-2-MAGs具有抗氧化和抗动脉硬化的作用；DHA的2-MAGs对心血管疾病有预防和治疗作用，在治疗慢性炎症、结肠直肠癌等方面均有效果；ARA的2-MAGs是一种内源性脂质信号分子，在免疫***、心血管***及中枢神经***中发挥着众多生理功能，如调节食欲、减轻疼痛、缓解炎症、治疗肥胖症等。

此外，将DHA分布在甘油骨架sn-2位上比其分布在sn-1，3位上的氧化稳定性好，这是因为空间位阻的保护作用，位于甘油骨架sn-1，3位的其他脂肪酸分子的隔断效应，比如饱和脂肪酸分子，分子内无不饱和双键，稳定性好，减少了氧分子与sn-2位上DHA接触机会，这从根本上提高了DHA的氧化稳定性。因此长链不饱和脂肪酸位于sn-2位具有构效上的突出优势，不但空间位阻小，而且具有较高的氧化稳定性。

因此，综合母乳研究数据、营养学研究结果和构效关系，富含长链不饱和脂肪酸的2-MAG可作为新型的长链不饱和脂肪酸的摄入形式，并具有其独特的生理优势。

有别于已有婴配奶粉用油，考虑到长链不饱和脂肪酸在人体内的吸收利用特点和营养学功效，综合考虑母乳脂肪中长链不饱和脂肪酸在sn-2位的分布特征，本发明在母乳数据的基础上优化并改良了sn-2位油酸、亚油酸、ARA和DHA的配比，使sn-2位这四种不饱和脂肪酸的协同优势在提高吸收利用率、缓解炎症和减少脂肪积累方面更为突出。

中国发明专利CN103725721B公开了一种富含二十二碳六烯酸的结构油脂，该结构油脂中，在sn-1,3位的二十二碳六烯酸占总脂肪酸的40％(重量)以上，在sn-2位的棕榈酸占总棕榈酸的50％(重量)以上。对比文件中还提供上述结构油脂的一种制备方法。对比文件的结构油脂富含二十二碳六烯酸，其sn-1,3位的二十二碳六烯酸和sn-2位的棕榈酸均容易被人体消化吸收，在提供sn-2位棕榈酸的同时补充二十二碳六烯酸，符合脂肪的母乳化方向，可用于婴幼儿配方食品中以及其他需要补充DHA的食品或保健品中。上述对比文件中DHA都是分布在甘油骨架两端位置的sn-1,3位上，DHA的氧化稳定性不佳，易氧化，使DHA的生物利用率低，人体不能充分利用DHA优异的生理功能。

将DHA分布在甘油骨架sn-2位上比其分布在sn-1，3位上氧化稳定性好，这是因为空间位阻的保护作用，位于甘油骨架sn-1，3位的其他脂肪酸分子的隔断效应，比如饱和脂肪酸分子，分子内无不饱和双键，稳定性好，减少了氧分子与sn-2位上DHA的接触机会，这从根本上提高了DHA的氧化稳定性。

发明内容

为了克服现有技术中的问题，本发明提供一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物及其制备方法与用途，根据母乳脂肪中sn-2位不饱和脂肪酸的整体富集特点和营养学特征，针对sn-2位不饱和脂肪酸的组成研究一种功能性结构脂组合物，组合物中具体包括油酸、亚油酸、二十二碳六烯酸和花生四烯酸以及sn-2位油酸、sn-2位亚油酸、sn-2位二十二碳六烯酸和sn-2位花生四烯酸，对sn-2长链不饱和脂肪酸进行组合优化，不但更加接近母乳，极大提高了不饱和脂肪酸的抗氧化性，且更加具有营养学优势，极大的提高了生物利用率，且能够更好的发挥不饱和脂肪酸的生理功效。

为了实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

本发明第一方面提供一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，所述组合物包括甘油三酯，所述甘油三酯中的不饱和脂肪酸包括油酸、亚油酸、二十二碳六烯酸和花生四烯酸；

所述组合物中sn-2位油酸的含量为2.5-30wt％，sn-2位亚油酸的含量为2.5-30wt％，sn-2位二十二碳六烯酸的含量为0.075-10wt％，sn-2位花生四烯酸的含量为0.075-10wt％。

在一个优选的实施方案中，所述组合物中sn-2位油酸的含量为2.5-20wt％，sn-2位亚油酸的含量为2.5-20wt％，sn-2位二十二碳六烯酸的含量为0.075-3wt％，sn-2位花生四烯酸的含量为0.075-6wt％。

在一个优选的实施方案中，所述组合物中：

sn-2位油酸与sn-2位亚油酸的含量之和为5-40wt％，且sn-2位二十二碳六烯酸与sn-2位花生四烯酸的含量之和为0.15-20wt％。

在一个优选的实施方案中，所述组合物中：

sn-2位油酸与sn-2位亚油酸的含量之和为15-40wt％，且sn-2位二十二碳六烯酸与sn-2位花生四烯酸的含量之和为0.15-10wt％。

在一个优选的实施方案中，所述组合物中sn-2位油酸、sn-2位亚油酸、sn-2位二十二碳六烯酸和sn-2位花生四烯酸的含量之和为10-40wt％。

在一个优选的实施方案中，所述组合物中sn-2位油酸、sn-2位亚油酸、sn-2位二十二碳六烯酸和sn-2位花生四烯酸的含量之和为20-40wt％。

在一个优选的实施方案中，所述组合物中sn-1,3位均为中短链饱和脂肪酸。

在一个优选的实施方案中，所述中短链饱和脂肪酸为辛酸、癸酸、月桂酸或肉豆蔻酸中的一种或两种及以上的组合。

本发明第二方面提供一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物的制备方法，包括以下步骤：

S1、将基础油于40-65℃混熔后得到混合油，所述基础油包括棕榈油、金枪鱼油、富含ARA的高山被孢霉菌产油脂、玉米油、葵花籽油、稻米油、花生油、鲤鱼油、鳊鱼油、白鲢鱼油、三文鱼油、巴沙鲶鱼油中的至少两种；

S2、将步骤S1得到的混合油与中短链饱和脂肪酸在40-65℃条件下混合，搅拌均匀后添加8-12％(w/w)Lipozyme RM IM，搅拌水解8-12h后，4000-8000rpm条件下离心去除酶，得到混合油脂；

S3、将步骤S2得到的混合油脂与乙醇等体积混合，萃取除去游离脂肪酸，重复进行两次萃取后，即得所述结构脂组合物。

在一个优选的实施方案中，所述棕榈油、金枪鱼油、富含ARA的高山被孢霉菌产油脂和玉米油、葵花籽油、稻米油、花生油、鲤鱼油、鳊鱼油、白鲢鱼油、三文鱼油、巴沙鲶鱼油中的一种的比例为(100-260)：(60-100)：(30-58)：(90-274)。

在一个优选的实施方案中，步骤S2中混合油与辛酸、癸酸、月桂酸或肉豆蔻酸的体积比为1：(8-10)。

本发明第三方面提供一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物的用途，作为人乳替代脂组合物或食品级营养油。

本申请中sn-2位某脂肪酸的含量表示为sn-2位某脂肪酸占sn-2位脂肪酸的含量。

高山被孢霉(Mortierella alpina)是一种产油丝状真菌，脂肪酸可以积累达到细胞干重的50％，具有较高的多不饱和脂肪酸(PUFAs)含量且种类丰富。作为食品级的工业产油微生物，它已经通过美国农业部(FDA)的安全性评估，是迄今为止生产PUFAs微生物中唯一具有正式安全性评估(GRAS)的菌种，其生产的花生四烯酸(ARA)产品已经成为婴幼儿奶粉的重要添加成分，亚油酸是高山被孢霉脂质合成过程中的重要中间产物，含量为总脂肪酸的10％左右，可以作为亚油酸异构酶的潜在底物来源。

本发明有益效果如下：

(1)本发明参考母乳脂肪中的含量范围，满足新GB10765/10766中对脂肪酸部分的含量要求，同时结合了脂肪营养学的研究结果以及甘油三酯sn-2位脂肪营养学研究结果，优化了基于母乳脂肪sn-2位的不饱和脂肪酸，将sn-2长链不饱和脂肪酸的组合优化，具体包括油酸、亚油酸、二十二碳六烯酸(DHA)和花生四烯酸(ARA)的含量和比例数据，使得二十二碳六烯酸(DHA)和花生四烯酸(ARA)全部富集在sn-2位上，优化组合后不但更加接近母乳，极大提高了不饱和脂肪酸的抗氧化性，且更加具有营养学优势，极大的提高了生物利用率，且能够更好的发挥不饱和脂肪酸的生理功效。

(2)本发明中将二十二碳六烯酸(DHA)富集于甘油骨架sn-2位上，使结构油脂的氧化稳定性更好，从根本上改善了多不饱和脂肪酸不稳定易氧化的问题。同时，甘油骨架sn-2位富含二十二碳六烯酸，其sn-2位二十二碳六烯酸能更好的进行新陈代谢，合成人体生长发育所必需的物质，极大的提高了二十二碳六烯酸的生物利用率，生理活性更强，可以充分发挥二十二碳六烯酸育脑益智、育视强视、防治心血管类疾病、抗癌、抗炎症和防治动脉硬化的相关生理功能。

(3)本发明中设计的二十二碳六烯酸(DHA)和花生四烯酸(ARA)在sn-2位的特殊结构甘油三酯更利于人体吸收，淋巴对特殊结构甘油三酯(ω-3PUFA位于sn-2位，其中主要是DHA)中PUFA以及淋巴脂质的转运率显著升高，sn-2位的PUFA更利于淋巴和肠内的吸收。

(4)本发明中制备的结构脂组合物，sn-2位富集长链不饱和脂肪酸，sn-1位和sn-3位上富集中短链饱和脂肪酸，增强了空间位阻的保护作用，饱和脂肪酸分子，分子内无不饱和双键，稳定性好，减少了氧分子与sn-2位上不饱和脂肪酸的接触机会，这从根本上提高了sn-2位的稳定性，不易被氧化。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本公开的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

一、sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物的制备

实施例1

(1)首先将棕榈油、金枪鱼油、富含ARA的高山被孢霉菌产油脂和葵花籽油于60℃混熔，三者的重量比例为10：10：5：2，得到混合油；

(2)将步骤(1)中得到的混合油再与辛酸以1：10的体积比混合，于60℃充分搅拌后添加8％(w/w)Lipozyme RM IM，搅拌水解8h后，4000-8000rpm条件下离心去除消化酶，得到混合油脂；

(3)将步骤(2)得到的混合油脂与乙醇以1：1体积混合，萃取除去游离脂肪酸，重复进行两次萃取后，即得结构脂组合物1。

实施例2

(1)首先将棕榈油、金枪鱼油、富含ARA的高山被孢霉菌产油脂和玉米油于65℃混熔，三者的重量比例为26：6：3：9，得到混合油；

(2)将步骤(1)中得到的混合油再与癸酸以1：8的体积比混合，于65℃充分搅拌后添加8％(w/w)Lipozyme RM IM，搅拌水解10h后，4000-8000rpm条件下离心去除消化酶，得到混合油脂；

(3)将步骤(2)得到的混合油脂与乙醇以1：1体积混合，萃取除去游离脂肪酸，重复进行两次萃取后，即得结构脂组合物2。

实施例3

(1)首先将棕榈油、金枪鱼油、富含ARA的高山被孢霉菌产油脂和玉米油于40℃混熔，三者的重量比例为138：77：38：166，得到混合油；

(2)将步骤(1)中得到的混合油再与癸酸以1：10的体积比混合，于40℃充分搅拌后添加12％(w/w)Lipozyme RM IM，搅拌水解12h后，4000-8000rpm条件下离心去除消化酶，得到混合油脂；

(3)将步骤(2)得到的混合油脂与乙醇以1：1体积混合，萃取除去游离脂肪酸，重复进行两次萃取后，即得结构脂组合物3。

实施例4

(1)首先将金枪鱼油、富含ARA的高山被孢霉菌产油脂和玉米油于50℃混熔，三者的重量比例为115：58：274，得到混合油；

(2)将步骤(1)中得到的混合油再与辛酸以1：10的体积比混合，于50℃充分搅拌后添加12％(w/w)Lipozyme RM IM，搅拌水解12h后，4000-8000rpm条件下离心去除消化酶，得到混合油脂；

(3)将步骤(2)得到的混合油脂与乙醇以1：1体积混合，萃取除去游离脂肪酸，重复进行两次萃取后，即得结构脂组合物4。

对比例1

1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO)，纯度为45％。

对比例2

二十二碳六烯酸甘油三酯，纯度94％。

对比例3：市售配方奶粉脂肪提取物(含OPO)

取10g市售婴幼儿配方奶粉1加入100ml温水充分溶解后，加入2ml氨水混合加热至60℃，孵育15-20min，加热过程中振荡3-5次。加热完成后冷却至室温后，加入100ml乙醇，充分混合。加入250ml***和石油醚混合溶液进行萃取，分层后取保留有机相。重复萃取2-3次后旋蒸去除有机溶剂，所得市售配方奶粉脂肪提取物。

对比例4：市售配方奶粉脂肪提取物(不含OPO)

取10g市售婴幼儿配方奶粉2加入100ml温水充分溶解后，加入2ml氨水混合加热至60℃，孵育15-20min，加热过程中振荡3-5次。加热完成后冷却至室温后，加入100ml乙醇，充分混合。加入250ml***和石油醚混合溶液进行萃取，分层后取保留有机相。重复萃取2-3次后旋蒸去除有机溶剂，所得市售配方奶粉脂肪提取物。

二、含量检测

将实施例1-4制备的组合物和对比例1-4的组合物采用下述方法进行检测：

取30mg提取得到的脂肪于15mL离心管中，依次加入7mL Tris-HCl(pH7.6)，1.75mL胆酸盐溶液(0.05％)，0.7mL CaCl₂溶液(2.2％)；然后加入30mg胰脂酶，振荡1min；放入37℃水浴锅中反应3min，取出后振荡30s，并再重复两次，最后一次水浴时间减为2min。用流动的冷水冲洗离心管壁以冷却，再加入2mL***，振荡提取。离心(4000rpm，3min)，取上清液于1.5mL离心管中，氮吹浓缩至溶液体积约为500μL。采用TLC法分离sn-2FAs，展开剂为正己烷/***/乙酸＝50:50:1。经2，7-二氯荧光素在紫外灯下显色后获得单甘酯条带，进行甲酯化并过膜后进GC分析。

在本申请中，sn-2位某脂肪酸的含量为：sn-2位某脂肪酸的含量/sn-2位脂肪酸总含量。

表1

由表1可知，实施例1-4中sn-2位油酸含量在11.66-21.52wt％范围内，符合5-40wt％的要求，对比文件1中为3.56wt％，含量较低，而对比文件2中二十二碳六烯酸甘油三酯中不含有油酸，对比文件3-4中油酸含量较高；实施例1-4中sn-2位亚油酸含量在15-20wt％范围内，符合5-40wt％的范围，对比文件1中含量较低，对比文件2中sn-2位不含有亚油酸，对比文件3-4中亚油酸含量较高；实施例1-4中sn-2位花生四烯酸(ARA)含量在2.84-5.36wt％左右，符合0.25--10wt％的要求，但对比文件1-4中sn-2上都不含有花生四烯酸；实施例1-4中sn-2位二十二碳六烯酸(DHA)相对含量均在1.63-3.04wt％范围内，符合0.25--10wt％的要求，对比文件1和3-4中却不含有sn-2位二十二碳六烯酸(DHA)。

三、粒径和电位的测定

(一)乳液的制备

构建乳清蛋白乳状液模型体系：先将一定量的乳化剂(乳清蛋白WP和酪蛋白酸钠CS摩尔比3：1)溶于超纯水，恒温水浴中搅拌4小时以上使充分溶解水化。将完全溶解水化的97％与3％油脂混合搅拌5min，然后经高速剪切分散机乳化3min，再经20MPa高压微射流处理，制备稳定的蛋白O/W型乳液(1.0％乳化剂，3％油)，得到乳液。

(二)采用Nano-ZS 90激光纳米粒度仪测定不同组合物乳液粒径和电位，测定结果如表2所示。

(三)统计分析

实验数据分析使用SPSS 17.0统计学软件对数据进行方差分析(ANOVA)。方差分析采用Tukey检验，p<0.05时为显著性差异。所有数据取3次测定的平均值。结果均以平均值±标准偏差的方式表示。

表2

由表2可知，实施例1-4制备的结构脂组合物粒径显著低于对比例1-4(p<0.01)，zeta电位绝对值显著高于对比例1-4(p<0.01)。根据甘油三酯的空间构象理论，结合此数据分析推测，本发明所制备的结构脂组合物乳化后具有长短链交错的脂肪酸分布，空间位阻小，因而具有粒径小，易吸收利用的优势；此外，zeta电位的数据表明，本发明所制备的结构脂乳化后的乳糜微粒具有更加显著的结构稳定性，显著优于所选用的市售配方奶粉用油。

四、降脂效果评估

(一)模拟胃液的配置

基于长链多不饱和脂肪酸-2-单甘酯的降脂功效，如DHA-2-MAGs、油酸-2-MAGs和ARA-2-MAGs具有低热量、易消化吸收、快速供能、调节食欲、降低血脂和体脂积累等生理活性，本发明所制备的结构脂与市售婴配用油相比，具有一定降低体重增加的功效，即使食用过量也不会因为脂肪的蓄积而导致体重的过度增加，可提供生长所需的脂肪酸及能量，但引起肥胖的可能性下降。

实验动物选择NIH雄性小鼠，3周龄，平均体重25g。饲喂的基础饲料如下：玉米淀粉400g/kg，酪蛋白200g/kg，麦芽糊精132g/kg，蔗糖100g/kg，膳食纤维50g/kg，矿物质35g/kg，维生素10g/kg，L-胱氨酸3g/kg，氯化胆碱2.5g/kg。高脂饲料为在基础饲料的基础上添加不同种类和含量的油脂。小鼠血脂分析使用自动血液分析仪测定各血液样品的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)。

实验数据分析使用SPSS 17.0统计学软件对数据进行方差分析(ANOVA)。方差分析采用Tukey检验，p<0.05时为显著性差异。所有数据取3次测定的平均值。结果均以平均值±标准偏差的方式表示。

实验方法如下：

(1)餐后血脂快速实验

餐后血脂实验，采用禁食后的小鼠检测其餐后血脂水平。将小鼠在饲养环境中适应性喂养1周，然后按体重随机分成4组，每组12只，分别为：空白组、组合物1组、组合物2组、组合物3组、组合物4组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组。将各组小鼠禁食18小时(不禁水)后开始灌胃实验，灌胃量为每克体重灌胃0.1mg样品；分别对空白组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组灌胃生理盐水、组合物1、组合物2、组合物3、组合物4、对比例1、对比例2、对比例3和对比例4。四小时后眼角取血，离心分离血液4℃保存备用。

通过测定血脂中的甘油三酯含量可以判断油脂的代谢和积累情况。对小鼠灌胃4h后，取血测定小鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)的浓度，结果如表3所示，单位为mmol/L，其中a表示与空白组具有显著性差异，b表示与对比例1、3、4组具有显著性差异。

表3

由表3可知，各组间TC含量没有显著性差异(p>0.05)；实施例1-4组和对比例1-4组中血液TG的浓度都比空白组高，但实施例1-4组和对比例2组的TG含量要显著低于对比例1、3、4组(p<0.05)。说明组合物的结构脂和对比例2可降低餐后血脂水平，防止体内脂肪积累。

(2)高脂饮食实验

将小鼠随机分为14组，即空白组、高脂对照组和不同剂量的本发明所制备结构脂实验组(实施例1、实施例3)和市售婴配奶粉对照实验组(对比例3、对比例4)，每组12只，分组规则见下表4，其中，除空白组以外，所有高脂实验组的油脂添加量为10％，其余为88.5％基础饲料、1％胆固醇、0.3％胆酸盐和0.2％丙硫氧基嘧啶。实验期间各组小鼠自由饮水，空白组饲喂基础饲料，高脂对照组喂饲含猪油的饲料，本发明所制备结构脂组合物1和组合物3实验组饲喂含1％、5％、10％本发明所制备结构脂的基础饲料，市售婴配奶粉对照组喂含1％、5％、10％对比例油脂的基础饲料。每笼小鼠每日的采食量限定为60g±1g(每笼6只)，每周记录小鼠体重。6周后，所有小鼠断食24h后称重；眼角取血，血液5000r/min离心5min，取上层血清用于血脂指标的测定。

表4

对小鼠血液样品中的TG和TC进行检测，结果见表4，发现所有高脂实验组和空白组的血脂TG含量水平没有明显差异(p>0.05)；在高脂饮食模式下，所有高脂饮食实验组小鼠血液的TC浓度都显著高于空白组(p<0.05)。本发明专利所制备低剂量结构脂实验组(组合物1、组合物3)和对比例低剂量实验组(对比例3、对比例4)小鼠血液的TC浓度与高脂猪油实验组相比无显著性差异(p>0.05)。然而，本发明所制备中剂量和高剂量实验组小鼠血液TC浓度比高脂猪油组明显降低(p<0.05)，但和中高剂量对比例实验组的TC浓度没有明显差异(p>0.05)。此研究表明，本发明所制备结构脂具有缓解血液总胆固醇升高、缓解由高脂肪摄取造成的高血脂症和抑制小鼠体内的脂肪积聚的趋势。

(五)抗炎功效评估

选取21日龄刚断乳SD雌性幼鼠120只，所有幼鼠，精神状态良好，行为活泼，进食正常，随机分为10组，每组12只，分为实施例1-4组、对比例1-4组、LPS炎症模型组和***治疗组，将各组幼鼠注射LPS，制造炎症模型，注射后均出现了精神不振、行动迟缓、畏寒、对外界的刺激(如声音、振动等)反应迟钝的现象。大约3小时后，经过注射LPS后幼鼠陆续恢复正常的状态，开始活动，但活动度均不如注射前。LPS注射8h后，各组均无死亡，各组的生存率均为100％，将实施例1-4组和对比例1-4组分别按照1.5ml/kg的剂量进行灌胃，***按常规使用剂量灌胃、LPS炎症模型组不进行灌胃，取各组幼鼠血清，利用幼鼠TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β、IL-4、IL-10ELISA试剂盒进行检测各组物质对幼鼠血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β、IL-4、IL-10分泌的影响(pg/ml，mean±SD，n＝12)，结果如表5所示。

采用SPSS17.0软件对实验结果进行统计分析，采用多个实验组和***组、LPS炎症模型组组间均数的两两比较方法(Dunnett检验法)进行比较；同时对数据进行方差分析(ANOVA)，方差分析采用Tukey检验；以p<0.05为具有统计意义的差异。结果均以平均值±标准偏差的方式表示。

表5

由表5可知，实施例1-4制备的结构脂组合物与LPS炎症模型组相比，具有显著的缓解炎症的生理功效(p<0.05)；对比例2(纯度为94％的二十二碳六烯酸甘油三酯)也具有一定的抗炎活性，但并不具有统计意义(p>0.05)；实施例1-4与对比例1、3、4相比，具有显著的缓解炎症的生理功效(p<0.05)。本发明所制备结构脂组合物显著缓解了幼鼠肠道多发的炎症症状和不适应性，且效果优于所选市售婴配用油。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只限于这些说明。对于本发明所属领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，其特征在于，所述组合物包括甘油三酯，所述甘油三酯中的不饱和脂肪酸包括油酸、亚油酸、二十二碳六烯酸和花生四烯酸；

所述组合物中sn-2位油酸的含量为2.5-30wt％，sn-2位亚油酸的含量为2.5-30wt％，sn-2位二十二碳六烯酸的含量为0.075-10wt％，sn-2位花生四烯酸的含量为0.075-10wt％。

2.根据权利要求1所述的一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，其特征在于，所述组合物中sn-2位油酸的含量为2.5-20wt％，sn-2位亚油酸的含量为2.5-20wt％，sn-2位二十二碳六烯酸的含量为0.075-3wt％，sn-2位花生四烯酸的含量为0.075-6wt％。

3.根据权利要求1所述的一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，其特征在于，所述组合物中：

sn-2位油酸的与sn-2位亚油酸的含量之和为5-40wt％，且sn-2位二十二碳六烯酸与sn-2位花生四烯酸的含量之和为0.15-20wt％。

4.根据权利要求1所述的一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，其特征在于，所述组合物中：

sn-2位油酸与sn-2位亚油酸的含量之和为15-40wt％，且sn-2位二十二碳六烯酸与sn-2位花生四烯酸的含量之和为0.15-10wt％。

5.根据权利要求1所述的一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，其特征在于，所述组合物中sn-2位油酸、sn-2位亚油酸、sn-2位二十二碳六烯酸和sn-2位花生四烯酸的含量之和为10-40wt％。

6.根据权利要求1所述的一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，其特征在于，所述组合物中sn-2位油酸、sn-2位亚油酸、sn-2位二十二碳六烯酸和sn-2位花生四烯酸的含量之和为20-40wt％。

7.根据权利要求1所述的一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，其特征在于，所述组合物中sn-1,3位均为中短链饱和脂肪酸。

8.根据权利要求7所述的一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物，其特征在于，所述中短链饱和脂肪酸为辛酸、癸酸、月桂酸或肉豆蔻酸中的一种或两种及以上的组合。

9.如权利要求1-8任一所述的sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将基础油于40-65℃混熔后得到混合油，所述基础油包括棕榈油、金枪鱼油、富含ARA的高山被孢霉菌产油脂、玉米油、葵花籽油、稻米油、花生油、鲤鱼油、鳊鱼油、白鲢鱼油、三文鱼油、巴沙鲶鱼油中的至少两种；

S2、将步骤S1得到的混合油与中短链饱和脂肪酸在40-65℃条件下混合，搅拌均匀后添加8-12％(w/w)Lipozyme RM IM，搅拌水解8-12h后，4000-8000rpm条件下离心去除酶，得到混合油脂；

S3、将步骤S2得到的混合油脂与乙醇等体积混合，萃取除去游离脂肪酸，重复进行两次萃取后，即得所述结构脂组合物。

10.如权利要求1-8任一所述的一种sn-2不饱和脂肪酸活性型结构脂组合物的用途，其特征在于，作为人乳替代脂组合物或食品级营养油。