CN113218941B - 一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种酶基金属‑多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针及其制备方法和应用，该探针为附着有葡萄糖氧酶的金属有机颗粒，该探针用于检测葡萄糖浓度和微生物活性。本发明合成的具有双酶活性的纳米材料，具有葡萄糖氧化酶和过氧化物酶活性，能够作为纳米酶替代天然过氧化物酶辣根过氧化物酶，在葡萄糖存在下，能够催化底物TMB显色；该方法利用微生物消耗葡萄糖的原理，将存在微生物的水体与不含有微生物的空白葡萄糖做对比，从而对液体中是否含有葡萄糖溶液进行定性分析，通过与原有的葡萄糖含量对比，对微生物进行一个定性分析。
Description
技术领域
本发明属于纳米检测技术领域，尤其是一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针及其制备方法和应用。
背景技术
由微生物引起的各种问题一直都是世界医疗卫生机构的一大负担，每年会导致70万余人死亡，是世界上造成死亡的第二大原因。通常情况下，微生物通常会利用葡萄糖作为自己的能量进行生长繁殖，因此其繁殖能力强。
纳米材料是尺寸在1～100nm，具有特殊性能的材料，由于其晶粒极小，纳米材料较同组成的微米晶体材料相比，在催化、光学、磁性和力学等领域具有十分突出的性能，成为了近年来材料科学和物理领域的研究热点。MOF是指金属有机骨架结构，具有比表面积大，活性位点丰富和易进行化学修饰的特点，是近年来研究较多的新型多孔材料，也是一种高比表面积、活性位点丰富、易化学修饰的新型多孔材料，但较差的水稳定性限制其在吸附挥发性有机化合物(VOCs)领域的应用。传统的微生物检测方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性、灵敏性均较高；但涉及的实验较多、操作繁琐、需要时间较长准备和收尾工作繁重,而且要有大量人员参与。现代微生物检测技术发展迅速，如核酸探针法、基因芯片技术等，有效的提高了检测效率和速度，但是由于这些技术所需设备较为昂贵，相应的对技术人员要求也较高。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针及其制备方法和应用，在于解决现有的纳米级探针由于低灵敏度和低选择性而造成的检菌效果不佳和假阳性等问题。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针，包括金属有机颗粒，金属有机颗粒上附着有葡萄糖氧化酶，所述金属有机颗粒为亚铁离子和没食子酸的复合物。
本发明的进一步改进在于：
优选的，附着有葡萄糖氧化酶的金属有机颗粒平均直径为15～25nm。
一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，将葡萄糖氧化酶溶液和四水合氯化亚铁溶液等体积混合，搅拌后形成混合溶液，在混合溶液中加入没食子酸溶液，没食子酸溶液和葡萄糖氧化酶溶液为等体积，混合溶液和没食子酸溶液混合后反应，获得反应后的溶液；
步骤2，离心清洗反应后的溶液，获得酶基金属-多酚纳米级催化的微生物活力检测探针。
优选的，其特征在于，步骤1中，葡萄糖氧化酶溶液的葡萄糖氧化酶的浓度为0.014-0.016g/mL。
优选的，步骤1中，没食子酸溶液中没食子酸的浓度为5.2g/L～5.5g/L。
优选的，步骤1中，四水合氯化亚铁溶液中，四水合氯化亚铁的浓度为7.1g/L～7.3g/L。
优选的，步骤1中，混合溶液和没食子酸溶液混合反应温度为8h。
优选的，步骤2中，离心清洗次数为3-5次，离心清洗时间为30min，离心速度为13000rpm/min。
一种上述的酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针的应用，其特征在于，所述微生物活力检测探针通过测量待测溶液中葡萄糖浓度的变化值，获得微生物的含量，测量时，待测溶液的pH值为4.0。
优选的，所述葡萄糖含量为0.45μmol/L～500μmol/L。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明公开了一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针，该探针为附着有葡萄糖氧酶的金属有机颗粒，所述金属有机颗粒为亚铁离子和没食子酸的复合物。其中葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖，亚铁离子和没食子酸形成的金属有机结构有过氧化酶作用，将过氧化氢氧化成羟基自由基。
本发明还公开了一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针的制备方法，该方法葡萄糖氧化酶和亚铁离子因吸附作用聚集在一起，在加入没食子酸后，亚铁离子与没食子酸结合生成具有过氧化酶作用的结构，与葡萄糖氧化酶紧密结合。，本发明通过一步法合成具有双酶活性的纳米复合材料，合成方法简便，消耗时间短，对设备要求低，可大规模合成。
本发明还公开了一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针的应用，该探针用于检测葡萄糖浓度和微生物活性。本发明合成的具有双酶活性的纳米材料，具有葡萄糖氧化酶和过氧化物酶活性，能够作为纳米酶替代天然过氧化物酶辣根过氧化物酶，在葡萄糖存在下，能够催化底物TMB显色；该方法利用微生物消耗葡萄糖的原理，将存在微生物的水体与不含有微生物的空白葡萄糖做对比，从而对液体中是否含有葡萄糖溶液进行定性分析，通过与原有的葡萄糖含量对比，对微生物进行一个定性分析。检测方法灵敏度高，所提供的检测方法对葡萄糖含量的LOD为0.043μmol/L；本发明的检测方法选择性高，选用的酶基纳米复合材料对于检测葡萄糖具有很高的选择性，对其他种类的糖等有基本没有响应，提升测量的准确性。该检测方法适用范围广，可实现酶基纳米复合材料对于水体系中葡萄糖进行灵敏检测，具有很好地应用性，同时拓宽了酶基纳米材料在葡萄糖定量分析和微生物定性分析领域的应用；本发明利用纳米复合材料的葡萄糖氧化酶和过氧化物酶活性检测葡萄糖的含量，并且可进一步对微生物进行定量分析，该方法具有操作简单、快速、灵敏度高和选择性高等优点。
进一步的，本发明方法适用于检测待测液体样品中一定浓度范围的葡萄糖浓度，检测的最佳葡萄糖浓度为0.45μmol/L～500μmol/L，对于葡萄糖浓度更高的检测待测液体样品亦可通过稀释方法进行检测；
进一步的，酸性条件下催化葡萄糖释放H2O2和葡萄糖酸，进一步生成·OH,进而催化TMB生成*TMB在缓冲液中呈现肉眼可见的蓝色，微生物会利用葡萄糖，因此可通过微生物利用的葡萄糖含量对微生物的活力进行检测。，提供一种高效、检测限低且操作要求较低的纳米复合检测探针，拓展了检测方法。
附图说明
图1为本发明具有双酶活性的酶基纳米复合材料的合成原理图；
图2为复合材料的扫描电镜图(SEM图)；
图3为高分辨透射电镜图(HRTEM图)；
其中，(a)图为标尺在100nm时材料的透射电镜图，从图中可以看出材料大小均匀；(b)图为标尺在5nm时材料的透射电镜图，有利于观察材料的形貌。
图4为一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针检测葡萄糖的标准曲线；(其中还包括催化不同底物的显色，从做到右从左到右是500到1μM，随着溶液中葡萄糖的含量降低，蓝色也逐渐变浅。)
图5为通过标准曲线获得的回归方程。
图6为一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针对于不同糖选择性的测定柱状图；
图7为一种酶基金属-多酚纳米材料的对不同微生物的检测效果。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步详细描述：
一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针的制备方法和其在实际样品中的微生物检测，是按以下步骤完成的：
(1)，将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，搅拌速度为40～60rpm/min，搅拌至完全溶解，得到葡萄糖氧化酶溶液，其中葡萄糖氧化酶的浓度为0.014-0.016g/mL。
(2)，分别将没食子酸(GA)和FeCl2.H2O分别溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，分别得到没食子酸溶液和氯化亚铁溶液。GA的浓度为5.2g/L～5.5g/L；FeCl2.4H2O的浓度为7.1g/L～7.3g/L。
(3)，将葡萄糖氧化酶溶液和四水合氯化亚铁溶液混合，于25℃在离心管中下搅拌均匀反应后形成混合溶液，然后在混合溶液中加入没食子酸溶液，使得混合溶液和没食子酸溶液在常温下反应8h，三个溶液的混合体积比为1：1：1，得到反应后的溶液，上述反应过程原理如图1所示，1a是没食子酸和亚铁离子生成金属有机结构的示意图，两者结合生成球形。1b是金属有机结构与葡萄糖氧化酶结合的示意图，两者通过吸附作用紧密结合，一个MOF可结合一到多个葡萄糖氧化酶，形成本申请主要研究的探针。1c是纳米复合材料发挥双酶活性，将葡萄糖催化生成过氧化氢，再进一步生成羟基自由基，使得TMB被氧化生成oxTMB,通过测定颜色从而实现对葡萄糖含量进行测定。图1中Gallic acid为没食子酸，GA-Fe(II)为没食子酸和二价铁的复合物；Glucose为葡萄糖。
(4)，通过离心清洗反应后的溶液，离心清洗的次数为3～5次，离心速度为13000rpm/min，每次离心清洗的时间为30min，离心清洗后的液体为GOx@GA-Fe(II)纳米复合材料，为酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针，形成的活力探针为颗粒状，分散在水中，为悬浊液形态。该活力探针使用时，更够根据需求的浓度进行稀释使用。
该检测探针在酸性条件下通过检测微生物环境中的葡萄糖的利用程度检测微生物的活力。检测对象主要是以葡萄糖为营养物质的革兰式阳性菌和革兰式阴性菌。
一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针，在酸性条件中催化葡萄糖生成葡萄糖酸和H2O2，进一步催化H2O2生成羟基自由氧(·OH)，将TMB氧化成TMB*，从而呈现肉眼可见的蓝色显色反应；所述的微生物活力检测探针由FeCl2.4H2O、GA和GOx等原料制备而成，具体的酸性条件PH值为4。
该探针的具体使用过程为：将待测溶液通过探针测量葡萄糖溶液，测量后获得葡萄糖溶液的初始值，然后将待测溶液分为对照组和实验组，对照组进行灭菌试验，灭菌后的对照组和实验组同时加入细菌，进行培养12h后测量各自的葡萄糖含量，通过对比二者的差值获得该待测溶液的是否含菌。
实施例1
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.015g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.378g/L的没食子酸溶液和浓度为7.258g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗5次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
图2和图3为GOx@GA-Fe(II)的扫描电镜图，从图中可以看出，合成的材料分布均匀，粒径一致，均为表面较粗糙的椭球型颗粒。
下面对上面得到的微生物活力探针进行具体的应用和测试：
一、检测葡萄糖浓度标准曲线绘制
将配置好的不同浓度(1、5、8、10、50、80、100、200、400、500μmol/L)葡萄糖溶液分别加10μL到相同规格的容器中，然后每一个再加入5μL的实施例1制备探针的纳米材料悬浮液(浓度为0.1mmol/L)、15μL TMB(20mM)溶液及170μL磷酸盐缓冲液(0.2M，pH 4.0)，在37度下反应20min，分别测定652nm处吸光值，记为A；10μL去离子水中加入5μL纳米材料悬浮液，15μL TMB(20mM)溶液到170μL磷酸盐缓冲液(0.2M，pH 4.0)的混合液反应20min为空白对照组，测定652nm波长处吸光值，其中空白对照组的荧光强度记为A0，以吸光度变化值A0-A为纵坐标，以葡萄糖的浓度为横坐标，然后分别记录紫外吸光曲线，绘制标准曲线，如图4所示。
根据步骤一的标准曲线获得回归方程，如图5所示，
A0-A＝0.05695+5.98059X(R2＝0.996)；其中，A0为空白对照组在652nm波长处的荧光强度，A为待检测液在625nm波长处的荧光强度，X为待检测液中葡萄糖的浓度；从图5中可以看出，葡萄糖浓度与吸光度值一一对应，呈现较好的线性关系，R2＝0.993，说明绘制的标准曲线有较好的精确性。
从图5中可以看出在1-500μmol/L范围内具有良好的线性关系，并根据检出限为3倍的标准偏差与斜率的比值，计算得到检出限为0.43μmol/L，结果证实，该方法检测硫离子具有较好的灵敏度和较宽的线性范围。
二、对不同种类糖的选择性
将配置好的不同糖(葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖)溶液10μL分别加入到不同容器中，然后分别向加入5μL纳米材料悬浮液、15μL TMB(20mM)溶液及170μL磷酸盐缓冲液(0.2M，pH4.0)，37度反应20min测定在652nm处的吸光值，记为A；取10μL去离子水，5μL纳米材料悬浮液、15μL TMB(20mM)溶液到170μL磷酸盐缓冲液(0.2M，pH 4.0)中，反应20min作为空白对照组，测定其在652nm处的吸光值强度A0；以吸收强度变化差值A0-A为纵坐标，以各物质为横坐标，绘制柱形图，如图6所示。从图4图片中根据计算的到的吸光值变化看出，不同的糖在酶基金属-多酚纳米复合材料催化下显色程度不同，只有当底物为葡萄糖时显色比较明显，其他种类的糖与空白相差不大，表明了探针对底物存在特异性选择。
三检测实际样品中的微生物
以苹果汁为实际样例，将苹果汁稀释5倍，再将苹果汁与108cfu的菌以1：4的比例混合，并在37度摇床进行孵育，取微生物(大肠杆菌、李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌、阪崎、金黄色葡萄球菌)分别加入在苹果汁中，分成五类设置有不同细菌的苹果汁；取每类带菌苹果汁10μL，加入材料5μL，15μLTMB，170μL磷酸缓冲液反应30min后在652nm波长处吸光度值进行检测，吸光度有明显的下降，即微生物消耗了苹果汁中的葡萄糖，实现了对微生物的检测，如图7所示。从图7可看出在葡萄糖与菌液孵育后，TMB显色会减弱即颜色会变浅，说明了微生物消耗了葡萄糖从而实现对微生物的检测。
本发明的工作原理为：本发明采用一步法合成具有双酶活性的酶基金属-多酚纳米复合材料，该材料同时具有葡萄糖氧化酶和过氧化物酶的活性，能够替代葡萄氧化酶和天然过氧化物酶辣根过氧化物酶，在葡萄糖存在条件下，该纳米复合物能够催化底物(TMB)显色，而葡萄糖氧化酶能够催化葡萄糖产生H2O2，被复合材料催化产生*OH使底物(TMB)显蓝色，因此，提供一种有效的葡萄糖浓度比色检测方法。进一步通过微生物消耗葡萄糖获取能量从而对微生物进行定性检测。
实施例2
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.014g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.5g/L的没食子酸溶液和浓度为7.2g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
实施例3
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.015g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.2g/L的没食子酸溶液和浓度为7.1g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
实施例4
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.016g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.3g/L的没食子酸溶液和浓度为7.3g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
实施例5
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.0145g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.4g/L的没食子酸溶液和浓度为7.15g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
实施例6
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.0155g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.25g/L的没食子酸溶液和浓度为7.25g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
实施例7
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.0142g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.35g/L的没食子酸溶液和浓度为7.12g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
实施例8
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.0148g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.45g/L的没食子酸溶液和浓度为7.18g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
实施例9
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.0153g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.38g/L的没食子酸溶液和浓度为7.28g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
实施例10
将葡萄糖氧化酶加入到去离子水中，搅拌至完全溶解，得到浓度为0.0159g/mL的葡萄糖氧化酶溶液。将GA和FeCl2·4H2O溶解于去离子水中，搅拌超声至完全溶解，得到浓度分别为5.27g/L的没食子酸溶液和浓度为7.25g/L的四水合氯化亚铁溶液。将氯化亚铁溶液与葡萄糖氧化酶溶液混合加到离心管中，于25℃中搅拌反应30min后，将GA溶液加到上述混合溶液中，在25℃搅拌条件反应8h，上述三个溶液的混合体积比为1:1:1，以去离子水为清洗剂，将合成的纳米材料进行离心清洗4次，得到一种酶基金属-多酚纳米级联反应的微生物活力探针。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，将葡萄糖氧化酶溶液和四水合氯化亚铁溶液等体积混合，搅拌后形成混合溶液，在混合溶液中加入没食子酸溶液，没食子酸溶液和葡萄糖氧化酶溶液为等体积，混合溶液和没食子酸溶液混合后反应，获得反应后的溶液；
葡萄糖氧化酶溶液的葡萄糖氧化酶的浓度为0.014-0.016g/mL；
步骤1中，没食子酸溶液中没食子酸的浓度为5.2g/L~5.5g/L；
四水合氯化亚铁溶液中，四水合氯化亚铁的浓度为7.1g/L~7.3g/L；
混合溶液和没食子酸溶液混合反应温度为8h；
步骤2，离心清洗反应后的溶液，获得酶基金属-多酚纳米级催化的微生物活力检测探针；
步骤2中，离心清洗次数为3-5次，离心清洗时间为30min，离心速度为13000rpm/min。
2.一种通过权利要求1所述的制备方法制得的酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针，其特征在于，包括金属有机颗粒，金属有机颗粒上附着有葡萄糖氧化酶，所述金属有机颗粒为亚铁离子和没食子酸的复合物。
3.根据权利要求2所述的一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针，其特征在于，附着有葡萄糖氧化酶的金属有机颗粒平均直径为15～25nm。
4.一种权利要求2所述的酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针的应用，其特征在于，所述微生物活力检测探针通过测量待测溶液中葡萄糖浓度的变化值，获得微生物的含量，测量时，待测溶液的pH值为4.0。
5.根据权利要求4所述一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针的应用，其特征在于，所述葡萄糖浓度为0.45 µmol/L ~500 µmol/L。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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