CN113215067A - Vbnc状态短乳杆菌cshrr5-3菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5‑3，其保藏编号为：CGMCCNo:18475。短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5‑3具有如下性能：菌株有较强的产酸性能；菌株发酵液具有抑菌特性，菌株发酵液具有热稳定性、紫外稳定性、酸碱稳定性、蛋白酶稳定性；菌株具有耐胃酸与耐胆盐性能；可产生胞外多糖，胞外多糖具有抗氧化活性。本发明还同时提供了上述短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5‑3的用途：作为抑菌剂、抗氧化剂。

Description

VBNC状态短乳杆菌CSHRR5-3菌株及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株具较好抑菌效果、较强产酸性能的复苏可培养化VBNC状态短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3及其应用。
背景技术
乳酸菌是指一类能发酵糖类产生乳酸的无芽孢、***的总称[1]，是一类被广泛应用的益生菌，常用于发酵工业和微生态制剂中。多数自然环境样品中真正能分离到的可培养微生物大约只有0.01％～10％，绝大部分微生物因处于活的但非可培养状态(viable but non-culturable，VBNC)未被有效鉴定，发掘VBNC菌是当今发现新菌种资源与开发环境功能菌的行之有效的途径[2]。研究表明，藤黄微球菌(Micrococcus luteus)在对数生长后期分泌的复苏促进因子(Resuscitation-promoting factor，Rpf)可恢复多种生态环境中处于VBNC状态细胞的复苏生长能力[3,4]。
已有研究表明，昆虫自身缺少完整的产酶***，需要依靠肠道菌提供多种酶才能完成食物的消化、营养吸收、物质代谢以及机体免疫等功能。桑蚕中肠内含有大量的乳酸菌，有可能是新型乳酸菌的一个重要来源。新鲜的蚕粪中含有大量来自蚕肠道的微生物，已有研究者从蚕粪中分离到能分解纤维素的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)[5]，利用复苏促进因子从蚕粪中筛选有抑菌效果的VBNC乳酸菌具有重要的科学意义。
目前已公开的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)的用途如下：
申请号202010936554.8的《一种短乳杆菌8-2B及其应用》告知该菌株能高效抑制炭黑曲霉生长及产毒，对黑曲霉的孢子萌发、芽管长度均产生明显抑制作用。
申请号202010880754.6的《一种利用短乳杆菌产酶降解西番莲果皮多糖的制备及其应用》告知经短乳杆菌产酶降解后西番莲果皮多糖具有更好的抗氧化活性。
申请号CN201910645078.1利用短乳杆菌能生产甘露聚糖酶；申请号：CN201910618450.X、公告号：CN110317768B告知了一种能消减4-甲基苯酚的短乳杆菌，消减能力达530μg/L，消减率达37.9％；申请号：CN201910008860.2、公告号：CN109628348B提供了一种短乳杆菌CGMCCNo.14811对水果进行发酵，可提高水果汁中的有机酸含量。
公告号为CN105820967B的《一株短乳杆菌及其应用》，短乳杆菌AR-123能够高效降解亚硝酸盐，作为蔬菜发酵剂应用，可以很好的保持蔬菜原有的风味及营养，发酵结束后的发酵蔬菜中亚硝酸盐含量仅为1.6mg/L。
公告号CN111778191B的《短乳杆菌及其培养方法和用途》，其短乳杆菌包含耐热性谷氨酸脱羧酶，基于该菌株开发了用于提高其发酵性能的白菜提取液培养基及生产γ-氨基丁酸。
公告号为CN102690768B，《一株短乳杆菌及其应用》，其短乳杆菌BBE-Y52能够产生细菌素抑制变异链球菌及其他口腔致病微生物的生长；能够产生胞外多糖，为乳酸菌在口腔环境中与其他微生物共聚集及生物膜的形成提供了必要的条件；还能够产过氧化氢，不仅具有杀菌的作用，也可以起到漂白牙齿的作用。
涉及的参考文献如下：
[1]Yeruva T,Vankadara S,Ramasamy S,et al.Identification of PotentialProbiotics in the Midgut of Mulberry Silkworm,Bombyx mori Through MetagenomicApproach[J].Probiotics Antimicrobial Proteins,2019,12(9):635-640(Yeruva T,Vankadara S,Ramasamy S,et al.用元基因组学方法鉴定桑蚕中肠中潜在的益生菌[J].Probiotics Antimicro bial Proteins,2019,12(9):635-640)；
[2]Kaeberlein T,Lewis K,Epstein SS.Isolating"Uncultivable"Microorganisms in Pure Culture in a Simulated Natural Environment.[J].Science,2002.296(5570):1127-1129(Kaeberlein T,Lewis K,Epstein SS.在模拟自然环境中分离纯培养的“非可培养”微生物[J].Science,2002.296(5570):1127-1129)；
[3]Mukamolova GV,Turapov OA,Young DI,et al.A family of autocrinegrowth factors in Mycobacterium tuberculosis[J].Molecular Microbiology,2010,46(3):623–635(Mukamolova GV,Turapov OA,Young DI,Kaprelyants AS,Kell DB,YoungM.结核分枝杆菌中自分泌生长因子家族[J].Molecular Microbiology,2010,46(3):623–635)；
[4]岳玲.家蚕杂交种F1及其亲本的肠道微生物多样性和血淋巴代谢组学差异研究[D].苏州大学；2018；
[5]张洁媛,张丽,宁恩创.蒽酮-硫酸法与苯酚-硫酸法测定苦瓜多糖的比较[J].现代食品,2018,(22):80-83,91。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一株具有较好抑菌效果与较强产酸性能的可培养化VBNC短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3菌株及其用途。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其保藏编号为：CGMCC No:18475。
短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3具有如下性能：菌株有较强的产酸性能；菌株发酵液具有抑菌特性，对李斯特氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、变形杆菌具有高拮抗性；菌株发酵液具有热稳定性、紫外稳定性、酸碱稳定性、蛋白酶稳定性；菌株具有耐胃酸与耐胆盐性能；可产生胞外多糖，胞外多糖具有抗氧化活性。
本发明还同时提供了上述短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3的用途：作为抑菌剂、抗氧化剂。
本发明的短乳杆菌菌株CSHRR5-3保藏信息如下：
保藏名称为Lactobacillus brevis，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC NO.18475，保藏时间2019年9月9日。
本发明在广西靖西市武平乡(23°14’N，106°22’E)桂蚕二号5龄期夏季新鲜蚕粪中，通过复苏促进因子(Rpf)的复苏分离获得可培养化VBNC菌株CSHRR5-3，经形态学鉴定、生理生化特性测试及16S rDNA测序分析，确定该菌株为短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)。
本发明所述的短乳杆菌(L.brevis)CSHRR5-3能够抑制大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、变形杆菌(Proteus species)、李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)等5种常见的食源性致病菌的生长。
短乳杆菌(L.brevis)CSHRR5-3有较强的产酸性能，接种在pH为6.4的MRS培养基上，37℃培养40～48h，pH约为3.14。
短乳杆菌(L.brevis)CSHRR5-3可产生胞外多糖，培养7天后胞外多糖浓度可达65.18mg/mL，胞外多糖抗氧化活性中羟基自由基清除率达到89.21％，显著高于阳性对照抗坏血酸。菌株CSHRR5-3的发酵液有很好的温度、光照、酸碱度和蛋白酶稳定性。
菌株CSHRR5-3对0～0.3％胆盐、人工胃液具有良好的耐受性。
本菌株的优点在于产酸能力强、对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯氏菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等常见肠道菌具有良好的抑制作用，其发酵液稳定性良好；可产生胞外多糖，具有抗氧化活性，羟自由基清除率可高达89.21％，对胆盐、人工胃液耐受。
本发明的短乳杆菌CSHRR5-3及其发酵液可代替抗生素拮抗常见的食源性病原菌，能克服目前存在的针对长期使用抗生素抑菌，动物机体容易产生耐药性的问题，并且具有在动物胃肠道中定植的潜力。
附图说明
图1为菌株CSHRR5-3在MRS固体培养基上的菌落形态。
图2为菌株CSHRR5-3在10×100显微镜下的菌体形态；
图2中，左图为革兰氏染色图片，右图为荚膜染色图片。
图3为菌株CSHRR5-3以16S rDNA序列为基础的***发育树图。
图4为菌株CSHRR5-3生长曲线(实心圆)及pH变化曲线(空心三角)。
图5为菌株CSHRR5-3发酵液对温度的稳定性。
图6菌株CSHRR5-3发酵液对紫外照射的稳定性。
图7菌株CSHRR5-3发酵液对酸碱(pH)的稳定性。
图8菌株CSHRR5-3发酵液对蛋白酶的稳定性。
图9菌株CSHRR5-3胞外多糖抗氧化活性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1、菌株CSHRR5-3筛选
(1)样品于2018年8月采自广西靖西市武平乡(23°14’N，106°22’E)桂蚕二号5龄期的新鲜蚕粪，VBNC乳酸菌的分离采用基于复苏促进因子(Rpf)的MPN法加稀释涂布平板分离获得，具体步骤如下：
1)含Rpf活性蛋白的培养上清液制备，参照CN102618464B的《一种能促进VBNC细菌生长并提高分离丰度的复苏培养基及其制备方法和应用》，将藤黄微球菌(Micrococcusluteus)IAM14879T在液体培养基培养至对数期后期，过滤获得上清液，用0.22μm滤膜过滤，作为活性Rpf蛋白液；活性Rpf蛋白液经121℃高温灭菌20min，即得灭活的Rpf蛋白液。
2)分离培养基：贫营养MRS培养基(1L)：蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母提取物2.5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖10g，吐温80 1mL，MgSO4 0.2g，MnSO40.04g，琼脂20g，水定容至1000mL；pH 6.2-6.6。
3)乳酸菌菌株的分离：
采用基于Rpf复苏促进因子的MPN培养***和稀释平板涂布法；培养基中含活性(或灭活)Rpf的含量为20％；即：
将贫营养MRS培养基与活性Rpf蛋白液按照8：2的体积比混合，作为加活性Rpf的处理组培养基；
将贫营养MRS培养基与灭活Rpf蛋白液按照8：2的体积比混合，作为灭活Rpf的对照组培养基；
称量0.5g蚕粪，倒入有4.5mL无菌水的离心管中，混匀，获10-1稀释度的蚕粪液。在96孔微盘的1-3排标记“+Rpf”，5-7排标记“-Rpf”。用排枪分装90μL处理组培养基于1-3排的每个微孔中，分装90μL对照组培养基于5-7排的每个微孔中；用酶标仪测培养液OD600值。用排枪吸取10-1稀释度的蚕粪上清液10μL至10-2排孔中，混匀，获10-3稀释液，依次稀释至10-10，每个段3个平行。测量乳酸菌0h OD600值，于30℃培养箱中培养，定期测量OD600值，记录数据，查对MPN表，计算含菌量，选择有浑浊现象的稀释倍数最大的培养液进行稀释涂布于贫营养MRS培养基平板，于30℃恒温培养，挑取单菌落至平板上获得纯培养。最终在处理组中共分离获得19株VBNC菌株。
4)拮抗致病菌的乳酸菌菌株筛选：
细菌培养基(1L)：胰蛋白胨5g，酵母提取物2.5g，牛肉膏1g，甘油1g，吐温800.05g，MgSO4 1g，琼脂20g，水定容至1000mL；pH 7.2。
MRS固体培养基(1L)：蛋白胨10g，牛肉浸粉8g，酵母浸粉4g，K2HPO4 2g，柠檬酸氢二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，MgSO4 0.2g，MnSO4 0.04g，吐温80 1mL，琼脂20g，水定容至1000mL；pH 6.4。
MRS液体培养基(1L)：取消MRS固体培养基中琼脂20g的使用，其余等同。
具体步骤如下：
①初筛：采用琼脂块法。
以李斯特氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等5种病原菌为指示菌进行拮抗菌的初筛。将5种病原菌分别涂布接种至细菌培养基平板上，用无菌打孔器在已培养好上述分离到的乳酸菌平板上取直径为6mm的菌块于涂布有病原菌平板上，每平板对称放置3个菌块，28℃恒温培养，观察各菌株对病原菌的抑制效果，从19株VBNC菌株中筛选得到6株抑菌活性较好的拮抗菌株。
②复筛：采用牛津杯法。
对上述初筛获得的6个菌株进行活化，然后取1环菌苔，分别接种至装有50mL MRS液体培养基的250mL三角瓶中，于37℃、140r/min摇床中培养18-22h作为种子液，以1％(体积％)接种量分别接种菌株至新的MRS液体培养基中，37℃、140r/min振荡培养168h，经离心后获得发酵上清液，并用0.22μm无菌滤膜过滤后备用。将活化后的李斯特氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等5种病原菌分别涂布接种至细菌培养基平板，每平板上对称放置3个无菌牛津杯，往牛津杯里分别加入上述无菌发酵上清液200μL，置4℃冰箱放置5h后，于28℃恒温培养，观察各菌株发酵上清液对指示菌的抑制效果，并求平均值。
通过初筛和复筛，获得1株对5种病原细菌均有较好抑菌效果的菌株CSHRR5-3，其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强，抑菌圈直径达23.3mm，对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径稍小，为15.5mm，结果见(表1)。
将菌株CSHRR5-3进行了保藏，保藏名称：Lactobacillus brevis，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC NO.18475，保藏日期：2019年09月09日。
表1 CSHRR5-3菌株发酵上清液的抑菌效果
Figure BDA0003137771320000061
实施例2、菌株CSHRR5-3的鉴定
形态学鉴定：在MRS培养基平板上培养24h后，形成的单菌落圆形，***，边缘光滑，乳白色，较湿润，不透明，直径1-3mm(图1)，菌体呈杆状，革兰氏染色阳性，有荚膜，无鞭毛，无芽孢(图2)。
生理生化特征测试：参照《常见细菌鉴定手册》中推荐的培养基测定菌株CSHRR5-3的生理生化特性，结果发现该菌株能利用葡萄糖、麦芽糖和乳糖生长；在葡萄糖发酵培养基上产酸产气；甲基红试验阳性；不还原硝酸盐，不液化明胶，硫化氢试验、尿素试验、V-P试验、接触酶和氧化酶均为阴性，不能利用西蒙氏柠檬酸盐，动力试验为弱阳性。结果见表2。
表2菌株CSHRR5-3的生理生化特性
Figure BDA0003137771320000062
注：“+”阳性；“-”阴性。
16S rDNA序列测定：用通用引物27F和1492R对菌株CSHRR5-3的16S rRNA基因序列进行扩增测序，得到大小为1459bp的序列，在EzBioCloud数据库上进行Blast比对分析，选取20株乳酸杆菌属的菌株构建***发育树(图3)，结果显示，CSHRR5-3与短乳杆菌(Lactobacillus brevis ATCC 14869)在进化树的同一支上，两菌株的同源性为98.9％，结合菌株形态特征、生理生化特征，确定该菌株为短乳杆菌(Lactobacillus brevis CSHRR5-3)。
实施例3、菌株CSHRR5-3生长曲线及产酸能力的测定
取菌株CSHRR5-3菌苔1环，接种至装有50mL MRS液体培养基的250mL三角瓶中，于37℃、140r/min摇床中培养18-22h作为种子液。以1％(体积比)接种量，将种子液接种到装有50mL MRS液体培养基的锥形瓶中，37℃、140r/min的摇床中振荡培养48h，每隔2h取少量菌悬液测定OD值与pH值，其生长曲线与pH变化曲线见图4。从生长曲线可知，该菌株在8h时进入生长对数期，30h后进入生长稳定期，其对数生长期为8～30h；从pH变化曲线可知，菌株在培养26～32h后开始产酸，到40h时pH值降到3.14，40-48h间稳定在3.14左右，说明菌株CSHRR5-3的产酸能力较强。
实施例4、菌株CSHRR5-3发酵液的制备方法
将实施例3所得的种子液以1％接种量接入MRS液体培养基，37℃发酵培养168h，12000r/min离心10min得到菌株CSHRR5-3发酵液(上清液)。
实施例5、菌株CSHRR5-3发酵液稳定性的测定：
(1)温度稳定性：取等量菌株CSHRR5-3发酵液至10mL试管中，分别在40℃、60℃、80℃、100℃、120℃下处理30min，然后用牛津杯法检测发酵液抑菌活性(见图5)。由图5可知，CSHRR5-3菌株发酵液抑菌活性在温度为40℃、60℃、80℃、100℃、120℃时抑菌圈直径无显著性差异，说明CSHRR5-3发酵液具有良好的热稳定性。
(2)紫外稳定性：取等量菌株CSHRR5-3发酵液至无菌培养皿中，分别在紫外照射(583μW/cm2)下处理1h、2h、3h、4h、5h、6h后，用牛津杯法检测发酵液抑菌活性(见图6)。由图6可知，CSHRR5-3菌株发酵液抑菌活性在紫外照射不同时间处理下，抑菌圈直径无显著性差异，说明CSHRR5-3发酵液具有良好的紫外稳定性。
(3)酸碱稳定性：取等量菌株CSHRR5-3发酵液至10mL试管中，分别调pH至1-10，过夜处理24h后调回初始pH(3.14)，然后以pH为3.14的无菌水为对照(CK)检测发酵液抑菌活性(见图7)。由图7可知，经不同pH处理后的菌株CSHRR5-3发酵液抑菌活性无显著差异，说明CSHRR5-3发酵液具有良好的酸碱稳定性。
(4)蛋白酶稳定性：取等量CSHRR5-3菌株发酵液至10mL试管中，分别用终浓度为1mg/mL的蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶在37℃水浴处理3h，然后检测发酵液抑菌活性(见图8)。由图8可知，CSHRR5-3菌株发酵液抑菌活性在1mg/mL的蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶37℃水浴处理3h后抑菌圈直径无显著性差异，说明CSHRR5-3发酵液具有良好的蛋白酶稳定性。
实施例6、菌株CSHRR5-3胞外多糖抗氧化活性测定：
(1)胞外多糖的提取：
取实施例4所得的发酵液(上清液)，在沸水中水浴20min，通过Sevage法除蛋白，即：加入1/3体积的Sevage液6000g离心15min，取上清，重复2-3次。再加入3倍体积的无水乙醇在4℃冰箱中冷藏过夜，12000g离心20min收集沉淀，用蒸馏水溶解沉淀，即得粗提的胞外多糖液。
选择8000-14000Da的透析袋预处理：将透析袋放入1.0mmol/L(pH＝8.0)的EDTA溶液中加热煮沸10min，再用去离子水清洗至洗涤液为中性，加入粗提的胞外多糖溶液于去离子水中透析2d，期间每2h换一次水，6h后再每4h换一次水。得到的溶液(截留液)放置在培养皿中，盖上保鲜膜，扎孔，在-20℃冰箱中过夜冷冻。冷冻(-56℃)干燥24h，得粉末状胞外多糖。将所得的胞外多糖进行羟自由基清除率测定。
(2)羟自由基清除率测定
各溶液加入的量如表3所示，在试管中依次加入试剂摇匀后，37℃水浴15min后，用紫外分光光度计测定其510nm处的吸光值，以1mg/mL抗坏血酸为阳性对照，去离子水为阴性对照。得到的值根据公式：羟自由基清除率(％)＝1-(Ax-Ax0)/A0*100％获得胞外多糖羟自由基清除率，以胞外多糖浓度为横坐标，510nm处的吸光值为纵坐标作图。结果见图9，当胞外多糖浓度为0.5mg/mL时，羟自由基清除率86.4％，随着胞外多糖浓度的升高，羟自由基清除率无显著性差异(胞外多糖浓度为1.0mg/mL时，最高能达到89.21％)，而阳性对照抗坏血酸的羟自由基清除率只有26.8％。
表3羟自由基清除率测定方法
Figure BDA0003137771320000081
实施例7、菌株CSHRR5-3人工胃液及胆盐耐受性测定
(1)人工胃液溶液配制
氯化钠0.8g，磷酸二氢钾0.02g，磷酸氢二钠0.115g，胃蛋白酶0.35g，蒸馏水定容至100mL，用1mol/L的盐酸调节pH至2.5，0.22μm滤膜在超净工作台中过滤备用。
(2)人工胃液耐受性测定
将菌体重悬于PBS缓冲液中使其浓度为108CFU/mL。取4.5mL人工胃液，以4.5mLPBS缓冲液为对照，与0.5mL菌液混合后37℃孵育4h，每小时测定其OD600值。结果(表4)表明，菌株CSHRR5-3对人工胃液耐受性好。人工胃液处理0～4h，菌液OD600值未出现显著性的变化(P<0.05)。
表4菌株CSHRR5-3人工肠液及人工胃液耐受性
Figure BDA0003137771320000091
(3)胆盐耐受性测定
用分别含0％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％牛胆盐的PBS缓冲液调整短乳杆菌菌液浓度至108CFU/mL，在37℃恒温水浴锅中分别温育4h，每小时测定其OD600值，结果(表5)表明，随着胆盐浓度的升高，处理时间的延长，其OD值表现出不同程度的下降，0.4％胆盐浓度处理2～4h，菌液浓度表现出显著性下降，但其OD值仍大于0.5，表明菌株对胆盐有较好的耐受性，具有在含胆盐的肠道中定植的潜力。
表5不同胆盐浓度对菌株CSHRR5-3的影响
Figure BDA0003137771320000092
本发明的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3与现有的短乳杆菌以及本发明过程中筛选而得的其他短乳杆菌的性能对比如下：
一、关于抑菌：
本发明的短乳杆菌CSHRR5-3，对大肠杆菌的抑菌直径是19.77mm，对金黄色葡萄球菌的抑菌直径是23.00mm，对李斯特氏菌的抑菌直径为22.0mm，对变形杆菌的抑菌直径23.3mm，对枯草芽孢杆菌的抑菌直径为15.5mm。
本发明过程中筛选到的另一抑菌效果佳的乳球菌属菌株CSCR1-3，对大肠杆菌的抑菌直径是13.83mm，对金黄色葡萄球菌的抑菌直径是12.03mm，对李斯特氏菌的抑菌直径为13.05mm，对变形杆菌的抑菌直径12.00mm，对枯草芽孢杆菌的抑菌直径为10.53mm。
ZLB004(短乳杆菌CGMCC No.5760)：对大肠杆菌的抑菌直径是16mm，对金黄色葡萄球菌的抑菌直径是14.3mm。
二、关于产酸性能
本发明CSHRR5-3培养第40小时，pH约为3.14；
短乳杆菌H20-c的最低pH约为3.58；短乳杆菌BDLB0001的最低pH约为4.63。
三、羟基自由基清除率：
本发明的CSHRR5-3能达到89.21％，而短乳杆菌H20-c、BDLB0001、BBE-Y52、ZLB004均明显不如本发明。
四、稳定性
本发明的CSHRR5-3具有良好的热稳定性、紫外稳定性、酸碱稳定性、蛋白酶稳定性；而短乳杆菌H20-c、BDLB0001、BBE-Y52、ZLB004均无法体现紫外稳定性和蛋白酶稳定性。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (9)

1.短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其特征是保藏编号为：CGMCC No:18475。
2.根据权利要求1所述的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其特征是：菌株具有产酸特性。
3.根据权利要求2所述的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其特征是：菌株发酵液具有抑菌性。
4.根据权利要求3所述的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其特征是：对李斯特氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、变形杆菌具有高拮抗性。
5.根据权利要求2～4任一所述的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其特征是：菌株发酵液具有热稳定性、紫外稳定性、酸碱稳定性、蛋白酶稳定性。
6.根据权利要求5所述的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其特征是：具有耐胃酸与耐胆盐性能。
7.根据权利要求6所述的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其特征是：具有产胞外多糖的性能。
8.根据权利要求7所述的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3，其特征是：胞外多糖具有抗氧化活性。
9.如权利要求1～8任一所述的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CSHRR5-3的用途，其特征是：作为抑菌剂、抗氧化剂。
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