CN113213642B - 一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，包括以下重量份的原料：包括以下重量份的原料：芽孢杆菌粉45‑50份、光合细菌35‑40份、乳酸杆菌3‑5份、赤红球菌3‑6份。本发明中的芽孢杆菌能有效地降解有机磷农药、有机氯农药，也可用作絮凝剂处理污水；光合细菌能有效地吸收利用水体中的氨、亚硝酸盐、硫化氢等有害物质，还能作为刚孵出苗种的开口饵料，大幅度提高苗种的成活率；赤红球菌类对水体中的无机氮磷具有较强的净化能力，维持了良好的生态水环境；酵母菌能够分解消耗水体中的油脂残留物，净化水质，并且作为营养丰富的单细胞蛋白，能增强大口黑鲈幼苗的免疫能力。

Description

一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及水产养殖领域，尤其涉及一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂及其制备方法。

技术背景

大口黑鲈是一种优质淡水鱼类，具有适应性强、生长快、易起捕、养殖周期短等优点，加之肉质鲜美细嫩，无肌间刺，外形美观，深受养殖者和消费者欢迎。大口黑鲈是以肉食为主的杂食性鱼类，刚孵出鱼苗的开口饵料为轮虫和无节幼体，稚鱼以食枝角类为主，幼鱼以丰年虾、水蚤和饲料混合喂养。

近年来，我国的大口黑鲈养殖业快速发展，养殖的集约化程度不断提高，养殖环境和养殖水域的水质日趋恶化，导致大口黑鲈幼苗的存活率显著降低，容易感染柱状黄杆菌、弹状病毒病、熟身病、气泡病、肠炎病等疾病。有关渔业主管部门开始推广水产健康养殖技术。使用微生态制剂是实施水产健康养殖的重要技术手段之一。微生态制剂产品，俗称活性益生菌，是利用微生物自身新陈代谢的生理功能，并采取一定的人工技术措施，创造有利于微生物生长，繁殖的良好环境，加速微生物的增殖及其新陈代谢生理功能，从而使污水中的有机性污染物质得意降解，去除的污水处理技术。它具有无毒副作用、无污染、无残留和低成本等特点，可以抑制病原微生物的生长，提高养殖对象自身的免疫力，维持养殖生态平衡。

大口黑鲈幼苗高密度养殖，水体内致病微生物易存活、易滋生，无法利用自身修复能力来消毒，不利于循环养殖，目前还缺乏针对大口黑鲈幼苗高密度养殖设计的调水微生态制剂。

发明内容

针对上述需求，申请人开发出了一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂来解决以上问题。

为了实现上述目的，本发明公开了如下的技术方案：

一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，所述制剂包括以下重量份的原料：芽孢杆菌粉45-50份、光合细菌35-40份、乳酸杆菌3-5份、赤红球菌3-6份、酵母菌1-4份。

优选的，上述一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，所述制剂包括以下重量份的原料：芽孢杆菌粉45 50份、光合细菌35 40份、乳酸杆菌4 5份、赤红球菌4 5份、酵母菌2 3份。

优选的，上述一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，所述制剂包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌粉48份、光合细菌40份、乳酸杆菌5份、赤红球菌4份、酵母菌3份。

优选的，上述一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，所述制剂中的芽孢杆菌，按重量计由枯草芽孢杆菌50％、地衣芽孢杆菌20％、蜡状芽孢杆菌20％、解淀粉芽胞杆菌10％组成。

优选的，上述一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，所述制剂中的光合细菌，按重量计由蓝细菌35％、球形红假单胞菌23％、荚膜红假单胞菌20％、胶质红假单胞菌12％、沼泽红假单胞菌10％等组成。

优选的，上述一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，所述酵母菌为解脂耶氏酵母。

上述用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：

S1：菌体的制备。

I：将所述比重的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌，置于发酵罐中，初始培养基为大豆粉40g/L、玉米浆25g/L、葡萄糖15g/L、磷酸氢二钾3g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.35g/L、酵母浸粉0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、硫酸亚铁0.1g/L、碳酸钙0.1g/L；接种量2％，发酵温度37℃，搅拌速度为150-200rpm，培养16-24小时，控制发酵罐中的PH为6.5-7.0；

Ⅱ:将所述比重的蓝细菌、球形红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、胶质红假单胞菌、沼泽红假单胞菌置于发酵盆中，初始培养基为醋酸钠1.145g/L、蛋白胨0.055g/L、碳酸氢钠0.6g/L、硫代硫酸钠0.4g/L、氯化钠0.3g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.05g/L。接种量为10％，用60W白炽灯泡光照培养，温度在30-37℃，发酵时间为4-5天，控制PH为6.5-7.5；

Ⅲ：将所述的解脂耶氏酵母置于发酵罐中，初始培养基为甘油40g/L、磷酸二氢钾42.9g/L、硫酸铵5g/L、硫酸钙1g/L、硫酸钾14.3g/L、硫酸镁11.7g/L、PTM4储液2.5ml/L和维生素储液1.0ml/L。接种量5％，发酵温度28℃，搅拌速度为300rpm，培养12-18小时，发酵过程中用50％的氨水控制发酵罐中的PH为5.5；

Ⅳ：所述的赤红球菌置于发酵罐中，初始培养基为糊精10g/L、葡萄糖15g/L、酵母提取物15g/L、玉米浆粉3g/L、改性聚硅氧烷消泡剂0.2g/L。在发酵过程中，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃，24h后发酵温度32℃，发酵时间为24-36小时；

Ⅴ：所属的乳酸杆菌置于发酵罐中，初始培养基为糖蜜40g/L，玉米浆10g/L，磷酸氢二钾0.8g/L，转速130-160r/min，接种量2.0％，发酵温度32℃，发酵时间为12-18小时；

S2：将S1(I-Ⅴ)中得到的发酵液分别经10000r/min的转速高速离心20分钟，去除上清液，得到菌体；

S3：将S2中得到的菌体分别在-80℃低温下干燥12个小时，直至干燥块状；

S4：将S3中冻干得到的菌块研磨成粉，按上述比重充分混合，并装入密封袋内低温保存。

优选的，上述用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂的制备方法，所述解脂耶氏酵母选自CCTCC保藏号为M2013606的菌株。所述菌株的保藏信息见公开号为CN104711201A的中国专利。

优选的，上述用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂的制备方法，所述赤红球菌选自CGMCC保藏号为17525的菌株。所述菌株的保藏信息见公开号为CN110184215A的中国专利。

本发明至少具有以下有益效果：

本发明中的芽孢杆菌能有效地降解有机磷农药、有机氯农药，也可用作絮凝剂处理污水；光合细菌能有效地吸收利用水体中的氨、亚硝酸盐、硫化氢等有害物质，还能作为刚孵出苗种的开口饵料，大幅度提高苗种的成活率；赤红球菌类对水体中的无机氮磷具有较强的净化能力，维持了良好的生态水环境；酵母菌能够分解消耗水体中的脂类残留物，并且作为单细胞蛋白，营养丰富、能增强大口黑鲈幼苗的免疫能力。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

实施例1

一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，包括以下重量份的原料：芽孢杆菌粉50份、光合细菌40份、乳酸杆菌4份、赤红球菌4份、解脂耶氏酵母菌2份。其中芽孢杆菌由为枯草芽孢杆菌50％、地衣芽孢杆菌20％、蜡状芽孢杆菌20％、解淀粉芽胞杆菌10％组成；光合细菌由为蓝细菌35％、球形红假单胞菌23％、荚膜红假单胞菌20％、胶质红假单胞菌12％、沼泽红假单胞菌10％等组成。

其制备方法，包括以下步骤：

S1：菌体的制备。

I：将所述比重的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌，置于发酵罐中，初始培养基为大豆粉40g/L、玉米浆25g/L、葡萄糖15g/L、磷酸氢二钾3g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.35g/L、酵母浸粉0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、硫酸亚铁0.1g/L、碳酸钙0.1g/L。接种量2％，发酵温度37℃，搅拌速度为150rpm，培养16小时，控制发酵罐中的PH为6.5。

Ⅱ:将所述比重的蓝细菌、球形红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、胶质红假单胞菌、沼泽红假单胞菌置于发酵盆中，初始培养基为醋酸钠1.145g/L、蛋白胨0.055g/L、碳酸氢钠0.6g/L、硫代硫酸钠0.4g/L、氯化钠0.3g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.05g/L。接种量为10％，用60W白炽灯泡光照培养，温度在30℃，发酵时间为4天，控制PH为6.5。

Ⅲ：将所述的解脂耶氏酵母置于发酵罐中，初始培养基为甘油40g/L、磷酸二氢钾42.9g/L、硫酸铵5g/L、硫酸钙1g/L、硫酸钾14.3g/L、硫酸镁11.7g/L、PTM4储液2.5ml/L和维生素储液1.0ml/L。接种量5％，发酵温度28℃，搅拌速度为300rpm，培养12小时，发酵过程中用50％的氨水控制发酵罐中的PH为5.5。

Ⅳ：所述的赤红球菌置于发酵罐中，初始培养基为糊精10g/L、葡萄糖15g/L、酵母提取物15g/L、玉米浆粉3g/L、改性聚硅氧烷消泡剂0.2g/L。在发酵过程中，搅拌速度控制在180r/min，移种后发酵初期温度28℃，24h后发酵温度32℃，发酵时间为24小时。

Ⅴ：所属的乳酸杆菌置于发酵罐中，初始培养基为糖蜜40g/L，玉米浆10g/L，磷酸氢二钾0.8g/L，转速120r/min，接种量2.0％，发酵温度32℃，发酵时间为12小时。

S2：将S1(I-Ⅴ)中得到的发酵液分别经10000r/min的转速高速离心20分钟，去除上清液，得到菌体；

S3：将S2中得到的菌体分别在-80℃低温下干燥12个小时，直至干燥块状；

S4：将S3中冻干得到的菌块研磨成粉，按上述比重充分混合，并装入密封袋内低温保存。

实施例2

一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，包括以下重量份的原料：芽孢杆菌粉46份、光合细菌40份、乳酸杆菌5份、赤红球菌6份、解脂耶氏酵母菌3份。其中芽孢杆菌由为枯草芽孢杆菌50％、地衣芽孢杆菌20％、蜡状芽孢杆菌20％、解淀粉芽胞杆菌10％组成；光合细菌由为蓝细菌35％、球形红假单胞菌23％、荚膜红假单胞菌20％、胶质红假单胞菌12％、沼泽红假单胞菌10％等组成。

其制备方法，包括以下步骤：

S1：菌体的制备。

I：将所述比重的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌，置于发酵罐中，初始培养基为大豆粉40g/L、玉米浆25g/L、葡萄糖15g/L、磷酸氢二钾3g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.35g/L、酵母浸粉0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、硫酸亚铁0.1g/L、碳酸钙0.1g/L。接种量2％，发酵温度37℃，搅拌速度为200rpm，培养24小时，控制发酵罐中的PH为7.0。

Ⅱ:将所述比重的蓝细菌、球形红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、胶质红假单胞菌、沼泽红假单胞菌置于发酵盆中，初始培养基为醋酸钠1.145g/L、蛋白胨0.055g/L、碳酸氢钠0.6g/L、硫代硫酸钠0.4g/L、氯化钠0.3g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.05g/L。接种量为10％，用60W白炽灯泡光照培养，温度在37℃，发酵时间为5天，控制PH为7.5。

Ⅲ：将所述的解脂耶氏酵母置于发酵罐中，初始培养基为甘油40g/L、磷酸二氢钾42.9g/L、硫酸铵5g/L、硫酸钙1g/L、硫酸钾14.3g/L、硫酸镁11.7g/L、PTM4储液2.5ml/L和维生素储液1.0ml/L。接种量5％，发酵温度28℃，搅拌速度为300rpm，培养18小时，发酵过程中用50％的氨水控制发酵罐中的PH为5.5。

Ⅳ：所述的赤红球菌置于发酵罐中，初始培养基为糊精10g/L、葡萄糖15g/L、酵母提取物15g/L、玉米浆粉3g/L、改性聚硅氧烷消泡剂0.2g/L。在发酵过程中，搅拌速度控制在200r/min，移种后发酵初期温度28℃，24h后发酵温度32℃，发酵时间为36小时。

Ⅴ：所属的乳酸杆菌置于发酵罐中，初始培养基为糖蜜40g/L，玉米浆10g/L，磷酸氢二钾0.8g/L，转速160r/min，接种量2.0％，发酵温度32℃，发酵时间为18小时。

S2：将S1(I-Ⅴ)中得到的发酵液分别经10000r/min的转速高速离心20分钟，去除上清液，得到菌体；

S3：将S2中得到的菌体分别在-80℃低温下干燥12个小时，直至干燥块状；

S4：将S3中冻干得到的菌块研磨成粉，按上述比重充分混合，并装入密封袋内低温保存。

实施例3

一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，包括以下重量份的原料：芽孢杆菌粉48份、光合细菌40份、乳酸杆菌5份、赤红球菌4份、解脂耶氏酵母菌3份。其中芽孢杆菌由为枯草芽孢杆菌50％、地衣芽孢杆菌20％、蜡状芽孢杆菌20％、解淀粉芽胞杆菌10％组成；光合细菌由为蓝细菌35％、球形红假单胞菌23％、荚膜红假单胞菌20％、胶质红假单胞菌12％、沼泽红假单胞菌10％等组成。

其制备方法，包括以下步骤：

S1：菌体的制备。

I：将所述比重的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌，置于发酵罐中，初始培养基为大豆粉40g/L、玉米浆25g/L、葡萄糖15g/L、磷酸氢二钾3g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.35g/L、酵母浸粉0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、硫酸亚铁0.1g/L、碳酸钙0.1g/L。接种量2％，发酵温度37℃，搅拌速度为200rpm，培养24小时，控制发酵罐中的PH为7.0。

Ⅱ:将所述比重的蓝细菌、球形红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、胶质红假单胞菌、沼泽红假单胞菌置于发酵盆中，初始培养基为醋酸钠1.145g/L、蛋白胨0.055g/L、碳酸氢钠0.6g/L、硫代硫酸钠0.4g/L、氯化钠0.3g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.05g/L。接种量为10％，用60W白炽灯泡光照培养，温度在37℃，发酵时间为4天，控制PH为7.0。

Ⅲ：将所述的解脂耶氏酵母置于发酵罐中，初始培养基为甘油40g/L、磷酸二氢钾42.9g/L、硫酸铵5g/L、硫酸钙1g/L、硫酸钾14.3g/L、硫酸镁11.7g/L、PTM4储液2.5ml/L和维生素储液1.0ml/L。接种量5％，发酵温度28℃，搅拌速度为300rpm，培养12小时，发酵过程中用50％的氨水控制发酵罐中的PH为5.5。

Ⅳ：所述的赤红球菌置于发酵罐中，初始培养基为糊精10g/L、葡萄糖15g/L、酵母提取物15g/L、玉米浆粉3g/L、改性聚硅氧烷消泡剂0.2g/L。在发酵过程中，搅拌速度控制在200r/min，移种后发酵初期温度28℃，24h后发酵温度32℃，发酵时间为36小时。

Ⅴ：所属的乳酸杆菌置于发酵罐中，初始培养基为糖蜜40g/L，玉米浆10g/L，磷酸氢二钾0.8g/L，转速160r/min，接种量2.0％，发酵温度32℃，发酵时间为18小时。

S2：将S1(I-Ⅴ)中得到的发酵液分别经10000r/min的转速高速离心20分钟，去除上清液，得到菌体；

S3：将S2中得到的菌体分别在-80℃低温下干燥12个小时，直至干燥块状；

S4：将S3中冻干得到的菌块研磨成粉，按上述比重充分混合，并装入密封袋内低温保存。

实施例4

一种用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，包括以下重量份的原料：芽孢杆菌粉50份、光合细菌35份、乳酸杆菌5份、赤红球菌6份、解脂耶氏酵母菌4份。其中芽孢杆菌由为枯草芽孢杆菌50％、地衣芽孢杆菌20％、蜡状芽孢杆菌20％、解淀粉芽胞杆菌10％组成；光合细菌由为蓝细菌35％、球形红假单胞菌23％、荚膜红假单胞菌20％、胶质红假单胞菌12％、沼泽红假单胞菌10％等组成。

其制备方法，包括以下步骤：

S1：菌体的制备。

I：将所述比重的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌，置于发酵罐中，初始培养基为大豆粉40g/L、玉米浆25g/L、葡萄糖15g/L、磷酸氢二钾3g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.35g/L、酵母浸粉0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、硫酸亚铁0.1g/L、碳酸钙0.1g/L。接种量2％，发酵温度37℃，搅拌速度为200rpm，培养24小时，控制发酵罐中的PH为6.5。

Ⅱ:将所述比重的蓝细菌、球形红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、胶质红假单胞菌、沼泽红假单胞菌置于发酵盆中，初始培养基为醋酸钠1.145g/L、蛋白胨0.055g/L、碳酸氢钠0.6g/L、硫代硫酸钠0.4g/L、氯化钠0.3g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.05g/L。接种量为10％，用60W白炽灯泡光照培养，温度在37℃，发酵时间为5天，控制PH为7.0。

Ⅲ：将所述的解脂耶氏酵母置于发酵罐中，初始培养基为甘油40g/L、磷酸二氢钾42.9g/L、硫酸铵5g/L、硫酸钙1g/L、硫酸钾14.3g/L、硫酸镁11.7g/L、PTM4储液2.5ml/L和维生素储液1.0ml/L。接种量5％，发酵温度28℃，搅拌速度为300rpm，培养12小时，发酵过程中用50％的氨水控制发酵罐中的PH为5.5。

Ⅳ：所述的赤红球菌置于发酵罐中，初始培养基为糊精10g/L、葡萄糖15g/L、酵母提取物15g/L、玉米浆粉3g/L、改性聚硅氧烷消泡剂0.2g/L。在发酵过程中，搅拌速度控制在200r/min，移种后发酵初期温度28℃，24h后发酵温度32℃，发酵时间为24小时。

Ⅴ：所属的乳酸杆菌置于发酵罐中，初始培养基为糖蜜40g/L，玉米浆10g/L，磷酸氢二钾0.8g/L，转速160r/min，接种量2.0％，发酵温度32℃，发酵时间为12小时。

S2：将S1(I-Ⅴ)中得到的发酵液分别经10000r/min的转速高速离心20分钟，去除上清液，得到菌体；

S3：将S2中得到的菌体分别在-80℃低温下干燥12个小时，直至干燥块状；

S4：将S3中冻干得到的菌块研磨成粉，按上述比重充分混合，并装入密封袋内低温保存。

实施例5

测试例

使用上述实施例1至4制备的用于大口黑鲈幼苗养殖调水微生态制剂，对同一环境的不同养殖池中进行调水处理(每个实施例制备的菌粉使用三个养殖池，施加量为1.5g菌粉/立方米水体)，对照组1使用的调水微生态制剂与实施例4一致，但不包含赤红球菌，对照组2不添加任何制剂。并在使用前，和使用7天后，分别检测养殖水体中的总大肠菌群浓度(GB5750)、水体中总磷(钼酸铵分光光度法(GB1189389))、氨氮含量(采用纳氏试剂光度法(GB747987))最终比较结果如表1所示：

表1比较结果

由上表1可以看出，使用了本方案中的微生态制剂后，水中总大肠菌群、水体中总磷、总氨氮含量的浓度得到了下降，且赤红球菌与芽孢杆菌、光合细菌、乳酸杆菌和酵母菌联合使用较对照组1取得更好的效果，尤其是使用实施例二中制备的微生态制剂，养殖水体中的各项三项指标明显的下降，可以证明本方案中的微生态制剂可以减少水中的细菌和有害化学物质，赤红球菌与芽孢杆菌、光合细菌、乳酸杆菌和酵母菌联合使用更利于大口黑鲈幼苗的养殖。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种制剂在用于大口黑鲈幼苗养殖的调水微生态剂中的应用，其特征在于，所述制剂由以下重量份的原料制成：枯草芽孢杆菌粉48份、光合细菌40份、乳酸杆菌5份、赤红球菌4份、酵母菌3份；

所述制剂中的芽孢杆菌，按重量计由枯草芽孢杆菌50％、地衣芽孢杆菌20%、蜡状芽孢杆菌20%、解淀粉芽胞杆菌10%组成；

所述制剂中的光合细菌，按重量计由蓝细菌35％、球形红假单胞菌23%、荚膜红假单胞菌20%、胶质红假单胞菌12%、沼泽红假单胞菌10%组成；

所述酵母菌为解脂耶氏酵母，选自CCTCC保藏号为M2013606的菌株；

所述赤红球菌选自CGMCC保藏号为17525的菌株；

上述制剂的制备方法，包括以下步骤：

S1：菌体的制备；

I：将所述比重的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌，置于发酵罐中，初始培养基为大豆粉40 g/L、玉米浆25 g/L、葡萄糖15 g/L、磷酸氢二钾3 g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.35g/L、酵母浸粉0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、硫酸亚铁0.1g/L、碳酸钙0.1g/L；接种量2%，发酵温度37℃，搅拌速度为150-200rpm，培养16-24小时，控制发酵罐中的PH为6.5-7.0；

Ⅱ:将所述比重的蓝细菌、球形红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、胶质红假单胞菌、沼泽红假单胞菌置于发酵盆中，初始培养基为醋酸钠1.145g／L、蛋白胨0.055g／L、碳酸氢钠0.6g／L、硫代硫酸钠0.4g／L、氯化钠0．3g／L、硫酸镁0.1g／L、磷酸二氢钾0.05g／L；接种量为10%，用60W白炽灯泡光照培养，温度在30-37℃，发酵时间为4-5天，控制PH为6.5-7.5；

Ⅲ：将所述的解脂耶氏酵母置于发酵罐中，初始培养基为甘油40 g/L、磷酸二氢钾42.9g/L、硫酸铵5g/L、硫酸钙1 g/L、硫酸钾14.3 g/L、硫酸镁11.7 g/L、PTM4储液2.5ml/L和维生素储液1.0 ml/L；接种量5%，发酵温度28℃，搅拌速度为300rpm，培养12-18小时，发酵过程中用50%的氨水控制发酵罐中的PH为5.5；

Ⅳ：所述的赤红球菌置于发酵罐中，初始培养基为糊精10g/L、葡萄糖15g/L、酵母提取物15g/L、玉米浆粉3g/L、改性聚硅氧烷消泡剂0.2g/L；在发酵过程中，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃，24h后发酵温度32℃，发酵时间为24-36小时；

Ⅴ：所述的乳酸杆菌置于发酵罐中，初始培养基为糖蜜40g/L，玉米浆10g/L，磷酸氢二钾0.8g/L，转速130-160r/min，接种量2.0%，发酵温度32℃，发酵时间为12-18小时；

S2：将S1(I-Ⅴ)中得到的发酵液分别经10000r/min的转速高速离心20分钟，去除上清液，得到菌体；

S3：将S2中得到的菌体分别在-80℃低温下干燥12个小时，直至干燥块状；

S4：将S3中冻干得到的菌块研磨成粉，按上述比重充分混合，并装入密封袋内低温保存。