CN113068612A - 一种提高草莓种子组培发芽率的方法 - Google Patents

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杨仕品
钟霈霖
乔荣
李荣飞
王爱华
马红叶
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Abstract

本发明公开了一种提高草莓种子组培发芽率的方法，属于野生草莓种子的组织培养领域，方法包括浸种、准备培养基和用具、种子及器具消毒、种子二次杀菌、种皮处理和种子接种。本发明能将野生草莓种子的组培发芽率从0提高到70％以上，实现了高发芽率，草莓种子的自然发芽率仅为30‑40％，该方法已经远远超过草莓种子的自然发芽率。通过对种子杀菌和消毒，可以有效的保证了种子的生长环境，同时在杀菌过程中实现了对野生草莓种子组织的唤醒，并通过对种皮进行物理方法处理，破除了种子的生理性休眠，大大的提高了草莓种子的发芽率。

Description

一种提高草莓种子组培发芽率的方法
技术领域
本发明涉及野生草莓种子的组织培养领域，尤其涉及一种提高草莓种子组培发芽率的方法。
背景技术
草莓属于蔷薇科草莓属，是多年生常绿草本植物，在园艺学上属于浆果类果树。草莓果实鲜嫩多汁，酸甜香郁，风味独特，营养丰富，与其他果树相比，栽培周期短，适宜设施栽培，是一种经济效益较高的果树。草莓品种的不断改良、更新是世界草莓产业发展的基础，至今国内外已育成的草莓品种主要是通过常规杂交育种手段，以杂交种子所得的实生后代进行选育获得。种子播种，获得实生苗是目前草莓育种工作中的重要环节之一。野生草莓有着部分优良的特性，需要把野生草莓进行培育，但是在培育过程中，野生草莓种子发芽率严重影响培育的研究，现有的野生草莓自然发芽率只有5-10％，因此，需要研究出一种能搞提高野生草莓种子发芽率的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高草莓种子组培发芽率的方法，解决现有野生草莓种子发芽率低的技术问题。
一种提高草莓种子组培发芽率的方法，所述方法包括如下步骤：
步骤1：将野生草莓种子置于敞口容器，倒入蒸馏水淹没种子，将该容器放于4℃冰箱中静置2d；
步骤2：配制培养基，将培养基置于118℃灭菌锅中灭菌30min待用，同时将细质铁砂布、镊子、培养皿和滤纸用报纸包裹严实后同培养基一起灭菌；
步骤3：将浸泡好的野生草莓种子从容器滤出，置于滤纸上吸干水分，然后与纱布、镊子、培养皿、滤纸、次氯酸钠溶液、培养基所需的器具放在超净工作台，开紫外灯杀菌30min；
步骤4：将野生草莓种子放入培养皿中，倒入杀菌液对野生草莓种子二次杀菌处理，将二次杀菌后野生草莓种子用无菌水反复清洗干净置于滤纸上吸干水分；
步骤5：对野生草莓种子的皮进行处理，直到种皮变为原来的五分之一为止；
步骤6：用镊子将处理好的野生草莓种子接种到MS培养基中，封口后放入培养室或光照培养箱中培养。
进一步地，所述步骤2中，培养基包括33g/LNH4NO3、7.4g/L MgSO4、2.1g/LZnSO4、1g/L CoCl2、0.83g/LKI、0.3g/L烟酸、0.1g/L盐酸硫胺素、2g/L甘氨酸、5g蔗糖、0.57g/L卡那霉素。
进一步地，所述步骤4中，杀菌液为浓度1％次氯酸钠浸泡20min，用无菌水反复清洗4-5次后置于滤纸上吸干水分。
进一步地，所述步骤4中，杀菌液为70％乙醇、1％汞和水混合溶液，浸泡20-25min，然后使用清水反复清洗，直到将表面的汞完全清洗，然后置于滤纸上吸干水分。
进一步地，所述步骤5中，种皮处理过程为，将野生草莓种子均匀单层摊一种平坦的砂纸上，然后盖上另外一张砂纸，并在砂纸的上方覆盖一层沙子，沙子对野生草莓种子的压力为0.1-0.08N压力，然后固定上面一张砂纸的四边，来回拖动底部的砂纸8-10，野生草莓种子在两张砂纸之间滚动，然后再固定底部砂纸的四边，来回拖动上面的一张砂纸5-8，然后将野生草莓种子移到两张砂布之间，然后双手拉住上面一张砂布并向下压，压力为0.1-0.2N，并来回拖动14-17次。
进一步地，所述步骤5中，将野生草莓种子与浓度为18.4mol/L的硫酸进行浸泡，野生草莓种子与硫酸的比为1:0.4，浸泡时间为1-4min，同时浸泡时，使用玻璃棒进行搅拌。
本发明采用了上述技术方案，本发明具有以下技术效果：
本发明能将野生草莓种子的组培发芽率从0提高到70％以上，实现了高发芽率，草莓种子的自然发芽率仅为30-40％，该方法已经远远超过草莓种子的自然发芽率。通过对种子杀菌和消毒，可以有效的保证了种子的生长环境，同时在杀菌过程中实现了对野生草莓种子组织的唤醒，并通过对种皮进行物理方法处理，破除了种子的生理性休眠，大大的提高了草莓种子的发芽率。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，举出优选实施例，对本发明进一步详细说明。然而，需要说明的是，说明书中列出的许多细节仅仅是为了使读者对本发明的一个或多个方面有一个透彻的理解，即便没有这些特定的细节也可以实现本发明的这些方面。
实施例1：
一种提高草莓种子组培发芽率的方法，所述方法包括如下步骤：
步骤1：将野生草莓种子置于敞口容器，倒入蒸馏水淹没种子，将该容器放于4℃冰箱中静置2d。
步骤2：配制培养基，将培养基置于118℃灭菌锅中灭菌30min待用，同时将细质铁砂布、镊子、培养皿和滤纸用报纸包裹严实后同培养基一起灭菌。
培养基包括33g/LNH4NO3、7.4g/L MgSO4、2.1g/L ZnSO4、1g/L CoCl2、0.83g/LKI、0.3g/L烟酸、0.1g/L盐酸硫胺素、2g/L甘氨酸、5g蔗糖、0.57g/L卡那霉素。
步骤3：将浸泡好的野生草莓种子从容器滤出，置于滤纸上吸干水分，然后与纱布、镊子、培养皿、滤纸、次氯酸钠溶液、培养基所需的器具放在超净工作台，开紫外灯杀菌30min。
步骤4：将野生草莓种子放入培养皿中，倒入浓度1％次氯酸钠浸泡20min，用无菌水反复清洗4-5次后置于滤纸上吸干水分。
步骤5：对野生草莓种子的皮进行处理，处理过程为将野生草莓种子均匀单层摊一种平坦的砂纸上，然后盖上另外一张砂纸，并在砂纸的上方覆盖一层沙子，沙子对野生草莓种子的压力为0.1-0.08N压力，然后固定上面一张砂纸的四边，来回拖动底部的砂纸8-10，野生草莓种子在两张砂纸之间滚动，然后再固定底部砂纸的四边，来回拖动上面的一张砂纸5-8，然后将野生草莓种子移到两张砂布之间，然后双手拉住上面一张砂布并向下压，压力为0.1-0.2N，并来回拖动14-17次。，直到种皮变为原来的五分之一为止。
步骤6：用镊子将处理好的野生草莓种子接种到MS培养基中，封口后放入培养室或光照培养箱中培养。
培养8-10天后，统计发芽率为70.3％。
实施例2：
一种提高草莓种子组培发芽率的方法，所述方法包括如下步骤：
步骤1：将野生草莓种子置于敞口容器，倒入蒸馏水淹没种子，将该容器放于4℃冰箱中静置2d。
步骤2：配制培养基，将培养基置于118℃灭菌锅中灭菌30min待用，同时将细质铁砂布、镊子、培养皿和滤纸用报纸包裹严实后同培养基一起灭菌。
培养基包括33g/LNH4NO3、7.4g/L MgSO4、2.1g/L ZnSO4、1g/L CoCl2、0.83g/LKI、0.3g/L烟酸、0.1g/L盐酸硫胺素、2g/L甘氨酸、5g蔗糖、0.57g/L卡那霉素。
步骤3：将浸泡好的野生草莓种子从容器滤出，置于滤纸上吸干水分，然后与纱布、镊子、培养皿、滤纸、次氯酸钠溶液、培养基所需的器具放在超净工作台，开紫外灯杀菌30min。
步骤4：将野生草莓种子放入培养皿中，倒入70％乙醇、1％汞和水混合溶液，浸泡20-25min，然后使用清水反复清洗，直到将表面的汞完全清洗，然后置于滤纸上吸干水分。
步骤5：对野生草莓种子的皮进行处理，处理过程为将野生草莓种子与浓度为18.4mol/L的硫酸进行浸泡，野生草莓种子与硫酸的比为1:0.4，浸泡时间为1-4min，同时浸泡时，使用玻璃棒进行搅拌，直到种皮变为原来的五分之一为止。
步骤6：用镊子将处理好的野生草莓种子接种到MS培养基中，封口后放入培养室或光照培养箱中培养。
培养8-10天后，统计发芽率为73.4％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种提高草莓种子组培发芽率的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
步骤1：将野生草莓种子置于敞口容器，倒入蒸馏水淹没种子，将该容器放于4℃冰箱中静置2d；
步骤2：配制MS培养基，将培养基置于118℃灭菌锅中灭菌30min待用，同时将细质铁砂布、镊子、培养皿和滤纸用报纸包裹严实后同培养基一起灭菌；
步骤3：将浸泡好的野生草莓种子从容器滤出，置于滤纸上吸干水分，然后与纱布、镊子、培养皿、滤纸、次氯酸钠溶液、培养基所需的器具放在超净工作台，开紫外灯杀菌30min；
步骤4：将野生草莓种子放入培养皿中，倒入杀菌液对野生草莓种子二次杀菌处理，将二次杀菌后野生草莓种子用无菌水反复清洗干净置于滤纸上吸干水分；
步骤5：对野生草莓种子的皮进行处理，直到种皮变为原来的五分之一为止；
步骤6：用镊子将处理好的野生草莓种子接种到MS培养基中，封口后放入培养室或光照培养箱中培养。
2.根据权利要求1所述的一种提高草莓种子组培发芽率的方法，其特征在于：所述步骤2中，培养基包括33g/LNH4NO3、7.4g/L MgSO4、2.1g/LZnSO4、1g/L CoCl2、0.83g/LKI、0.3g/L烟酸、0.1g/L盐酸硫胺素、2g/L甘氨酸、5g蔗糖、0.57g/L卡那霉素。
3.根据权利要求2所述的一种提高草莓种子组培发芽率的方法，其特征在于：所述步骤4中，杀菌液为浓度1％次氯酸钠浸泡20min，用无菌水反复清洗4-5次后置于滤纸上吸干水分。
4.根据权利要求2所述的一种提高草莓种子组培发芽率的方法，其特征在于：所述步骤4中，杀菌液为70％乙醇、1％汞和水混合溶液，浸泡20-25min，然后使用清水反复清洗，直到将表面的汞完全清洗，然后置于滤纸上吸干水分。
5.根据权利要求4所述的一种提高草莓种子组培发芽率的方法，其特征在于：所述步骤5中，种皮的物理处理过程为，将野生草莓种子均匀单层摊一种平坦的砂纸上，然后盖上另外一张砂纸，并在砂纸的上方覆盖一层沙子，沙子对野生草莓种子的压力为0.1-0.08N压力，然后固定上面一张砂纸的四边，来回拖动底部的砂纸8-10，野生草莓种子在两张砂纸之间滚动，然后再固定底部砂纸的四边，来回拖动上面的一张砂纸5-8，然后将野生草莓种子移到两张砂布之间，然后双手拉住上面一张砂布并向下压，压力为0.1-0.2N，并来回拖动14-17次。
6.根据权利要求4所述的一种提高草莓种子组培发芽率的方法，其特征在于：所述步骤5中，将野生草莓种子与浓度为18.4mol/L的硫酸进行浸泡，野生草莓种子与硫酸的比为1:0.4，浸泡时间为1-4min，同时浸泡时，使用玻璃棒进行搅拌。
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