CN104705187B

CN104705187B - 一种红根野蚕豆组织培养方法

Info

Publication number: CN104705187B
Application number: CN201510121414.4A
Authority: CN
Inventors: 施恩校
Original assignee: Maguan Zhuan Da Agricultural Science And Technology Co Ltd
Current assignee: Maguan Zhuan Da Agricultural Science And Technology Co Ltd
Priority date: 2015-03-19
Filing date: 2015-03-19
Publication date: 2017-03-29
Anticipated expiration: 2035-03-19
Also published as: CN104705187A

Abstract

本发明涉及一种红根野蚕豆组织培养方法，属于植物组织培养技术领域。本发明的技术主要分为两个部分，第一步：以红根野蚕豆的种子为材料，在诱导培养基一号培养基中对红根野蚕豆进行发芽诱导；第二步：将发芽长到五到六厘米的红根野蚕豆种苗以节为单位进行切段处理，并把切好的茎段接种于诱导芽和根的二号培养基中，从而培育出红根野蚕豆完整植株。本发明的红根野蚕豆组织培养方法解决了红根野蚕豆自然繁殖能力低的问题，从而满足了人类对红根野蚕豆的需求。

Description

一种红根野蚕豆组织培养方法

技术领域

本发明涉及一种培养方法，具体涉及一种红根野蚕豆组织培养方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

红根野蚕豆，植物界中被子植物门、双子植物纲、玄参科、野蚕豆属、红根野蚕豆种，又名滑野蚕豆、大花胡麻草、小红药等，为玄参科植物红根野蚕豆全草，性温、味酸、微辛，用于散瘀止血、消肿止痛；主治咯血、咳血、吐血、妇女闭经、内伤瘀血、中老年人风湿痹痛、筋骨痛、脑血栓、脑溢血、酒精肝等。作为一种名贵中药材，现今由于自然繁殖能力低市场需求大，人类的过度采摘等原因导致自然资源稀缺，无法满足人类对红根野蚕豆的药用需求。

19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活；1902年，德国植物学家哈伯兰特细胞全能性的理论是植物组培的理论基础。1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。

植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养即植物无菌培养技术，广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术；狭义是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

中国中药杂志2003年12月第28卷第12期，薛建平、葛德燕等对玄参科地黄组织培养的研究进行了阐述。1983年，毛文岳等人就对地黄的组织培养进行了研究，其中吴美芳等人以怀地黄北京一号，新鲜的块根为外植体进行培育，得出完整植株；毛文岳等以地黄茎尖为外植体进行培养也获得了地黄完整植株。迄今为止国内外对地黄、金鱼草、玄参等玄参科植物组织培养方面都取得了显著的成功。

虽然地黄、金鱼草等都是玄参科植物，现今国内外对地黄、金鱼草等玄参科植物组织培养研究也相当成熟，但是红根野蚕豆作为一种名贵而稀缺的中药材，其组织培养在国内外仍然是一片空白，现今红根野蚕豆的繁殖方法还停留在种子土播的繁殖方式上，这种方法具有成本高、发芽率低、不易成活(成活率低于百分之一)的缺点。鉴于这些传统的繁殖方式上的缺点和不足，急待研究出一套适合红根野蚕豆组织培养技术，用于解决红根野蚕豆自然繁殖能力低的问题，从而在一定程度上满足人类对红根野蚕豆的需求，为中药材发展带来更大的社会效益和经济效益。

植物组织培养方法的专利很多，中国发明“一种玉米的组织培养方法”，申请号201210011592.8通过基因改良与组织培养，以实现玉米的人工快速繁育；中国发明“一种草莓继代培养方法”，申请号201310212115.2采用低温-常温的培养条件，大幅度提高体细胞胚的成熟率，但是红根野蚕豆组织培养的方法还未见报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺点和不足，提供一种红根野蚕豆组织培养方法，用于解决红根野蚕豆自然繁殖能力低的问题。

为实现上述发明的目的，本发明采取的技术方案如下：

一种红根野蚕豆组织培养方法，包括如下步骤：

(1)外植体的处理和保存：将从野外采摘回来的红根野蚕豆种子作为外植体，外植体用84消毒液的100倍稀释液浸泡8～15分钟，再用自来水冲洗0.5～1小时，置于干净的玻璃器皿内备用，未用完的放于冰箱内保存以便日后使用；

(2)外植体的灭菌：将处理过的外植体置于超净工作台上，用75％的酒精消毒25～35秒，再在体积浓度为0.1％的升汞中浸泡8～10分钟后，用无菌水冲洗2～4次；

(3)外植体接种：将上述灭菌过的外植体破壳接种于培养瓶中，培养基采用诱导培养基一号，并进行封口标记；

(4)组织培养：将接种好的培养瓶置于25～35℃的黑暗温室中培养5～8天，再置于25～35℃的光照温室中培养25～40天，得到红根野蚕豆种苗；

(5)继代培养：将培养好的平均株高5～6cm的红根野蚕豆种苗在超净工作台上用接种工具以节为单位进行切割，将切割好的茎段接种于诱导芽和根的培养基二号中，并进行封口；将接种好的苗置于20～30℃的黑暗温室中培养5～8天后，再置于25～30℃的光照温室中培养30～50天，得到红根野蚕豆的完整植株；

(6)炼苗和移栽：将培养好的红根野蚕豆完整植株置于温室大棚内进行5～8天的炼苗后，进行移栽。

步骤(3)所述的诱导培养基一号由如下成分组成：以一升计算：常量元素为：NH₄NO₃750～850mg、KNO₃900～1000mg、Cal₂·2H₂O 200～250mg、MgSO₄·7H₂O 150～200mg、KH₂PO₄320～380mg；微量元素：KI 0.80～0.85mg、H₃BO₃6.0～6.5mg、MnSO₄·4H₂O 22.0～22.5mg、ZnSO₄·7H₂O 8.3～8.8mg、Na₂MnO₄·2H₂O 0.22～0.28mg、CuSO₄·5H₂O 0.022～0.028mg、CoCl₂·6H₂O 0.022～0.028mg、FeSO₄·7H₂O 27.5～28mg、Na₂-EDTA·2H₂O 37～37.5mg；有机成分：肌醇80～120mg、烟酸0.3～0.8mg、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.3～0.8mg、盐酸硫胺素(维生素B1)0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、蔗糖25～35g、马铃薯45～55g、琼脂3～8g、余量为蒸馏水；PH值5.8。

步骤(5)所述的诱导芽和根的培养基二号由如下成分组成：以一升计算：常量元素为：NH₄NO₃750～850mg、KNO₃1800～2000mg、Cal₂·2H₂O 420～460mg、MgSO₄·7H₂O320～360mg、KH₂PO₄650～750mg；微量元素：KI 0.80～0.85mg、H₃BO₃6.0～6.5mg、MnSO₄·4H₂O22.0～22.5mg、ZnSO₄·7H₂O 8.3～8.8mg、Na₂MnO₄·2H₂O 0.22～0.28mg、CuSO₄·5H₂O0.022～0.028mg、CoCl₂·6H₂O 0.022～0.028mg、FeSO₄·7H₂O 27.5～28mg、Na₂-EDTA·2H₂O37～37.5mg；有机成分：肌醇80～120mg、烟酸0.3～0.8mg、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.3～0.8mg、盐酸硫胺素(维生素B1)0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、矮壮素0.8～1.2g、香蕉60～80g、马铃薯45～55g、蔗糖25～35g、碳粉0.8～1.2g、琼脂3～8g、余量为蒸馏水；PH值5.8。

步骤(3)所述的诱导培养基一号还可以用下列培养基：(1)MS+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0-6.0；(2)1/2MS+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0-6.0；(3)N6+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0-6.0。

步骤(5)所述的诱导芽和根的培养基二号还还可以用如下培养基：(1)MS+0.1～0.8mg/l6-BA+0.0～0.5mg/l NAA+6～8％香蕉+0.5～1g/l矮壮素+0.1～0.3％碳粉+0.4～0.6％琼脂+3～5％蔗糖、PH值5.0-6.0；(2)1/2MS+0.1～0.8mg/l 6-BA+0.0～0.5mg/l NAA+6～8％香蕉+0.5～1g/l矮壮素+0.1～0.3％碳粉+0.4～0.6％琼脂+3～5％蔗糖，PH值5.0-6.0。

步骤(4)所述光照温室的光照强度为1500～2500lx，光照时间为5～10小时。

步骤(5)所述的光照室温的光照强度为2000～3000lx，光照时间5～10小时。

本发明的有益效果是：本发明采用了黑暗温室-光照温室的培养条件，完善了诱导培养基和继代培养基及各个时期的培养温度、光照强度、光照时间，研究出一整套适合红根野蚕豆组织培养方法的流程，大大的降低了成本，培育出大量成活率高的红根野蚕豆试管苗，从而满足市场对红根野蚕豆苗木的需求，是红根野蚕豆组织培养的领跑者，为中药材发展带来更大的社会效益和经济效益。

附图说明

图1组织培养红根野蚕豆的流程图。

具体实施方式

下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。

实施例1

一种红根野蚕豆组织培养方法，包括如下步骤：

(1)外植体的处理和保存：将从野外采摘回来的红根野蚕豆作为外植体，外植体用84消毒液的100倍稀释液浸泡8分钟，再用自来水冲洗0.5小时，置于干净的玻璃器皿内备用，未用完的放于冰箱内保存以便日后使用；

(2)外植体的灭菌：将处理过的外植体置于超净工作台上，用75％的酒精消毒25秒，再在体积浓度为0.1％的升汞中浸泡8分钟后，用无菌水冲洗2次；

(4)组织培养：将接种好的培养瓶置于25℃的黑暗温室中培养5天，再置于25℃的光照温室中培养25天，得到红根野蚕豆种苗；

(5)继代培养：将培养好的平均株高5～6cm的红根野蚕豆种苗在超净工作台上用接种工具以节为单位进行切割，将切割好的茎段接种于诱导芽和根的培养基二号中，并进行封口；将接种好的苗置于20℃的黑暗温室中培养5天后，再置于25℃的光照温室中培养30天，得到红根野蚕豆的完整植株；

(6)炼苗和移栽：将培养好的红根野蚕豆完整植株置于温室大棚内进行5天的炼苗后，进行移栽。

步骤(3)所述的诱导培养基一号由如下成分组成：以一升计算：常量元素为：NH₄NO₃800mg、KNO₃950mg、Cal₂·2H₂O 220mg、MgSO₄·7H₂O 170mg、KH₂PO₄350mg；微量元素：KI0.83mg、H₃BO₃6.2mg、MnSO₄·4H₂O 22.3mg、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg、Na₂MnO₄·2H₂O 0.25mg、CuSO₄·5H₂O 0.025mg、CoCl₂·6H₂O 0.025mg、FeSO₄·7H₂O27.8mg、Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg；有机成分：肌醇100mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5mg、盐酸硫胺素(维生素B1)0.5mg、甘氨酸2mg、蔗糖30g、马铃薯50g、琼脂5g、余量为蒸馏水；PH值5.8。

步骤(5)所述的诱导芽和根的培养基二号由如下成分组成：以一升计算：常量元素为：NH₄NO₃800mg、KNO₃1900mg、Cal₂·2H₂O 440mg、MgSO₄·7H₂O 340mg、KH₂PO₄700mg；微量元素：KI 0.83mg、H₃BO₃6.2mg、MnSO₄·4H₂O 22.3mg、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg、Na₂MnO₄·2H₂O0.25mg、CuSO₄·5H₂O 0.025mg、CoCl₂·6H₂O 0.025mg、FeSO₄·7H₂O27.8mg、Na₂-EDTA·2H₂O37.3mg；有机成分：肌醇100mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5mg、盐酸硫胺素(维生素B1)0.5mg、甘氨酸2mg、矮壮素1g、香蕉80g、马铃薯50g、蔗糖30g、碳粉1g、琼脂5g、余量为蒸馏水；PH值5.8。

实施例2

一种红根野蚕豆组织培养方法，包括如下步骤：

于2013年9月份到野外采栽健康生长、优良无病害的红根野蚕豆植株种子，作为本次实验的外植体：

(1)外植体的处理和保存：采摘回来的外植体用84消毒液的100倍稀释液浸泡15分钟，再用自来水冲洗1小时，置于干净的玻璃器皿内备用，未用完的可放于冰箱内保存以便日后使用；

(2)外植体的灭菌：将处理过的外植体置于超净工作台上，用75％的酒精消毒30秒，再在体积浓度为0.1％的升汞中浸泡10分钟后，用无菌水冲洗4次；

(3)外植体接种：将上述灭菌过的外植体破壳接种于培养瓶中，培养基采用诱导培养基一号中，诱导培养基一号为MS+3％蔗糖+5％马铃薯+0.5％琼脂，PH值5.8，并进行封口标记；

(4)组织培养：将接种好的培养瓶置于35℃的黑暗温室中培养8天，再置于温度为35℃，光照强度为2500lx，光照时间为10小时的光照温室中进行培养，培养14天后红根野蚕豆种子开始发芽，培养时间到25天时红根野蚕豆发芽率达到98％，得到红根野蚕豆种苗；

(5)继代培养：将培养40天后的平均株高5～6cm的红根野蚕豆种苗在超净工作台上用接种工具以节为单位进行切割，将切割好的茎段接种于诱导芽和根的培养基二号中，二号培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+8％香蕉+3％蔗糖+0.5％琼脂+0.1％碳粉+1g/l矮壮素，PH值5.8，并进行封口；将接种好的苗置于30℃的黑暗温室中培养8天后，再置于温度为30℃，光照强度为3000lx，光照时间10小时的光照温室中进行培养，培养15天时红根野蚕豆茎段节间开始有芽产生，当培养时间到31天时芽生长高度达到6厘米，茎段基部开始有不定根长出，培养时间到50天时就得到红根野蚕豆的完整植株，茎段发芽率和生根率均达到98％；

(6)炼苗和移栽：将培养成的可以移栽的继代苗置于温室大棚内进行8天的炼苗后，进行移栽。

实施例3

一种红根野蚕豆组织培养方法，包括如下步骤：

(1)外植体的处理和保存：采摘回来的外植体用84消毒液的100倍稀释液浸泡8分钟，再用自来水冲洗1小时，置于干净的玻璃器皿内备用，未用完的可放于冰箱内保存以便日后使用；

(2)外植体的灭菌：将处理过的外植体置于超净工作台上，用75％的酒精消毒30秒，再在体积浓度为0.1％的升汞中浸泡8分钟后，用无菌水冲洗3次；

(3)外植体接种：将上述灭菌过的外植体破壳接种于诱导培养基一号中，并进行封口标记；

(4)组织培养：将接种好的培养瓶置于30℃的黑暗温室中培养7天，再置于温度为30℃，光照强度为20000lx，光照时间为8小时的光照温室中进行培养，培养14天后红根野蚕豆种子开始发芽，培养时间到25天时红根野蚕豆发芽率达到98％，得到红根野蚕豆种苗；

(5)继代培养：将培养40天后的平均株高5～6cm的红根野蚕豆种苗在超净工作台上用接种工具以节为单位进行切割，将切割好的茎段接种于诱导芽和根的培养基二号中，并进行封口；将接种好的苗置于25℃的黑暗温室中培养7天后，再置于温度为25℃，光照强度为2500lx，光照时间8小时的光照温室中进行培养，培养15天时红根野蚕豆茎段节间开始有芽产生，当培养时间到31天时芽生长高度达到6厘米，茎段基部开始有不定根长出，培养时间到50天时就得到红根野蚕豆的完整植株，茎段发芽率和生根率均达到98％；

(6)炼苗和移栽：将培养成的可以移栽的继代苗置于温室大棚内进行7天的炼苗后，就可以进行移栽。

步骤(3)所述的诱导培养基一号由如下成分组成：以一升计算：常量元素为：NH₄NO₃850mg、KNO₃1000mg、Cal₂·2H₂O 250mg、MgSO₄·7H₂O 200mg、KH₂PO₄380mg；微量元素：KI 0.85mg、H₃BO₃6.5mg、MnSO₄·4H2O 22.5mg、ZnSO₄·7H₂O 8.8mg、Na₂MnO₄·2H₂O 0.28mg、CuSO₄·5H₂O 0.028mg、CoCl₂·6H₂O 0.028mg、FeSO₄·7H₂O28mg、Na₂-EDTA·2H₂O 37.5mg；有机成分：肌醇120mg、烟酸0.8mg、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.8mg、盐酸硫胺素(维生素B1)0.8mg、甘氨酸3mg、蔗糖35g、马铃薯50g、琼脂8g、余量为蒸馏水；PH值5.8。

步骤(5)所述的诱导芽和根的培养基二号由如下成分组成：以一升计算：常量元素为：NH₄NO₃850mg、KNO₃2000mg、Cal₂·2H₂O 460mg、MgSO₄·7H₂O 360mg、KH₂PO₄750mg；微量元素：KI 0.85mg、H₃BO₃6.5mg、MnSO₄·4H₂O 22.5mg、ZnSO₄·7H₂O 8.8mg、Na₂MnO₄·2H₂O0.28mg、CuSO₄·5H₂O 0.028mg、CoCl₂·6H₂O 0.028mg、FeSO₄·7H₂O28mg、Na₂-EDTA·2H₂O37.5mg；有机成分：肌醇120mg、烟酸0.8mg、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.8mg、盐酸硫胺素(维生素B1)0.8mg、甘氨酸3mg、矮壮素1.2g、香蕉60g、马铃薯55g、蔗糖35g、碳粉1.2g、琼脂8g、余量为蒸馏水；PH值5.8。

实施例4

一种红根野蚕豆组织培养方法，包括如下步骤：

(1)外植体的处理和保存：采摘回来的外植体用84消毒液的100倍稀释液浸泡12分钟，再用自来水冲洗1小时，置于干净的玻璃器皿内备用，未用完的可放于冰箱内保存以便日后使用；

(2)外植体的灭菌：将处理过的外植体置于超净工作台上，用75％的酒精消毒35秒，再在体积浓度为0.1％的升汞中浸泡9分钟后，用无菌水冲洗4次；

(4)组织培养：将接种好的培养瓶置于28℃的黑暗温室中培养6天，再置于温度为28℃，光照强度为2200lx，光照时间为7小时的光照温室中进行培养，培养14天后红根野蚕豆种子开始发芽，培养时间到25天时红根野蚕豆发芽率达到98％，得到红根野蚕豆种苗；

(5)继代培养：将培养40天后的平均株高5～6cm的红根野蚕豆种苗在超净工作台上用接种工具以节为单位进行切割，将切割好的茎段接种于诱导芽和根的培养基二号中，并进行封口；将接种好的苗置于23℃的黑暗温室中培养7天后，再置于温度为28℃，光照强度为2200lx，光照时间7小时的光照温室中进行培养，培养15天时红根野蚕豆茎段节间开始有芽产生，当培养时间到31天时芽生长高度达到6厘米，茎段基部开始有不定根长出，培养时间到50天时就得到红根野蚕豆的完整植株，茎段发芽率和生根率均达到98％；

步骤(3)所述的诱导培养基控制在：1/2MS+8％马铃薯+8％椰子汁+5％蔗糖+0.6％琼脂，PH值5.0。

步骤(5)所述的继代培养基控制在：1/2MS+0.8mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA+6％香蕉+1g/l矮壮素+0.3％碳粉+0.6％琼脂+5％蔗糖，PH值5.0。

实施例5

一种红根野蚕豆组织培养方法，包括如下步骤：

(1)外植体的处理和保存：采摘回来的外植体用84消毒液的100倍稀释液浸泡9分钟，再用自来水冲洗1小时，置于干净的玻璃器皿内备用，未用完的可放于冰箱内保存以便日后使用；

(2)外植体的灭菌：将处理过的外植体置于超净工作台上，用75％的酒精消毒33秒，再在体积浓度为0.1％的升汞中浸泡10分钟后，用无菌水冲洗4次；

(4)组织培养：将接种好的培养瓶置于30℃的黑暗温室中培养7天，再置于温度为28℃，光照强度为3000lx，光照时间为9小时的光照温室中进行培养，培养14天后红根野蚕豆种子开始发芽，培养时间到25天时红根野蚕豆发芽率达到98％，得到红根野蚕豆种苗；

(5)继代培养：将培养40天后的平均株高5～6cm的红根野蚕豆种苗在超净工作台上用接种工具以节为单位进行切割，将切割好的茎段接种于诱导芽和根的培养基二号中，并进行封口；将接种好的苗置于25℃的黑暗温室中培养7天后，再置于温度为28℃，光照强度为3000lx，光照时间9小时的光照温室中进行培养，培养15天时红根野蚕豆茎段节间开始有芽产生，当培养时间到31天时芽生长高度达到6厘米，茎段基部开始有不定根长出，培养时间到50天时就得到红根野蚕豆的完整植株，茎段发芽率和生根率均达到98％；

步骤(3)所述的诱导培养基控制在：N6+8％马铃薯+8％椰子汁+5％蔗糖+0.6％琼脂，PH值6.0。

步骤(5)所述的继代培养基控制在：MS+0.8mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA+8％香蕉+1g/l矮壮素+0.3％碳粉+0.6％琼脂+5％蔗糖、PH值6.0。

Claims

1.一种红根野蚕豆组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：

(6)炼苗和移栽：将培养好的红根野蚕豆完整植株置于温室大棚内进行5～8天的炼苗后，进行移栽；

步骤(3)所述的诱导培养基一号由如下成分组成：(1)以一升计算：常量元素为：NH₄NO₃750～850mg、KNO₃ 900～1000mg、CaCl₂·2H₂O 200～250mg、MgSO₄·7H₂O 150～200mg、KH₂PO₄ 320～380mg；微量元素：KI 0.80～0.85mg、H₃BO₃ 6.0～6.5mg、MnSO₄·4H₂O 22.0～22.5mg、ZnSO₄·7H₂O 8.3～8.8mg、Na₂MnO₄·2H₂O 0.22～0.28mg、CuSO₄·5H₂O 0.022～0.028mg、CoCl₂·6H₂O 0.022～0.028mg、FeSO₄·7H₂O 27.5～28mg、Na₂-EDTA·2H₂O 37～37.5mg；有机成分：肌醇80～120mg、烟酸0.3～0.8mg、盐酸吡哆醇0.3～0.8mg、盐酸硫胺素0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、蔗糖25～35g、马铃薯45～55g、琼脂3～8g、余量为蒸馏水；PH值5.8；或者为：(2)MS+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0-6.0；或(3)1/2MS+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0-6.0；或(4)N6+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0-6.0；

步骤(5)所述的诱导芽和根的培养基二号由如下成分组成：(1)以一升计算：常量元素为：NH₄NO₃ 750～850mg、KNO₃ 1800～2000mg、CaCl₂·2H₂O 420～460mg、MgSO₄·7H₂O 320～360mg、KH₂PO₄ 650～750mg；微量元素：KI 0.80～0.85mg、H₃BO₃ 6.0～6.5mg、MnSO₄·4H₂O22.0～22.5mg、ZnSO₄·7H₂O 8.3～8.8mg、Na₂MnO₄·2H₂O 0.22～0.28mg、CuSO₄·5H₂O0.022～0.028mg、CoCl₂·6H₂O 0.022～0.028mg、FeSO₄·7H₂O 27.5～28mg、Na₂-EDTA·2H₂O37～37.5mg；有机成分：肌醇80～120mg、烟酸0.3～0.8mg、盐酸吡哆醇0.3～0.8mg、盐酸硫胺素0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、矮壮素0.8～1.2g、香蕉60～80g、马铃薯45～55g、蔗糖25～35g、碳粉0.8～1.2g、琼脂3～8g、余量为蒸馏水；PH值5.8；或者为：(2)MS+0.1～0.8mg/l6-BA+0.0～0.5mg/l NAA+6～8％香蕉+0.5～1g/l矮壮素+0.1～0.3％碳粉+0.4～0.6％琼脂+3～5％蔗糖、PH值5.0-6.0；或(3)1/2MS+0.1～0.8mg/l 6-BA+0.0～0.5mg/l NAA+6～8％香蕉+0.5～1g/l矮壮素+0.1～0.3％碳粉+0.4～0.6％琼脂+3～5％蔗糖，PH值5.0-6.0。

2.根据权利要求1所述一种红根野蚕豆组织培养方法，其特征在于：步骤(4)所述光照温室的光照强度为1500～2500lx，光照时间为5～10小时。

3.根据权利要求1所述一种红根野蚕豆组织培养方法，其特征在于：步骤(5)所述的光照室温的光照强度为2000～3000lx，光照时间5～10小时。