CN113049805A - 抗体复合物及其制备方法、检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗体复合物及其制备方法、检测试剂盒。该抗体复合物包括多个经标记物标记的抗体，多个经标记物标记的抗体间通过交联剂连接。上述抗体复合物用于化学发光免疫分析的灵敏度高。

Description

抗体复合物及其制备方法、检测试剂盒

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，特别是涉及一种抗体复合物及其制备方法、检测试剂盒。

背景技术

化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术，是继放射免疫分析、酶联免疫分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最免疫测定技术。

化学发光免疫分析包含两个部分：化学发光分析***和免疫反应***。化学发光分析***是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子(hM)，利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应***是将发光物质(可以在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原或抗体上，或酶作用于发光底物。

化学发光免疫分析以标记方法的不同而分为两种：(1)化学发光标记免疫分析；(2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析。

化学发光标记免疫分析是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物(acridinium ester，AE)，吖啶酯类化合物通过启动发光试剂(NaOH、H₂O₂等)作用而发光，为快速的闪烁发光。

化学发光酶免疫分析应属酶免疫分析，只是酶反应的底物是发光剂，以酶标记生物活性物质(例如抗原或抗体)进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)，它们有各自的发光底物。

然而，经过化学发光剂或酶标记的标记物标记的生物活性物质在进行化学发光免疫分析时，灵敏度还有待提高。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够改善化学发光免疫分析的灵敏度的抗体复合物。

此外，还提供一种能够改善化学发光免疫分析的灵敏度的抗体复合物的制备方法及一种灵敏度高的检测试剂盒。

一种抗体复合物，包括多个经标记物标记的抗体，多个经标记物标记的抗体间通过交联剂连接。

上述抗体复合物是多个抗体聚合而成的复合物，且每个抗体上均标记有标记物。在使用时，一个抗原可以对应多个标记物而发光信号被放大，因此，将该抗体复合物体运用于化学发光免疫分析时，能够增加信噪比，提高灵敏度。

在其中一个实施例中，所述交联剂为二酰肼类化合物。

在其中一个实施例中，所述经标记物标记的抗体中的标记物选自吖啶酯、三联吡啶钌、金刚烷、鲁米诺、鲁米诺的衍生物、异鲁米诺、异鲁米诺的衍生物、辣根过氧化物酶及碱性磷酸酶中的一种。

在其中一个实施例中，所述经标记物标记的抗体中的抗体为CHI3L1抗体、降钙素原抗体或心肌肌钙蛋白I抗体。

在其中一个实施例中，所述抗体复合物包括四个所述经标记物标记的抗体。

一种抗体复合物的制备方法，包括以下步骤：

采用活化剂将抗体活化后与交联剂混合反应，制备含有多种多聚体的混合物，所述多聚体是由至少两个抗体经所述交联剂交联而形成；

筛选所述混合物中的目的多聚体；及

采用标记物标记所述目的多聚体，制备抗体复合物。

在其中一个实施例中，所述活化剂用于活化所述抗体的羧基，所述交联剂具有至少两个氨基。

在其中一个实施例中，所述活化剂包括碳二亚胺，所述交联剂为二酰肼类化合物。

在其中一个实施例中，所述标记物选自吖啶酯、三联吡啶钌、金刚烷、鲁米诺、鲁米诺的衍生物、异鲁米诺、异鲁米诺的衍生物、辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶中的一种。

一种检测试剂盒，包括上述的抗体复合物。

附图说明

图1为实施例1的抗体复合物的制备流程图；

图2为实施例1的含有多种多聚体的混合物的纯化分离图谱。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本发明公开内容更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

术语解释：“抗体”是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。一般地，抗体以一个或者多个Y字形单体存在，每个Y字形单体由4条多肽链组成，包含两条相同的重链和两条相同的轻链，轻链和重链是根据它们的分子量大小来命名的。Y字形结构的顶端是可变区，为抗原结合部位。每个重链有两个区即恒定区和可变区，所有同一型的抗体其恒定区都是相同的，不同型的抗体之间则存在差异。每条轻链也有两个前后相连的结构域，即一个恒定区和一个可变区。

本发明一实施方式提供了一种抗体复合物，该抗体复合物包括多个经标记物标记的抗体，多个经标记物标记的抗体间通过交联剂连接。该抗体复合物是由多个抗体经交联剂交联聚合而成的复合物，且每个抗体上均标记有标记物，在使用时，一个抗原对应多个标记物而发光信号被放大，因此，将该抗体复合物体运用于化学发光免疫分析时，能够增加信噪比，提高灵敏度。

可选地，经标记物标记的抗体中的标记物选自吖啶酯、三联吡啶钌、金刚烷、鲁米诺、鲁米诺的衍生物、异鲁米诺、异鲁米诺的衍生物、辣根过氧化物酶及碱性磷酸酶中的一种。当然，在其他实施方式中，经标记物标记的抗体中的标记物不限于上述，还可以是可用于化学发光免疫分析平台的其他物质。

可选地，经标记物标记的抗体中的抗体为CHI3L1抗体、降钙素原抗体(PCT抗体)或心肌肌钙蛋白I抗体(cTn-I抗体)。可以理解是，在其他实施方式中，经标记物标记的抗体中的抗体不限于上述，还可以是可用于化学发光免疫分析平台的其他物质。在本实施方式中，抗体为单克隆抗体。当然，在其他实施例中，抗体也可以多克隆抗体。此外，抗体还可以为由轻链可变区和重链可变区经其巯基形成二硫键的方式连接而成的抗体片段。此时，轻链可变区和重链可变区通过非共价键作用形成具有全部抗原结合位点的FV区，具有抗原结合能力，例如抗原结合片段(antigen-binding fragment，Fab片段)或Fab’片段。

可选地，交联剂为二酰肼类化合物。通过二酰肼类化合物的两个氨基与抗体的羧基发生反应而使得两个抗体连接。具体地，交联剂选自马来酸二酰肼、乙二酸二酰肼及己二酸二酰肼中的至少一种。

可选地，上述抗体复合物包括四个经标记物标记的抗体。可以理解的是，在其他实施方式中，上述抗体复合物中的经标记物标记的抗体的数量不限于4，还可以是其他任意大于1的整数。优选地，上述抗体复合物中的经标记物标记的抗体的数量为2～6。

在一个可选地具体示例中，上述复合物包括四个吖啶酯标记的CHI3L1抗体，四个吖啶酯标记的CHI3L1抗体通过己二酸二酰肼连接。

此外，本发明一实施方式还提供了一种上述抗体复合物的制备方法，该制备方法包括步骤a～步骤c：

步骤a：采用活化剂将抗体活化后与交联剂反应，制备含有多种多聚体的混合物。

具体地，活化剂用于活化抗体的羧基，交联剂具有至少两个氨基。将抗体的羧基活化后与交联剂的氨基反应，从而使得多个抗体通过交联剂连接而形成聚合物。多聚体由至少两个抗体经交联剂交联形成的。

可选地，用于活化抗体的活化剂包括碳二亚胺。具体地，用于活化抗体的活化剂选自二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N，N′-二异丙基碳二亚胺中的至少一种。

在一些实施例中，用于活化抗体的活化剂还包括N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和N-羟基磺基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)中的至少一种。通过N-羟基琥珀酰亚胺和/或N-羟基磺基琥珀酰亚胺，使得碳二亚胺活化后抗体的结构更稳定，更利于其与交联剂的反应。进一步地，用于活化抗体的活化剂包括碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，其中，碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比10：(1～200)。进一步地，碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比3：(1～30)。在一个具体示例中，用于活化抗体的活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺。

具体地，交联剂为二酰肼类化合物。进一步地，交联剂选自乙二酰肼、马来酸二酰肼及己二酸二酰肼中的至少一种。

在本实施方式中，抗体为CHI3L1的单克隆抗体。用于活化抗体的活化剂的摩尔量是抗体的摩尔量的5倍～1000倍。进一步地，用于活化抗体的活化剂的摩尔量是抗体的摩尔量的5倍～1000倍。需要说明的是，抗体的摩尔量以抗体能与抗原结合的位点的数量计。可以理解的是，在其他实施方式中，抗体不限于CHI3L1的单克隆抗体，还可是其他抗体。

具体地，在酸性缓冲液中活化抗体。可选地，酸性缓冲液选自柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液及2-吗啉代乙磺酸(MES)缓冲液中的至少一种。进一步地，酸性缓冲液的pH为3～6.5。更进一步地，酸性缓冲液是pH为5的2-吗啉代乙磺酸缓冲液。

在其中一个实施例中，采用活化剂将抗体活化后与交联剂反应以制备含有多种多聚体的混合物的步骤包括：在酸性缓冲液中，采用碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化抗体，制备活化抗体；及将活化抗体脱盐处理后与交联剂混合反应，制备含有多种多聚体的混合物。

步骤b：筛选混合物中的目的多聚体。

根据需要获得的目的多聚体的分子量的大小，采用蛋白纯化仪筛选并纯化目的多聚体。

在其中一个实施例中，采用蛋白纯化仪，选用易于纯化分离大蛋白和蛋白复合物的预装柱，平衡预装柱后，从含有多种多聚体的混合物中纯化分离得到高纯度的目的多聚体；接着通过SDS-PAGE电泳实验，确定收集的目的多聚体。

步骤c：采用标记物标记目的多聚体，制备抗体复合物。

在本实施方式中，将羧基被活化后的吖啶酯与步骤b得到的目的多聚体混合反应，制备抗体复合物。吖啶酯的羧基与目的多聚体的抗体上的赖氨酸残基反应，从而使得吖啶酯标记到目的多聚体的抗体上，制得抗体复合物。

具体地，用于活化吖啶酯的活化剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺。可选地，用于活化吖啶酯的活化剂还包括N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和N-羟基磺基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)中的至少一种。在采用EDC活化吖啶酯的时，EDC与吖啶酯反应O-酰基异脲中间产物，通过O-酰基异脲中间产物与目的多聚体的抗体反应而使得吖啶酯标记到目的多聚体的抗体上。然而，O-酰基异脲中间产物的稳定性较差，易水解，因此，通过添加N-羟基琥珀酰亚胺和N-羟基磺基琥珀酰亚胺中的至少一种，使得O-酰基异脲中间产物的稳定性提高，从而提高吖啶酯的标记效率。

可以理解的是，在其他实施方式中，用于活化吖啶酯的活化剂不限于上述，还可以是其他可以活化吖啶酯的羧基的物质。当然，在其他实施方式中，标记物不限于吖啶酯，还可以是其他物质，此时，将其他标记物标记到目的多聚体的抗体上即可。

进一步地，在本实施方式中，采用两步法将吖啶酯标记到目的多聚体的抗体。具体地，将用于活化吖啶酯的活化剂与吖啶酯混合反应后，采用液相色谱法(HPLC)将多余的活化剂去除，得到纯化后的活化的吖啶酯；然后，将纯化后的活化的吖啶酯与目的多聚体混合反应，使得吖啶酯标记到目的多聚体的抗体上，制备抗体复合物。可以理解的是，在一些实施方式中，也可以采用一步法(即将吖啶酯、用于活化吖啶酯的活化剂和目的多聚体直接混合反应)将吖啶酯标记到目的多聚体的抗体上。

在本实施方式中，标记物是通过标记物的羧基和目的多聚体的抗体的赖氨酸残基反应而使得标记物标记到目的多聚体的抗体上。可以理解的是，在其他实施方式中，将标记物连接到抗体上的方式不限于上述，还可以通过其他方式将标记物标记到多聚体的抗体上。

在本实施方式中，是先将抗体形成多聚体后标记标记物而形成抗体复合物。当然，在其他实施方式中，还可以先标记抗体后将标记有标记物的抗体交联而形成抗体复合物。

上述抗体复合物的制备方法简捷易操作，按照上述抗体复合物的制备方法制得的抗体复合物包括由交联剂连接的多个经标记物标记的抗体，在将抗原与抗体复合物混合使用时，一个抗原可以对应多个标记物，从而使得检测时的发光信号被放大，从而增大检测的信噪比，提高检测的灵敏度。

上述抗体复合物在检测时可以实现一个抗原对应多个标记物，能够提高检测的灵敏度。因此，本发明一实施方式还提供了一种上述抗体复合物在制备检测试剂盒中的应用。

此外，本发明一实施方式还提供了一种检测试剂盒，该检测试剂盒包括上述抗体复合物，用于检测能与抗体复合物中的抗体特异性结合的抗原。

可选地，上述检测试剂盒还包括缓冲液及固相载体中的至少一种。

在一个可选地具体示例中，缓冲液选自磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和硼酸盐缓冲液中的至少一种。固相载体选自磁珠及树脂中的一种。

上述检测试剂盒包括上述抗体复合物，具有良好的灵敏度。

具体实施例

以下结合具体实施例进行详细说明。以下实施例如未特殊说明，则不包括除不可避免的杂质外的其他组分。实施例中采用试剂和仪器如非特别说明，均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者生产厂家推荐的方法实现。下文中，除非特殊说明，所使用的试剂均购自Sigma-aldrich公司，级别为分析纯。下文中使用的抗CHI3L1单克隆抗体购自杭州普望生物技术有限公司。

实施例1

请参阅图1，本实施例的抗体复合物的制备方法包括但不限于如下步骤：

(1)将标记用的1mg抗CHI3L1单克隆抗体溶解于1mL 50mM MES缓冲液(pH 5.0)中，终浓度6.67nmol/L，制得抗体溶液。

(2)向步骤(1)的抗体溶液中加入EDC(EDC在由抗体溶液、EDC及NHS组成的混合溶液中的终浓度为0.34mmol/L)和NHS(NHS在由抗体溶液、EDC及NHS组成的混合溶液中的终浓度为3.4mmol/L)，在25℃条件下反应30分钟后，用GE公司的AKTA纯化设备，选用5mL G25预装纯化柱(GE公司)，以50mM MES(pH 5.0)缓冲液作为平衡缓冲液，去除未反应的EDC和NHS，制得纯化后的活化抗体。

(3)将步骤(2)纯化后的活化抗体中加入己二酸二酰肼(己二酸二酰肼在由抗体、缓冲液和已二酸二酰肼组成的混合液中的终浓度0.78mmol/L)，在25℃条件下反应1h，得到含有多种多聚体的混合物。

(4)将步骤(3)制得的含有多种多聚体的混合物通过GE公司的AKTA设备，选用易于分离蛋白复合物的纯化柱SuperoseTM 6Increase 10/300GL，以50mM PBS(pH 8.0)缓冲液作为洗脱缓冲液，进行纯化分离，得到高纯度的同源四聚抗CHI3L1单克隆抗体。其中，含有多种多聚体的混合物的纯化分离图谱为图2所示，在图2中3号峰为同源四聚抗CHI3L1单克隆抗体。

(5)向步骤(4)中的同源四聚抗CHI3L1单克隆抗体中在加入10μL溶解于DMSO溶剂的10mmol/L吖啶酯，于25℃反应1h，然后用GE公司的AKTA纯化设备，选用5mL G25预装纯化柱(GE公司)，以50mM PBS(pH 8.0)缓冲液作为洗脱缓冲液进行洗脱，去除吖啶酯、DMSO、NHS和吖啶酯水解产物吖啶酸等得到本实施的抗体复合物。

实施例2

本实施例的抗体复合物的制备方法大致与实施例1相同，其不同在于，本实施例中经交联剂交联得到的含有多种多聚体的混合物，不作纯化分离处理，只脱盐除去未反应的交联剂。具体制备步骤包括：

(1)将标记用的1mg抗CHI3L1单克隆抗体溶解于1mL 50mM MES缓冲液(pH 5.0)中，终浓度6.67nmol/L，制得抗体溶液。

(2)向步骤(1)的抗体溶液中加入EDC(EDC在由抗体溶液、EDC及NHS组成的混合溶液中的终浓度为0.34mmol/L)和NHS(NHS在由抗体溶液、EDC及NHS组成的混合溶液中的终浓度为3.4mmol/L)，在25℃条件下反应30分钟后，用GE公司的AKTA纯化设备，选用5mL G25预装纯化柱(GE公司)，以50mM MES(pH 5.0)缓冲液作为平衡缓冲液，去除游离的NHS及反应副产物，制得纯化后的活化抗体。

(3)将步骤(2)纯化后的活化抗体中加入己二酸二酰肼(己二酸二酰肼在由抗体、缓冲液和已二酸二酰肼组成的混合液中的终浓度0.78mmol/L)，在25℃条件下反应1h，得到含有多种多聚体的混合物。

(4)将步骤(3)制得的含有多种多聚体的混合物通过GE公司的AKTA设备，选用易于分离蛋白复合物的纯化柱SuperoseTM 6Increase 10/300GL，以50mM PBS(pH 8.0)缓冲液作为洗脱缓冲液，进行纯化分离，除去未反应的小分子交联剂及副产物，得到含有多种多聚体的混合物溶液。

(5)向步骤(4)中的含有多种多聚体的混合物溶液中加入10μL溶解于DMSO溶剂的10mmol/L吖啶酯，于25℃反应1h，然后用GE公司的AKTA纯化设备，选用5mL G25预装纯化柱(GE公司)，以50mM PBS(pH 8.0)缓冲液作为洗脱缓冲液进行洗脱，去除游离的吖啶酯、DMSO、NHS和吖啶酯水解产物吖啶酸等，得到本实施的抗体复合物。

对比例1

本对比例制备吖啶酯标记的抗CHI3L1单克隆抗体。具体步骤包括但不限于：

(1)将标记用的1mg抗CHI3L1单克隆抗体溶解于1mL 50mM PBS缓冲液(pH 5.0)中，终浓度6.67nmol/L，制得抗体溶液。

(2)在步骤(1)制得的抗体溶液中加入10μL溶解于DMSO溶剂的10mmol/L商品化的吖啶酯(带有NHS活化基团，为NHS-DMAE-NSP)，于25℃条件下反应1h，然后用GE公司的AKTA纯化设备，选用5mL G25预装纯化柱(GE公司)，以50mM PBS(pH 8.0)缓冲液作为洗脱缓冲液，除去游离的吖啶酯、NHS、DMSO和吖啶酯水解产物吖啶酸等，得到吖啶酯标记的抗CHI3L1单克隆抗体。

测试一

将各实施例制得的抗体复合物和对比例1制得的吖啶酯标记的抗CHI3L1单克隆抗体用于CHI3L1的化学发光免疫分析中。各实施例及对比例1的具体步骤均包括如下步骤：

取含100ng/mL的CHI3L1的血清样本中，加入50μg抗CHI3L1单克隆抗体包被的磁珠，再加入10pmol各实施例对应的抗体复合物或对比例1对应的吖啶酯标记的抗CHI3L1单克隆抗体，37℃孵育反应10min后，磁分离清洗3次，接着先后加入100μL HNO₃-H₂O₂溶液和100μL的氢氧化钠溶液，用iFlash3000型化学发光免疫分析仪(亚辉龙生物)测量发光值，平行进行3份

测量，取平均值，结果如表1所示。

表1

组别	平均发光值(RLU)
		实施例1	5524572
实施例2	3242154
		对比例1	841269

免疫分析所得结果的发光值越大，说明吖啶酯标记物的活性越好。因此，由表1可知，采用实施例1的抗体复合物进行CHI3L1检测时发光值最大，且实施例1的发光值大于实施例2，说明实施例1的抗体复合物进行CHI3L1检测时，灵敏度会高于其他实施例和对比例，且吖啶酯标记的同源四聚单克隆抗体的灵敏度高于由吖啶酯标记的多种同源多聚单克隆抗体组成的混合物的灵敏度。

测试二

将各实施例制得的抗体复合物和对比例1制得的吖啶酯标记的抗CHI3L1单克隆抗体用于血液样品中的CHI3L1浓度的化学发光免疫分析中。各实施例及对比例1的具体步骤包括如下步骤：

向系列浓度的CHI3L1样本溶液中分别加入50μg抗CHI3L1单克隆抗体包被的磁珠试剂和5pmol各实施例对应的抗体复合物或对比例1对应的吖啶酯标记的抗CHI3L1单克隆抗体，37℃孵育反应10min后，磁分离清洗3次，接着先后加入100μL HNO₃-H₂O₂溶液和100μL的氢氧化钠溶液，用iFlash3000型化学发光免疫分析仪(亚辉龙生物)测量3次，取平均值，并计算检出限、重复性和检测范围，结果如表2所示，其中：

重复性：用浓度分别为1000μg/mL(±20％)和6500μg/mL(±20％)的重复性参考品进行检测，各检测10次，计算10次测量结果的平均值(M)和标准差(SD)，根据公式CV＝SD/M×100％得出变异系数(CV)。

检出限采用CLSI EP17-A文件推荐的实验方法进行；

线性范围检测：将接近线性范围上限的高值样品稀释2倍、4倍、6倍、8倍和10倍，其中低值浓度样品按照检出限、检出限的2倍、4倍、6倍及8倍进行配制。每一浓度样品重复检测3次，计算其平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r。

表2

由表2结果可知，采用实施例1～2的抗体复合物检测CHI3L1时，检出限低，灵敏度高，重复性好，检测范围宽，线性好(r≥0.9900)，可应用于化学发光免疫分析且效果良好。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种抗体复合物，其特征在于，包括多个经标记物标记的抗体，多个经标记物标记的抗体间通过交联剂连接。

2.根据权利要求1所述的抗体复合物，其特征在于，所述交联剂为二酰肼类化合物。

3.根据权利要求1所述的抗体复合物，其特征在于，所述经标记物标记的抗体中的标记物选自吖啶酯、三联吡啶钌、金刚烷、鲁米诺、鲁米诺的衍生物、异鲁米诺、异鲁米诺的衍生物、辣根过氧化物酶及碱性磷酸酶中的一种。

4.根据权利要求1所述的抗体复合物，其特征在于，所述经标记物标记的抗体中的抗体为CHI3L1抗体、降钙素原抗体或心肌肌钙蛋白I抗体。

5.根据权利要求1～4任一项所述的抗体复合物，其特征在于，所述抗体复合物包括四个所述经标记物标记的抗体。

6.一种抗体复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

采用活化剂将抗体活化后与交联剂混合反应，制备含有多种多聚体的混合物，所述多聚体是由至少两个抗体经所述交联剂交联而形成；

筛选所述混合物中的目的多聚体；及

采用标记物标记所述目的多聚体，制备抗体复合物。

7.根据权利要求6所述的抗体复合物的制备方法，其特征在于，所述活化剂用于活化所述抗体的羧基，所述交联剂具有至少两个氨基。

8.根据权利要求7所述的抗体复合物的制备方法，其特征在于，所述活化剂包括碳二亚胺，所述交联剂为二酰肼类化合物。

9.根据权利要求6所述的抗体复合物的制备方法，其特征在于，所述标记物选自吖啶酯、三联吡啶钌、金刚烷、鲁米诺、鲁米诺的衍生物、异鲁米诺、异鲁米诺的衍生物、辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶中的一种。

10.一种检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～5任一项所述的抗体复合物。

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