CN113024549B - 海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶a及制备和用途 - Google Patents

海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶a及制备和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN113024549B
CN113024549B CN202110266902.XA CN202110266902A CN113024549B CN 113024549 B CN113024549 B CN 113024549B CN 202110266902 A CN202110266902 A CN 202110266902A CN 113024549 B CN113024549 B CN 113024549B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
streptomyces
glioma
ethyl acetate
culture medium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110266902.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113024549A (zh
Inventor
张治针
秦乐
勇括
连晓媛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CN202110266902.XA priority Critical patent/CN113024549B/zh
Publication of CN113024549A publication Critical patent/CN113024549A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113024549B publication Critical patent/CN113024549B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供一种海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶A及制备和用途，本发明从海洋沉积物中的链霉菌的代谢产物中分离得到，所述链霉菌分类命名为Streptomycessp.SY2111，保藏编号:CCTCC M 2021154。所述链霉萘啶A可显著抑制人胶质瘤U87MG和U251细胞的增殖，可制备抗胶质瘤药物，为胶质瘤的治疗提供一种新的药物分子。链霉萘啶A的化学结构式为：

Description

海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶A及制备和用途
技术领域
本发明属医药领域,涉及从海洋链霉菌Streptomyces sp.SY2111培养物的代谢产物中获得具有抗胶质瘤活性的新化合物链霉萘啶A(streptonaphthyridine A)及其制备方法和在制备抗胶质瘤药物中的应用。
背景技术
胶质瘤是一种常见和死亡率高的脑肿瘤，目前对胶质瘤治疗方式主要包括手术切除、放疗和以替莫唑胺为主的药物疗。但是，由于胶质瘤呈侵袭性生长，肿瘤组织与正常组织无明显界限，而且，胶质瘤多位于脑的重要功能区，因此手术切除无法完全去除病灶组织。而放疗毒副作用大。因此，药物对胶质瘤的治疗具有更重要的意义。然而，目前用于胶质瘤治疗的药物极为有限，替莫唑胺是唯一一个可单独用于胶质瘤治疗的药物，也是目前治疗胶质瘤的金标药，但仍然存在毒性和耐药性等问题。尽管分子靶向药物为肿瘤的治疗开辟了新途径，但是靶向药物在胶质瘤治疗方面并未取得预期的治疗效果。显然，临床上需要疗效更好、安全性更高和作用机制独特的新型抗胶质瘤药物。
海洋深渊特殊的生境使深渊微生物可能与浅海微生物有不同的适应机制和代谢途径，从而产生结构新颖和生物活性独特的次生代谢产物。马里亚纳海沟是目前已知的海洋最深处，可达11000米。近几年，随着深海勘探技术的发展，对马里亚纳海沟深渊微生物的研究也越来越多，表明马里亚纳海沟微生物资源丰富。然而，目前对马里亚纳海沟微生物代谢产物的研究不多，只有零星报道。大量研究表明，海洋微生物因其生境特殊、遗传可控、可放大发酵等特性逐渐在海洋生物研究中成为研究重心，其中，放线菌是发现抗肿瘤药或药物先导化合物的重要来源。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶A(streptonaphthyridine A)，是一个新化合物，其化学结构式为：
Figure GDA0003351650060000011
本发明的第二个目的是提供链霉萘啶A的制备方法，通过以下步骤实现：
(1)链霉菌Streptomyces sp.SY2111的分离培养
取空气干燥的海底沉积物用灭菌自来水溶解后摇床振荡过夜，将样品混悬液稀释成一定的浓度，取一定量的样品稀释液均匀分散到含有固体培养基的培养皿中，在室温条件下培养一定时间后,将不同的菌落分别转移到另一含有固体培养基的培养皿中，在室温条件下继续培养一定时间。最后将生长良好的SY2111单一菌落接种到斜面培养基培养后置4℃冰箱保存备用。
所述的海底沉积物是从马里亚拉海沟7281米深的海域获得；所述样品稀释液的浓度为1×10-4～1×10-2g/mL；所述振荡的转速为160～180rpm；所述样品稀释液的取样量为200μL；所述培养皿和斜面培养的固体培养基均为高氏琼脂培养基；所述的室温培养温度为20～28℃；所述的培养时间为7～14天。
(2)链霉菌Streptomyces sp.SY2111的菌种鉴定
上述步骤(1)分离培养所获得的菌株SY2111用目前实验室普遍使用的16S rDNA序列分析方法鉴定其种类，确定为链霉菌，分类命名为Streptomyces sp.SY2111，已被中国典型培养物保藏中心-武汉中心保藏，保藏编号:CCTCC M 2021154。
(3)链霉菌Streptomyces sp.SY2111培养物的制备
将上述步骤(2)获得的链霉菌Streptomyces sp.SY2111的菌株接种到含有一定量的液体培养基的大三角烧瓶中，将含有SY2111菌种的培养液在室温条件下振荡培养一定时间后得到菌种液。最后将菌种液转入含有一定量的固体大米培养基的大三角烧瓶中，在室温静置培养一定时间后，得到含有抗胶质瘤活性化合物链霉萘啶A的SY2111固体发酵产物。
所述的SY2111菌株为产生抗胶质瘤活性物质链霉萘啶A的链霉菌；所述的液体培养基为高氏液体培养基(可溶性淀粉20克,硝酸钾1克,七水合硫酸镁0.5克,磷酸氢二钾0.5克,氯化钠0.5克,硫酸亚铁0.01克,天然海水1升)，所述的用量为250mL；所述的固体大米培养基为大米40克和海水60毫升；所述的大三角培养瓶为500mL；所述的室温培养温度为20～28℃；所述的菌种培养时间为4～6天，大米培养基的培养时间为50～60天。
(4)链霉萘啶A的提取分离纯化
将上述步骤(3)获得的菌株SY2111的固体发酵产物用乙酸乙酯提取得到总乙酸乙酯提取物。将乙酸乙酯总提取物先用硅胶柱层析分离，用石油醚和乙酸乙酯混合溶剂以及乙酸乙酯和甲醇混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液，用薄层层析(TLC)检测各组分，合并含有相同成分的组分，得到六个组分(A～F)。组分F再用十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)柱层析分离,分别用30％、50％、70％和100％的甲醇洗脱，得到组分F1～F4。最后，组分F1用制备型高效液相色谱分离纯化得到纯化合物链霉萘啶A。
所述硅胶柱层析的硅胶用量与上柱的样品量比例是10～15克:1.0克；所述的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂梯度为10:1、5:1、2:1、1:1和0:1(体积比)，乙酸乙酯和甲醇混合溶剂梯度为5:1和1:1(体积比)；所述的十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)柱层析的ODS用量与上柱的样品量比例是20～30克:1.0克；所述的制备型高效液相色谱分离条件是:创新通恒CXTH-3000高效液相色谱仪，富士C18 CT-30色谱柱(280×30mm,10μm)，甲醇和水为流动相(25/75,体积比),检测波长210nm，流速为10.0mL/min。
(5)链霉萘啶A的结构鉴定
链霉萘啶A的结构是通过分析它的紫外光谱、红外光谱、一维和二维核磁共振(NMR)波谱、高分辨质谱(HRESIMS)数据、旋光(OR)计算和单晶X-射线衍射结果而确定。
本发明的第三个目的是提供链霉萘啶A在制备抗胶质瘤药物中的应用。所述的链霉萘啶A可显著抑制胶质瘤U87MG和U251细胞的增殖，在制备治疗胶质瘤药物方面具有应用前景。
链霉萘啶A(streptonaphthyridine A)是从来源于马里亚纳海沟7281米深沉积物的链霉菌Streptomyces sp.SY2111的代谢产物中分离得到的一个新萘啶类化合物。链霉萘啶A可显著抑制人胶质瘤U87MG和U251细胞的增殖，在制备抗胶质瘤药物方面具有应用前景。本发明的有益之处在于：(1)马里亚纳海沟来源的链霉菌Streptomyces sp.SY2111在所述的培养条件下可以产生抗胶质瘤活性化合物链霉萘啶A；(2)链霉萘啶A为新化合物；(3)链霉萘啶A显著抑制胶质瘤细胞U87MG和U251细胞的增殖，可为胶质瘤的治疗提供一种新的药物分子。
附图说明
图1是链霉菌Streptomyces sp.SY2111的菌落图。
图2是链霉萘啶A的紫外光谱图。
图3是链霉萘啶A的高分辨质谱图。
图4是链霉萘啶的氢谱。
图5是链霉萘啶A的碳谱。
图6是链霉萘啶A的HMQC谱。
图7是链霉萘啶A的HMBC谱。
图8是链霉萘啶A的单晶X-射线衍射的结构图。
图9是链霉萘啶A的HMBC相关示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明作进一步详细描述。但是,本发明不限于这些实施例。
实施例1链霉菌Streptomyces sp.SY2111的分离培养
将从马里亚纳海沟7281米深的海底沉积物在28℃的条件下空气干燥8天。取干燥的沉积物1克，溶解于9mL的无菌水中，振荡过夜后用灭菌自来水配成浓度为1×10-3g/mL的样品溶液。取200μL样品液均匀分散到含有高氏琼脂固体培养基的培养皿中，在28℃的条件下培养7天时间后,将不同的菌落分别转移到另一含有高氏琼脂固体培养基的培养皿中，在28℃的条件下继续培养7天。最后将生长良好的SY2111单一菌落接种到高氏琼脂固体斜面培养基培养后，置4℃冰箱保存备用。
实施例2链霉菌Streptomyces sp.SY2111的菌种鉴定
使用16S rDNA序列分析方法鉴定所获得菌株SY2111的种类。
2.1实验试剂及仪器
PCR试剂：PrimeSTAR Max DNA Polymerase(TaKaRa)，引物(Invitrogen合成)，引物序列是：
Figure GDA0003351650060000041
Marker：DL5000
实验仪器：离心机，电泳仪，PCR仪，ABI 3730XL测序仪。
2.2实验步骤
细菌基因组DNA抽提
电泳检测
PCR扩增
a.PCR反应体系
Figure GDA0003351650060000042
Figure GDA0003351650060000051
b.PCR反应条件
Figure GDA0003351650060000052
c.电泳检测
d.测序:切胶纯化测序
e.分析结果:拼接序列。
2.3实验结果
拼接后的序列为：
gtgttaccgactttcgtgacgtgacgagcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcagcaatgctgatctgcgattactagcgactccgacttcatggggtcgagttgcagaccccaatccgaactgagaccggctttttgagattcgctccacctcgcggtatcgcagctctttgtaccggccattgtagcacgtgtgcagcccaagacataaggggcatgatgacttgacgtcgtccccaccttcctccgagttgaccccggcggtctcccgtgagtccccagcaccacaagggcctgctggcaacacgggacaagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacagccatgcaccacctgtacaccgaccacaagggggcacccatctctgggtgtttccggtgtatgtcaagccttggtaaggttcttcgcgttgcgtcgaattaagccacatgctccgccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagttttagccttgcggccgtactccccaggcggggaacttaatgcgttagctgcggcacggacgacgtggaatgtcgcccacacctagttcccaacgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgttcgctccccacgctttcgctcctcagcgtcagtatcggcccagagatccgccttcgccaccggtgttcctcctgatatctgcgcatttcaccgctacaccaggaattccgatctcccctaccgaactctagcctgcccgtatcgaatgcagacccggggttaagccccgggctttcacatccgacgtgacaggccgcctacgagctctttacgcccaataattccggacaacgcttgcgccctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccggcgcttcttctgcaggtaccgtcactttcgcttcttccctgctgaaagaggtttacaacccgaaggccgtcatccctcacgcggcgtcgctgcatcaggctttcgcccattgtgcaatattccccactgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcagtcccagtgtggccggtcgccctctcaggccggctacccgtcgtcgccttggtgagccgttacctcaccaactagctgataggccgcgggctcatcctgcaccgccggagctttccaccaccatcagatgcctgaagtggtcgtatccggtattagaccccgtttccagggcttgtcccagagtgcagggcagattgcccacgtgttactcacccgttcgccactatcccccaccgaagcgggttcatcgttc(1348bp)。
以上获得的16S rDNA序列与美国美国国立卫生研究院的NCBI的GenBank数据库比较,其结果表明:菌株SY2111的16S rDNA序列与GenBank库中的链霉菌Streptomycesfradiae strain NBRC 12773的16s rDNA序列有99.7％的相似性(登录号:NR112270.1)。因此,本发明所获得的菌株SY2111的分类命名为Streptomyces sp.SY2111(附图1)，该菌株已被中国典型培养物保藏中心保藏,保藏编号:CCTCC M 2021154，保藏日:2021.1.25；保藏地址：中国.武汉.武汉大学。
实施例3链霉菌Streptomyces sp.SY2111固体发酵产物的制备
取高氏琼脂固体斜面培养基的链霉菌Streptomyces sp.SY2111的菌接种到含有250mL液体高氏培养基(可溶性淀粉20克,硝酸钾1克,七水合硫酸镁0.5克,磷酸氢二钾0.5克,氯化钠0.5克,硫酸亚铁0.01克,天然海水1升)的500mL三角烧瓶中,将含有SY2111菌种的培养液在28℃条件下旋转(180rpm)振摇培养4天后得到菌种液。将5mL菌种液转入到含有大米固体培养基(大米40克和天然海水60毫升)的500mL三角烧瓶中,在28℃条件下静置培养60天,得到含有抗胶质瘤活性物质链霉萘啶A的培养物。本实验总计制备了200瓶菌株SY2111的大米培养物。
实施例4链霉萘啶A的提取分离纯化
将上述实验获得的200瓶菌株SY2111的大米培养物分别用乙酸乙酯浸提3次，每次300mL,浸提24小时。将乙酸乙酯浸提液合并，减压浓缩得到总提取物24.86克。将总提物溶于少量乙酸乙酯中，加入25克硅胶拌样，于研钵内混合搅拌直至乙酸乙酯挥发完全，样品呈均匀颗粒状后将样品加入含有300g硅胶的层析柱中，依次各用1L的石油醚和乙酸乙酯(10:1，5:1，1:1，0:1)及乙酸乙酯和甲醇(5:1，1:1)混合溶剂梯度洗脱，根据反向硅胶薄层色谱(TLC)检测结果合并相似组分得到6个组分A～F。
组分F先用十八烷基硅烷键合硅胶(ODS,500克)柱层析分离，依次各用1L的30％、50％、70％和100％MeOH洗脱，得到4个组分F1～F4。然后，用半制备型高效液相色谱仪(仪器：创新通恒CXTH-3000；色谱柱：富士C18 CT-30,280×30mm,10μm；流动相：甲醇/水,25/75；检测波长:210nm，流速:10.0mL/min)分离组分F1得到化合物链霉萘啶A(5.6mg,tR 37min)。
实施例5链霉萘啶A的结构鉴定
链霉萘啶A(streptonaphthyridine A)：为透明斜方晶体；分子式C10H10N2O2；熔点为285～287℃；[α]D 20+12(c 0.2,CH3OH)，计算值为+38；紫外光谱(附图2)：UV(MeOH)λmax(logε)217(3.57),244(3.37),305(3.44)nm；红外光谱：IR(ATR)νmax 2981,2922,2864,1681,1639,1604,1053,1033,1013cm–1；高分辨质谱(附图3)：HRESIMS m/z 191.0818[M+H]+(计算值C10H11N2O2,191.0821)，213.0637[M+Na]+(计算值C10H10N2NaO2,213.0640)，403.1378[2M+Na]+(计算值C20H20N4NaO4,403.1382)。通过分析链霉萘啶A的氢谱(附图4)、碳谱(附图5)、HMQC谱(附图6)、HMBC谱(附图7)、单晶X射线衍射获得的结构(附图8)和旋光度计算结果，确定了链霉萘啶A的化学结构，为一个新化合物，其13C和1H核磁共振信号归属见表一,它的COSY和HMBC相关示意图见附图9。
Figure GDA0003351650060000071
表一、链霉萘啶A的13C和1H NMR数据(溶剂：氘代二甲基亚砜DMSO-d6)
No. <sup>13</sup>C(150MHz) <sup>1</sup>H(600MHz,J in Hz) No. <sup>13</sup>C(150MHz) <sup>1</sup>H(600MHz,J in Hz)
1 161.8,C – 6 150.7,CH 8.64,1H,d(5.6)
2 152.8,C – 7 149.7,CH 9.24,1H,s
3 97.6,CH 6.55,1H,s 8 119.7,C –
4 143.2,C – 9 65.2,CH 4.56,1H,q(6.4)
5 119.4,CH 7.55,1H,d(5.6) 10 23.3,CH<sub>3</sub> 1.37,3H,d(6.4)
实施例6链霉萘啶A的抗胶质瘤活性
用磺酰罗丹明B(SRB)法测定链霉萘啶A对胶质瘤细胞U87MG和U251细胞的增殖的抑制作用，阿霉素用于阳性对照。胶质瘤U87MG和U251细胞分别用含有10％FBS的MEM和DMEM培养基在37℃和5％二氧化碳的孵化箱中培养，经过三代培养的细胞用于本发明的实验研究。细胞接种于96孔板中，贴壁24h后分别加入不同浓度的链霉萘啶A或阿霉素，药物处理72h后用SRB染色，用酶标仪测定515nm处的吸收光度值，检测肿瘤细胞的存活率，计算链霉萘啶A和阿霉素抑制肿瘤细胞增殖的IC50值。实验结果表明：链霉萘啶A可抑制胶质瘤细胞的增殖，其抑制胶质瘤U251和U87MG细胞增殖的IC50值分别为13.4和7.9μM(表二)。
表二、链霉萘啶A对胶质瘤细胞增殖的抑制活性(IC50:μM)
Figure GDA0003351650060000072
以上实验结果说明，链霉萘啶A可抑制胶质瘤细胞的增殖，在制备治疗抗胶质瘤药物方面具有应用潜力。
序列表
<110> 浙江大学
<120> 海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶A及制备和用途
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknow)
<400> 1
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknow)
<400> 2
ggytaccttg ttacgactt 19
<210> 3
<211> 1348
<212> DNA
<213> 链霉菌(Streptomyces sp. SY2111)
<400> 3
gtgttaccga ctttcgtgac gtgacgagcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc 60
gcagcaatgc tgatctgcga ttactagcga ctccgacttc atggggtcga gttgcagacc 120
ccaatccgaa ctgagaccgg ctttttgaga ttcgctccac ctcgcggtat cgcagctctt 180
tgtaccggcc attgtagcac gtgtgcagcc caagacataa ggggcatgat gacttgacgt 240
cgtccccacc ttcctccgag ttgaccccgg cggtctcccg tgagtcccca gcaccacaag 300
ggcctgctgg caacacggga caagggttgc gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca 360
cgacacgagc tgacgacagc catgcaccac ctgtacaccg accacaaggg ggcacccatc 420
tctgggtgtt tccggtgtat gtcaagcctt ggtaaggttc ttcgcgttgc gtcgaattaa 480
gccacatgct ccgccgcttg tgcgggcccc cgtcaattcc tttgagtttt agccttgcgg 540
ccgtactccc caggcgggga acttaatgcg ttagctgcgg cacggacgac gtggaatgtc 600
gcccacacct agttcccaac gtttacggcg tggactacca gggtatctaa tcctgttcgc 660
tccccacgct ttcgctcctc agcgtcagta tcggcccaga gatccgcctt cgccaccggt 720
gttcctcctg atatctgcgc atttcaccgc tacaccagga attccgatct cccctaccga 780
actctagcct gcccgtatcg aatgcagacc cggggttaag ccccgggctt tcacatccga 840
cgtgacaggc cgcctacgag ctctttacgc ccaataattc cggacaacgc ttgcgcccta 900
cgtattaccg cggctgctgg cacgtagtta gccggcgctt cttctgcagg taccgtcact 960
ttcgcttctt ccctgctgaa agaggtttac aacccgaagg ccgtcatccc tcacgcggcg 1020
tcgctgcatc aggctttcgc ccattgtgca atattcccca ctgctgcctc ccgtaggagt 1080
ctgggccgtg tctcagtccc agtgtggccg gtcgccctct caggccggct acccgtcgtc 1140
gccttggtga gccgttacct caccaactag ctgataggcc gcgggctcat cctgcaccgc 1200
cggagctttc caccaccatc agatgcctga agtggtcgta tccggtatta gaccccgttt 1260
ccagggcttg tcccagagtg cagggcagat tgcccacgtg ttactcaccc gttcgccact 1320
atcccccacc gaagcgggtt catcgttc 1348

Claims (8)

1.一种海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶A，其特征在于，其化学结构式为：
Figure 900967DEST_PATH_IMAGE002
。
2.一种链霉菌，分类命名为Streptomycessp. SY2111，已被中国典型培养物保藏中心-武汉中心保藏，保藏编号: CCTCC M 2021154。
3.权利要求1所述的链霉萘啶A的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
（1）链霉菌Streptomycessp. SY2111的分离培养
取海底沉积物用灭菌自来水溶解后摇床振荡过夜，将样品混悬液稀释，取样品稀释液均匀分散到含有固体培养基的培养皿中，在室温条件下培养后,将不同的菌落分别转移到另一含有固体培养基的培养皿中，在室温条件下继续培养，最后将生长良好的单一菌落SY2111接种到斜面培养基培养后置4℃冰箱保存备用；
（2）链霉菌Streptomycessp. SY2111的菌种鉴定
将步骤（1）分离培养所获得的单一菌落SY2111用目前实验室普遍使用的16S rDNA序列分析方法鉴定其种类，确定为链霉菌，分类命名为Streptomycessp. SY2111，已被中国典型培养物保藏中心-武汉中心保藏，保藏编号: CCTCC M 2021154；
（3）链霉菌Streptomycessp. SY2111培养物的制备
将步骤(2)获得的链霉菌Streptomycessp. SY2111的菌株接种到液体培养基中，将培养液在室温条件下振荡培养后得到菌种液，最后将菌种液转入固体大米培养基中，在室温静置培养后，得到含有抗胶质瘤活性化合物链霉萘啶A的SY2111固体发酵产物；
（4）链霉萘啶A的提取分离纯化
将步骤（3）获得的固体发酵产物用乙酸乙酯提取得到乙酸乙酯总提取物，将乙酸乙酯总提取物先用硅胶柱层析分离，用石油醚和乙酸乙酯混合溶剂以及乙酸乙酯和甲醇混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液，用薄层层析检测各组分，合并含有相同成分的组分，得到A~F六个组分，组分F再用十八烷基硅烷键合硅胶柱层析分离, 分别用30%、50%、70%和100%的甲醇洗脱，得到组分F1~F4，最后，组分F1用制备型高效液相色谱分离纯化得到纯化合物链霉萘啶A。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的海底沉积物是从马里亚拉海沟7281米深的海域获得；所述样品稀释液的浓度为1×10-4~1×10-2 g/mL；所述培养皿和斜面培养的固体培养基均为高氏琼脂培养基；所述的室温培养温度为20~28℃；所述的固体培养基中的培养时间为7~14天。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述的液体培养基为高氏液体培养基，所述的固体大米培养基为大米40 克和海水60毫升；所述的室温培养温度为20~28℃；所述的菌种培养时间为4~6天，大米培养基的培养时间为50~60天。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，高氏液体培养基由可溶性淀粉20 克,硝酸钾 1 克, 七水合硫酸镁0.5 克, 磷酸氢二钾0.5 克, 氯化钠 0.5 克, 硫酸亚铁0.01克, 天然海水1升组成。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述硅胶柱层析的硅胶用量与上柱的样品量比例是10~15克: 1.0 克；所述的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂梯度为10:1、5:1、2:1、1:1和0:1，乙酸乙酯和甲醇混合溶剂梯度为5:1和1:1；所述的十八烷基硅烷键合硅胶柱层析的ODS用量与上柱的样品量比例是20~30克：1.0 克；所述的制备型高效液相色谱分离条件是：创新通恒CXTH-3000高效液相色谱仪，富士C18 CT-30 色谱柱 280×30 mm，10μm，甲醇和水为流动相，检测波长210 nm，流速为10.0 mL/min。
8.权利要求1所述的链霉萘啶A在制备抗胶质瘤药物中的应用，其特征在于，所述胶质瘤为胶质瘤U251和U87MG。
CN202110266902.XA 2021-03-11 2021-03-11 海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶a及制备和用途 Active CN113024549B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110266902.XA CN113024549B (zh) 2021-03-11 2021-03-11 海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶a及制备和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110266902.XA CN113024549B (zh) 2021-03-11 2021-03-11 海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶a及制备和用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113024549A CN113024549A (zh) 2021-06-25
CN113024549B true CN113024549B (zh) 2022-01-11

Family

ID=76469750

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110266902.XA Active CN113024549B (zh) 2021-03-11 2021-03-11 海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶a及制备和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113024549B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105670968A (zh) * 2016-03-04 2016-06-15 浙江大学 一种海洋天然抗胶质瘤活性物质及制备和用途
CN111646993A (zh) * 2020-06-08 2020-09-11 浙江大学 海洋抗胶质瘤活性物质异壁咔啉碱c及制备和用途
CN111747955A (zh) * 2020-06-08 2020-10-09 浙江大学 海洋抗胶质瘤活性物质异壁咔啉碱a及制备和用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105670968A (zh) * 2016-03-04 2016-06-15 浙江大学 一种海洋天然抗胶质瘤活性物质及制备和用途
CN111646993A (zh) * 2020-06-08 2020-09-11 浙江大学 海洋抗胶质瘤活性物质异壁咔啉碱c及制备和用途
CN111747955A (zh) * 2020-06-08 2020-10-09 浙江大学 海洋抗胶质瘤活性物质异壁咔啉碱a及制备和用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN113024549A (zh) 2021-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111646993B (zh) 海洋抗胶质瘤活性物质异壁咔啉碱c及制备和用途
CN106188084B (zh) 海洋真菌来源的萘螺缩酮类化合物及其制备方法和应用
CN105670968B (zh) 一种海洋天然抗胶质瘤活性物质及制备和用途
CN111747955B (zh) 海洋抗胶质瘤活性物质异壁咔啉碱a及制备和用途
CN106397544A (zh) 环肽类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用
CN113024549B (zh) 海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶a及制备和用途
CN103173390B (zh) 一种紫色杆菌菌株及其应用
CN111072670B (zh) 一种二酮哌嗪类化合物及其制备方法和用途
CN108570025A (zh) 一种含氧五元环的海松烷二萜类化合物、制备方法及其应用
CN110357788B (zh) 一种聚酮类化合物及其制备方法和用途
CN108913606B (zh) 一种海洋抗耐药菌活性物质及制备和用途
CN114213428B (zh) 一种吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用
CN105418602B (zh) 一种海洋肽类化合物及其制备方法和应用
CN102643765A (zh) 链霉菌、抗肿瘤化合物Spiro-Indimycin A-D及其制备方法和应用
CN113912497A (zh) 一种海洋抗胶质瘤活性化合物及制备和用途
CN105112322B (zh) 灰霉醌a和b及其制备方法和医药用途
CN107686817A (zh) 一株阔苞菊内生真菌CYSK‑4及其生产的Ascomylactam类化合物的应用
CN110627640B (zh) 一种暗黄链霉酸和暗黄链霉酮的制备及其医药用途
CN110872266B (zh) 海洋青霉倍半萜内酯抗肿瘤活性物质及制备和用途
CN109384828B (zh) 抗耐药菌活性物质青霉碱醚a及制备和用途
CN108949610B (zh) 一种链霉菌和以链霉菌产生的angucycline类化合物及其制备与应用
CN106047751A (zh) 一株拟诺卡氏放线菌及其活性代谢产物的分离方法与应用
CN108264462B (zh) 一种含四元环的海松烷二萜类化合物及其抗肿瘤用途
CN112500348A (zh) 一类格尔德霉素衍生物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
CN103570652A (zh) 一种环氧苯并蒽醌类化合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant