CN113015903B - 样本检测方法及样本分析仪 - Google Patents

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Abstract

一种检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法及样本分析仪。该样本检测方法包括：制备含待测血液样本和稀释液的第一待测样本液；利用阻抗法求取第一待测样本液中的红细胞和血小板的第一检测结果；当第一检测结果表明血液样本异常时，制备含待测血液样本和稀释液的第二待测样本液或者从第一待测样本液制备第二待测样本液；在光学检测区对第二待测样本液进行光照射；收集第二待测样本液中的粒子因光照射所产生的至少两种散射光信号；根据至少两种散射光信号，求取第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。根据本申请能够实现RBC和PLT的准确分类，尤其是能够实现在普通稀释液环境下对异常样本的RBC和PLT进行准确的分类。

Description

样本检测方法及样本分析仪
技术领域
本申请涉及血液细胞分析领域，具体涉及一种检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法及一种相应的样本分析仪。
背景技术
血细胞分析是医院临床检验应用非常广泛的分析检测之一，其测量获得的参数可分为三大系列：白细胞系、红细胞系(红细胞(RBC)和血红蛋白)和血小板(PLT)。目前，在血细胞分析中进行RBC和PLT的测量时，一般采用阻抗法或光学法。
但是上述两种方法均存在一些弊端，例如在阻抗法中对于某些异常样本、如低值PLT样本，其PLT直方图与RBC直方图交界处往往没有明显界限，导致算法无法准确切割PLT与RBC直方图，进而不能获取准确的PLT测量结果。而低值PLT的准确性又是临床重点关注的血常规指标，这成为阻抗法测量的主要缺点。另外，在荧光法中，需要荧光染料对细胞染色，而且还需要使用特殊的稀释液对细胞进行球形化处理，所以使用成本较高，不利于光学法在临床的推广。
因此，目前RBC和PLT的检测方法存在上述问题，需要对所述方法进一步改进。
发明内容
本申请第一方面提供了一种检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法，所述方法包括：
制备含待测血液样本和稀释液的第一待测样本液；
使所述第一待测样本液在具有一带电极的孔的流动室中流动并检测所述第一待测样本液中的粒子通过所述孔时产生的电信号；
根据所述电信号求取所述第一待测样本液中的红细胞和血小板的第一检测结果；
根据所述第一检测结果判断所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板是否异常；
当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，
制备含所述待测血液样本和稀释液的第二待测样本液或者从所述第一待测样本液制备第二待测样本液；
在光学检测区对所述第二待测样本液进行光照射；
收集所述第二待测样本液中的粒子因光照射所产生的至少两种散射光信号；
根据所述至少两种散射光信号，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。
示例性地，所述第一检测结果和/或所述所述第二检测结果可以包括红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积、血小板平均体积和红细胞体积分布宽度中的至少一个参数的结果或其组合计算得到的参数的结果。
示例性地，所述异常可以为所述第一待测样本液中的血小板的数量小于预定阈值。
示例性地，所述稀释液能保持所述待测血液样本中的红细胞和血小板的原始形态。
示例性地，所述至少两种散射光信号可以包括轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号及后向散射光信号中的至少两种。
示例性地，所述轴向光损失、所述前向散射光信号、所述中角散射光信号、所述高角散射光信号、所述侧向散射光信号以及所述后向散射光信号的散射角度分别为0°～1°、1°～10°、10°～20°、20°～70°、70°～110°以及110°～160°。
示例性地，所述至少两种散射光信号可以包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的至少一种、尤其是至少两种。优选地，所述至少两种散射光信号可以包括前向散射信号和中角散射信号或者包括前向散射信号和高角散射信号。
示例性地，所述光照射可以为偏振光照射，所述至少两种散射光信号包括所述样本液中的粒子因偏振光照射所产生的轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号以及后向散射光信号的特定偏振态信号中的至少两种。示例性地，所述至少两种散射光信号可以包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号的特定偏振态信号中的至少一种、尤其是至少两种。
示例性地，所述根据所述至少两种散射光信号，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果可以包括：
根据所述至少两种散射光信号生成所述第二待测样本液中的粒子的二维或三维散点图；
基于所述二维或三维散点图，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。
示例性地，所述方法可以包括：当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，根据所述第一检测结果和所述第二检测结果求取所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果，即红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积、血小板平均体积和红细胞体积分布宽度中的至少一个参数的最终检测结果或其组合计算得到的参数的最终检测结果，或者将所述所述第二检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
示例性地，所述方法还可以包括：当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板正常时，将所述第一检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
示例性地，所述方法还可以包括：输出所述待测血液样本的红细胞和血小板的最终检测结果。
本申请第二方面提供了一种样本分析仪，包括：
采样装置，具有带吸移管嘴的吸移管并且具有驱动装置，该驱动装置用于驱动所述吸移管通过所述吸移管嘴定量吸取血液样本；
样本制备装置，具有反应池和供液部，其中，所述反应池用于接收采样装置所吸取的血液样本，所述供液部将稀释液提供给反应池，从而由所述采样装置所吸取的血液样本与由所述供液部提供的稀释液在所述反应池中混合，以制备成待测样本液；
阻抗检测装置，包括具有一带电极的孔的第一流动室，所述阻抗检测装置检测所述待测样本液中的粒子通过所述孔时产生的直流阻抗，并输出反映粒子通过孔时的信息的电信号；
光学检测装置，具有光源、第二流动室以及集光器，其中，经稀释液处理后的待测样本液中的粒子可在所述流动室内流动，所述光源所发出的光照射所述第二流动室中的粒子以产生至少两种散射光信号，所述集光器用于收集所述至少两种散射光信号；
输送装置，用于将所述反应池中经稀释液处理后的待测样本液输送到所述阻抗检测装置和所述光学检测装置中；
处理器，与所述采样装置、所述样本制备装置、所述阻抗检测装置、所述光学检测装置以及所述输送装置通信连接并且用于：
指示所述样本制备装置制备含待测血液样本和稀释液的第一待测样本液；
指示所述输送装置将制备的第一待测样本液输送至所述第一流动室；
从所述阻抗检测装置获取所述第一待测样本液通过所述阻抗检测装置的第一流动室所产生的电信号；
根据所述电信号求取所述第一待测样本液中的红细胞和血小板的第一检测结果；
根据所述第一检测结果判断所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板是否异常；
当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，
指示所述样本制备装置制备含所述待测血液样本和稀释液的第二待测样本液或者从所述第一待测样本液制备第二待测样本液；
指示所述输送装置将制备的第二待测样本液输送至所述第二流动室；
从所述光学检测装置获取所述第二待测样本液中的粒子在所述光学检测装置的第二流动室中因光照射所产生的至少两种散射光信号，并且
根据所述至少两种散射光信号，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。
示例性地，所述第一检测结果和/或所述所述第二检测结果可以包括红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积、血小板平均体积和红细胞体积分布宽度中的至少一个参数的最终检测结果或其组合计算得到的参数的最终检测结果。
示例性地，所述异常可以为所述第一待测样本液中的血小板的数量小于预定阈值。
示例性地，所述第一流动室和所述第二流动室可以构成为同一个具有一带电极的孔的流动室。
示例性地，所述稀释液能保持所述血液样本中所述红细胞和所述血小板的原始形态。
示例性地，所述至少两种散射光信号可以包括轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号及后向散射光信号中的至少两种。
示例性地，所述轴向光损失、所述前向散射光信号、所述中角散射光信号、所述高角散射光信号、所述侧向散射光信号以及所述后向散射光信号的散射角度分别为0°～1°、1°～10°、10°～20°、20°～70°、70°～110°以及110°～160°。
示例性地，所述至少两种散射光信号可以包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的至少一种、尤其是至少两种。优选地，所述至少两种散射光信号可以包括前向散射信号和中角散射信号或者包括前向散射信号和高角散射信号。
示例性地，所述光源可以构成为发出偏振光的光源，所述至少两种散射光信号包括所述样本液中的粒子因偏振光照射所产生的轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号以及后向散射光信号的特定偏振态信号中的至少两种。
示例性地，所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号的特定偏振态信号中的至少一种、尤其是至少两种。
示例性地，所述处理器可以用于：
根据所述至少两种散射光信号生成所述第二待测样本液中的粒子的二维或三维散点图；
基于所述二维或三维散点图，求取所述第二待测血液样本中的红细胞和血小板的第二检测结果。
示例性地，所述处理器可以用于：当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，根据所述第一检测结果和所述第二检测结果求取所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果，即红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积、血小板平均体积和红细胞体积分布宽度中的至少一个参数的最终检测结果或其组合计算得到的参数的最终检测结果，或者将所述第二检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
示例性地，所述处理器可以用于：当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板正常时，将所述第一检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
示例性地，所述样本分析仪还可以包括与所述处理器通信连接的输出装置，用于输出所述待测血液样本的红细胞和血小板的最终检测结果。
根据本申请实施例的检测血液样本中的红细胞和血小板的方法及样本分析仪能够实现RBC和PLT的准确分类和/或计数，尤其是在普通稀释液环境下实现RBC和PLT的准确分类和/或计数。尤其是，本申请能够提升阻抗法测量的准确性，实现在普通稀释液环境下对异常样本的RBC和PLT进行准确的分类和/或计数。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为采用阻抗法检测RBC和PLT得到的直方图；
图2A为采用阻抗法检测正常样本的RBC和PLT得到的RBC直方图；
图2B为采用阻抗法检测正常样本的RBC和PLT得到的PLT直方图；
图3为采用阻抗法检测异常样本的RBC和PLT得到的PLT直方图；
图4为采用荧光法检测血液样本的RBC和PLT得到的前向散射光信号(FSC)与荧光信号(FL)的散点图；
图5为本申请一实施例提供的具有光学检测装置的样本分析仪的结构示意图；
图6为本申请另一实施例提供的具有阻抗检测装置的样本分析仪的结构示意图；
图7为本申请第一实施方式提供的检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法的示意性流程图；
图8为本申请一实施例中各种散射光信号的散射角的示意图；
图9为根据本申请第一实施方式提供的样本检测方法得到的前向散射光信号(FSC)与中角散射光信号(MAS)散点图；
图10为根据本申请第一实施方式提供的样本检测方法得到的前向散射光信号(FSC)与高角散射光信号(WAS)散点图；
图11为本申请第二实施方式提供的检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法的示意性流程图。
具体实施方式
为了使得本申请的目的、技术方案和优点更为明显，下面将参照附图详细描述根据本申请的示例实施例。显然，所描述的实施例仅仅是本申请的一部分实施例，而不是本申请的全部实施例，应理解，本申请不受这里描述的示例实施例的限制。基于本申请中描述的本申请实施例，本领域技术人员在没有付出创造性劳动的情况下所得到的所有其它实施例都应落入本申请的保护范围之内。
在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本申请更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员而言显而易见的是，本申请可以无需一个或多个这些细节而得以实施。在其他的例子中，为了避免与本申请发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。
应当理解的是，本申请能够以不同形式实施，而不应当解释为局限于这里提出的实施例。相反地，提供这些实施例将使公开彻底和完全，并且将本申请的范围完全地传递给本领域技术人员。
在此使用的术语的目的仅在于描述具体实施例并且不作为本申请的限制。在此使用时，单数形式的“一”、“一个”和“所述/该”也意图包括复数形式，除非上下文清楚指出另外的方式。还应明白术语“组成”和/或“包括”，当在该说明书中使用时，确定所述特征、整数、步骤、操作、元件和/或部件的存在，但不排除一个或更多其它的特征、整数、步骤、操作、元件、部件和/或组的存在或添加。在此使用时，术语“和/或”包括相关所列项目的任何及所有组合。
为了彻底理解本申请，将在下列的描述中提出详细的步骤以及详细的结构，以便阐释本申请提出的技术方案。本申请的较佳实施例详细描述如下，然而除了这些详细描述外，本申请还可以具有其他实施方式。
目前在血液分析仪中一般采用阻抗法或荧光光学法对血液样本中的RBC和PLT进行测量。
其中，阻抗法基于库尔特原理，使经过稀释的血样通过小孔，在小孔的两侧施加恒流源，每一个通过小孔的细胞都引起小孔内液体电阻抗的变化，从而生成电脉冲。获取对应的电脉冲，其幅度代表细胞的体积，从而生成RBC与PLT直方图，该直方图是一维信息，即只有细胞的体积信息，如图1所示。
在图1中，虚线左边为PLT直方图，虚线右边为RBC直方图。由于RBC粒子直径约为PLT的3倍，RBC粒子数量约为PLT的30倍，因此PLT直方图在RBC直方图的左边，且与横轴所围成的面积比RBC小得多。也就是说，图1中虚线为RBC、PLT直方图的分界线。将RBC和PLT直方图分别做归一化处理，并单独画出来，就形成血细胞分析仪上常见的RBC直方图与PLT直方图，如图2A和2B所示，其中，图2A为采用阻抗法检测正常样本的RBC和PLT得到的RBC直方图；图2B为采用阻抗法检测正常样本的RBC和PLT得到的PLT直方图。
在正常样本的RBC和PLT直方图中，RBC峰与PLT峰之间存在明显的界限，通常将PLT直方图中PLT粒子主峰右侧的凹谷作为PLT与RBC的分界线，再分别对这两个直方图进行分析，得到PLT与RBC相关测量参数。但是对于某些异常样本，如低值PLT样本，其PLT直方图与RBC直方图交界处往往没有明显界限，如图3所示，低值PLT直方图呈现锯齿状，导致算法无法准确切割PLT与RBC直方图，进而不能获取准确的PLT测量结果。低值PLT的准确性是临床重点关注的血常规指标，这是阻抗法测量的主要缺点。
而荧光光学法可以克服此缺陷。荧光法基于流式细胞术。经过稀释和染色的样本在鞘流的挤压下，依次通过光学检测区。每个细胞经过激发光源的照射，在光学***中获得前向散射信号(代表细胞体积)与荧光信号(代表细胞内核酸含量)，以此生成二维散点图，从而对RBC和PLT进行划分与计算。相对于阻抗法获得的一维直方图，光学法的二维散点图多了一个维度的信息，从而可以准确在二维散点图上对PLT和RBC进行划分，如图4所示。因为在荧光法中，需要荧光染料对细胞染色，而且还需要使用特殊的稀释液对细胞进行球形化处理，所以使用成本较高，不利于光学法在临床的推广。
为了解决该问题，本申请提出一种仅利用散射光信息来检测血液血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法和样本分析仪，该样本检测方法和样本分析仪能够在普通稀释液环境下实现RBC和PLT的准确分类和计数，尤其是能够实现在普通稀释液环境下对异常样本的RBC和PLT进行准确的分类和计数。此外，在没有多种稀释液(尤其球形化稀释液)的应用场景，对于异常样本，通过本申请提出的方法和样本分析仪还能够提升阻抗法测量的准确性。
下面结合附图对本申请提供的检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法和样本分析仪进行详细的说明。
首先结合图5和图6详细说明本申请提供的样本分析仪。
如图5所示，该样本分析仪100至少包括采样装置(未示出)、样本制备装置110、光学检测装置120、输送装置130和处理器140。
所述采样装置具有带吸移管嘴的吸移管并且具有驱动装置，该驱动装置用于驱动所述吸移管通过所述吸移管嘴定量吸取血液样本。进一步地，采样装置在吸取血液样本之后由其驱动装置驱动并移动至样本制备装置110的反应池111，将所吸取的血液样本注入到该反应池111中。
所述样本制备装置110具有至少一个反应池111并且具有供液部(未示出)，其中，所述反应池111用于接收采样装置所吸取的血液样本，所述供液部将稀释液提供给反应池111，从而由所述采样装置所吸取的血液样本与由所述供液部提供的稀释液在所述反应池中反应，以制备成待检测血液样本。例如，供液部可以用于将适当的稀释液注入到反应池中，以对血液样本中的粒子进行处理，从而制备成待检测血液样本，用于后续检测。其中，所述稀释液选用血细胞分析仪必备的普通稀释液，以保持所述血液样本中所述红细胞和所述血小板的原始形态，无需使用使RBC、PLT球形化的特殊稀释液。例如，所述稀释液可以包括氯化钠，磷酸盐缓冲液以及防腐剂等成分，稀释液并不局限于某一种，可以根据需要进行选择，在此不再赘述。
所述光学检测装置120具有光源121、流动室122以及集光器123、124。光源121可以发射自然光或特定波段的光，并不局限于某一种。或者所述光源121还可以选用偏振光源，以发射特定偏振状态的偏振光。流动室122具有孔口1221，在样本制备装置110中经稀释液处理后的待测样本液的粒子可在所述流动室122内流动，并逐个经过孔口1221。光源121所发出的光照射所述流动室122中的粒子以产生光学信号信息。集光器123、124用于收集所述光学信号信息。所述光学信号信息可以包括轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号及后向散射光信号中的至少两种，当选用偏振光进行照射时，所述光学信号信息包括所述轴向光损失、所述前向散射光信号、所述中角散射光信号、所述高角散射光信号、所述侧向散射光信号以及所述后向散射光信号的特定偏振态信号中的至少两种。即，光学检测装置120至少包括轴向光损失集光器、前向散射光信号集光器、中角散射光信号集光器、高角散射光信号集光器、侧向散射光信号集光器以及后向散射光信号集光器中的至少两种集光器。
在一种实施例中，所述集光器构成为光电探测器，如光电二极管或光电倍增管等。具体地，如图5所示，在流动室122中流动的血细胞发出的前向散射光通过聚光镜126和针孔127被光电二极管(前向散射光集光器)123接受，而侧向散射光通过聚光镜126、分色镜128、光学膜129和针孔127被光电倍增管(侧向散射光集光器)124接受。从各集光器123、124输出的光信号分别通过由放大器141进行放大和波形处理等模拟信号处理后被输送到处理器140中。
在本申请中，所述轴向光损失、所述前向散射光信号、所述中角散射光信号、所述高角散射光信号、所述侧向散射光信号以及所述后向散射光信号的散射角度分别为0°～1°、1°～10°、10°～20°、20°～70°、70°～110°以及110°～160°。其中，轴向光损失集光器、前向散射光信号集光器、中角散射光信号集光器、高角散射光信号集光器、侧向散射光信号集光器分别配置为接收上述散射角度的散射光信号。
优选地，所述光学检测装置120至少包括前向散射光信号集光器、中角散射光信号集光器和高角散射光信号集光器中的至少两个，以接收前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的至少两种或前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号的特定偏振态信号中的至少两种散射光信号，以提高所述红细胞和血小板的检测结果的准确性。
所述输送装置130用于将在反应池111中经稀释液处理后的待测血液样本输送到光学检测装置120中。
所述处理器140与采样装置、样本制备装置110、光学检测装置120以及输送装置130通信连接并且设置用于从所述光学检测装置120获取所述光学信号信息并且对所述光学信号信息进行处理，以求取待测血液样本中的粒子的检测结果。处理器140可以具有未示出的A/D转换器，用于将由光学检测装置120提供的模拟信号转换为数字信号。具体地，处理器140用于实施以下还要详细说明的按照本申请的样本检测方法。
在本申请实施例中，上述处理器140可以为特定用途集成电路(ApplicationSpecific Integrated Circuit，ASIC)、数字信号处理器(Digital Signal Processor，DSP)、数字信号处理装置(Digital Signal Processing Device，DSPD)、可编程逻辑装置(ProgRAMmable Logic Device，PLD)、现场可编程门阵列(Field ProgRAMmable GateArray，FPGA)、中央处理器(Central Processing Unit，CPU)、控制器、微控制器、微处理器中的至少一种。可以理解地，对于不同的设备，用于实现上述处理器功能的电子器件还可以为其它，本申请实施例不作具体限定。
此外，如图6所示，所述样本分析仪100还可以包括阻抗检测装置150，其包括具有一带电极153的孔152的流动室151，所述阻抗检测装置150检测所述待测样本液中的粒子通过所述孔152时产生的直流阻抗，并输出反映粒子通过孔时的信息的电信号。
具体地，采样装置在吸取血液样本之后由其驱动装置驱动并移动至样本制备装置110的反应池111，将所吸取的血液样本注入到该反应池111中。输送装置130还可以将在反应池111中经稀释液处理后的待测血液样本输送到阻抗检测装置150中，即输送到流动室151中。阻抗检测装置150还可以设有未图示的鞘液舱，用于给流动室151提供鞘液。在流动室152中，待测样本液在鞘液的包裹下流过，小孔152使待测样本液流变为细流，使待测样本液中所含粒子(有形成份)逐一通过小孔152。电极153与直流电源154电连接，直流电源154向一对电极153之间提供直流电。在直流电源154提供直流电期间，可以检出一对电极153间的阻抗。表示阻抗变化的电阻信号被放大器155放大后输送到处理器140。电阻信号的大小与粒子的体积(大小)相对应，因此通过处理器140对电阻信号进行信号处理可以获得待测血液样本中的粒子分类计数结果，尤其是红细胞和血小板的分类计数结果。
在有利的实施例中，光学检测装置120的流动室122与阻抗检测装置150的流动室152可以为同一个流动室，以节省空间。也就是说，阻抗检测装置150的流动室152可以同时用作光学检测装置120的流动室122。当然，光学检测装置120的流动室122与阻抗检测装置150的流动室152也可以为独立分开的两个流动室。
此外，所述血液样本分析仪100可以进一步包括与所述处理器140通信连接的输出装置(未示出)，设置用于从所述处理器140接收并显示血液样本分析结果和/或所述光信号信息中的至少两种所组成的散点图。
接着参考图7至11对上述血液样本分析仪100检测血液样本中的红细胞和血小板的具体方法和原理进行详细的说明。
图7为本申请第一实施方式提供的检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法。如图7所示，一种检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法200包括以下步骤：
步骤S210，制备含待测血液样本和稀释液的待测样本液。
例如，在该步骤中，例如在样本分析仪100的样本制备装置110中制备待测样本液，所述样本制备装置110具有至少一个反应池111并且具有供液部(未示出)，在处理器140的控制下，采样装置在吸取血液样本之后由其驱动装置驱动并移动至样本制备装置110的反应池111，然后供液部将稀释液提供给反应池111，从而由所述采样装置所吸取的血液样本与由所述供液部提供的稀释液在所述反应池中反应，以制备成待检测血液样本。一方面，稀释液为待测血液样本提供了适宜的pH、电导率和渗透压，保证细胞的形态完整，不发生溶血作用；此外，稀释液还用于对上次检测样本残留的物质进行清洗，保证样本分析仪的采样针、管路和流动室的清洁，防止交叉污染；再一方面，样本分析仪暂时停止运行期间稀释剂要充盈在管路中间，防止外界灰尘等异物进入仪器，造成故障。其中，所述稀释液选用血细胞分析仪必备的普通稀释液，以保持所述血液样本中所述红细胞和所述血小板的原始形态，而不是使RBC、PLT球形化的特殊稀释液。
其中，在本申请的一实施例中，所述稀释液可以包括氯化钠，磷酸盐缓冲液以及防腐剂等成分，稀释液并不局限于某一种，可以根据需要进行选择，在此不再赘述。
步骤S220，在光学检测区对所述待测样本液进行光照射。
例如在该步骤中，在处理器140的控制下，样本分析仪100的输送装置130将在反应池111中经稀释液处理后的待测血液样本输送到光学检测装置120的流动室122中，经稀释液处理后的待测样本液的粒子可在所述流动室122内流动，并逐个经过孔口1221，光源121所发出的光照射所述流动室122中的粒子以产生光学信号信息。
步骤S230，收集所述待测样本液中的粒子因光照射所产生的至少两种散射光信号，即特定散射角度的散射光信号。
例如，在该步骤中，在处理器140的控制下，光学检测装置120将其输出的散射光信号输送到处理器140中，以便处理器140对所述散射光信号进行处理。在本申请的实施例中，所述散射光信号可以包括轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号及后向散射光信号中的至少两种。优选地，所述散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的至少一种、尤其是至少两种。更优选地，所述至少两种散射光信号可以包括前向散射信号和中角散射信号或者包括前向散射信号和高角散射信号。
其中，在本申请的实施例中所述散射角度指的是，以流动室中样本流与激发光束重合区域的中心为角度的顶点，以激发光束的传播方向为角度的第一条边，以在上述顶点的粒子发出的散射光的传播方向为角度的第二条边，由上述顶点和两条边所形成的角度。在没有相反说明的情况下，散射角度均参照该解释。
在此，本申请对所述散射光信号的散射角度进行如下定义，如图8所示，其中：所述轴向光损失的散射角度为：0°～1°；所述前向散射光信号的散射角度为：1°～10°；所述中角散射光信号的散射角度为：10°～20°；所述高角散射光信号的散射角度为：20°～70°；所述侧向散射光信号的散射角度为：70°～110°；并且所述后向散射光信号的散射角度为：110°～160°。
在本申请的一实施例中，收集前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的任意两种或全部用于后续对所述血液样本中的红细胞和血小板进行分类，选用上述三种散射光信号中的至少两种可以更有效和更加准确的对红细胞和血小板进行分类。具体地，例如，选用前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中至少两种获得到的红细胞和血小板的散点图中有更加清晰的红细胞和血小板分界线，由此进行分类的结果更加精准。
当然，需要说明的是，散射光信号的选择并不局限于上述示例，可以根据实际需要进行选择。
其中，所述光照射为可以为自然光或特定波段的光，还可以选用特定偏振状态的偏振光照射。当选用偏振光对所述待测样本液进行照射时，所述散射光信号为所述样本液中的粒子因偏振光照射而产生轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号以及后向散射光信号的特定偏振态信号。
类似地，在本申请的一实施例中，收集前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号的特定偏振态信号中的任意两种或全部用于后续对所述血液样本中的红细胞和血小板进行分类，以获得更有效和更加准确的对红细胞和血小板进行分类。
步骤S240，根据所述至少两种散射光信号，对所述待测血液样本中的红细胞和血小板进行分类。
例如，处理器140从光学检测装置120接收所述散射光信号并进行处理，以获得所述待测血液样本中的红细胞和血小板的分类结果。
优选地，在该步骤S240中，对所述红细胞和所述血小板进行分类的步骤可以包括：根据所述至少两种散射光信号生成所述血液样本中的粒子的二维或三维散点图；基于所述二维或三维散点图，对所述血液样本中的红细胞和血小板进行分类。
在本申请的一实施例中，例如当待测样本液的PLT值＜30时，PLT直方图在右边界区呈现出锯齿状，如图3所示，难以划出与RBC区域相分离的分界线。但是采用本申请所述检测方法，可以生成如图9和图10所示的散点图。其中，图9为前向散射(FSC)光信号与中角散射(MAS)光信号的散点图。图10为前向散射(FSC)光信号与高角散射(WAS)光信号的散点图。从图9和图10中可以看出PLT粒子团与RBC粒子团之间均存在明显界限，如图中虚线所示方向。因此，在阻抗法中无法区分的PLT与RBC粒子团能够在光散射散点图中得以区分，从而得到准确的RBC和PLT测量结果。
除了可以对红细胞和所述血小板进行分类以外，还可以根据所述至少两种散射光信号，求取所述红细胞和所述血小板的预定参数的检测结果。其中，所述预定参数可以包括红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积MCV、血小板平均体积MPV和红细胞体积分布宽度RDW中的至少一个参数以及由上述参数经过组合计算后得到的其他参数。
进一步地，所述方法200还可以包括输出所述待测血液样本的红细胞和血小板的分类结果和/或所述预定参数。
根据本申请第一实施方式的检测血液样本中的红细胞和血小板的方法200及相应的样本分析仪能够实现RBC和PLT的准确分类和计数，尤其是在普通稀释液环境下实现RBC和PLT的准确分类和计数。
接着结合图11对本申请第二实施方式提供的检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法进行详细的说明。如图11所示，所述方法300包括：
步骤S310，制备含待测血液样本和稀释液的第一待测样本液。
该步骤S310可以参照本申请第一实施方式提供的方法200中的步骤S210，当然可以根据阻抗法的待测样本液的制备方法做进一步的改进和调整，在此不再赘述。
步骤S320，使所述第一待测样本液在具有一带电极的孔的流动室中流动并检测所述第一待测样本液中的粒子通过所述孔时产生的电信号。
例如，在该步骤中，在处理器140的控制下，将第一待测样本液经输送装置130送往阻抗检测装置150的流动室151。阻抗检测装置150的鞘液舱给流动室151提供鞘液，待测样本液在鞘液的包裹下流过，小孔152使第一待测样本液流变为细流，使第一待测样本液中所含粒子(有形成份)逐一通过小孔152，进而通过小孔152上的电极153产生阻抗变化、即电信号。表示阻抗变化的电阻信号被放大器放大后输送到处理器140。
步骤S330，根据所述电信号求取所述第一待测样本液中的红细胞和血小板的第一检测结果。
例如在该步骤中，处理器140从阻抗检测装置150获取电信号，电信号的大小与粒子的体积(大小)相对应，通过处理器140对电信号进行信号处理可以获得待测样本液中的红细胞和血小板的第一检测结果。即，所述第一检测结果是指通过阻抗法获得到的红细胞和血小板的检测结果。示例性地，所述第一检测结果可以包括红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积、血小板平均体积和红细胞体积分布宽度中的至少一个参数的结果或其组合计算得到的参数的结果。
步骤S340，根据所述第一检测结果判断所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板是否异常。在获得第一检测结果之后，执行步骤S340。优选地，所述异常可以指所述待测血液样本中的血小板的数量小于预定阈值，当待测血液样本中的血小板的数量小于预定阈值时，第一检测结果则会出现如图3所示的情况，其PLT直方图与RBC直方图交界处往往没有明显界限，低值PLT直方图呈现锯齿状，导致算法无法准确切割PLT与RBC直方图，进而不能获取准确的PLT测量结果。
当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，执行如下步骤：步骤S350，制备含所述待测血液样本和稀释液的第二待测样本液或者从所述第一待测样本液制备第二待测样本液，即所述第二待测样本液可以在所述样本制备装置110的反应池111中重新制备或者直接将从所述第一待测样本液的剩余部分作为所述第二待测样本液；步骤S360，在光学检测区对所述第二待测样本液进行光照射；步骤S370，收集所述第二待测样本液中的粒子因光照射所产生的至少两种散射光信号；步骤S380，根据所述至少两种散射光信号，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。示例性地，所述第二检测结果也可以包括红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积、血小板平均体积和红细胞体积分布宽度中的至少一个参数的结果或其组合计算得到的参数的结果。其中，步骤S360至步骤S380的具体实现方式可以参照本申请第一实施方式提供的方法200中的步骤S220-步骤S240，在此不再赘述。
此外，当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，执行步骤S390a，根据所述第一检测结果和所述第二检测结果求取所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果，也就是说可以利用光散射法获得的第二检测结果对由阻抗法获得的第一检测结果进行修正。通过将阻抗法与光散射法结合能够更加准确的获得RBC、PLT的分类结果。例如通过光散射法获得RBC、PLT散点图，经过RBC、PLT聚团的分析，在RBC、PLT阻抗法直方图上准确的划分RBC与PLT群，从而辅助RBC、PLT阻抗通道获得更准确的测量结果。当然，在步骤S390a中，也可以将所述第二检测结果直接确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板正常时，执行步骤S390b，将所述第一检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
此外，在步骤S390之后还可以实施如下步骤：输出所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
应说明的是，按照本申请第二实施方式的方法300中的各个步骤可以参照上述按照本申请第一实施方式的方法200中相应的解释和说明，在此不再赘述。
根据本申请第二实施方式的检测血液样本中的红细胞和血小板的方法及相应的样本分析仪能够实现在普通稀释液环境下对异常样本的RBC和PLT进行准确的分类和计数。在没有多种稀释液(尤其球形化稀释液)的应用场景，对于异常样本，通过本申请第二实施方式提供的方法和样本分析仪能够提升阻抗法测量的准确性。
此外，本申请还提出一种检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法，所述方法与本申请第二实施方式提供的的样本检测方法的不同之处在于，无论待测血液样本是否异常，同时采用阻抗法和本申请提出的光散射法对待测血液样本进行检测，得出阻抗法的第一检测结果和光散射法的第二检测结果，然后根据实际情况，利用第一检测结果和第二检测结果得出待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
应理解，在说明书、权利要求书和附图中提及的特征、结构和优点，只要在本申请的范围内是有意义的，均可以任意相互组合。针对本申请的方法所说明的特征、结构和优点以相应的方式适用于本申请的样本分析仪，反之亦然。
本申请实施例中所使用的技术术语仅用于说明特定实施例而并不旨在限定本申请。在本文中，单数形式“一”、“该”及“所述”用于同时包括复数形式，除非上下文中明确另行说明。进一步地，在说明书中所使用的用于“包括”和/或“包含”是指存在所述特征、整体、步骤、操作、元件和/或构件，但是并不排除存在或增加一个或多个其它特征、整体、步骤、操作、元件和/或构件。
在所附权利要求中对应结构、材料、动作以及所有装置或者步骤以及功能元件的等同形式(如果存在的话)旨在包括结合其他明确要求的元件用于执行该功能的任何结构、材料或动作。本申请的描述出于实施例和描述的目的被给出，但并不旨在是穷举的或者将被本申请限制在所公开的形式。在不偏离本申请的范围和精神的情况下，多种修改和变形对于本领域的一般技术人员而言是显而易见的。本申请中所描述的实施例能够更好地揭示本申请的原理与实际应用，并使本领域的一般技术人员可了解本申请。
本申请中所描述的流程图仅仅为一个实施例，在不偏离本申请的精神的情况下对此图示或者本申请中的步骤可以有多种修改变化。比如，可以不同次序的执行这些步骤，或者可以增加、删除或者修改某些步骤。本领域的一般技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本申请权利要求所作的等同变化，仍属于本申请所涵盖的范围。

Claims (28)

1.一种检测血液样本中的红细胞和血小板的样本检测方法，其特征在于，所述方法包括：
制备含待测血液样本和稀释液的第一待测样本液；
使所述第一待测样本液在具有一带电极的孔的流动室中流动并检测所述第一待测样本液中的粒子通过所述孔时产生的电信号；
根据所述电信号求取所述第一待测样本液中的红细胞和血小板的第一检测结果；
根据所述第一检测结果判断所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板是否异常；
当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，
制备含所述待测血液样本和稀释液的第二待测样本液或者从所述第一待测样本液制备第二待测样本液；
在光学检测区对所述第二待测样本液进行光照射；
收集所述第二待测样本液中的粒子因光照射所产生的至少两种散射光信号；
根据所述至少两种散射光信号，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一检测结果和/或所述第二检测结果包括红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积、血小板平均体积和红细胞体积分布宽度中的至少一个参数的结果或其组合计算得到的参数的结果。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述异常为所述第一待测样本液中的血小板的数量小于预定阈值。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述稀释液能保持所述待测血液样本中的红细胞和血小板的原始形态。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述至少两种散射光信号包括轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号及后向散射光信号中的至少两种。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述轴向光损失、所述前向散射光信号、所述中角散射光信号、所述高角散射光信号、所述侧向散射光信号以及所述后向散射光信号的散射角度分别为0°～1°、1°～10°、10°～20°、20°～70°、70°～110°以及110°～160°。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的至少一种；或者，
所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的至少两种。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述至少两种散射光信号包括前向散射信号和中角散射信号或者包括前向散射信号和高角散射信号。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述光照射为偏振光照射，所述至少两种散射光信号包括所述样本液中的粒子因偏振光照射所产生的轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号以及后向散射光信号的偏振态信号中的至少两种。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号的偏振态信号中的至少一种；或者
所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号的偏振态信号中的至少两种。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述根据所述至少两种散射光信号，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果的步骤包括：
根据所述至少两种散射光信号生成所述待测血液样本中的粒子的二维或三维散点图；
基于所述二维或三维散点图，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，根据所述第一检测结果和所述第二检测结果求取所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果，或者将所述第二检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板正常时，将所述第一检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
14.根据权利要求12或13所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：
输出所述待测血液样本的红细胞和血小板的最终检测结果。
15.一种样本分析仪，其特征在于，包括：
采样装置，具有带吸移管嘴的吸移管并且具有驱动装置，该驱动装置用于驱动所述吸移管通过所述吸移管嘴定量吸取血液样本；
样本制备装置，具有反应池和供液部，其中，所述反应池用于接收采样装置所吸取的血液样本，所述供液部将稀释液提供给反应池，从而由所述采样装置所吸取的血液样本与由所述供液部提供的稀释液在所述反应池中混合，以制备成待测样本液；
阻抗检测装置，包括具有一带电极的孔的第一流动室，所述阻抗检测装置检测所述待测样本液中的粒子通过所述孔时产生的直流阻抗，并输出反映粒子通过孔时的信息的电信号；
光学检测装置，具有光源、第二流动室以及集光器，其中，经稀释液处理后的待测样本液中的粒子可在所述流动室内流动，所述光源所发出的光照射所述第二流动室中的粒子以产生至少两种散射光信号，所述集光器用于收集所述至少两种散射光信号；
输送装置，用于将所述反应池中经稀释液处理后的待测样本液输送到所述阻抗检测装置和所述光学检测装置中；
处理器，与所述采样装置、所述样本制备装置、所述阻抗检测装置、所述光学检测装置以及所述输送装置通信连接并且用于：
指示所述样本制备装置制备含待测血液样本和稀释液的第一待测样
本液；
指示所述输送装置将制备的第一待测样本液输送至所述第一流动室；
从所述阻抗检测装置获取所述第一待测样本液通过所述阻抗检测装
置的第一流动室所产生的电信号；
根据所述电信号求取所述第一待测样本液中的红细胞和血小板的第一检测结果；
根据所述第一检测结果判断所述待测血液样本中的红细胞和/或血小
板是否异常；
当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，
指示所述样本制备装置制备含所述待测血液样本和稀释液的第二待测样本液或者从所述第一待测样本液制备第二待测样本液；
指示所述输送装置将制备的第二待测样本液输送至所述第二流动室；
从所述光学检测装置获取所述第二待测样本液中的粒子在所述光学
检测装置的第二流动室中因光照射所产生的至少两种散射光信号，并且
根据所述至少两种散射光信号，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。
16.根据权利要求15所述的样本分析仪，其特征在于，所述第一检测结果和/或所述所述第二检测结果包括红细胞计数、血小板计数、红细胞平均体积、血小板平均体积和红细胞体积分布宽度中的至少一个参数的结果或其组合计算得到的参数的结果。
17.根据权利要求15或16所述的样本分析仪，其特征在于，所述异常为所述第一待测样本液中的血小板的数量小于预定阈值。
18.根据权利要求15或16所述的样本分析仪，其特征在于，所述第一流动室和所述第二流动室构成为同一个具有一带电极的孔的流动室。
19.根据权利要求15或16所述的样本分析仪，其特征在于，所述稀释液能保持所述待测血液样本中的红细胞和血小板的原始形态。
20.根据权利要求15或16所述的样本分析仪，其特征在于，所述至少两种散射光信号包括轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号及后向散射光信号中的至少两种。
21.根据权利要求20所述的样本分析仪，其特征在于，所述轴向光损失、所述前向散射光信号、所述中角散射光信号、所述高角散射光信号、所述侧向散射光信号以及所述后向散射光信号的散射角度分别为0°～1°、1°～10°、10°～20°、20°～70°、70°～110°以及110°～160°。
22.根据权利要求15所述的样本分析仪，其特征在于，所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的至少一种；或者
所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号中的至少两种。
23.根据权利要求15所述的样本分析仪，其特征在于，所述光源构成为发出偏振光的光源，所述至少两种散射光信号包括所述样本液中的粒子因偏振光照射所产生的轴向光损失、前向散射光信号、中角散射光信号、高角散射光信号、侧向散射光信号以及后向散射光信号的偏振态信号中的至少两种。
24.根据权利要求23所述的样本分析仪，其特征在于，所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号的偏振态信号中的至少一种；或者
所述至少两种散射光信号包括前向散射信号、中角散射信号、高角散射信号的偏振态信号中的至少两种。
25.根据权利要求15所述的样本分析仪，其特征在于，所述处理器用于：
根据所述至少两种散射光信号生成所述待测血液样本中的粒子的二维或三维散点图；
基于所述二维或三维散点图，求取所述第二待测样本液中的红细胞和血小板的第二检测结果。
26.根据权利要求15所述的样本分析仪，其特征在于，所述处理器用于：当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板异常时，根据所述第一检测结果和所述第二检测结果求取所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果，或者将所述第二检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
27.根据权利要求15所述的样本分析仪，其特征在于，所述处理器用于：当所述第一检测结果表明所述待测血液样本中的红细胞和/或血小板正常时，将所述第一检测结果确定作为所述待测血液样本中的红细胞和血小板的最终检测结果。
28.根据权利要求26或27所述的样本分析仪，其特征在于，所述样本分析仪还包括与所述处理器通信连接的输出装置，用于输出所述待测血液样本的红细胞和血小板的最终检测结果。
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