CN112941010A - 一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法及应用。所述提取方法是将植物愈伤组织取方法具体是将植物愈伤组织加入hank’s液中匀浆过滤取滤液，经过多次不同离心调节下进行离心后，收集上层清液C即为植物愈伤组织功效滤液；将留在容器中的淡绿色或淡黄色胶装透明沉淀，加入PBS缓冲液或生理盐水将其溶解冻干得到淡黄色或淡绿色或白色干燥粉末即为植物愈伤组织外泌体。所述植物愈伤组织功效滤液和植物愈伤组织外泌体均用于皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老中。本发明得到植物组织纯化外泌体产物性质稳定，可在常温下运输和储存，可以降低皮肤炎症反应，激活表皮再生，增强皮肤细胞增殖、分化能力，促进创面愈合，并抵抗和逆转光老化。

Description

一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法
技术领域
本发明涉及及植物提取技术领域，具体是一种从雪绒花愈伤组织或滨海剌芹愈伤组织或海茴香愈伤组织中提取富含愈伤组织功效成分体液和其纯化外泌体产物的植物愈伤组织外泌体提取方法及应用。
背景技术
愈伤组织是植物离体培养条件下形成的一种高度液泡化，无定形态，含有大量植物干细胞的无规则松散组织。植物的愈伤组织中富含植物干细胞，具有多种功效成分，相比于普通的植物提取物，其功效成分浓度更高，成分谱更加广泛。常见的愈伤组织有雪绒花愈伤组织，滨海剌芹愈伤组织和海茴香愈伤组织。雪绒花愈伤组织现已分离和鉴定出：咖啡酸、香草酸、原儿茶醛、反式桂皮酸、β-谷甾醇，阿魏酸，奎宁酸，火绒草酸，黄酮类等多种化学成分，并经药理试验已证明具有抗炎，抗氧化，促进胶原代谢平衡以及促进胶原新生的效果。滨海剌芹愈伤组织中富含三萜皂苷类、生物碱类、环烯醚萜类、挥发油类等化合物，成分较复杂、多样等特点，并经药理试验已证明具有抗炎，抗菌，抗衰老效果。海茴香愈伤组织已分理出茴香醚、α-茴香酮、甲基胡椒酚、茴香醛、维生素C等成分。海茴香提取物在所有浓度下的抗氧活性均高于α-生育酚和BHT，能抑制亚油酸的过氧化作用，同时能抑制酪氨酸酶的活性，具有美白的功效，并经药理试验已证明具有抗炎，抗氧化，促进胶原代谢平衡以及促进胶原新生的效果。
目前市面上植物提取物产品大多为精油、纯露、细胞液等，功能利用有限。精油是萃取植物特有的芳香物质，虽然有一定效果，但含有的功效性蛋白较少，特别是水溶性蛋白的确实让精油的效果不够理想。植物纯露除了大量的水分子外，仅含少量的低沸点水溶性物质，大部分活性物质被遗弃。植物细胞液是利用雪绒花细胞系或细胞株离体培养后，对其培养液进行收集产生的植物制品。其缺点在于功效物质含量较低，且细胞系细胞株具有无线增殖的可能性，应用于人体时其成瘤性或诱导肿瘤产生的风险尚未排除。近年来研究发现植物能够分泌一种囊泡小体，直径在40-100nm，被命名为外泌体，其内选择性包裹脂质、蛋白质、mRNA及miRNA等多种生物活性物质，具有明确的减轻组织损伤程度、促进损伤组织形态学及功能学修复的作用。
在现有的植物外泌体提取方案中，由于植物渗透压差异性，采用PBS或生理盐水在数小时的提取过程中可能因为渗透压差异而导致外泌体囊泡结构破裂，从而导致外泌体提取产量降低，无法发挥功效性；而且现有的植物外泌体提取方案中，缺乏对滤渣的粗过滤，由于植物组织纤维丰富的特点，未经粗过滤的植物组织漂浮于匀浆液中，低速离心不具备实际操作性。除此之外，现有的植物外泌体提取方案中，在终末提取步骤中添加甘油、丙二醇、甘露醇等赋形剂，会导致渗透压变化而导致提取的外泌体破裂，从而导致最终提取的外泌体实际功效性降低。同时，添加的赋形剂有一定的致敏性和化学活性，在后续制药、化妆品制备中增大了操作的难度。
皮肤损伤在日常生活极为常见，小到皮肤色素沉积、粗糙、痤疮、粉刺，大到皮肤烧烫伤，创面可大可小，可深可浅，损伤部位各不相同，都会给患者带来烦恼和痛苦；而目前研究人员从天然可食用的植物中采集外泌体虽然可以用于人体美容中，但是对于皮肤的修复能力还有待研究。
发明内容
本发明针对现有技术中植物外泌体提取及应用上存在的各种缺陷提供了一种从雪绒花愈伤组织或滨海剌芹愈伤组织或海茴香愈伤组织中提取植物愈伤组织功效成分体液和外泌体的方法及提取的植物愈伤组织功效成分体液和外泌体的应用，本发明能更好的维持植物外泌体结构稳定，保证其稳定储存和运输，并可在溶解后保持外泌体的形态，而且本发明中的愈伤组织纯化外泌体产物及愈伤组织功效滤液可以加速创面修复，抵抗光老化，对皮肤的创伤可以达到更好的治疗或美容效果。
为了达到上述目的，本发明提供了一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)将植物愈伤组织以1:1～1:5体积比加入hank’s液中，匀浆，并以300～2500目网筛过滤，取滤液，并以300～500g离心10～30分钟，取上层清液A；所述植物愈伤组织为雪绒花愈伤组织或滨海剌芹愈伤组织或海茴香愈伤组织；
(2)将上清液A再以2000～4000g离心10～30分钟，取上层清液B；
(3)将上层清液B以100000～120000g离心力离心90～110分钟，分离出上层清液C，该上层清液C即为植物愈伤组织功效滤液；
(4)收集步骤(3)中分离出上层清液C之后的留在容器中的淡绿色或淡黄色胶装透明沉淀，加入PBS缓冲液或生理盐水将其溶解，并转入-80度冰箱或液氮中急冻10～20min，然后转入冻干机干燥24小时，并真空包装，所得淡黄色或淡绿色或白色干燥粉末即为植物愈伤组织外泌体。
本发明较优的技术方案：所述步骤(1)中的植物愈伤组织采用离体培养至胚芽状的愈伤组织；所述步骤(1)中的植物愈伤组织与hank’s液的体积比为1:1；所述步骤(1)中的匀浆液2500目网筛过滤，匀浆后的过滤液体以400g离心20分钟取上层清液A。
本发明较优的技术方案：所述步骤(2)中上层清液A以3000g离心20分钟；所述步骤(3)中上层清液B以11000离心力离心100分钟。
本发明较优的技术方案：所述步骤(4)中沉淀在离心管中直接加入生理盐水溶解，其生理盐水加入离心管容积的1/20～1/10，然后转入西林瓶中置于-80度冰箱或液氮中急冻10～20min，然后转入冻干机-40℃～-80℃，压强＜100pa条件下干燥24小时。
本发明提供了一种按照上述提取方法制备的植物愈伤组织功效滤液的应用，其特征在于：将上述植物愈伤组织功效滤液单独作为皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品应用，或添加到皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品中应用。
本发明较优的技术方案：所述植物愈伤组织功效滤液单独作为皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品应用时，其植物愈伤组织功效滤液的稀释浓度为40～60％，通过无针高压喷射装置促进皮肤吸收。
本发明较优的技术方案：将上述植物愈伤组织功效滤液加入生理盐水和甘油混合均匀制备成保湿喷雾，其中植物愈伤组织功效滤液、生理盐水、甘油的混合体积比为8～12:7～10:0.8～1.2。
本发明提供的一种按照上述提取方法制备的植物愈伤组织外泌体的应用，其特征在于：将上述植物愈伤组织外泌体单独作为皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品应用，或添加到皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品中应用。
本发明较优的技术方案：所述植物愈伤组织外泌体单独作为皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品应用时，其植物愈伤组织外泌体的稀释浓度为8～12％，并通过无针高压喷射装置促进皮肤吸收。
本发明较优的技术方案：将上述植物愈伤组织外泌体按照以下配方乳化并搅拌均匀制备成护肤保湿霜，所述配方中各种物质的重量份数如下，按质量百分比计：植物愈伤组织外泌0.05-2.0份，棕榈酸异丙脂1-5份、季戊四醇双硬脂酸脂1-5份、鲸蜡硬脂醇1-5份、异构十六烷1-5份、烷基多糖苷2-8份、磷脂2-5份、聚季铵盐1-3份、玻尿酸1-3份、防腐剂0.01-0.2份、香精0-0.03份、蒸馏水余量。
本发明的有益效果：
(1)本发明采用hank’s液(平衡盐溶液)对植物外泌体进行提取，经实验研究能更好的维持植物外泌体结构稳定，并在匀浆后添加粗过滤步骤，将低速离心部分设为两步，改善了外泌体提取的实际操作性，在终末提取步骤以生理盐水重悬外泌体，采用冻干和真空包装的步骤，得到的雪绒花愈伤组织或滨海剌芹愈伤组织或海茴香愈伤组织纯化外泌体产物性质稳定，可在常温下运输和储存，并可在溶解后保持外泌体的形态；
(2)本发明除了可以提取植物外泌体外，还可以提取得到愈伤组织功效滤液，且得到的愈伤组织纯化外泌体产物及愈伤组织功效滤液均可以降低皮肤炎症反应，激活表皮再生，增强皮肤细胞增殖、分化能力，促进创面愈合，并抵抗和逆转光老化，对成纤维细胞和角质细胞均有较好的促进迁移效果，是生物医学的新兴产品，并可用于多种日化产品制备；
(3)本发明中的植物愈伤组织外泌体可以通过胞吞胞吐等方式被细胞吸收，增强了其作为护肤产品的运用范围，亦可以使用无针高压喷射装置促进皮肤吸收，达到更好的治疗或美容效果；
(4)本发明中得到愈伤组织功效滤液或愈伤组织纯化外泌体产物在制备促进面部年轻化护肤品以及促进创面愈合生物医药方面可以单独运用，也可以也可添加入护肤产品、生物敷料中进一步开发。
附图说明
图1是本发明实施例中雪绒花、滨海剌芹、海茴香三种物质的愈伤组织外泌体和雪绒花愈伤组织功效滤液的外形图，其中编号1为雪绒花愈伤组织外泌体，编号2为雪绒花愈伤组织功效滤液，编号3为滨海刺芹愈伤组织外泌体，编号4为滨海刺芹愈伤组织功效滤液，编号5为海茴香愈伤组织外泌体，编号6为海茴香愈伤组织功效滤液；
图2是实施例中雪绒花愈伤组织外泌体在透射电镜下的观察图；
图3是实施例中雪绒花愈伤组织外泌体在扫描电镜下的观察图；
图4是实施例中滨海剌芹愈伤组织外泌体在透射电镜下的观察图；
图5是实施例中滨海剌芹愈伤组织外泌体在透射电镜下的观察图；
图6是实施例中海茴香愈伤组织外泌体在扫描电镜下的观察图；
图7是实施例中海茴香愈伤组织外泌体在扫描电镜下的观察图；
图8是实施例中不同浓度的雪绒花愈伤组织外泌体产物(PPCEP)对成纤维细胞促进迁效果对比曲线图；
图9是实施例中不同浓度的雪绒花愈伤组织外泌体产物(PPCEP)对角质细胞促进迁移效果对比曲线图；
图10是实施例中不同浓度的雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)对成纤维细胞促进迁效果对比曲线图；
图11是实施例中不同浓度的雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)对角质细胞促进迁移效果对比曲线图；
具体实施例
下面结合实施例对本发明进一步说明。
实施例一：将雪绒花愈伤组织以1:1体积比加入hank’s液中，匀浆，以2500目网筛过滤，取滤液，以500g离心10分钟，取上层清液A；再以4000g离心30分钟，取上层清液B；将上层清液B以120000g离心力离心90分钟，倾倒上层清液C至一新容器内，该淡黄色上层清液C即为雪绒花愈伤组织功效滤液，具体见图1中编号为2的视图；倾倒后管壁附着的淡黄色胶装透明沉淀即为雪绒花愈伤组织外泌体沉淀，加入2mL的生理盐水，重新溶解该纯化外泌体，转入西林瓶中，液氮中急冻，转入冻干机干燥24小时，并真空包装，所得淡黄色干燥粉末即为雪绒花愈伤组织外泌体，具体见图1中编号为1的视图。
实施例二：将滨海剌芹愈伤组织以1:1体积比加入hank’s液中，匀浆，以2500目网筛过滤，取滤液，以500g离心10分钟，取上层清液A；再以4000g离心30分钟，取上层清液B；将上层清液B以120000g离心力离心90分钟，倾倒上层清液C至一新容器内，该淡黄色上层清液C即为滨海剌芹愈伤组织功效滤液，具体见图1中编号4的视图；倾倒后管壁附着的淡黄色胶装透明沉淀即为滨海剌芹愈伤组织纯化外泌体沉淀，加入2mL的生理盐水，重新溶解该纯化外泌体，转入西林瓶中，液氮中急冻，转入冻干机干燥24小时，并真空包装，所得淡黄色干燥粉末即滨海剌芹愈伤组织纯化外泌体，具体见图1中编号3的视图。
实施例三：将海茴香愈伤组织以1:1体积比加入hank’s液中，匀浆，以2500目网筛过滤，取滤液，以500g离心10分钟，取上层清液A；再以4000g离心30分钟，取上层清液B；将上层清液B以120000g离心力离心90分钟，倾倒上层清液C至一新容器内，该淡黄色上层清液C即为海茴香愈伤组织功效滤液，具体见图1中编号6的视图；倾倒后管壁附着的淡黄色胶装透明沉淀即为海茴香愈伤组织纯化外泌体沉淀，加入2mL的生理盐水，重新溶解该纯化外泌体，转入西林瓶中，液氮中急冻，转入冻干机干燥24小时，并真空包装，所得淡黄色干燥粉末即海茴香愈伤组织外泌体，具体见图1中编号5的视图。
本申请的发明人利用透射电镜及扫描电镜观察实施例一中所制备的雪绒花愈伤组织外泌体(详见图2和图3)、实施例二中制备的滨海剌芹愈伤组织纯化外泌体(详见图4和图5)、实施例三中制备的海茴香愈伤组织外泌体(详见图6和图7)，通过附图可见所制备外泌体结构完整，尺寸在80-200nm之间。
本申请的发明人还针对实例一中不同浓度的雪绒花愈伤组织外泌体(PPCEP)和雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)对成纤维细胞和角质细胞均有较好的促进迁移效果进行了对比试验研究，具体如下：
试验一：利用实施例一中制备的雪绒花愈伤组织外泌体(PPCEP)对皮肤细胞进行体外划痕实验。用空白DMEM培养基配置5％，10％，20％的PPCEP溶液，添加入铺满细胞的6孔板中，利用1ml枪头在地面制作划痕，随后利用不同浓度的PPCEP对体外成纤维细胞和角质细胞进行干预，并与空白DMEM培养基和含有10％牛血清的DMEM培养基对比，观察在不同时间点下成纤维细胞和角质细胞的迁移速率。其试验结果如图8(不同浓度的PPCEP对成纤维细胞的促进迁移效果)和图9(不同浓度的PPCEP对角质细胞均的促进迁移效果)，通过对比结果可以看出，不同浓度的PPCEP对成纤维细胞和角质细胞均有较好的促进迁移效果，这说明了PPCEP有助于皮肤创面愈合，提高皮肤细胞活性。其中10％浓度的PPCEP对成纤维细胞和角质细胞的促进迁移能力最强。
试验二：利用实施例一中制备的雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)对皮肤细胞进行体外划痕实验。用空白DMEM培养基配置20％，50％，100％的PPCEP溶液，添加入铺满细胞的6孔板中，利用1ml枪头在地面制作划痕，随后利用不同浓度的PPCaF对体外成纤维细胞和角质细胞进行干预，并与空白DMEM培养基和含有10％牛血清的DMEM培养基对比，观察在不同时间点下成纤维细胞和角质细胞的迁移速率。其试验结果如图10(不同浓度的PPCaF对成纤维细胞的促进迁移效果)和图11(不同浓度的PPCaF对角质细胞均的促进迁移效果)，可见不同浓度的PPCaF对成纤维细胞和角质细胞均有较好的促进迁移效果，虽然PPCaF对于皮肤细胞的促进迁移能力弱于阳性对照小牛血清，但对比空白对照，依旧呈现出了显著性的促进作用，这说明了PPCaF有助于皮肤创面愈合，提高皮肤细胞活性。
本申请的发明人还针对本申请中制备的愈伤组织外泌体和愈伤组织功效滤液的应用进行试验研究，其具体如下：
实施例四：采用实施例一种制备的雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)用于制备护肤保湿喷雾，具体是取实施例一制备的PPCaf 50mL，加入45mL生理盐水及5mL甘油调节皮肤触感，混合均匀后装入喷雾瓶中，以氮气加压,即可制备雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)护肤保湿喷雾。
针对实施例四中制备的雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)护肤保湿喷雾的进行试用研究结果如下：
1.受试者1号使用雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)护肤保湿喷雾前，肌肤水分为23.5％，使用后即刻为66.4％，6小时后为33.1％，差值分别为42.9％，9.6％，补水效果显著，保湿效果较好。
2.受试者2号使用雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)护肤保湿喷雾前，肌肤水分为26.4％％，使用后即刻为56.2％，6小时后为28.2％，差值分别为32.4％，6％，补水效果较好，保湿效果较好。
3.受试者2号使用雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)护肤保湿喷雾前，肌肤水分为22.9％％，使用后即刻为64.3％，6小时后为36.1％，差值分别为41.4％，13.2％，补水效果显著，保湿效果良好。
上述试验结果显示，本发明中的雪绒花愈伤组织功效滤液(PPCaF)用于制备护肤保湿喷雾其保湿补水效果比较好。
实施例五：将实施例一中制备的雪绒花愈伤组织外泌体(PPCEP)用于之别护肤保湿霜，其配方中各物质的重量份如下：按100份重量份计，取PPCEP0.05份，棕榈酸异丙脂1份、季戊四醇双硬脂酸脂1份、鲸蜡硬脂醇5份、异构十六烷5份、烷基多糖苷8份、磷脂5份、聚季铵盐-51 3份、玻尿酸1份、防腐剂0.2份、香精0.03份、蒸馏水余量；将上述原料乳化并搅拌均匀，可制备雪绒花愈伤组织纯化外泌体产物(PPCEP)护肤保湿霜。
并将实施例五中制备的含有雪绒花愈伤组织外泌体(PPCEP)的护肤保湿霜的进行试用研究，其具体如下：
1.受试者1号使用雪绒花愈伤组织纯化外泌体产物(PPCEP)护肤保湿霜前，肌肤水分为22.0％，使用后即刻为54.2％，6小时后为48.1％，差值分别为32.2％，26.1％，补水效果显著，保湿效果显著。
2.受试者2号使用雪绒花愈伤组织纯化外泌体产物(PPCEP)护肤保湿霜前，肌肤水分为24.1％％，使用后即刻为48.2％，6小时后为32.1％，差值分别为24.1％，8％，补水效果良好，保湿效果较好。
3.受试者3号使用雪绒花愈伤组织纯化外泌体产物(PPCEP)护肤保湿霜前，肌肤水分为29.2％％，使用后即刻为44.3％，6小时后为41.4％，差值分别为，15.1％，12.2％，补水效果良好，保湿效果良好。
通过上述试验证明，本发明中制备的雪绒花愈伤组织外泌体(PPCEP)应用于护肤霜中，其补水和保湿效果均比较好。

Claims (10)

1.一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)将植物愈伤组织以1:1～1:5体积比加入hank’s液中，匀浆，并以300～2500目网筛过滤，取滤液，并以300～500g离心10～30分钟，取上层清液A；所述植物愈伤组织为雪绒花愈伤组织或滨海剌芹愈伤组织或海茴香愈伤组织；
(2)将上清液A再以2000～4000g离心10～30分钟，取上层清液B；
(3)将上层清液B以100000～120000g离心力离心90～110分钟，分离出上层清液C，该上层清液C即为植物愈伤组织功效滤液；
(4)收集步骤(3)中分离出上层清液C之后的留在容器中的淡绿色或淡黄色胶装透明沉淀，加入PBS缓冲液或生理盐水将其溶解，并转入-80度冰箱或液氮中急冻10～20min，然后转入冻干机干燥24小时，并真空包装，所得淡黄色或淡绿色或白色干燥粉末即为植物愈伤组织外泌体。
2.根据权利要求1所述的一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法，其特征在于具体步骤如下：所述步骤(1)中的植物愈伤组织采用离体培养至胚芽状的愈伤组织；所述步骤(1)中的植物愈伤组织与hank’s液的体积比为1:1；所述步骤(1)中的匀浆液2500目网筛过滤，匀浆后的过滤液体以400g离心20分钟取上层清液A。
3.根据权利要求1所述的一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法，其特征在于具体步骤如下：所述步骤(2)中上层清液A以3000g离心20分钟；所述步骤(3)中上层清液B以11000离心力离心100分钟。
4.根据权利要求1所述的一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法，其特征在于具体步骤如下：所述步骤(4)中沉淀在离心管中直接加入生理盐水溶解，其生理盐水加入离心管容积的1/20～1/10，然后转入西林瓶中置于-80度冰箱或液氮中急冻10～20min，然后转入冻干机-40℃～-80℃，压强＜100pa条件下干燥24小时。
5.一种按照权利要求1至3中任意一项中的提取方法制备的植物愈伤组织功效滤液的应用，其特征在于：将上述植物愈伤组织功效滤液单独作为皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品应用，或添加到皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品中应用。
6.根据权利要求5所述的一种植物愈伤组织功效滤液的应用，其特征在于：所述植物愈伤组织功效滤液单独作为皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品应用时，其植物愈伤组织功效滤液的稀释浓度为40～60％，通过无针高压喷射装置促进皮肤吸收。
7.根据权利要求5所述的一种植物愈伤组织功效滤液的应用，其特征在于：将上述植物愈伤组织功效滤液加入生理盐水和甘油混合均匀制备成保湿喷雾，其中植物愈伤组织功效滤液、生理盐水、甘油的混合体积比为8～12:7～10:0.8～1.2。
8.一种按照权利要求1至4任意一项中的提取方法制备的植物愈伤组织外泌体的应用，其特征在于：将上述植物愈伤组织外泌体单独作为皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品应用，或添加到皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品中应用。
9.根据权利要求8所述的一种植物愈伤组织外泌体的应用，其特征在于：所述植物愈伤组织外泌体单独作为皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老的药品或护肤品应用时，其植物愈伤组织外泌体的稀释浓度为8～12％，并通过无针高压喷射装置促进皮肤吸收。
10.根据权利要求8所述的一种植物愈伤组织外泌体的应用，其特征在于将上述植物愈伤组织外泌体按照以下配方乳化并搅拌均匀制备成护肤保湿霜，所述配方中各种物质的重量份数如下，按质量百分比计：植物愈伤组织外泌0.05-2.0份，棕榈酸异丙脂1-5份、季戊四醇双硬脂酸脂1-5份、鲸蜡硬脂醇1-5份、异构十六烷1-5份、烷基多糖苷2-8份、磷脂2-5份、聚季铵盐1-3份、玻尿酸1-3份、防腐剂0.01-0.2份、香精0-0.03份、蒸馏水余量。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113975203A (zh) * 2021-09-01 2022-01-28 福建省丰盛佳园农林科技集团有限公司 一种添加有油茶花提取液的乳液及其制备工艺
CN114392215A (zh) * 2021-12-29 2022-04-26 珠海金肽生物科技有限公司 一种含植物愈伤组织提取物的组合物及其应用
CN115813845A (zh) * 2022-09-28 2023-03-21 广州丝芬化妆品有限公司 一种植物细胞与外泌体的组合物的应用
CN116115659A (zh) * 2022-11-25 2023-05-16 安赛搏(重庆)生物技术有限公司 一种滨海刺芹愈伤组织提取物的提取方法和应用
CN116850114A (zh) * 2023-08-21 2023-10-10 广州航美化妆品有限公司 一种舒缓修复组合物及舒缓修复乳及其制备方法
CN117180164A (zh) * 2023-11-08 2023-12-08 北京尧景基因技术有限公司 天山雪莲紫色愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或美白皮肤产品中的应用
CN117205130A (zh) * 2023-11-08 2023-12-12 北京尧景基因技术有限公司 滨海刺芹愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001087256A1 (de) * 2000-05-16 2001-11-22 Pentapharm Ag Kosmetisch wirksame zusammensetzung
CN102973432A (zh) * 2012-11-26 2013-03-20 青岛文创科技有限公司 一种保湿霜
CN106924316A (zh) * 2015-12-30 2017-07-07 生物Fd&C株式会社 含高山火绒草植物细胞培养提取物的皮肤外用剂组合物及其制造方法
CN109568414A (zh) * 2018-12-18 2019-04-05 王 从玫瑰花中提取玫瑰花精华液和外泌体的方法及应用
CN110496095A (zh) * 2019-07-15 2019-11-26 上海新高姿化妆品有限公司 具有协同抗氧化功效的组合物及其在化妆品中的应用
US20200069565A1 (en) * 2018-08-10 2020-03-05 Societe De Recherche Cosmetique S.A.R.L. Cosmetic composition comprising a passionflower extract and edelweiss cells, and uses
KR20200026646A (ko) * 2018-08-30 2020-03-11 주식회사 바이오에프디엔씨 피부 생기 부여 및 활력 증대를 위한 식물세포 컴플렉스 배양물 또는 그 추출물을 함유하는 피부개선용 화장료 조성물
CN111228210A (zh) * 2020-04-02 2020-06-05 广州一一生物技术有限公司 一种修复皮肤屏障的组合物及其制备方法和应用
WO2020161683A1 (en) * 2019-02-08 2020-08-13 Lubrizol Advanced Materials, Inc. Compounds useful for the treatment and/or care of the skin, hair, nails and/or mucous membranes
CN111632075A (zh) * 2020-05-27 2020-09-08 广州赛琅生物技术有限公司 一种促进皮肤创面愈合的外泌体制剂及其制备方法
KR20210004672A (ko) * 2019-07-05 2021-01-13 바이오스펙트럼 주식회사 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001087256A1 (de) * 2000-05-16 2001-11-22 Pentapharm Ag Kosmetisch wirksame zusammensetzung
CN102973432A (zh) * 2012-11-26 2013-03-20 青岛文创科技有限公司 一种保湿霜
CN106924316A (zh) * 2015-12-30 2017-07-07 生物Fd&C株式会社 含高山火绒草植物细胞培养提取物的皮肤外用剂组合物及其制造方法
US20200069565A1 (en) * 2018-08-10 2020-03-05 Societe De Recherche Cosmetique S.A.R.L. Cosmetic composition comprising a passionflower extract and edelweiss cells, and uses
KR20200026646A (ko) * 2018-08-30 2020-03-11 주식회사 바이오에프디엔씨 피부 생기 부여 및 활력 증대를 위한 식물세포 컴플렉스 배양물 또는 그 추출물을 함유하는 피부개선용 화장료 조성물
CN109568414A (zh) * 2018-12-18 2019-04-05 王 从玫瑰花中提取玫瑰花精华液和外泌体的方法及应用
WO2020161683A1 (en) * 2019-02-08 2020-08-13 Lubrizol Advanced Materials, Inc. Compounds useful for the treatment and/or care of the skin, hair, nails and/or mucous membranes
KR20210004672A (ko) * 2019-07-05 2021-01-13 바이오스펙트럼 주식회사 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법
CN110496095A (zh) * 2019-07-15 2019-11-26 上海新高姿化妆品有限公司 具有协同抗氧化功效的组合物及其在化妆品中的应用
CN111228210A (zh) * 2020-04-02 2020-06-05 广州一一生物技术有限公司 一种修复皮肤屏障的组合物及其制备方法和应用
CN111632075A (zh) * 2020-05-27 2020-09-08 广州赛琅生物技术有限公司 一种促进皮肤创面愈合的外泌体制剂及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WON KYONG CHO等: "Anti-Aging E ects of Leontopodium alpinum (Edelweiss) Callus Culture Extract through Transcriptome Profilin", 《GENES》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113975203A (zh) * 2021-09-01 2022-01-28 福建省丰盛佳园农林科技集团有限公司 一种添加有油茶花提取液的乳液及其制备工艺
CN114392215A (zh) * 2021-12-29 2022-04-26 珠海金肽生物科技有限公司 一种含植物愈伤组织提取物的组合物及其应用
CN115813845A (zh) * 2022-09-28 2023-03-21 广州丝芬化妆品有限公司 一种植物细胞与外泌体的组合物的应用
CN116115659A (zh) * 2022-11-25 2023-05-16 安赛搏(重庆)生物技术有限公司 一种滨海刺芹愈伤组织提取物的提取方法和应用
CN116850114A (zh) * 2023-08-21 2023-10-10 广州航美化妆品有限公司 一种舒缓修复组合物及舒缓修复乳及其制备方法
CN116850114B (zh) * 2023-08-21 2024-02-20 广州航美化妆品有限公司 一种舒缓修复组合物及舒缓修复乳
CN117180164A (zh) * 2023-11-08 2023-12-08 北京尧景基因技术有限公司 天山雪莲紫色愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或美白皮肤产品中的应用
CN117205130A (zh) * 2023-11-08 2023-12-12 北京尧景基因技术有限公司 滨海刺芹愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用
CN117180164B (zh) * 2023-11-08 2024-01-30 北京尧景基因技术有限公司 天山雪莲紫色愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或美白皮肤产品中的应用
CN117205130B (zh) * 2023-11-08 2024-02-02 北京尧景基因技术有限公司 滨海刺芹愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用

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