CN112843124A - 一种丹参配方颗粒的制备方法及其质量标准 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种丹参配方颗粒的制备方法及其质量标准，该配方以丹参饮片为原料，经水提、干燥等流程制得丹参配方颗粒，并通过试验确定了丹参配方颗粒的薄层鉴别方法、指纹图谱及含量指标，制定了丹参配方颗粒的质量标准，为保证丹参配方颗粒质量达到稳定、可控、高效及安全提供数据支撑。

Description

一种丹参配方颗粒的制备方法及其质量标准
技术领域
本发明涉及一种中药配方颗粒制备方法和质量标准，特别涉及一种丹参配方颗粒制备方法和质量标准。
背景技术
丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎，主产于陕西、安徽、山西、河北、内蒙古等地，具有活血通、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦等功效，常用作于治疗心绞痛、冠心病及胸腹刺痛、经闭痛经等病症，入药历史悠久。丹参的主要化学成分可分为两类，一是脂溶性的丹参酮类化合物，主要有酮II A、丹参酮I和隐丹参酮等；二是水溶性的丹酚酸类成分，主要有丹酚酸B、原儿茶醛、丹参素等。丹参酮IIA具有抗肿瘤、抗氧化、抗凝血及抗血栓等作用，是治疗冠心病的主要有效成分之一；丹酚酸B、丹参素具有抗心肌缺血、缺氧等活性，临床用途十分广泛。
中药配方颗粒是以传统中药为原料，经提取、浓缩、制粒等工艺，制成的一种统一规格、统一剂量、统一标准的新型配方用药，是由单味中药饮片制成的、供中医临床配方用的颗粒。相比于传统中药，中药配方颗粒制剂具有服用方便、易于携带，质量规格统一，便于保管、存放，临床使用组合方便快捷，灵活多变等优势。然而目前中药配方颗粒质量标准尚不完善，无统一的国家标准。
本发明的目的在于提供一种丹参配方颗粒制备方法及其质量标准，通过确定质量标准及其检验方法，为丹参配方颗粒产业化生产提供一定的数据支撑。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种丹参配方颗粒制备方法及其质量标准，本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
具体制备工艺为，取丹参饮片2000g，加水煎煮两次，滤过，滤液减压浓缩，干燥，加辅料适量，混匀，制成1000g颗粒，分装，即得。
所说的质量标准是：
1、性状：本品为棕黄色至黄棕色的颗粒；气微，味微苦、涩。
2、鉴别：
取本品，研细，取粉末0.3g，加50％乙醇5ml，超声处理30分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。另取丹参对照药材1g，加水25ml，加热回流60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加50％乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。再取丹酚酸B对照品，加50％乙醇制成1ml 含1mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇 -甲酸(6∶4∶8∶1∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇试液，在 105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3、检查
符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2015年版四部通则0104。
4、浸出物
取本品，研细，取约2g，精密称定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2015年版四部通则2201)项下的热浸法测定，不得少于30.0％。
5、指纹图谱
照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与***适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为 4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为286nm；柱温为30℃。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。
Figure RE-GSB0000186436410000021
指纹对照品溶液的制备 取丹参对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加水20ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放置至室温，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
供试品溶液的制备 取本品研细，取粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率45kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
测定法 分别精密吸取指纹对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
按中药色谱指纹图谱相似度评价***，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，5 分钟后的色谱峰，相似度不得低于0.90。
6、含量测定
照高效液相色谱仪法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与***适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液 (22∶78)为流动相；流速为每分钟1.2ml；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇-水(8∶2)混合溶液制成每1ml含0.10mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品，研细，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-水(8∶2)混合溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率150W，频率45kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇-水(8∶2)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇-水(8∶2)混合溶液至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，每1g含丹酚酸B(C36H30O16)不得少于20.0mg。
8、性味与归经
苦，微寒。归心、肝经。
9、规格
1g配方颗粒相当于饮片3.0g。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明明确了丹参配方颗粒制备工艺，制定了丹参薄层色谱鉴别、含量测定指标等质量标准，能够有效控制丹参配方颗粒的质量。
具体实施方式
下面详细叙述本发明的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
试验例1
丹参配方颗粒薄层鉴别研究
参照《中国药典》2015年版一部丹参[鉴别]项下方法及文献资料报道中丹参鉴别方法，由于丹参酮不易溶于水，丹参配方颗粒制剂中，丹参酮含量过低，控制丹参酮含量不能有效反映丹参配方颗粒的质量，丹参总酚酸水溶性较好，拟采用薄层色谱法：以丹酚酸B对照品、丹参对照药材为对照，对三批样品进行鉴别，结果薄层色谱斑点清晰，方法可行，拟列入正文作为本品的鉴别方法。具体说明如下：：
1、试剂与药材
丹参对照药材：批号为120923-201615，购于中国食品药品检定研究院；
丹酚酸B对照品：批号为111562-201716，购于中国食品药品检定研究院；
供试品：批号171800901、171800902、171800903
薄层板：硅胶G板。
试剂均为分析纯。
2、溶液制备
(1)供试品溶液的制备：取本品，研细，取粉末0.3g，加50％乙醇5ml，超声处理30分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液的制备：取丹参对照药材1g，加水25ml，加热回流60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加50％乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
(3)对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品，加乙醇制成1ml含1mg溶液，作为对照品溶液。
3、色谱条件
薄层板：硅胶G薄层板。
点样量：各5μl。
展开剂：三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶4∶8∶1∶4)。
显色及检视：喷以5％香草醛硫酸乙醇试液，在105℃加热至斑点显色清晰。目光下检视。
结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4、鉴别方法的优化
4.1对照药材溶液制备方案考察
由于丹参配方颗粒采用水提取，为了使对照药材与供试品提取方法对应，因此，本研究对对照药材分别采用不同提取方法进行比较，具体如下：
方法1：取丹参对照药材1g，加水25ml，加热回流60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml，超声处理15分钟，离心，上清液浓缩至1ml，过滤，即得。
方法2：取丹参对照药材1g，加水25ml，加热回流60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加50％乙醇1ml使溶解。
方法3：取丹参对照药材1g，加乙醇5ml，超声处理15分钟，离心，上清液浓缩至1ml，过滤，即得.
吸取上述3种方法制备的对照药材以及丹酚酸B对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶4∶8∶1∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇试液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果表明，方法2 色谱主斑点最清晰，且与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。选定此提取方式作为对照药材溶液制备方法，确定鉴别方法如正文。
试验例2
丹参配方颗粒指纹图谱检测
参考《中国药典》2015年版一部丹参总酚酸提取物[指纹图谱]项下方法制定。
1、仪器与材料
日本Shimadzu LC-20A高效液相色谱仪***；美国Agilent 1260 Infinity II高效液相色谱仪***；XS-205DU电子天平(1/10万，瑞士梅特勒公司)；双频数显恒温超声波清洗仪 (KQ-500GVDV)；电热恒温水浴锅(DK-98-II)；色谱柱：Shimadzu-GL InertSustainC18，粒径为5μm，内径为4.6mm，长度为250mm；Thermo SCIENTIFIC C18，粒径为5μm，内径为4.6mm，长度为250mm；
丹参对照药材：批号为120923-201615，购于中国食品药品检定研究院；
原儿茶醛对照品：批号为110810-201608，购于中国食品药品检定研究院；
迷迭香酸对照品：批号为111871-201706，购于中国食品药品检定研究院；
左旋紫草素对照品：批号为110769-200506，购于中国食品药品检定研究院；
丹酚酸B对照品：批号为111562-201716，购于中国食品药品检定研究院；
乙腈为色谱纯(Fisher Chemicals)；水为娃哈哈纯净水；其余试剂为分析纯。
2、色谱条件与***适用性
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为286nm；柱温为30℃。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。
Figure RE-GSB0000186436410000051
3、溶液的制备
(1)指纹对照品溶液的制备
丹参配方颗粒是由丹参饮片经水提浓缩干燥得来，丹参对照药材经过水提的参照物溶液最能反应丹参配方颗粒中成分组成，具有代表性。且丹参对照药材易获得，选取作为丹参指纹图谱的参照物，以水回流即得。
(2)供试品溶液的制备
为使所含成分在指纹图谱中尽量体现，根据丹参配方颗粒由水提取且溶于水的性质，选用水作为溶剂，超声提取。
4、仪器设备的选择
使用同一色谱柱，在柱温、流动相、检测波长相同的情况下，分别在日本ShimadzuLC-20A 高效液相色谱仪***和美国Agilent 1260高效液相色谱仪***上实验。结果表明，两种型号仪器均能获得较好的分析效果，但前者峰形及分离度更好，选用日本ShimadzuLC-20A高效液相色谱仪***。
5、色谱柱的选择
分别选用Shimadzu-GL InertSustain C18，粒径为5μm，内径为4.6mm，长度为250mm 和Thermo SCIENTIFIC C18，粒径为5μm，内径为4.6mm，长度为250mm色谱柱，用相同流动相对同一参照物溶液进行分离测定，结果Thermo SCIENTIFIC C18，粒径为5μm，内径为4.6mm，长度为250mm色谱柱分离效果最好。
6、检测波长的选择
选择紫外检测器获取HPLC指纹图谱。用DAD采集色谱-光谱数据，并比较不同波长的色谱图，参考参照《中国药典》2015年版一部丹参总酚酸提取物指纹图谱项下波长，选择波长为286nm
7、指纹图谱的建立
7.1.共有模式的建立
取三个产地，每个产地三批丹参药材及对照药材共10份药材，按指纹对照品溶液的制备方法制备成药材溶液1-10。按指纹图谱色谱条件，注入液相色谱仪。记录色谱图。取上述10 批样品建立共有模式，将10批样品色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价***研究版” (2004A版)，以对照药材指纹图谱为参照图谱，选取“时间窗宽度”为0.1min，对照图谱的生产方法为“中位数”，自动匹配并建立指纹图谱共有模式。
7.2对照指纹图谱的建立
采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价***2004A版”***评价软件分析检验模式，以指纹图谱共有模式为对照，计算各批次样品的相似度，结果见表13。相似度可以体现不同产地批次样品间各成分在种类及其相对量上的整体相似程度。分析结果表明，各药材相似度值均大于0.9。其中对照药材指纹图谱相似度最高，为0.979。考虑对照指纹图谱的稳定性和便宜性，采用对照药材指纹图谱作为对照指纹图谱。
7.3.共有特征峰的选取及识别
在10批丹参药材指纹图谱中出峰时间基本一致、峰面积较大8个峰为共有特征色谱峰，特征峰的选取原则是：主要的特征峰与相邻峰分离度达到1.5以上，其他特征峰也达到一定分离，峰尖到峰谷的距离至少大于该峰高的三分之二以上，如果未达到，则可以合并为一个峰计算。按丹参指纹图谱条件，将原儿茶醛、迷迭香酸、紫草素和丹酚酸B对照品混合溶液进样分析，并与对照指纹图谱中相应色谱峰进行比较，确定原儿茶醛、迷迭香酸、紫草素和丹酚酸B在对照指纹图谱中的峰位置。
8.指纹图谱标准的方法验证
8.1.精密度考察
取同一份指纹对照品溶液，照指纹图谱色谱条件，连续进样6次，将6次色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价***2004A版”***评价软件，计算相似度，结果均大于0.99，说明仪器精密度良好。
8.2.重复性考察
取同一份样品，制备6份样品溶液，分别照指纹图谱色谱条件注入液相色谱仪，将6次色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价***2004A版”***评价软件，计算相似度，结果均大于0.98。说明方法重复性良好。
8.3.稳定性考察
取指纹对照品溶液，照指纹图谱色谱条件，分别于配制后0、4、8、12、24h进行测定，将色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价***2004A版”***评价软件，计算相似度，结果均大于0.99。说明溶液稳定性良好。
8.4.耐用性考察
取同一批样品及对照药材，分别用Agilent1260 Infinity II高效液相色谱仪和SHIMADZU LC-20A高效液相色谱仪按上述选定的色谱条件对样品进行6次分离测定，结果分离度均能达到要求，两台设备所得指纹图谱，分别导入“中药色谱指纹图谱相似度评价***2004A版”***评价软件，计算与对照图谱相似度。结果均大于0.99。说明溶液稳定性良好。12个相似度的RSD％不大于1％，本色谱条件具有广泛的耐用性。
9、相似度限度研究
取10批丹参配方颗粒，按供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液1-10。另取丹参对照药材，按指纹对照品溶液制备方法制备指纹对照品溶液，取供试品溶液及指纹对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。按中药色谱指纹图谱相似度评价***计算供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度(见表1)。结果表明，丹参配方颗粒指纹图谱与对照指纹图谱相似度均大于0.88。为保证丹参配方颗粒质量，拟定丹参配方颗粒指纹图谱相似度不得小于0.9，列入正文。
表1 丹参配方颗粒指纹图谱相似度
Figure RE-GSB0000186436410000081
试验例3
丹参配方颗粒含量测定
1、指标成分的选择
丹参总酚酸和丹参酮为丹参主要成分，由于丹参酮不易溶于水，丹参配方颗粒制剂中，丹参酮含量过低，控制丹参酮含量不能有效反映丹参配方颗粒的质量，丹参总酚酸水溶性较好，拟定其为丹参配方颗粒含量测定指标，采用高效液相色谱仪法以丹酚酸B为指标进行含量测定，并列入正文。
2、仪器与试药
日本ShimadzuLC-20A高效液相色谱仪***，包括SIL-20AC自动进样器，DGU-20A脱气单元，LC-20AT溶液输送单元，CTO-20A柱温箱，SPD-20A紫外检测器，LabSolutions LCWorkstation Ver.5 Multi LC-PDA(中文版)数据工作站，CBM-20A网络化***控制器，XS -205DU电子天平(1/10万，瑞士梅特勒公司)，紫外可见分光光度计(UV-2600)，双频数显恒温超声波清洗仪(KQ-500GVDV)，电热恒温水浴锅(DK-98-II)，电子天平(TP-A500，福州华志科学仪器有限公司)，MZ-204型电子天平(1/万，瑞士梅特勒公司)，电热恒温干燥箱(WGLL-125BZ)。
丹酚酸B对照品：批号为111562-201716，购于中国食品药品检定研究院；
乙腈为色谱纯(Fisher Chemicals)，水为娃哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。
3、检测波长的选择
取丹酚酸B对照品适量，加甲醇-水(8∶2)混合溶液溶解，紫外可见分光光度计(UV-2600) 进行光谱扫描(190nm～400nm)，由光谱图可见，丹酚酸B对照品在288nm波长处有最大吸收。结合文献资料及中国药典药材标准，选择286nm作为检测波长。
4、色谱条件
参考《中国药典》2015年版一部丹参[含量测定]项下丹酚酸B含量测定方法，色谱条件为：乙腈-0.1％磷酸溶液(22∶78)为流动相，流速：1.2ml/min，以C18柱(4.6×250nm，5μm) 为分析柱。
5、对照品溶液的制备
取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇-水(8∶2)混合溶液制成每1ml含0.10mg的溶液，即得。
6、供试品溶液的制备
取本品适量，研细，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-水(8∶2) 混合溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率150W，频率45kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇-水(8∶2)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇-水(8∶2)混合溶液至刻度，摇匀，即得。
7、阴性对照溶液的制备
取空白辅料0.3g，同供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。
8、***适用性
精密吸取对照品溶液10μl，按选定色谱条件注入液相色谱仪，连续测定6次，记录色谱图，结果见表2。
表2 ***适用性试验结果
Figure RE-GSB0000186436410000091
由表可见，对照品峰面积的RSD值为0.10％，保留时间的RSD值为0.42％，理论板数最低为10641，***适用性良好。
9、专属性
精密吸取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10μl，按选定色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表3。
表3 专属性试验结果
Figure RE-GSB0000186436410000101
由表可知，空白溶液及阴性样品溶液对丹酚酸B检测均没有干扰，供试品溶液色谱图中主峰与相邻峰之间的分离度大于1.5，专属性良好。
10、重复性试验
取样品，照供试品溶液及对照品溶液制备方法制备样品，供试品溶液平行制备6份，照选定色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，外标法计算含量，结果见表4，含量平均值为 35.18mg/g，重复性良好。
表4 重复性试验结果
Figure RE-GSB0000186436410000102
11、准确度试验
取样品，以丹酚酸B的量计等比精密加入对照品溶液，分别制成含丹酚酸B 50％、100％、 150％浓度的样品溶液共9份，照选定色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率，结果见表5。
表5 准确度试验结果
Figure RE-GSB0000186436410000103
Figure RE-GSB0000186436410000111
试验表明：各浓度下的回收率均在95％～105％之间，相对标准偏差RSD(％)不大于2.0％。
12、样品测定
照正文色谱条件，对三批丹参配方颗粒进行含量测定，结果见表6。
表6 丹参配方颗粒丹酚酸B含量测定结果
Figure RE-GSB0000186436410000112
根据测定结果，结合实际情况，拟定本品按干燥品计算，每1g含丹酚酸B(C36H30O16)不得少于20.0mg。
实验例1
一种丹参配方颗粒制备方法包括以下步骤：
具体制备工艺为，取丹参饮片2000g，加水煎煮两次，滤过，滤液减压浓缩，干燥，加辅料适量，混匀，制成1000g颗粒，分装，即得。
一种丹参配方颗粒的质量标准是：
所说的质量标准是：
1、性状：本品为棕黄色至黄棕色的颗粒；气微，味微苦、涩。
2、鉴别：
取本品，研细，取粉末0.3g，加50％乙醇5ml，超声处理30分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。另取丹参对照药材1g，加水25ml，加热回流60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加50％乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。再取丹酚酸B对照品，加50％乙醇制成1ml 含1mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇 -甲酸(6∶4∶8∶1∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇试液，在 105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3、检查
符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2015年版四部通则0104。
4、浸出物
取本品，研细，取约2g，精密称定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2015年版四部通则2201)项下的热浸法测定为31.6％。
5、指纹图谱
照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与***适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为 4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为286nm；柱温为30℃。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。
Figure RE-GSB0000186436410000121
指纹对照品溶液的制备 取丹参对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加水20ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放置至室温，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
供试品溶液的制备 取本品研细，取粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率45kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
测定法 分别精密吸取指纹对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
按中药色谱指纹图谱相似度评价***，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，5 分钟后的色谱峰，相似度0.94。
6、含量测定
照高效液相色谱仪法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与***适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液 (22∶78)为流动相；流速为每分钟1.2ml；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇-水(8∶2)混合溶液制成每1ml含0.10mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品，研细，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-水(8∶2)混合溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率150W，频率45kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇-水(8∶2)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇-水(8∶2)混合溶液至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，每1g含丹酚酸B(C36H30O16)不得少于22.6mg。
8、规格
1g配方颗粒相当于饮片3.0g。

Claims (1)

1.一种丹参配方颗粒制备方法及其质量标准，其制备方法包括以下过程：取丹参饮片2000g，加水煎煮两次，滤过，滤液减压浓缩，干燥，加辅料适量，混匀，制成1000g颗粒，分装，即得，每1g配方颗粒相当于饮片3.0g；
该配方颗粒的质量标准包括性状指标、薄层色谱鉴别指标、检查、浸出物指标、指纹图谱及含量测定，所述各项指标如下：
(1)性状：本品为棕黄色至黄棕色的颗粒；气微，味微苦、涩；
(2)鉴别：
取本品，研细，取粉末0.3g，加50％乙醇5ml，超声处理30分钟，离心，取上清液作为供试品溶液；另取丹参对照药材1g，加水25ml，加热回流60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加50％乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；再取丹酚酸B对照品，加50％乙醇制成1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶4∶8∶1∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)检查
符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2015年版四部通则0104；
(4)浸出物
取本品，研细，取约2g，精密称定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2015年版四部通则2201)项下的热浸法测定，不得少于30.0％；
(5)指纹图谱
照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定；
色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为286nm；柱温为30℃，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000；
Figure FSA0000196709830000011
指纹对照品溶液的制备取丹参对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加水20ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放置至室温，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，取粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率45kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；
测定法分别精密吸取指纹对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
按中药色谱指纹图谱相似度评价***，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，5分钟后的色谱峰，相似度不得低于0.90；
(6)含量测定
照高效液相色谱仪法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定；
色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液(22∶78)为流动相；流速为每分钟1.2ml；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。
对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇-水(8∶2)混合溶液制成每1ml含0.10mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品，研细，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-水(8∶2)混合溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率150W，频率45kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇-水(8∶2)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇-水(8∶2)混合溶液至刻度，摇匀，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，每1g含丹酚酸B(C36H30O16)不得少于20.0mg。
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