CN112825993B - 一种提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法。首先取产朊假丝酵母和扣囊复膜孢酵母两种菌种，分别用接种环各取少量菌用100μL无菌水稀释，然后分别涂布于YM固体培养基上进行培养，培养后分别取所得单菌落各转接到YM液体培养基中进行菌种制备，得到活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌；将得到的两种活化酵母菌依次接种于制备好的刺梨汁中进行摇床培养，培养后完成发酵，测定刺梨多糖含量，离心过滤，收集上清液，得到刺梨果饮。本发明利用优良的酵母菌种提高多糖活性，从而增强抗氧化能力，并改善了刺梨饮品的口感。
Description
一、技术领域：
本发明属于食品发酵技术领域，尤其是涉及一种提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法。
二、背景技术：
刺梨(Rosa roxbunghii)为蔷薇科多年生落叶灌木缫丝花的果实，又名刺莓果、木梨子，别名刺菠萝，是滋补健身的食药两用营养珍果。生于海拔500～2500 米的向阳山坡、沟谷、路旁以及灌木丛中，是贵州、鄂西山区、湘西、凉山、冕宁山区等地的天然野果。刺梨是一种天然的药食两用植物，刺梨鲜果中含有丰富的维生素、多糖、有机酸、酚类、氨基酸和微量元素等营养成分。研究表明，刺梨中活性物质含量都显著高于这些常见水果蔬菜，其体外抗氧化能力，是常见水果蔬菜的10～60倍。
随着生活节奏的增加，环境的变化以及年龄的增长，机体在活动和代谢过程中会产生较多的氧自由基，但对于健康机体而言其维持着一定的平衡关系，当其平衡被打破后则有着较强的破坏性，对机体的生物膜***造成损伤，导致慢性疾病的发生。因此，从天然资源中提取多糖等功效组分作为自由基清除剂，尤其从果蔬废弃资源中提取活性成分，不仅能够提高果蔬资源的综合利用，还为食品添加剂的研制及进一步推广应用提供依据。另外，刺梨果实中单宁和有机酸含量较高，生食酸涩，口感较差，因此比较适宜进行二次开发，开发研究具有抗氧化功效的刺梨发酵果饮是一种比较好的选择。
三、发明内容：
本发明要解决的技术问题是：基于刺梨果实是滋补健身的食药两用营养珍果，为了更好地食用，本发明提供一种提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法。本发明技术方案采用两种非酿酒酵母作为发酵菌种进行混合发酵，采用的两种酵母菌种为产朊假丝酵母(Candida utilis)菌株和扣囊复膜孢酵母 (Saccharomycopsis fibuligera)菌株，本发明利用优良的酵母菌种提高多糖活性，从而增强抗氧化能力，并改善了刺梨饮品的口感。
为了解决上述问题，本发明采取的技术方案是：
本发明提供一种提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)取4℃冰箱斜面试管保存的产朊假丝酵母和扣囊复膜孢酵母两种菌种，分别用接种环在两种菌斜面上的菌落表层轻点一下粘附上菌0.01～0.05g，各用 100μL无菌水进行稀释，稀释后采用涂布棒分别涂布于YM固体培养基上，然后分别在温度27～31℃下培养48～60h，培养后取所得单菌落分别转接到YM 液体培养基中进行菌种制备，得到活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌；
(2)选取成熟的刺梨果实，清洗干净，然后采用榨汁机榨汁破碎，在室温条件下浸渍过夜，然后在温度为121℃下灭菌15～20min后备用；
(3)将步骤(1)所得活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌依次接种于步骤(2)制备好的刺梨汁中，于温度为26～28℃下，180rpm摇床培养5～ 7d，培养后完成发酵，测定刺梨多糖含量，离心过滤，收集上清液，得到刺梨果饮。
根据上述的提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，步骤(1)中所述YM液体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉2.5～3g、蛋白胨4～5g、葡萄糖8～10g和麦芽提取物2.5～3g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌15～20 min，得到YM液体培养基，室温静置待用；
所述YM固体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉2.5～ 3g、蛋白胨4～5g、葡萄糖8～10g、麦芽提取物2.5～3g和琼脂粉18～20g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌15～20min，灭菌后倒入90mm培养皿中，室温静置凝固后得到YM固体培养基，室温静置待用。
根据上述的提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，步骤(1)中所述培养后取所得单菌落分别转接到YM液体培养基中进行菌种制备时，两种单菌落的用量均为0.01～0.05g、YM液体培养基的用量均为200mL。
根据上述的提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，步骤(1)中所述 YM液体菌培养基中进行菌种制备的培养条件为：温度为27～31℃、转速为 180～220rpm，培养24～30h至对数生长期，用分光光度计测定菌量浓度OD600为2.0～2.2。
根据上述的提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，步骤(3)中所述所得活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌依次接种于步骤(2)制备好的刺梨汁中时，两种酵母菌接种用量比例为1：1。
根据上述的提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，步骤(3)中所述所得活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌依次接种于步骤(2)制备好的刺梨汁中时，活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌的用量均为刺梨果汁体积的2～5％。
根据上述的提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，步骤(3)中所述离心过滤时，离心的转速为3000～5000rpm，时间为10～30min。
本发明的积极有益效果：
1、本发明通过两种非酿酒酵母进行混合发酵，其中，产朊假丝酵母发酵密度高，发酵中其蛋白质和维生素B的含量均比传统酿酒酵母高；扣囊复膜酵母具有较强的糖化能力和产蛋白酶能力，二者相结合，既能通过发酵提高刺梨多糖活性、从而增强抗氧化能力，也有助于改善刺梨果饮的口感特征。
2、本发明通过制备方法的改进，将与发酵密度高的产朊假丝酵母与扣囊复膜酵母进行了很好的结合，共培养时采用好氧发酵，产朊假丝酵母和扣囊复膜酵母利用原料中的单糖、双糖等小分子糖，将一些组分转化并产生活性代谢物质。
通过抗氧化实验检测得出：利用产朊假丝酵母与扣囊复膜酵母这两种酵母混合发酵后，刺梨汁的多糖在DPPH清除率上较之单一传统的酿酒酵母提高了1 倍以上，铁离子还原力上提高了3倍以上。从而达到提高刺梨多糖活性、增强抗氧化能力的目的。另外，通过发酵也降低刺梨汁本身的苦涩感，提升了口感。从而实现了刺梨功能性果饮的抗氧化能力提高和口感提升的发酵的作用。
3、本发明是一种混合发酵提高抗氧化功效的发酵制备方法。本发明制备方法简单易行，有效地提高了刺梨果饮抗氧化能力并改善口感，满足消费者对高品质的需求，同时也避免了市场上刺梨果饮的同质性恶性竞争。
4、本发明通过利用两种酵母进行混合发酵，从而有助于提高刺梨果饮的抗氧化功效。
四、具体实施方式：
以下结合实施例进一步阐述本发明，但并不限制本发明技术方案保护的范围。
实施例1：
一种提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，该制备方法的详细步骤如下(采用单酵母菌种进行发酵，其为产朊假丝酵母(candida utilis)菌株)：
(1)取4℃冰箱斜面试管保存的产朊假丝酵母菌种，用接种环在菌斜面上的菌落表层轻点一下粘附上菌0.05g，然后用100μL无菌水进行稀释，稀释后采用涂布棒涂布于加有YM固体培养基的90mm培养皿上，接着在温度28℃下培养48h，培养后取所得单菌落0.05g转接到200mL YM液体培养基中进行菌种制备，菌种制备条件为：温度为28℃、转速为180rpm，培养26h至对数生长期，用分光光度计测定菌量浓度OD600为2.0～2.2；得到活化的产朊假丝酵母菌；
所述YM液体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g和麦芽提取物3g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌20min，得到 YM液体培养基，室温静置待用；
所述YM固体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、麦芽提取物3g和琼脂粉20g，将称取的各种用料加入 2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌 20min，灭菌后倒入90mm培养皿中，室温静置凝固后得到YM固体培养基，室温静置待用；
(2)选取成熟的刺梨果实，清洗干净，然后采用榨汁机榨汁破碎，在室温条件下浸渍过夜，然后在温度为121℃下灭菌20min后备用；
(3)将步骤(1)所得活化的产朊假丝酵母菌接种于步骤(2)制备好的200mL 刺梨汁中(活化的产朊假丝酵母菌的用量为刺梨果汁体积的5％即10mL)，于温度为28℃下，180rpm摇床培养7d，培养后完成发酵，测定刺梨多糖含量，离心过滤(离心的转速为4000rpm，时间为20min)，收集上清液，得到刺梨果饮。
实施例2：
一种提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，该制备方法的详细步骤如下(采用扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)菌株单酵母菌种进行发酵)：
(1)取4℃冰箱斜面试管保存的扣囊复膜孢酵母菌种，用接种环在菌斜面上的菌落表层轻点一下粘附上菌0.03g，然后用100μL无菌水进行稀释，稀释后采用涂布棒涂布于加有YM固体培养基的90mm培养皿上，接着在温度28℃下培养48h，培养后取所得单菌落0.03g转接到200mL YM液体培养基中进行菌种制备，菌种制备条件为：温度为28℃、转速为180rpm，培养26h至对数生长期，用分光光度计测定菌量浓度OD600为2.0～2.2；得到活化的扣囊复膜孢酵母菌；
所述YM液体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g和麦芽提取物3g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌20min，得到 YM液体培养基，室温静置待用；
所述YM固体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、麦芽提取物3g和琼脂粉20g，将称取的各种用料加入 2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌20min，灭菌后倒入90mm培养皿中，室温静置凝固后得到YM固体培养基，室温静置待用；
(2)选取成熟的刺梨果实，清洗干净，然后采用榨汁机榨汁破碎，在室温条件下浸渍过夜，然后在温度为121℃下灭菌20min后备用；
(3)将步骤(1)所得活化的扣囊复膜孢酵母菌接种于步骤(2)制备好的 200mL刺梨汁中(活化的扣囊复膜孢酵母菌的用量为刺梨果汁体积的5％即 10mL)，于温度为28℃下，180rpm摇床培养7d，培养后完成发酵，测定刺梨多糖含量，离心过滤(离心的转速为4000rpm，时间为20min)，收集上清液，得到刺梨果饮。
实施例3：
本发明提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，该制备方法的详细步骤如下(采用产朊假丝酵母(candida utilis)菌株和扣囊复膜孢酵母 (Saccharomycopsisfibuligera)菌株两种酵母菌种进行发酵)：
(1)取4℃冰箱斜面试管保存的产朊假丝酵母和扣囊复膜孢酵母两种菌种，分别用接种环在菌斜面上的菌落表层轻点一下粘附上菌0.05g，然后分别用 100μL无菌水进行稀释，稀释后分别采用涂布棒涂布于加有YM固体培养基的 90mm培养皿上，接着在温度28℃下培养48h，培养后分别取所得单菌落0.05g 各转接到200mL YM液体培养基中进行菌种制备，菌种制备条件均为：温度为 28℃、转速为180rpm，培养26h至对数生长期，用分光光度计测定菌量浓度OD600为2.0～2.2；得到活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌；
所述YM液体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g和麦芽提取物3g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌20min，得到 YM液体培养基，室温静置待用；
所述YM固体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、麦芽提取物3g和琼脂粉20g，将称取的各种用料加入 2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌 20min，灭菌后倒入90mm培养皿中，室温静置凝固后得到YM固体培养基，室温静置待用；
(2)选取成熟的刺梨果实，清洗干净，然后采用榨汁机榨汁破碎，在室温条件下浸渍过夜，然后在温度为121℃下灭菌20min后备用；
(3)将步骤(1)所得活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌依次接种于步骤(2)制备好的200mL刺梨汁中(活化的产朊假丝酵母菌的用量和扣囊复膜孢酵母菌的用量均为刺梨果汁体积的5％即10mL)，于温度为28℃下，180 rpm摇床培养7d，培养后完成发酵，测定刺梨多糖含量，离心过滤(离心的转速为4000rpm，时间为20min)，收集上清液，得到刺梨果饮。
实施例4：
本发明提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，该制备方法的详细步骤如下(采用产朊假丝酵母(candida utilis)菌株和扣囊复膜孢酵母 (Saccharomycopsisfibuligera)菌株两种酵母菌种进行发酵)：
(1)取4℃冰箱斜面试管保存的产朊假丝酵母和扣囊复膜孢酵母两种菌种，分别用接种环在菌斜面上的菌落表层轻点一下粘附上菌0.03g，然后分别用 100μL无菌水进行稀释，稀释后分别采用涂布棒涂布于加有YM固体培养基的 90mm培养皿上，接着在温度28℃下培养48h，培养后分别取所得单菌落0.03g 各转接到200mL YM液体培养基中进行菌种制备，菌种制备条件均为：温度为 28℃、转速为180rpm，培养26h至对数生长期，用分光光度计测定菌量浓度OD600为2.0～2.2；得到活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌；
所述YM液体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g和麦芽提取物3g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌20min，得到 YM液体培养基，室温静置待用；
所述YM固体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、麦芽提取物3g和琼脂粉20g，将称取的各种用料加入 2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌 20min，灭菌后倒入90mm培养皿中，室温静置凝固后得到YM固体培养基，室温静置待用；
(2)选取成熟的刺梨果实，清洗干净，然后采用榨汁机榨汁破碎，在室温条件下浸渍过夜，然后在温度为121℃下灭菌20min后备用；
(3)将步骤(1)所得活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌按先后顺序：在活化的产朊假丝酵母菌接种于步骤(2)制备好的200mL刺梨汁中发酵 12h后再将扣囊复膜孢酵母菌接种进去发酵(活化的产朊假丝酵母菌的用量和扣囊复膜孢酵母菌的用量均为刺梨果汁体积的5％即10mL)，于温度为28℃下，180rpm摇床培养7d，培养后完成发酵，测定刺梨多糖含量，离心过滤(离心的转速为4000rpm，时间为20min)，收集上清液，得到刺梨果饮。
实施例5：
本发明提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，该制备方法的详细步骤如下(采用产朊假丝酵母(candida utilis)菌株和扣囊复膜孢酵母 (Saccharomycopsisfibuligera)菌株两种酵母菌种进行发酵)：
(1)取4℃冰箱斜面试管保存的产朊假丝酵母和扣囊复膜孢酵母两种菌种，分别用接种环在菌斜面上的菌落表层轻点一下粘附上菌0.02g，然后分别用 100μL无菌水进行稀释，稀释后分别采用涂布棒涂布于加有YM固体培养基的 90mm培养皿上，接着在温度28℃下培养48h，培养后分别取所得单菌落0.02g 各转接到200mL YM液体菌培养基中进行菌种制备，菌种制备条件均为：温度为28℃、转速为180rpm，培养26h至对数生长期，用分光光度计测定菌量浓度 OD600为2.0～2.2；得到活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌；
所述YM液体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g和麦芽提取物3g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌20min，得到 YM液体培养基，室温静置待用；
所述YM固体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、麦芽提取物3g和琼脂粉20g，将称取的各种用料加入 2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌 20min，灭菌后倒入90mm培养皿中，室温静置凝固后得到YM固体培养基，室温静置待用；
(2)选取成熟的刺梨果实，清洗干净，然后采用榨汁机榨汁破碎，在室温条件下浸渍过夜，然后在温度为121℃下灭菌20min后备用；
(3)将步骤(1)所得活化的扣囊复膜孢酵母菌和产朊假丝酵母菌按先后顺序：在活化的扣囊复膜孢酵母菌接种于步骤(2)制备好的200mL刺梨汁中发酵12h后再将产朊假丝酵母菌接种进去发酵(活化的产朊假丝酵母菌的用量和扣囊复膜孢酵母菌的用量均为刺梨果汁体积的5％即10mL)，于温度为28℃下， 180rpm摇床培养7d，培养后完成发酵，测定刺梨多糖含量，离心过滤(离心的转速为4000rpm，时间为20min)，收集上清液，得到刺梨果饮。
对比实施例1：
与实施例1基本相同，其不同之处在于：采用酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)菌株作为发酵菌种进行单菌种发酵，其它制备条件相同。
对比实施例2：
与实施例3基本相同，其不同之处在于：采用产朊假丝酵母(candida utilis) 菌株和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株作为发酵菌种进行双菌种混合发酵，其它制备条件相同。
对比实施例3：
与实施例3基本相同，其不同之处在于：采用扣囊复膜孢酵母 (Saccharomycopsisfibuligera)菌株和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株作为发酵菌种进行双菌种混合发酵，其它制备条件相同。
为了进一步说明本发明能够达到较好的技术效果，进行了以下实验：
对实施例1～5和对比实施例1～3制得的刺梨发酵果饮进行抗氧化指标检测，具体检测方法如下：
1、刺梨发酵果饮中多糖的测定采用蒽酮比色法，首先绘制标准曲线：采用乙酸乙酯配置15mg/mL蒽酮溶液，0.2mg/mL葡萄糖标准液；分别取葡萄糖标准液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1mL于试管中，稀释至2mL，蒽酮试剂0.5mL，冷水浴中加入浓硫酸5mL，摇匀；迅速放入水浴锅中，80℃下水浴15min，取出后流动水冷却至室温，在620nm处测定其吸光度。以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。样品测定：样品采用GB/T15038-2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》进行酸水解，然后进行适当浓度的稀释，620nm处测定其吸光度，带入标准曲线供试，即可计算出样品中总糖的含量。
2、刺梨发酵果饮中多糖的抗氧化活性指标：氮自由基(DPPH)清除能力分析，通过氮自由基(DPPH)清除能力测试试剂盒来测定刺梨多糖的DPPH清除率。步骤：从-20℃冰箱取出DPPH试剂，37℃平衡20min以上，待试剂融化后，在试剂瓶中加入100ml无水乙醇，剧烈震荡使试剂充分融解。分别吸取DPPH 溶液1ml，与其等量的无水乙醇、以及不同浓度多糖样品混合，充分摇匀后，室温放置避光静置30min使之充分反应。然后通过以下计算公式进行计算。
其中Ai表示含有样品和DPPH的溶液的吸光度，Aj表示含有样品和无水乙醇的溶液的吸光度，A0表示含有无水乙醇和DPPH的溶液的吸光度(空白对照)。清除50％DPPH自由基(IC50)所需的样品溶液浓度是通过绘制自由基清除率与样品浓度的关系来计算的。测量在OD517处进行，所有的实验均进行三次重复。
3、刺梨发酵果饮中多糖的抗氧化活性指标：铁离子还原能力的测定，通过铁离子还原能力测试试剂盒来测定刺梨多糖的铁离子还原能力。步骤：取不同浓度的多糖样品，依次加入1ml的磷酸缓冲液(0.2mol/L、pH 6.6)和1ml、1％的铁***溶液。混合物50℃水浴20min，快速冷却后再加入1ml、10％的三氯乙酸，充分混匀后，3000r/min离心10min，取3ml上清液加入新试管中，取0.6ml、 0.1％三氯化铁到上清液，充分混匀，室温静置10min，测定OD700处的吸光值。不加样品的反应液为空白对照。
以上实验所得相关检测数据详见表1。
表1本发明实验所得相关检测数据
(*:p<0.05)结果极显著。
通过实施例1～5以及对比实施例1～3之间实验数据进行比较可知，本发明利用非酿酒酵母：产阮假丝酵母和扣囊复膜孢酵母进行混合发酵刺梨汁，制备所得发酵刺梨果饮的抗氧化最强。其中，在多糖浓度一定时，DPPH清除率方面：混合发酵比单一发酵高，其中实施例3相较之对比2和对比3有13～18％明显提高；铁离子还原力方面：与DPPH清除率相似，混合发酵占用优势，实施例3也高于对比2和对比3。另外实例3、实例4、实例5之间的通过比较可知，实例3的两种酵母菌同时进行发酵比实例4、实例5的两种酵母菌分时间段依次进行发酵的效率高，所以由表1可知，实例3的抗氧化活性最高，即本发明技术方案取得技术效果最为突出。
Claims (1)
1.一种提高刺梨发酵果饮抗氧化功效的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
（1）取4℃冰箱斜面试管保存的产朊假丝酵母和扣囊复膜孢酵母两种菌种，分别用接种环在两种菌斜面上的菌落表层轻点一下粘附上菌0.01～0.05g，各用100μL无菌水进行稀释，稀释后采用涂布棒分别涂布于YM固体培养基上，然后分别在温度27～31℃下培养48～60h，培养后取所得单菌落分别转接到YM液体培养基中进行菌种制备，得到活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌；
所述YM液体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉2.5～3g、蛋白胨4～5g、葡萄糖8～10g和麦芽提取物2.5～3g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌15～20 min，得到YM液体培养基，室温静置待用；
所述YM固体培养基的制作方法：以1L用量为基准，称取酵母浸粉2.5～3g、蛋白胨4～5g、葡萄糖8～10g、麦芽提取物2.5～3g和琼脂粉18～20g，将称取的各种用料加入2L三角瓶中进行混合，混合均匀后加入水补足1L，然后在温度121℃下灭菌15～20 min，灭菌后倒入90mm培养皿中，室温静置凝固后得到YM固体培养基，室温静置待用；
所述培养后取所得单菌落分别转接到YM液体培养基中进行菌种制备时，两种单菌落的用量均为0.01～0.05g、YM液体培养基的用量均为200mL；
所述YM液体菌培养基中进行菌种制备的培养条件为：温度为27～31℃、转速为180～220 rpm，培养24～30h至对数生长期，用分光光度计测定菌量浓度OD600为2.0～2.2；
（2）选取成熟的刺梨果实，清洗干净，然后采用榨汁机榨汁破碎，在室温条件下浸渍过夜，然后在温度为121℃下灭菌15～20min后备用；
（3）将步骤（1）所得活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌依次接种于步骤（2）制备好的刺梨汁中，于温度为26～28℃下，180 rpm摇床培养5～7d，培养后完成发酵，测定刺梨多糖含量，离心过滤，收集上清液，得到刺梨果饮；
所述所得活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌依次接种于步骤（2）制备好的刺梨汁中时，两种酵母菌接种用量比例为1：1；
所述所得活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌依次接种于步骤（2）制备好的刺梨汁中时，活化的产朊假丝酵母菌和扣囊复膜孢酵母菌的用量均为刺梨果汁体积的2～5%；
所述离心过滤时，离心的转速为3000～5000rpm，时间为10～30min。
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