CN112798794A - 一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒 - Google Patents

一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒。为了解决现有α1酸性糖蛋白检测试剂盒无法兼顾低值灵敏度和高值线性的问题，本发明采用的技术方案是采用一种胶乳增强免疫比浊法检测α1酸性糖蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括耦联有抗人α1酸性糖蛋白抗体的胶乳颗粒溶液，所述胶乳颗粒，所述胶乳颗粒包括粒径为50～100nm的胶乳颗粒A，粒径为100～300nm的胶乳颗粒B，以及粒径为300～500nm的胶乳颗粒C。本发明的可用于人尿α1酸性糖蛋白检测，检测范围大，低值灵敏度高，使用方便，成本可控，具有市场应用价值。

Description

一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒
技术领域
本发明具体涉及一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒。
背景技术
目前市场上大部分测定人酸性糖蛋白的产品针对的是血清样本，测定尿酸性糖蛋白的产品则不常见。由于正常人尿液中α-酸性糖蛋白含量较低，通常小于1㎎/L，低于免疫比浊法的检测极限(通常为5㎎/L)，用于检测血液中α1酸性糖蛋白的免疫比浊法试剂无法用于检测尿液。所以该项目必须采用灵敏度更高的检测方法，另外在高通量的全自动分析仪器上，目前在国内外多采用Dako公司的α-酸性糖蛋白试剂即胶乳免疫比浊法试剂。
Dako公司的α1酸性糖蛋白试剂在线性范围为0.1～5.0㎎/L，抗原过剩范围仅达到50.00㎎/L，即浓度超过50㎎/L的样本可能会出现被低估(测定结果低于5.0㎎/L，无法提醒医生是需要稀释复测的高值样本)甚至假阴性结果(低于阴性参考值1.50㎎/L)；因此其线性及抗原过剩均存在明显缺陷。发明人和临床医院的研究人员发现肾病患者α1酸性糖蛋白含量超过5.0㎎/L的样本超过80％，即使用Dako试剂在临床使用，80％的病患需要稀释后复测，也有25％左右的病患的α1酸性糖蛋白含量超过60㎎/L，文献还报道过α1酸性糖蛋白含量达到200mg/L的病例，如果试剂盒的线性范围超过200㎎/L，那么在临床使用中基本无需进行样本稀释。
专利CN105403712A公开了一种测定人尿酸性糖蛋白检测试剂盒，该试剂盒采用的胶乳颗粒粒径为150nm-350nm，该试剂盒线性范围是0.5mg/L-60mg/L。由于150nm-350nm粒径的胶乳颗粒，很难保证低值灵敏度，所以其线性下线为0.5mg/L，不能满足市场需要，且文献报道正常参考范围在1mg/L左右，线性下线为0.5mg/L时，0.5mg/L样本无法被检测到；其线性上线为60mg/l，也很难满足高值要求，线性很难满足文献报道的高值能够达到200mg/L的病例测试要求，测试时样本需要进行稀释，不方便临床应用。
专利CN105628942A公开了一种测定人尿酸性糖蛋白检测试剂盒，R1是缓冲成分，pH值要求在5.5-9，R2含酸性糖蛋白抗体胶乳颗粒。该专利公开了R1试剂的优选过程，虽然也公开了胶乳颗粒制备过程，但重点都在R1试剂的研究上，此发明能够有很低的检测灵敏度，但高值只做到6mg/L，远远不能满足市场需要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种兼具低值灵敏度和高值线性的α1酸性糖蛋白检测试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
本发明提供一种采用胶乳增强免疫比浊法检测α1酸性糖蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括一种采用胶乳增强免疫比浊法检测α1酸性糖蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括耦联有抗人α1酸性糖蛋白抗体的胶乳颗粒溶液，所述胶乳颗粒包括粒径为50～100nm的胶乳颗粒A，粒径为100～300nm的胶乳颗粒B，以及粒径为300～500nm的胶乳颗粒C。
本发明中所述粒径是指胶乳颗粒样品中累计粒度分布数达到95％，且检测粒径重复性CV小于5％。
优选地，所述胶乳颗粒A、所述胶乳颗粒B、所述胶乳颗粒C的粒径比为1：1.5～2.5:4～7。
进一步优选地，所述胶乳颗粒A、所述胶乳颗粒B、所述胶乳颗粒C的粒径比为1：1.9～2.1:5～7。
优选地，所述胶乳颗粒A、所述胶乳颗粒B、所述胶乳颗粒C的用量比为1：0.1～0.5:0.1～0.3。
进一步优选地，所述胶乳颗粒A、所述胶乳颗粒B、所述胶乳颗粒C的用量比为1：0.2～0.5:0.1～0.3。
优选地，所述抗人α1酸性糖蛋白抗体与所述胶乳颗粒采用物理吸附和化学耦联相结合的方式进行耦联。
进一步优选地，将所述胶乳颗粒A、所述胶乳颗粒B、所述胶乳颗粒C分别与抗人α1酸性糖蛋白抗体进行物理吸附，再加入耦联剂进行化学耦联。
进一步优选地，所述抗人α1酸性糖蛋白抗体的用量与乳胶颗粒的质量的比为1:8～15，进一步优选为1:9～12。
进一步优选地，所述耦联剂为EDC和/或NHS。
进一步优选地，所述EDC的用量与乳胶颗粒的质量的比为1:90～110，进一步优选为1：95～105。
优选地，所述抗人α1酸性糖蛋白抗体为兔抗人α1酸性糖蛋白多克隆抗体和/或羊抗人α1酸性糖蛋白多克隆抗体。
优选地，所述试剂盒还包括缓冲液。
优选地，所述缓冲液为GOODS缓冲液、磷酸盐缓冲液、或甘氨酸缓冲液。
优选地，所述试剂盒中还含有校准品。
本发明的试剂盒的线性范围为0.1mg/L-250mg/L。
优选地，所述试剂盒的测试样本为尿液。
本发明采用三种不同粒径的胶乳颗粒组合的方式，采用物理吸附法和化学耦联相结合的耦联工艺，制备胶乳增强免疫比浊法测定酸性糖蛋白的试剂盒，其能够实现0.1mg/L-250mg/L内检测结果稳定可靠，由于本发明的试剂盒可同时兼顾低值灵敏度和高值线性，因此可直接对尿液进行检测，不需要对样品进行稀释，很大的提高了检测效率，并节约了试剂成本。
本发明通过调整优化三种胶乳颗粒的用量比例，能够保持胶乳溶液的稳定，很好的控制试剂盒批次间的差异。
本发明采用物理吸附法和化学耦联胶乳标记相结合的方法，比纯化学方法节约耦联剂的使用，更节约成本。
本发明的试剂盒能够规模化生产，且能够配套市面上绝大多数自动化分析仪器使用，实现快速、准确、全自动检测，成本可控，适于大规模推广使用。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：
本发明的兼具低值灵敏度和高值线性的α1酸性糖蛋白检测试剂盒，可用于人尿α1酸性糖蛋白检测，使用方便，成本可控，具有市场应用价值。
附图说明
附图1为实施例1的线性稀释图；
附图2为实施例2的线性稀释图；
附图3为实施例3的线性稀释图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件。本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，校准品。
试剂1：GOODS缓冲液；试剂2：抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液，其制备方法为：
1：粒径为50nm、100nm、300nm的胶乳颗粒分别与兔抗人α1酸性糖蛋白多克隆抗体耦联。
1.1物理吸附：在离心管中加入9ml 25mmol/L的HEPES缓冲液(pH7.4±0.3)，加入0.1g乳胶颗粒，再加入抗人α1酸性糖蛋白多克隆抗体0.01g，在室温条件下进行孵育，孵育时间1小时；
1.2化学耦联：向停止孵育的乳胶颗粒溶液中加入EDC耦联剂100ul(10mg/ml浓度)，在室温条件下进行活化，活化时间1小时；
1.3加入1％BSA溶液100ul进行封闭，封闭时间1小时；
1.4使用高速冷冻离心机离心(根据乳胶颗粒的粒径设置离心参数，具体见表1)，离心结束后去除离心管中的上清液，加入10mL的R2保存液，超声震荡混匀，得到某一粒径的抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液。
表1
胶乳颗粒粒径 离心转速 离心时间
50-80nm 18000转/min 1小时
80-150nm 18000转/min 40分钟
150-300nm 18000转/min 30分钟
300-500nm 18000转/min 20分钟
R2保存液的配制方法为：在烧杯中加入1000ml纯水，加入HEPES 11.9g，搅拌溶解混匀；加入NaN30.1g，搅拌溶解混匀；加入蔗糖10g，搅拌溶解混匀；加入吐温20 0.1g，搅拌混匀，得到R2保存液，存放在2-8摄氏度冷藏冰箱内。
2.抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液配制：
抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(50nm粒径)5ml，抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(100nm粒径)1ml，抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(300nm粒径)0.5ml加入离心管中，搅拌混匀，得到6.5ml抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液。
3.配制校准品：
取外购的重组α1酸性糖蛋白纯物质，分别取0.05mg、0.5mg、5mg、10mg、25mg，加入到5个不同的离心管中，每个离心管加入100ml 50mmoL/l的HEPES溶液，再分别加入0.1ml吐温20，0.01g的防腐剂，0.1g的海藻糖，混匀得到浓度依次为0.5mg/L，5mg/L，50mg/L，100mg/L，250mg/L的校准品。
4.使用尿液样本验证实施例的试剂盒的线性范围及检出下限。测试方法及结果如下：
4.1取试剂1 160μl，试剂2 40μl，取2.5μl校准品。采用Hitachi7170全自动生化分析仪进行测试，测试条件为546nm单波长，根据两点终点法计算校准品的吸光度变化值，吸光度变化值数据见表2：
表2
校准品浓度值(mg/L) 0 0.5 5 50 100 250
吸光度变化值 11 178 958 3365 4340 5587
4.2线性范围：
使用α1酸性糖蛋白浓度为250mg/L左右的尿液样本，按稀释比例分别为0.04％、0.10％、0.50％、1.00％、5.00％、10.00％、50％、100％作为待测样本，线性数据结果见表3：
表3
稀释比例 0.04％ 0.10％ 0.50％ 1.00％ 5.00％ 10.00％ 50％ 100％
估计值(mg/L) 0.10674 0.2565 1.2549 2.5029 12.4869 24.9669 124.8069 249.6069
实测值(mg/L) 0.11 0.24 1.24 2.45 12.44 24.51 125.88 249.12
偏差 3.05％ -6.43％ -1.19％ -2.11％ -0.38％ -1.83％ 0.86％ -0.20％
根据表3数据绘制线性稀释曲线，横坐标为稀释比例，纵坐标为实测值，具体如图1所示，图1显示：线性稀释曲线方程为线性回归方程，R2为线性系数，R2＝1，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值偏差＜10％，说明线性合格。
4.3检出下限：
取α1酸性糖蛋白浓度为0.1mg/L、0.5mg/L以及1mg/L的尿液样本，检测10次，测试精密度CV，CV小于等于20％，即说明检测结果符合国家相关法规要求。检测下限数据见表4：
表4
Figure BDA0002872457640000051
Figure BDA0002872457640000061
从表2～4可以看出，本实施例的α1酸性糖蛋白检测试剂盒，在0.10㎎/L～250.00㎎/L内满足线性稀释估计值与实测值偏差＜10％，且检测下限也能达到0.1㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到0.10㎎/L～250.00㎎/L。
实施例2
一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，校准品。
本实施例中试剂1及校准品同实施例1；
本实施例中试剂2基本同实施例1，区别在于使用的胶乳颗粒粒径分别为60nm、120nm、400nm，试剂2的制备基本同实施例1，区别在于离心条件不同，具体见表1。
抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液配制：抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(60nm粒径)10ml，抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(120nm粒径)5ml，抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(400nm粒径)1ml加入离心管中，搅拌混匀，得到16ml抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液。
使用校准品测试吸光度变化值，使用尿液样本验证本实施例的试剂盒的线性范围及检出下限，测试方法同实施例1。吸光度变化值数据见表5，线性范围见表6，并根据表6数据绘制线性曲线，具体见图2，检出下限数据见表7。
表5
校准品浓度值(mg/L) 0 0.5 5 50 100 250
吸光度变化值 23 186 992 3681 4521 5781
表6
稀释比例 0.04％ 0.10％ 0.50％ 1.00％ 5.00％ 10.00％ 50％ 100％
估计值(mg/L) 0.106912 0.25708 1.2582 2.5096 12.5208 25.0348 125.1468 250.2868
实测值(mg/L) 0.1 0.26 1.23 2.43 12.56 25.57 124.33 250.64
偏差 -6.47％ 1.14％ -2.24％ -3.17％ 0.31％ 2.14％ -0.65％ 0.14％
表7
检测浓度(mg/L) 0.1 0.5 1
结果1 0.12 0.52 1.01
结果2 0.08 0.54 1.05
结果3 0.1 0.55 1.02
结果4 0.1 0.48 1.01
结果5 0.08 0.51 0.97
结果6 0.09 0.48 0.95
结果7 0.09 0.53 1.01
结果8 0.09 0.55 1.03
结果9 0.09 0.56 1.09
结果10 0.11 0.59 1.02
均值 0.095454545 0.528181818 1.014545455
SD 0.012692955 0.034785054 0.038643671
精密度CV 13.30％ 6.59％ 3.81％
合格范围 小于20％ 小于20％ 小于20％
图2显示：线性稀释曲线方程为线性回归方程，R2为线性系数，R2＝1，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值偏差＜10％，说明线性合格。
从表5～7可以看出，本实施例的α1酸性糖蛋白检测试剂盒，在0.10㎎/L～250.00㎎/L内满足线性稀释估计值与实测值偏差＜10％，且检测下限也能达到0.1㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到0.10㎎/L～250.00㎎/L。
实施例3
一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，校准品。
本实施例中试剂1及校准品同实施例1；
本实施例中试剂2基本同实施例1，区别在于使用的胶乳颗粒粒径分别为100nm、200nm、500nm，试剂2的制备基本同实施例1，区别在于离心条件不同，具体见表1。
抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液配制：抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(100nm粒径)5ml，抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(200nm粒径)1ml，抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液(500nm粒径)0.5ml加入离心管中，搅拌混匀，得到6.5ml抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液。
使用校准品测试吸光度变化值，使用尿液样本验证实施例的试剂盒的线性范围及检出下限，测试方法同实施例1。吸光度变化值数据见表8，线性范围见表9，并根据表9数据绘制线性曲线，具体见图3，检出下限数据见表10。
表8
校准品浓度值(mg/L) 0 0.5 5 50 100 250
吸光度变化值 26 201 1029 3745 4618 5861
表9
稀释比例 0.04％ 0.10％ 0.50％ 1.00％ 5.00％ 10.00％ 50％ 100％
估计值(mg/L) 0.096008 0.24647 1.24955 2.5034 12.5342 25.0727 125.3807 250.7657
实测值(mg/L) 0.09 0.25 1.24 2.47 12.33 24.45 126.98 250.04
偏差 -6.26％ 1.43％ -0.76％ -1.33％ -1.63％ -2.48％ 1.28％ -0.29％
表10
检测浓度(mg/L) 0.1 0.5 1
结果1 0.11 0.54 1.03
结果2 0.09 0.56 1.03
结果3 0.09 0.52 1.01
结果4 0.11 0.51 1
结果5 0.08 0.48 1
结果6 0.09 0.49 0.97
结果7 0.11 0.48 0.98
结果8 0.09 0.53 0.99
结果9 0.08 0.54 0.99
结果10 0.12 0.52 1.03
均值 0.097272727 0.515454545 1.002727273
SD 0.014181365 0.027100635 0.021628171
精密度CV 14.58％ 5.26％ 2.16％
合格范围 小于20％ 小于20％ 小于20％
图3显示：线性稀释曲线方程为线性回归方程，R2为线性系数，R2＝0.9999，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值偏差＜10％，说明线性合格。
从表8～10可以看出，本实施例的α1酸性糖蛋白检测试剂盒，在0.10㎎/L～250.00㎎/L内满足线性稀释估计值与实测值偏差＜10％，且检测下限也能达到0.1㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到0.10㎎/L～250.00㎎/L。
对比例1
一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，校准品。
本实施例中试剂1及校准品同实施例1；
本实施例中试剂2基本同实施例1，区别在于试剂2的制备中仅采用物理吸附。
抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液配制同实施例1。
对比例2
一种α1酸性糖蛋白检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，校准品。
本实施例中试剂1及校准品同实施例1；
本实施例中试剂2基本同实施例1，区别在于试剂2的制备中仅采用化学耦联。
化学耦联步骤为：
在离心管中加入9ml 25mmol/L的HEPES缓冲液(pH7.4±0.3)，加入0.1g乳胶颗粒，再加入EDC耦联剂1000ul(10mg/ml浓度)，在室温条件下进行活化，活化时间1小时；
使用高速冷冻离心机离心(离心参数：18000转/min，1小时)，离心结束后去除离心管中的上清液，加入10ml 25mmol/L的HEPES缓冲液(pH7.4±0.3)，超声震荡混匀，再加入兔抗人α1酸性糖蛋白多克隆抗体0.01g，室温耦联1小时。
实施例1、对比例1及对比例2中耦联剂的用量见表11。
表11
耦联方法 耦联剂(EDC用量)
对比例1 无
实施例1 100ul(10mg/ml)
对比例2 1000ul(10mg/ml)
使用校准品测试对比例1及对比例2的吸光度变化值，使用尿液样本测试对比例1及对比例2的检出下限并与实施例1进行比较，测试方法同实施例1。吸光度变化值数据见表12，检出下限数据见表13。
表12
Figure BDA0002872457640000091
Figure BDA0002872457640000101
表13
检测浓度(mg/L) 对比例1 实施例1 对比例2
结果1 0.12 0.11 0.12
结果2 0.08 0.11 0.13
结果3 0.05 0.08 0.12
结果4 0.06 0.09 0.11
结果5 0.08 0.08 0.09
结果6 0.12 0.09 0.08
结果7 0.13 0.11 0.11
结果8 0.07 0.11 0.09
结果9 0.04 0.11 0.12
结果10 0.15 0.12 0.11
均值 0.090909091 0.100909091 0.107272727
SD 0.037416574 0.014491377 0.016193277
精密度CV 41.16％ 14.36％ 15.10％
合格范围 小于20％ 小于20％ 小于20％
表12和表13显示：采用物理吸附方法，试剂整体吸光度过低，且不满足低值重复性，不宜采用此方法；化学耦联方法整体吸光度和低值样本检测结果基本一致，但使用EDC耦联剂的用量是物理和化学耦联相结合的方法的10倍。采用物理和化学相结合的耦联方法经济节约，而且在耦联过程中比纯化学方法少一次使用高速冷冻离心机，简化了工艺步骤，节约了成本，更利于工艺的控制。
实施例4、5
实施例4、5基本同实施例1，区别仅在于配制抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液时不同粒径的胶乳颗粒的使用量不同，具体见表14。
表14
Figure BDA0002872457640000102
Figure BDA0002872457640000111
使用校准品测试实施例4及实施例5的试剂盒的吸光度变化值数据，具体见表15。
表15
校准品浓度值(mg/L) 0 0.5 5 50 100 250
实施例1 吸光度变化值 11 178 958 3365 4340 5587
实施例4 吸光度变化值 22 184 1012 3391 4403 5681
实施例5 吸光度变化值 26 192 1071 3328 4529 5720
表14-15显示：虽然不同粒径微球用量稍有区别，但对试剂2整体吸光度没有明显影响，可以看出，控制不同粒径乳胶颗粒的用量在一定比例范围内，其整体性能基本不变，因此控制不同粒径的耦联抗体的乳胶颗粒的用量比可以减少工艺批内差异，保持试剂2稳定。
对比例3、4
对比例3、4基本同实施例1，区别仅在于配制抗人α1酸性糖蛋白抗体胶乳溶液时不同粒径的胶乳颗粒的使用量不同，具体见表16。
表16
胶乳粒径 实施例1 对比例3 对比例4
50nm 10ml 10ml 10ml
100nm 5ml 1ml 2ml
300nm 1ml 5ml 4ml
使用校准品测试对比例3、4的试剂盒的吸光度变化值数据，具体见表17。
表17
校准品浓度值(mg/L) 0 0.5 5 50 100 250
实施例1 吸光度变化值 11 178 958 3365 4340 5587
对比例3 吸光度变化值 56 332 1521 4174 6225 6123
对比例4 吸光度变化值 34 278 1326 3932 6033 6013
表16-17显示：不同粒径的偶联抗体的乳胶颗粒的用量比超过一定比例限制后，线性范围减小，对比例3、对比例4的最后两个浓度点(100mg/L和250mg/L校准品)的吸光度基本一致，说明校准曲线在100mg/L以后走向趋于向下，可知其试剂线性只能做到100mg/L，浓度超过100mg/L的样本会出现检测结果小于100mg/L的现象，因此不能满足试剂盒线性到达250mg/L的要求。
以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种采用胶乳增强免疫比浊法检测α1酸性糖蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括耦联有抗人α1酸性糖蛋白抗体的胶乳颗粒溶液，所述胶乳颗粒包括粒径为50～100nm的胶乳颗粒A，粒径为100～300nm的胶乳颗粒B，以及粒径为300～500nm的胶乳颗粒C。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述胶乳颗粒A、所述胶乳颗粒B、所述胶乳颗粒C的粒径比为1：1.5～2.5:4～7。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述胶乳颗粒A、所述胶乳颗粒B、所述胶乳颗粒C的用量比为1：0.1～0.5:0.1～0.3。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗人α1酸性糖蛋白抗体与所述胶乳颗粒采用物理吸附和化学耦联相结合的方式进行耦联。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述化学耦联采用的耦联剂为EDC和/或NHS。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗人α1酸性糖蛋白抗体为兔抗人α1酸性糖蛋白多克隆抗体和/或羊抗人α1酸性糖蛋白多克隆抗体。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括缓冲液，所述缓冲液为GOODS缓冲液、磷酸盐缓冲液、或甘氨酸缓冲液。
8.据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有校准品。
9.据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的线性范围为0.1mg/L-250mg/L。
10.据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的测试样本为尿液。
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