CN112778405B - 一种与植物开花期相关的蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种与植物开花期相关的蛋白及其编码基因与应用。本发明所要保护的一个技术方案是来源于大豆的蛋白质在调控植物开花或缩短植物开花期中的应用，该蛋白质的名称为GmMASB1，其可为氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白质。本发明从大豆品种齐黄34中克隆了基因GmMASB1，并将其在拟南芥中过量表达，得到转GmMASB1基因植株，转GmMASB1基因植物的开花期显著早于未转基因的野生型，因此，GmMASB1蛋白具有促进开花作用，可应用于植物育种或品种选育。

Description

一种与植物开花期相关的蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种与植物开花期相关的蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

植物在生长发育过程中，受到外部环境和自身因素的多重影响，将经历多次生长时期的转变，其中最重要且最具标志性的是营养生长向生殖生长的转变。这一转变决定了植物的开花时间，进而大大影响甚至决定了植物在某一区域的适应性。

大豆是典型的短日作物，同纬度地区大豆品种对短日照反应存在差异。导致单个品种的种植范围相对狭窄。大豆在不同纬度地区间引种时，常因日照长度的变化导致开花期提前或延后，造成产量下降甚至颗粒无收。这一特性(大豆对光周期反应十分敏感)给大豆的远距离引种和高油高蛋白等优良品种的推广带来巨大困难，是限制大豆产量的重要因素。因此，挖掘开花相关基因并研究其功能不仅对深入理解营养生长和生殖生长关系、指导大豆育种具有重要意义，也可为培育适合一定地区种植的大豆优良品种提供分子手段，是培育广适大豆育种的重要切入点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何调控植物的开花期。

为了解决上述技术问题，本发明首先提供了蛋白质的下述任一种应用：

P1、所述蛋白质在调控植物开花期中的应用，

P2、所述蛋白质在促进植物开花中的应用，

P3、所述蛋白质在缩短植物开花期中的应用，

P4、所述蛋白质在植物育种中的应用，

P5、所述蛋白质在植物品质改良中的应用。

所述蛋白质可为如下A1)、A2)或A3)的蛋白质：

A1)氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白质。

A2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的由A1)衍生的或与A1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质。

A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质。

上述蛋白质可来源于大豆。

上述蛋白质中，序列表中序列2由232个氨基酸残基组成。

上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述蛋白质中，所述蛋白标签(protein-tag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、GST标签和/或SUMO标签等。

上述蛋白质中，同一性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。

上述蛋白质中，所述80％以上的同一性可为至少81％、82％、85％、86％、88％、90％、91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。

上文所述植物可为下述任一种：

D1)双子叶植物，

D2)豆目植物，

D3)豆科植物，

D4)大豆属植物，

D5)大豆；

D6)山柑目植物，

D7)十字花科植物，

D8)拟南芥属植物，

D9)拟南芥。

为了解决上述技术问题，本发明还提供了上文所述蛋白质相关的生物材料的下述任一种应用：

Q1、所述生物材料在调控植物开花期中的应用，

Q2、所述生物材料在促进植物开花中的应用，

Q3、所述生物材料在缩短植物开花期中的应用，

Q4、所述生物材料在植物育种中的应用，

Q5、所述生物材料在植物改良中的应用。

所述生物材料可为下述B1)至B9)中的任一种：

B1)编码上文所述蛋白质的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；

B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；

B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；

B5)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

B6)含有B1)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2)所述表达盒的转基因植物组织；

B7)含有B1)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2)所述表达盒的转基因植物器官；

B8)促进或提高上文所述蛋白质的基因表达的核酸分子；

B9)含有B8)所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因植物细胞系。

上述应用中，B1)所述核酸分子可为如下b1)、b2)或b3)所示的所述蛋白质的编码基因：

b1)编码链的编码序列是序列表中序列1的核苷酸的cDNA分子或DNA分子；

b2)核苷酸是序列表中序列1的cDNA分子或DNA分子，

b3)与b2)限定的cDNA或DNA分子杂交且编码具有相同功能的蛋白质的cDNA分子或DNA分子。

上述生物材料中，B2)所述的含有核酸分子的表达盒，是指能够在宿主细胞中表达上述应用中所述蛋白质的DNA，该DNA不但可包括启动蛋白编码基因转录的启动子，还可包括终止蛋白编码基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。可用于本发明的启动子包括但不限于：组成型启动子，组织、器官和发育特异的启动子，和诱导型启动子。

可用现有的植物表达载体构建含有所述蛋白编码基因表达盒的重组表达载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。如pAHC25、pWMB123、pBin438、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb(CAMBIA公司)等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂碱合成酶基因Nos)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。

上述生物材料中，所述重组微生物具体可为酵母，细菌，藻和真菌。

为了解决上述技术问题，本发明还提供了一种促进植物开花的方法。所述方法包括增强或提高目的植物中上文所述蛋白质的活性或/和上文所述蛋白质的编码基因的表达量，从而促进目的植物开花。

所述增强或提高目的植物中上文所述蛋白质的活性或/和上文所述蛋白质的编码基因的表达量可通过将上文所述蛋白质的编码基因导入所述目的植物实现的。

上述方法中，所述蛋白的编码基因可先进行如下修饰，再导入目的植物中，以达到更好的表达效果：

1)与各种植物表达的启动子连接，以利于其在植物中的表达；所述启动子可包括组成型、诱导型、时序调节、发育调节、化学调节、组织优选和组织特异性启动子；启动子的选择将随着表达时间和空间需要而变化，而且也取决于靶物种；例如组织或器官的特异性表达启动子，根据需要受体在发育的什么时期而定；尽管证明了来源于双子叶植物的许多启动子在单子叶植物中是可起作用的，反之亦然，但是理想地，选择双子叶植物启动子用于双子叶植物中的表达，单子叶植物的启动子用于单子叶植物中的表达；

2)与适合的转录终止子连接，也可以提高本发明基因的表达效率；例如来源于CaMV的tml，来源于rbcS的E9；任何已知在植物中起作用的可得到的终止子都可以与本发明基因进行连接；

3)引入增强子序列，如内含子序列(例如来源于Adhl和bronzel)和病毒前导序列(例如来源于TMV,MCMV和AMV)。

上述方法中，所述对逆境胁迫敏感植物可为转基因植物，也可为通过杂交等常规育种技术获得的植物。

上述方法中，所述转基因植物理解为不仅包含第一代到第二代转基因植物，也包括其子代。对于转基因植物，可以在该物种中繁殖该基因，也可用常规育种技术将该基因转移进入相同物种的其它品种，特别包括商业品种中。所述转基因植物包括种子、愈伤组织、完整植株和细胞。

上文所述植物和/或目的植物可为下述任一种：

D1)双子叶植物，

D2)豆目植物，

D3)豆科植物，

D4)大豆属植物，

D5)大豆；

D6)山柑目植物，

D7)十字花科植物，

D8)拟南芥属植物，

D9)拟南芥。

上文所述的蛋白质和/或所述的生物材料也属于本发明的保护范围。

本发明首次鉴定了大豆GmMASB1蛋白在调控植物开花时间和方面的功能，提出了利用过量表达GmMASB1改变植物开花时间的方法。实验证明，在模式植物拟南芥中过量表达大豆GmMASB1蛋白相比较与野生型能够促进植株早开花5-6天。本发明为解决植物杂交育种中的花期不遇问题、植物的生育期控制问题、光周期敏感性问题和引种问题提供了方法和依据。

附图说明

图1为转GmMASB1拟南芥中GmMASB1的表达水平检测。WT为野生型拟南芥，L8和L12为两个过量表达GmMASB1的拟南芥株系。

图2为转GmMASB1拟南芥的早花表型图。A为种植27天后转GmMASB1拟南芥株系L8，L12和野生型拟南芥的生长情况。B为种植27天后转GmMASB1拟南芥株系L8，L12和野生型拟南芥的莲座叶。图中WT为野生型拟南芥，L8和L12为两个过量表达GmMASB1的拟南芥株系。

图3为转GmMASB1拟南芥和野生型拟南芥开花天数和开花时莲座叶数目的比较。A为转GmMASB1拟南芥和野生型拟南芥开花天数比较；B为转GmMASB1拟南芥和野生型拟南芥开花时莲座叶数目的比较。图中WT为野生型拟南芥，L8和L12为两个过量表达GmMASB1的拟南芥株系。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、GmMASB1基因的克隆

本实施例选用的材料为大豆品种齐黄34。该品种在文献“张彦威,李伟,张礼凤等.基于重测序的大豆新品种齐黄34的全基因组变异挖掘.中国油料作物学报,2016,38(02),150-158”中公开过，公众可从山东省农业科学院作物研究所获得。

1、播种大豆材料齐黄34，待其出苗后进行长日(14h光照/10h黑暗)处理，9天后取其单叶并提取RNA，并以获得的RNA为模板，反转录得到cDNA。

2、以步骤1获得的cDNA为模板，采用引物GmMASB1-F：ATGGGAAGAGGGAAGGTGGTTCT和GmMASB1-R：TTATGACTGCTTTGGCCTCAACCA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。并对其进行测序。

测序结果表明：PCR扩增产物的核苷酸序列为序列表中序列1，将cDNA的CDS序列为序列1所示DNA分子的基因命名为GmMASB1，其中，自5’端第1-699为ORF(序列表序列1的第1-699位)，编码由232个氨基酸残基组成的蛋白质，该蛋白命名为GmMASB1，GmMASB1蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。

实施例2、转GmMASB1拟南芥的获得及其功能验证

本实施例所用pCAMBIA3300s载体(在文献“任国勇,李伟,张礼凤等.转HarpinXooc蛋白编码基因hrf2大豆的胞囊线虫病1号小种抗性鉴定.作物杂志,2017,3:49-53.”中已公开)是在商业化载体pCAMBIA3300上添加了35S启动子序列(序列表中序列3的第8328-9004位核苷酸)得到的改造后的载体,pCAMBIA3300s为序列表中序列3所示的DNA分子。

1、转GmMASB1拟南芥的获得

1.1重组表达载体pCAMBIA3300s-GmMASB1的构建

(1)将实施例1中扩增得到的PCR扩增产物进行回收纯化得到回收纯化产物，然后以回收纯化产物为模板，以引物GmMASB1-HR-F:5’-TCTCGAGCTTTCGCGAGCTCATGGGAAGAGGGAAGGTGG-3’，GmMASB1-HR-R：5’-AGGTCGACTCTAGAGGATCCTTATGACTGCTTTGGCCTCAAC-3’进行PCR扩增(引物下划线部分为载体pCAMBIA3300s上的序列)，得到PCR产物命名为GmMASB1-HR，GmMASB1-HR两端含有pCAMBIA3300s载体上部分载体序列的片段。

(2)用限制性内切酶SacI与BamHI对pCAMBIA3300s进行双酶切线性化处理并回收，与(1)中得到的PCR扩增产物GmMASB1-HR进行重组(重组试剂盒EasyGeno快速重组克隆试剂盒(VI201)购自天根生化科技有限公司)，重组产物转化大肠杆菌，涂于含有卡那霉素(Kan)的抗性平板上37℃过夜培养。挑选生长出的克隆子单菌落摇菌进行菌液PCR验证(验证引物为GmMASB1-F：ATGGGAAGAGGGAAGGTGGTTCT和GmMASB1-R：TTATGACTGCTTTGGCCTCAACCA)。PCR扩增能够得到大小699bp片段的单菌落即为阳性转化子单菌落。将阳性转化子单菌落进行摇菌并提取质粒得到重组载体质粒pCAMBIA3300s-GmMASB1。重组载体质粒pCAMBIA3300s-GmMASB1含有序列表中序列1所示的GmMASB1的cDNA的CDS序列，能够表达序列表中序列2所示的GmMASB1蛋白。

1.2重组农杆菌的获得

取1μg上述步骤1.1中制备的重组载体质粒pCAMBIA3300s-GmMASB1转化农杆菌GV3101的感受态细胞，28℃条件下于YEP培养基(含卡那霉素50mg/L)上培养两天，挑选阳性克隆，利用引物GmMASB1-F：5’-ATGGGAAGAGGGAAGGTGGTTCT-3’和GmMASB1-R：5’-TTATGACTGCTTTGGCCTCAACCA-3’进行PCR鉴定(产物大小为699bp)。将经PCR鉴定得到的阳性菌液命名为重组农杆菌GV3101/pCAMBIA3300s-GmMASB1，-80℃保存。

重组农杆菌GV3101/pCAMBIA3300s-GmMASB1含有实施例1中cDNA的CDS核苷酸序列为序列表中序列1的基因GmMASB1。

1.3、转GmMASB1拟南芥的获得

(1)受体植株准备：将适量Columbia(Col)野生型拟南芥种子(该种子在文献“Hongbo Sun,Zhen Jia,Dong Cao,et al.GmFT2a,a soybean homolog of FLOWERINGLOCUS T,is involved in flowering transition and maintenance.PLoS one,2011,6(12)e29238)中发表，公众可从山东省农业科学院作物研究所获得。)放入1.5mL离心管中，加入1mL无菌ddH₂O后加入5％次氯酸钠溶液，对种子表面进行消毒处理，处理15min后，在超净台中用无菌ddH₂O洗涤4-5次，将种子播种于1/2MS固体培养基中。低温处理(4℃)2-3d后置于温度为23℃，光照条件为16h光照/8h黑暗的培养箱中生长。15d后将植株移栽到营养基质中正常生长。

(2)侵染菌液的制备：将保存于-80℃的1.2中制备得到的重组农杆菌GV3101/pCAMBIA3300s-GmMASB1在添加Kan的YEP固体培养基中划线培养。长出的单菌落接种于10mLYEP液体培养基(含有Kan)中进行一次活化(28℃，220rpm震荡过夜)。取一次活化的菌液按1:1000的比例接种于80mL YEP液体培养基(含Kan)，28℃，220rpm震荡培养至OD_600nm为0.8-1.0。

(3)侵染过程：将达到所需OD值的重组农杆菌菌液转移至50mL离心管中，5000rpm离心10min以富集菌体。将菌体用5％的蔗糖溶液重悬，OD_600nm值达到0.4-0.5时，向菌液中加入Silwet-77(每100mL菌液加50uL)。侵染时，将拟南芥的花苞浸泡于菌液中，时间为90S。侵染后的植株暗培养24h后恢复正常培养(23℃，16h光照/8h黑暗)。1-2周后进行二次侵染，二次侵染过程与初次侵染过程步骤相同。

(4)将侵染后的拟南芥植株正常培养至成熟后，收获其成熟后的种子即为T₀代转基因种子。将T₀代转基因种子种植于添加有草铵膦的1/2MS培养基中，1-2周后，抗性幼苗转移至营养基质中继续培养。培养期间取叶片，提取其DNA，利用引物GmMASB1-F：5’-ATGGGAAGAGGGAAGGTGGTTCT-3’和GmMASB1-R：5’-TTATGACTGCTTTGGCCTCAACCA-3’进行PCR鉴定对目的基因GmMASB1进行PCR检测。检测出目的条带(产物大小为699bp)的株系正常培养至成熟，收获其种子为T₁代转基因种子。T₁代转基因种子采用上述T₀代转基因种子同样的方法种植筛选培养，直至收获T₂代的种子和T₃代转基因种子。T₃代转基因种子为不再分离的纯合株系的转基因种子用来进行后续的表型试验。

2、转GmMASB1拟南芥的开花情况

2.1转基因植株GmMASB1基因的相对表达量检测

实验设置三个重复。每个重复实验设置如下：选择步骤1中得到的转GmMASB1基因T₃代纯合拟南芥株系中的L8、L12和Columbia(Col)野生型植株(WT)种植于培养箱中进行长日培养(16小时光照/8小时黑暗)。种植16天后提取转基因材料和野生型植株叶片总RNA，反转录为cDNA，采用Real-time RT-PCR方法，以AtActin为内标基因，检测GmMASB1基因的相对表达量。引物序列如下：

qGmMASB1-F：5’-AAGGAACGCATGCTGACTGA-3’

qGmMASB1-R：5’-GTTCAGCTGGAGTGGCATCT-3’

qAtActin-F：5’-AAGTCTTGTTCCAGCCCTCG-3’

qAtActin-R：5’-TTTGCTCATACGGTCAGCGA-3’

检测结果如图1所示：野生型拟南芥中GmMASB1不表达，而转基因拟南芥L8,L12中GmMASB1有很高的表达量，说明GmMASB1过量表达拟南芥株系构建成功。

2.2转基因植株的开花期表型检测

观察并统计转GmMASB1拟南芥和野生型拟南芥的开花期(从种植到进入开花时期的天数)和开花时莲座叶的数目。结果显示：转GmMASB1拟南芥株系L8和L12开花期明显早于野生型WT(图2中A所示)；L8和L12开花时的莲座叶数目明显少于野生型WT(图2中B)。统计结果显示，长日条件下，WT的开花期为28.4±1.2天(统计株数33棵)，而L8的平均开花期为23.2±2.3天(统计株数35棵)，比WT提前5.2天；L12的平均开花期为22.4±1.7天(统计株数30棵)，比WT提前6天(图3中A)。野生型拟南芥WT开花时的莲座叶平均值为12.5±0.7片(统计株数33棵)，而L8开花时的莲座叶平均值为8.3±0.8片(统计株数35棵)，比野生型少4.2片；L12开花时的莲座叶平均值为8.1±0.9片(统计株数30棵)，比野生型少4.4片(图3中B)。从上述结果可以看出，大豆GmMASB1基因的过表达能促进拟南芥植株开花期提前。因此，GmMASB1基因具有促进开花的功能，可应用于大豆品种选育和育种。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 山东省农业科学院作物研究所

<120> 一种与植物开花期相关的蛋白及其编码基因与应用

<130> GNCSQ210206

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 699

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 1

atgggaagag ggaaggtggt tctggagaga atacagaaca agatcaatcg ccaagtaacc 60

ttctcaaagc gcagaaatgg tttgctcaag aaagctttcg agctatctgt tctatgcgat 120

gctgaaatcg ctctcgtcat cttctccagc cgtggcaagc tttttcagta tagtagcact 180

gacattaaca gaatcattga gaagtatcgt caatgctgct tcaacatgtc tcagactggc 240

gatgtagctg aacatcaatc ggagcagtgc ttataccagg agcttttggt attaagagtc 300

aagcatgagt cactccagcg gactcaaagg aatcttctgg gagaagaact agagccactt 360

agcatgaaag aattgcatag tttagagaaa caactggata gaacgcttgc acaagctcgg 420

aagcacctga cacagaagct ggtatcacga attgacgaat tacatggaaa ggtgcatagc 480

ctggagcagg ctaacaagca tttggaatct caggaaagag gtaaatgtac ccagatttgt 540

gaaggttctc ctaatggcca tattttgcaa gataaacaag tcaatcagtt tgaatatgga 600

acagcaggtt cgtttcggct tcagcaagag caaactactg cttccaaagg aaaagaaata 660

gagacgatcg aggactggtt gaggccaaag cagtcataa 699

<210> 2

<211> 232

<212> PRT

<213> 大豆（Glycine max）

<400> 2

Met Gly Arg Gly Lys Val Val Leu Glu Arg Ile Gln Asn Lys Ile Asn

1 5 10 15

Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Leu Lys Lys Ala

20 25 30

Phe Glu Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Glu Ile Ala Leu Val Ile Phe

35 40 45

Ser Ser Arg Gly Lys Leu Phe Gln Tyr Ser Ser Thr Asp Ile Asn Arg

50 55 60

Ile Ile Glu Lys Tyr Arg Gln Cys Cys Phe Asn Met Ser Gln Thr Gly

65 70 75 80

Asp Val Ala Glu His Gln Ser Glu Gln Cys Leu Tyr Gln Glu Leu Leu

85 90 95

Val Leu Arg Val Lys His Glu Ser Leu Gln Arg Thr Gln Arg Asn Leu

100 105 110

Leu Gly Glu Glu Leu Glu Pro Leu Ser Met Lys Glu Leu His Ser Leu

115 120 125

Glu Lys Gln Leu Asp Arg Thr Leu Ala Gln Ala Arg Lys His Leu Thr

130 135 140

Gln Lys Leu Val Ser Arg Ile Asp Glu Leu His Gly Lys Val His Ser

145 150 155 160

Leu Glu Gln Ala Asn Lys His Leu Glu Ser Gln Glu Arg Gly Lys Cys

165 170 175

Thr Gln Ile Cys Glu Gly Ser Pro Asn Gly His Ile Leu Gln Asp Lys

180 185 190

Gln Val Asn Gln Phe Glu Tyr Gly Thr Ala Gly Ser Phe Arg Leu Gln

195 200 205

Gln Glu Gln Thr Thr Ala Ser Lys Gly Lys Glu Ile Glu Thr Ile Glu

210 215 220

Asp Trp Leu Arg Pro Lys Gln Ser

225 230

<210> 3

<211> 9415

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 3

catgccaacc acagggttcc cctcgggatc aaagtacttt gatccaaccc ctccgctgct 60

atagtgcagt cggcttctga cgttcagtgc agccgtcttc tgaaaacgac atgtcgcaca 120

agtcctaagt tacgcgacag gctgccgccc tgcccttttc ctggcgtttt cttgtcgcgt 180

gttttagtcg cataaagtag aatacttgcg actagaaccg gagacattac gccatgaaca 240

agagcgccgc cgctggcctg ctgggctatg cccgcgtcag caccgacgac caggacttga 300

ccaaccaacg ggccgaactg cacgcggccg gctgcaccaa gctgttttcc gagaagatca 360

ccggcaccag gcgcgaccgc ccggagctgg ccaggatgct tgaccaccta cgccctggcg 420

acgttgtgac agtgaccagg ctagaccgcc tggcccgcag cacccgcgac ctactggaca 480

ttgccgagcg catccaggag gccggcgcgg gcctgcgtag cctggcagag ccgtgggccg 540

acaccaccac gccggccggc cgcatggtgt tgaccgtgtt cgccggcatt gccgagttcg 600

agcgttccct aatcatcgac cgcacccgga gcgggcgcga ggccgccaag gcccgaggcg 660

tgaagtttgg cccccgccct accctcaccc cggcacagat cgcgcacgcc cgcgagctga 720

tcgaccagga aggccgcacc gtgaaagagg cggctgcact gcttggcgtg catcgctcga 780

ccctgtaccg cgcacttgag cgcagcgagg aagtgacgcc caccgaggcc aggcggcgcg 840

gtgccttccg tgaggacgca ttgaccgagg ccgacgccct ggcggccgcc gagaatgaac 900

gccaagagga acaagcatga aaccgcacca ggacggccag gacgaaccgt ttttcattac 960

cgaagagatc gaggcggaga tgatcgcggc cgggtacgtg ttcgagccgc ccgcgcacgt 1020

ctcaaccgtg cggctgcatg aaatcctggc cggtttgtct gatgccaagc tggcggcctg 1080

gccggccagc ttggccgctg aagaaaccga gcgccgccgt ctaaaaaggt gatgtgtatt 1140

tgagtaaaac agcttgcgtc atgcggtcgc tgcgtatatg atgcgatgag taaataaaca 1200

aatacgcaag gggaacgcat gaaggttatc gctgtactta accagaaagg cgggtcaggc 1260

aagacgacca tcgcaaccca tctagcccgc gccctgcaac tcgccggggc cgatgttctg 1320

ttagtcgatt ccgatcccca gggcagtgcc cgcgattggg cggccgtgcg ggaagatcaa 1380

ccgctaaccg ttgtcggcat cgaccgcccg acgattgacc gcgacgtgaa ggccatcggc 1440

cggcgcgact tcgtagtgat cgacggagcg ccccaggcgg cggacttggc tgtgtccgcg 1500

atcaaggcag ccgacttcgt gctgattccg gtgcagccaa gcccttacga catatgggcc 1560

accgccgacc tggtggagct ggttaagcag cgcattgagg tcacggatgg aaggctacaa 1620

gcggcctttg tcgtgtcgcg ggcgatcaaa ggcacgcgca tcggcggtga ggttgccgag 1680

gcgctggccg ggtacgagct gcccattctt gagtcccgta tcacgcagcg cgtgagctac 1740

ccaggcactg ccgccgccgg cacaaccgtt cttgaatcag aacccgaggg cgacgctgcc 1800

cgcgaggtcc aggcgctggc cgctgaaatt aaatcaaaac tcatttgagt taatgaggta 1860

aagagaaaat gagcaaaagc acaaacacgc taagtgccgg ccgtccgagc gcacgcagca 1920

gcaaggctgc aacgttggcc agcctggcag acacgccagc catgaagcgg gtcaactttc 1980

agttgccggc ggaggatcac accaagctga agatgtacgc ggtacgccaa ggcaagacca 2040

ttaccgagct gctatctgaa tacatcgcgc agctaccaga gtaaatgagc aaatgaataa 2100

atgagtagat gaattttagc ggctaaagga ggcggcatgg aaaatcaaga acaaccaggc 2160

accgacgccg tggaatgccc catgtgtgga ggaacgggcg gttggccagg cgtaagcggc 2220

tgggttgtct gccggccctg caatggcact ggaaccccca agcccgagga atcggcgtga 2280

cggtcgcaaa ccatccggcc cggtacaaat cggcgcggcg ctgggtgatg acctggtgga 2340

gaagttgaag gccgcgcagg ccgcccagcg gcaacgcatc gaggcagaag cacgccccgg 2400

tgaatcgtgg caagcggccg ctgatcgaat ccgcaaagaa tcccggcaac cgccggcagc 2460

cggtgcgccg tcgattagga agccgcccaa gggcgacgag caaccagatt ttttcgttcc 2520

gatgctctat gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg ccgttttccg 2580

tctgtcgaag cgtgaccgac gagctggcga ggtgatccgc tacgagcttc cagacgggca 2640

cgtagaggtt tccgcagggc cggccggcat ggccagtgtg tgggattacg acctggtact 2700

gatggcggtt tcccatctaa ccgaatccat gaaccgatac cgggaaggga agggagacaa 2760

gcccggccgc gtgttccgtc cacacgttgc ggacgtactc aagttctgcc ggcgagccga 2820

tggcggaaag cagaaagacg acctggtaga aacctgcatt cggttaaaca ccacgcacgt 2880

tgccatgcag cgtacgaaga aggccaagaa cggccgcctg gtgacggtat ccgagggtga 2940

agccttgatt agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg agtacatcga 3000

gatcgagcta gctgattgga tgtaccgcga gatcacagaa ggcaagaacc cggacgtgct 3060

gacggttcac cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc tctaccgcct 3120

ggcacgccgc gccgcaggca aggcagaagc cagatggttg ttcaagacga tctacgaacg 3180

cagtggcagc gccggagagt tcaagaagtt ctgtttcacc gtgcgcaagc tgatcgggtc 3240

aaatgacctg ccggagtacg atttgaagga ggaggcgggg caggctggcc cgatcctagt 3300

catgcgctac cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat gtacggagca 3360

gatgctaggg caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct ttcctgtgga 3420

tagcacgtac attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggaacccgt acattgggaa 3480

cccaaagccg tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa aagagaaaaa 3540

aggcgatttt tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa cccgcctggc 3600

ctgtgcataa ctgtctggcc agcgcacagc cgaagagctg caaaaagcgc ctacccttcg 3660

gtcgctgcgc tccctacgcc ccgccgcttc gcgtcggcct atcgcggccg ctggccgctc 3720

aaaaatggct ggcctacggc caggcaatct accagggcgc ggacaagccg cgccgtcgcc 3780

actcgaccgc cggcgcccac atcaaggcac cctgcctcgc gcgtttcggt gatgacggtg 3840

aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg 3900

ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggcgcagcca 3960

tgacccagtc acgtagcgat agcggagtgt atactggctt aactatgcgg catcagagca 4020

gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa 4080

ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg 4140

gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg 4200

ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa 4260

ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg 4320

acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc 4380

tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc 4440

ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc 4500

ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg 4560

ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc 4620

actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga 4680

gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc 4740

tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac 4800

caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg 4860

atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 4920

acgttaaggg attttggtca tgcattctag gtactaaaac aattcatcca gtaaaatata 4980

atattttatt ttctcccaat caggcttgat ccccagtaag tcaaaaaata gctcgacata 5040

ctgttcttcc ccgatatcct ccctgatcga ccggacgcag aaggcaatgt cataccactt 5100

gtccgccctg ccgcttctcc caagatcaat aaagccactt actttgccat ctttcacaaa 5160

gatgttgctg tctcccaggt cgccgtggga aaagacaagt tcctcttcgg gcttttccgt 5220

ctttaaaaaa tcatacagct cgcgcggatc tttaaatgga gtgtcttctt cccagttttc 5280

gcaatccaca tcggccagat cgttattcag taagtaatcc aattcggcta agcggctgtc 5340

taagctattc gtatagggac aatccgatat gtcgatggag tgaaagagcc tgatgcactc 5400

cgcatacagc tcgataatct tttcagggct ttgttcatct tcatactctt ccgagcaaag 5460

gacgccatcg gcctcactca tgagcagatt gctccagcca tcatgccgtt caaagtgcag 5520

gacctttgga acaggcagct ttccttccag ccatagcatc atgtcctttt cccgttccac 5580

atcataggtg gtccctttat accggctgtc cgtcattttt aaatataggt tttcattttc 5640

tcccaccagc ttatatacct tagcaggaga cattccttcc gtatctttta cgcagcggta 5700

tttttcgatc agttttttca attccggtga tattctcatt ttagccattt attatttcct 5760

tcctcttttc tacagtattt aaagataccc caagaagcta attataacaa gacgaactcc 5820

aattcactgt tccttgcatt ctaaaacctt aaataccaga aaacagcttt ttcaaagttg 5880

ttttcaaagt tggcgtataa catagtatcg acggagccga ttttgaaacc gcggtgatca 5940

caggcagcaa cgctctgtca tcgttacaat caacatgcta ccctccgcga gatcatccgt 6000

gtttcaaacc cggcagctta gttgccgttc ttccgaatag catcggtaac atgagcaaag 6060

tctgccgcct tacaacggct ctcccgctga cgccgtcccg gactgatggg ctgcctgtat 6120

cgagtggtga ttttgtgccg agctgccggt cggggagctg ttggctggct ggtggcagga 6180

tatattgtgg tgtaaacaaa ttgacgctta gacaacttaa taacacattg cggacgtttt 6240

taatgtactg aattaacgcc gaattaattc gggggatctg gattttagta ctggattttg 6300

gttttaggaa ttagaaattt tattgataga agtattttac aaatacaaat acatactaag 6360

ggtttcttat atgctcaaca catgagcgaa accctatagg aaccctaatt cccttatctg 6420

ggaactactc acacattatt atggagaaac tcgagtcaaa tctcggtgac gggcaggacc 6480

ggacggggcg gtaccggcag gctgaagtcc agctgccaga aacccacgtc atgccagttc 6540

ccgtgcttga agccggccgc ccgcagcatg ccgcgggggg catatccgag cgcctcgtgc 6600

atgcgcacgc tcgggtcgtt gggcagcccg atgacagcga ccacgctctt gaagccctgt 6660

gcctccaggg acttcagcag gtgggtgtag agcgtggagc ccagtcccgt ccgctggtgg 6720

cggggggaga cgtacacggt cgactcggcc gtccagtcgt aggcgttgcg tgccttccag 6780

gggcccgcgt aggcgatgcc ggcgacctcg ccgtccacct cggcgacgag ccagggatag 6840

cgctcccgca gacggacgag gtcgtccgtc cactcctgcg gttcctgcgg ctcggtacgg 6900

aagttgaccg tgcttgtctc gatgtagtgg ttgacgatgg tgcagaccgc cggcatgtcc 6960

gcctcggtgg cacggcggat gtcggccggg cgtcgttctg ggctcatggt agactcgaga 7020

gagatagatt tgtagagaga gactggtgat ttcagcgtgt cctctccaaa tgaaatgaac 7080

ttccttatat agaggaaggt cttgcgaagg atagtgggat tgtgcgtcat cccttacgtc 7140

agtggagata tcacatcaat ccacttgctt tgaagacgtg gttggaacgt cttctttttc 7200

cacgatgctc ctcgtgggtg ggggtccatc tttgggacca ctgtcggcag aggcatcttg 7260

aacgatagcc tttcctttat cgcaatgatg gcatttgtag gtgccacctt ccttttctac 7320

tgtccttttg atgaagtgac agatagctgg gcaatggaat ccgaggaggt ttcccgatat 7380

taccctttgt tgaaaagtct caatagccct ttggtcttct gagactgtat ctttgatatt 7440

cttggagtag acgagagtgt cgtgctccac catgttatca catcaatcca cttgctttga 7500

agacgtggtt ggaacgtctt ctttttccac gatgctcctc gtgggtgggg gtccatcttt 7560

gggaccactg tcggcagagg catcttgaac gatagccttt cctttatcgc aatgatggca 7620

tttgtaggtg ccaccttcct tttctactgt ccttttgatg aagtgacaga tagctgggca 7680

atggaatccg aggaggtttc ccgatattac cctttgttga aaagtctcaa tagccctttg 7740

gtcttctgag actgtatctt tgatattctt ggagtagacg agagtgtcgt gctccaccat 7800

gttggcaagc tgctctagcc aatacgcaaa ccgcctctcc ccgcgcgttg gccgattcat 7860

taatgcagct ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg gcagtgagcg caacgcaatt 7920

aatgtgagtt agctcactca ttaggcaccc caggctttac actttatgct tccggctcgt 7980

atgttgtgtg gaattgtgag cggataacaa tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat 8040

tacgaattcg ggggatctgg attttagtac tggattttgg ttttaggaat tagaaatttt 8100

attgatagaa gtattttaca aatacaaata catactaagg gtttcttata tgctcaacac 8160

atgagcgaaa ccctatagga accctaattc ccttatctgg gaactactca cacattatta 8220

tggagaaact cgagcttgca tgcctgcagg tcgactctag aggatccccg ggtaccgagc 8280

tcgcgaaagc tcgagagaga tagatttgta gagagagact ggtgatttca gcgtgtcctc 8340

tccaaatgaa atgaacttcc ttatatagag gaagggtctt gcgaaggata gtgggattgt 8400

gcgtcatccc ttacgtcagt ggagatatca catcaatcca cttgctttga agacgtggtt 8460

ggaacgtctt ctttttccac gatgctcctc gtgggtgggg gtccatcttt gggaccactg 8520

tcggcagagg catcttgaac gatagccttt cctttatcgc aatgatggca tttgtaggtg 8580

ccaccttcct tttctactgt ccttttgatg aagtgacaga tagctgggca atggaatccg 8640

aggaggtttc ccgatattac cctttgttga aaagtctcaa tagccctttg gtcttctgag 8700

actgtatctt tgatattctt ggagtagacg agagtgtcgt gctccaccat gttcacatca 8760

atccacttgc tttgaagacg tggttggaac gtcttctttt tccacgatgc tcctcgtggg 8820

tgggggtcca tctttgggac cactgtcggc agaggcatct tgaacgatag cctttccttt 8880

atcgcaatga tggcatttgt aggtgccacc ttccttttct actgtccttt tgatgaagtg 8940

acagatagct gggcaatgga atccgaggag gtttcccgat attacccttt gttgaaaagt 9000

ctcaatagcc ctttggtctt ctgagactgt atctttgata ttcttggagt agacgagagt 9060

gtcgtgctcc accatgttgg caagcttggc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg 9120

ggaaaaccct ggcgttaccc aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg 9180

gcgtaatagc gaagaggccc gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg 9240

cgaatgctag agcagcttga gcttggatca gattgtcgtt tcccgccttc agtttaaact 9300

atcagtgttt gacaggatat attggcgggt aaacctaaga gaaaagagcg tttattagaa 9360

taacggatat ttaaaagggc gtgaaaaggt ttatccgttc gtccatttgt atgtg 9415

Claims (5)

1.蛋白质在促进植物开花中的应用；

所述蛋白质是如下A1）或A2）的蛋白质：

A1）氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白质；

A2）在A1）的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质；

所述植物为大豆或拟南芥。

2.与权利要求1中所述蛋白质相关的生物材料在促进植物开花中的应用；

所述生物材料为下述B1）至B7）中的任一种：

B1）编码权利要求1中所述蛋白质的核酸分子；

B2）含有B1）所述核酸分子的表达盒；

B3）含有B1）所述核酸分子的重组载体、或含有B2）所述表达盒的重组载体；

B4）含有B1）所述核酸分子的重组微生物、或含有B2）所述表达盒的重组微生物、或含有B3）所述重组载体的重组微生物；

B5）含有B1）所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2）所述表达盒的转基因植物细胞系；

B6）含有B1）所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2）所述表达盒的转基因植物组织；

B7）含有B1）所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2）所述表达盒的转基因植物器官；

所述植物为大豆或拟南芥。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：B1）所述核酸分子为如下b1）或b2)所示的所述蛋白质的编码基因：

b1）编码链的编码序列是序列表中序列1的核苷酸的DNA分子；

b2）核苷酸是序列表中序列1的DNA分子。

4.一种促进植物开花的方法，包括增强或提高目的植物中权利要求1中所述蛋白质的活性或/和权利要求1中所述蛋白质的编码基因的表达量，从而促进目的植物开花；

所述植物为大豆或拟南芥。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述增强或提高目的植物中权利要求1中所述蛋白质的活性或/和权利要求1中所述蛋白质的编码基因的表达量是通过将权利要求1中所述蛋白质的编码基因导入所述目的植物实现的。

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