CN112773791B - 一种s1p抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用 - Google Patents

一种s1p抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112773791B
CN112773791B CN202110177193.8A CN202110177193A CN112773791B CN 112773791 B CN112773791 B CN 112773791B CN 202110177193 A CN202110177193 A CN 202110177193A CN 112773791 B CN112773791 B CN 112773791B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mptp
inhibitor
neurodegenerative diseases
application
motor symptoms
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110177193.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112773791A (zh
Inventor
牛海晨
陈闯
张忠海
徐洲
王德广
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xuzhou Medical University
Original Assignee
Xuzhou Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xuzhou Medical University filed Critical Xuzhou Medical University
Priority to CN202110177193.8A priority Critical patent/CN112773791B/zh
Publication of CN112773791A publication Critical patent/CN112773791A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112773791B publication Critical patent/CN112773791B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种S1P抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用，S1P抑制剂通过抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的激活，防止多巴胺能神经元丢失和神经炎症联级反应的发生；并通过保护多巴胺能神经元、增加酪氨酸羟化酶恢复多巴胺的正常分泌水平，从而改善运动性症状和非运动性症状，具有制备治疗神经退行性疾病药物的潜能。

Description

一种S1P抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用
技术领域
本发明属于治疗神经退行性疾病药物领域，尤其涉及一种S1P抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。
背景技术
帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是第二大常见的神经退行性疾病，PD的主要临床病理特征是黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元的丢失和以α-突触核蛋白为主要成分的路易氏小体的存在。PD的临床表现一般分为运动性症状和非运动性症状，运动性症状包括静止性震颤，肌肉僵直，运动迟缓，慌张步态等，同时非运动性症状表现出嗅觉异常、精神认知障碍、抑郁和胃肠功能障碍等。
目前对于PD的治疗，临床上主要使用多巴胺制剂、抑制多巴胺降解药物或多巴胺受体激动剂使脑内多巴胺相对增多，但均只能暂时缓解症状，不能延缓多巴胺能神经元的退化。随着服药时间延长，药物有效率下降同时也加重相关脏器的毒副作用。因此探索新的治疗靶点和替代疗法，寻找新的非多巴胺能的药物已经成为治疗PD的研究热点。
已有文献报道在MPTP（1-甲基-4-苯基-l、2、3、6-四氢吡啶）诱导的PD模型小鼠的黑质中小胶质细胞活化明显增强，小胶质细胞激活和神经炎症的关联可能是帕金森病多巴胺能神经元丢失的关键调节因子。因此，可以从抑制小胶质细胞激活、防止多巴胺能神经元丢失的通路探索非多巴胺能的药物。S1P抑制剂已被用作治疗多发性硬化症的药物，关于其在血管类疾病中的作用也有所报道，而作为制备治疗帕金森病药物的应用还未被报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种S1P抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用，用于防止多巴胺能神经元丢失和神经炎症联级反应的发生，并改善运动性症状和非运动性症状。
本发明通过以下技术方案实现：一种S1P抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。
优选的，所述S1P抑制剂通过抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的激活，防止多巴胺能神经元丢失和神经炎症联级反应的发生。
优选的，所述S1P抑制剂通过保护多巴胺能神经元、增加酪氨酸羟化酶恢复多巴胺的正常分泌水平，从而改善运动性症状和非运动性症状。
优选的，所述S1P抑制剂为PF429242（4-[(二乙基氨基)甲基]-N-[2-(2-甲氧基苯基)乙基]-N-(3R)-3-吡咯烷基苯甲酰胺），结构式如下：
Figure 121772DEST_PATH_IMAGE001
。
优选的，所述神经退行性疾病为阿尔茨海默病或帕金森病。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明将S1P抑制剂应用于制备治疗神经退行性疾病药物，通过保护多巴胺能神经元、增加酪氨酸羟化酶恢复多巴胺的正常分泌水平，克服多巴胺类药物不能延缓多巴胺能神经元的退化的问题；并通过抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的激活，防止多巴胺能神经元丢失和神经炎症联级反应的发生，进一步保护多巴胺能神经元，具有制备治疗神经退行性疾病帕金森病药物的潜能。
附图说明
图1为实施例1中MPP+和PF429242浓度对SH-SY5Y细胞吸光度的影响；
图2为实施例2中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组转棒试验结果；
图3为实施例2中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组平衡木实验结果；
图4为实施例3中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组脑组织切片中神经元（NeuN标记）、酪氨酸羟化酶（TH标记）染色图；
图5为实施例3中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组TH染色细胞数量图；
图6为实施例3中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组TH和NeuN染色细胞数量图；
图7为实施例4中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组脑组织切片中小胶质细胞（IBA1标记）活化状态（CD11b标记）染色图；
图8为实施例4中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组活化状态小胶质细胞数量图；
图9为实施例5中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组脑组织切片中星形胶质细胞（GFAP标记）染色图；
图10为实施例5中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组星形胶质细胞数量图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明技术方案作进一步说明。
实施例1 细胞实验
将SH-SY5Y细胞按细胞密度为 1×104每孔接种于 96 孔板，设置7组（n=6）。待细胞贴壁后，Control组不作处理，MPP+组仅加入1mM MPP+，PF组分别加入1mM MPP+和不同浓度（1μl、2μl、3μl、3.5μl、4μl）的PF429242，培养48h。采用CCK-8 法检测细胞毒性，ELx800UV酶标仪在波长450 nm处检测吸光度（OD）值，反映活细胞数量。
结果如图1所示，在具有成熟神经元形态和生化特征的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中，加入1mM具有神经毒性的MPTP代谢产物MPP+（甲基-苯基吡啶离子）使细胞吸光度显著降低，说明SH-SY5Y或细胞的数量减少，MPP+具有显著细胞毒性。而加入MPP+和1~4μlPF429242的SH-SY5Y细胞吸光度较只加MPP+的细胞吸光度明显增强，恢复Control组正常水平，表明PF429242抑制MPP+对于SH-SY5Y的细胞毒性，具有保护SH-SY5Y细胞的作用。
实施例2动物实验
将6周龄雄性C57BL/6 小鼠32只分为四组（n=8），分别为Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组，安静环境下饲养，自由饮水取食。1周后， MPTP组按25mg/kg的剂量腹腔注射MPTP溶液（6.25mg/ml）2周（注射频率为每天一次）；MPTP+PF429242组按25mg/kg的剂量腹腔注射MPTP溶液（6.25mg/ml）的同时腹腔注射150ul的PF429242（0.125g/L）；MPTP+Saline组按25mg/kg的剂量腹腔注射MPTP溶液（6.25mg/ml）的同时腹腔注射150ul的生理盐水。分别进行转棒实验和平衡木实验来评估四组小鼠的抑郁情况和运动能力，结果如图2和图3所示。
图2和图3结果表明，MPTP、MPTP+Saline组小鼠会出现震颤、竖尾、竖毛、运动迟缓、步态不稳、肢体僵硬、活动明显减少等现象，在转棒上时间明显减少以及穿过平衡木的时间明显延长。而MPTP+PF429242组小鼠的转棒实验和平衡木实验结果与Control组相当，说明PF429242具有改善PD运动能力缺陷的作用。
实施例3 形态学实验-神经元细胞
将实施例2中Control、MPTP、MPTP+Saline、MPTP+PF429242组小鼠分别称重，根据体重计算 1%戊巴比妥钠（0.01ml/g）用量，然后腹腔注射进行麻醉。打开胸腹充分暴露心脏、肝脏，用镊子将心包膜打开，将灌注针***左心室并固定，打开灌注泵开关，同时剪开右心耳。先灌注 4ºC 预冷的 0.9% NaCl，至肝脏逐渐变白色、右心耳流出清亮液体为止，再灌注 4℃预冷的多聚甲醛固定液。固定液进入血管后，小鼠的四肢、尾巴开始抽搐，表明灌注液入脑，待抽动停止，全身组织器官***后即可停止灌注。小鼠断头取脑，将脑组织仔细完整分离，分组标记，放入4%多聚甲醛固定液后固定，4℃冰箱过夜。
将鼠脑从后固定液取出，用滤纸吸去表面残液，转移入 20% 蔗糖溶液，4℃过夜。第二日移入 30% 蔗糖溶液，4℃沉糖，待脑组织沉底后移入新 30%蔗糖溶液待用。将脑组织从蔗糖取出，用滤纸吸干表面液体，OCT包埋后，用冰冻切片机进行连续冠状位切片，疏水性粘附载玻片贴片，按照贴片顺序放入切片盒内，于-20℃保存，制得冷冻切片。
冷冻切片免疫荧光染色：冰冻切片37℃复温30min，PBS清洗。PBS稀释山羊血清原液，并加入TritonX-100，混匀后覆盖脑片，室温封闭1h，甩掉多余液体。稀释TH、NeuN一抗(1:400)，混匀后覆盖脑片，4℃孵育过夜。将一抗孵育后切片于37℃复温30 min，PBS清洗。稀释荧光二抗，混匀后覆盖脑片，室温孵育2h后，PBS清洗。孵育DAPI染色液，室温15 min，PBS清洗。抗荧光淬灭剂封片，使用显微镜观察、拍照。结果如图4至图6所示。
图4至图6结果表明，MPTP、MPTP+Saline组小鼠脑组织中神经元损伤、数量减少，多巴胺合成限速酶酪氨酸羟化酶数量相应减少，造成多巴胺分泌不足，影响黑质纹状体通路的作用，从而造成了小鼠的运动能力缺陷。而PF429242抑制了MPTP对于神经元的损害，恢复了酪氨酸羟化酶的数量，有利于恢复多巴胺的正常分泌水平，恢复正常运动能力。
实施例4 形态学实验-小胶质细胞
实施例4与实施例3的区别在于冷冻切片免疫荧光染色中，所用一抗为IBA1(1:400)、CD11b(1:200)。结果如图7、图8所示。
图7和图8结果表明，MPTP、MPTP+Saline组小鼠脑组织中小胶质细胞高度激活，激活状态小胶质细胞数量为MPTP+PF429242组和Control组的2~3倍。可能与受损或死亡的神经元释放损伤相关分子模式和α-突触核蛋白，通过模式识别受体激活小胶质细胞有关。被持续激活的小胶质细胞会增加IL-1β、IL-18、TNF-α等促炎细胞因子的释放，而促炎细胞因子水平的升高会继续激活其他静息状态下的小胶质细胞，从而在受损区域诱发神经炎症或神经变性。而PF429242抑制了小胶质细胞的激活，从而抑制PD的神经炎症反应。
实施例5 形态学实验-星形胶质细胞
实施例5与实施例3的区别在于冷冻切片免疫荧光染色中，所用一抗为GFAP(1:400)。结果如图9、图10所示。
图9和图10结果表明，MPTP、MPTP+Saline组小鼠脑组织中星形胶质细胞高度激活，激活状态星形胶质细胞数量为MPTP+PF429242组和Control组的2~3倍。激活的星形胶质细胞参与神经退行性帕金森病的神经炎症反应。而PF429242抑制了星形胶质细胞的激活，从而抑制PD的神经炎症反应。

Claims (1)

1.一种S1P抑制剂在制备治疗帕金森病药物中的应用，其特征在于，所述S1P抑制剂为PF429242（4-[(二乙基氨基)甲基]-N-[2-(2-甲氧基苯基)乙基]-N-(3R)-3-吡咯烷基苯甲酰胺），结构式如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
；
所述S1P抑制剂通过抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的激活，防止多巴胺能神经元丢失和神经炎症联级反应的发生，通过保护多巴胺能神经元、增加酪氨酸羟化酶恢复多巴胺的正常分泌水平，从而改善运动性症状和非运动性症状。
CN202110177193.8A 2021-02-07 2021-02-07 一种s1p抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用 Active CN112773791B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110177193.8A CN112773791B (zh) 2021-02-07 2021-02-07 一种s1p抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110177193.8A CN112773791B (zh) 2021-02-07 2021-02-07 一种s1p抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112773791A CN112773791A (zh) 2021-05-11
CN112773791B true CN112773791B (zh) 2022-09-23

Family

ID=75761358

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110177193.8A Active CN112773791B (zh) 2021-02-07 2021-02-07 一种s1p抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112773791B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102659657A (zh) * 2012-04-24 2012-09-12 徐州医学院 一种蛋白酶抑制剂pf429242的合成方法
WO2013113107A1 (en) * 2012-02-03 2013-08-08 University Health Network Methods for promoting neuron survival, axonal growth and/or regeneration

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111481540B (zh) * 2020-04-20 2021-03-16 徐州医科大学 Pf429242在制备用于预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤的药物中的用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013113107A1 (en) * 2012-02-03 2013-08-08 University Health Network Methods for promoting neuron survival, axonal growth and/or regeneration
CN102659657A (zh) * 2012-04-24 2012-09-12 徐州医学院 一种蛋白酶抑制剂pf429242的合成方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN112773791A (zh) 2021-05-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2414904C2 (ru) ЗАЩИТНОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ НЕЙРОНА СЕТЧАТКИ, СОДЕРЖАЩЕЕ В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА ПРОИЗВОДНОЕ ПРОСТАГЛАНДИНА F2α
US20220184075A1 (en) Pharmaceutical composition containing hdac6 inhibitor as active ingredient for prevention or treatment of itching
WO2001015717A1 (fr) Agents contenant du ginseng destines a proteger les cellules cerebrales ou les cellules nerveuses
US6165515A (en) Method for treatment of osteoporosis
JP2007529555A (ja) シヌクレイノパチーを治療する方法
KR20010032357A (ko) 신경 퇴화의 예방 및 신경 재생의 촉진을 위한 치환된아미노메틸 크로만의 용도
US20240197788A1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating parkinson's disease, and preparation method thereof
JP6959371B2 (ja) 純粋な５−ｈｔ６受容体アンタゴニストの新たな使用
US20240091227A1 (en) Use Of 2-Phenyl-6-(1H-Imidazol-1-YL) Quinazoline For Treating Neurodegenerative Diseases, Preferably Alzheimer's Disease
CN112773791B (zh) 一种s1p抑制剂在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用
EP3458040B1 (en) Combination of pure 5-ht6 receptor antagonists with nmda receptor antagonist
CN114010631B (zh) 含笑内酯及其衍生物在创伤性颅脑损伤治疗中的应用
JP7144052B2 (ja) 掻痒性皮膚疾患の予防又は治療薬
JP2002322092A (ja) Ｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸（ｎｍｄａ）アンタゴニストの予防的使用
US20040248984A1 (en) Use of $g(b)-adrenoceptor agonists for the treatment of neurodegenerative diseases
RU2716258C1 (ru) Пептидный антагонист нмда-рецептора
JP2001139483A (ja) 薬用人蔘からなる脳細胞または神経細胞保護剤
KR20210148802A (ko) 우황청심환을 포함하는 파킨슨 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물
Spiegel et al. Role of the caudate nucleus in Parkinsonian bradykinesia
CN115461051A (zh) 药学组合物及其于治疗帕金森氏症的用途
JP6266666B2 (ja) 医薬組成物および血管新生に関係する眼疾患の治療方法
KR102633592B1 (ko) 자폐 스펙트럼 장애의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이를 이용한 자폐 스펙트럼 장애 치료방법
JP2010513258A (ja) メラノコルチン受容体リガンドとしての新規アミノグアニジン
Pang et al. Research Article Investigation into Antiepileptic Effect of Ganoderic Acid A and Its Mechanism in Seizure Rats Induced by Pentylenetetrazole
CN116987091A (zh) 用于治疗癫痫发作疾病的药物及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant