CN112725327A - 细胞固定化载体的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细胞固定化载体的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：将海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；其中，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比为1：2～10；向所述载体溶液中添加硅藻土，混合均匀，逐滴挤压所述凝胶混合液至持续搅拌状态的交联溶液中固化，形成凝珠，洗涤凝珠并于‑25至‑15℃温度下冷冻交联，解冻后即得到细胞固定化载体。本发明还公开了一种假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法。本发明采用海藻酸钠溶液和聚乙烯醇复合包埋菌体细胞，能够显著提升发酵产物槐糖脂的产量，且包埋载体中还添加无机材料，提升载体的溶胀性、机械强度和相对传质性能，进一步提高槐糖脂的产量。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其涉及一种细胞固定化载体的制备方法及假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法。
背景技术
随着人们对环保意识的提高，生物表面活性剂凭借其低毒、可降解、环境友好等特性进入了研究者的视野。生物表面活性剂市场到2022年预计达到172.7亿美元，在2017年至2022年之间的复合年增长率为5.1％。槐糖脂作为一种生物表面活性剂，具有良好的增溶、乳化、润湿、发泡、分散、降低表面张力等化学表面活性剂通用性能，在石油工业、土壤修复、食品工业、化妆品、洗涤剂以及药学领域都得到了一定的应用，而且在抑菌抗癌等方面也被证实有巨大的潜在价值；虽然槐糖脂的广泛用途吸引了众多研究者和企业对其产生兴趣，但是相对高的生产成本仍是阻碍其进一步推广应用的主要问题。
槐糖脂主要是由非致病性酵母菌分泌的一类混合物，通常由复杂的同系物组成。槐糖脂是次级代谢产物，当氮源耗尽，培养基中达到较高的C/N比，槐糖脂开始合成，并且不与细胞生长相关。目前补料分批发酵是生产槐糖脂最常用的发酵工艺，因为可以缓解初始高糖和高油含量对槐糖脂发酵的抑制。在产槐糖脂的分批发酵中，发酵液的组分复杂，包括固体槐糖脂结晶、液体槐糖脂、疏水性底物、亲水性底物以及菌体，往往发酵在一到两周后开始变的粘稠，溶氧降低，生物反应器的能耗增加，且会有产物抑制的现象。
固定化细胞技术可以提高菌体的耐受性，实现高密度发酵并且便于将菌体与产物分离，容易建立高稀释率的连续细胞培养过程，降低成本。因此，亟需提供一种细胞固定化载体及其应用，采用海藻酸钠溶液和聚乙烯醇复合载体包埋菌体，可以有效地缓解产物抑制现象，克服这种发酵液组分复杂所出现的一系列问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种细胞固定化载体的制备方法及假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，可以提升槐糖脂的产量，避免因发酵液组分复杂和浓度变高而造成的槐糖脂产量降低的问题。
为了实现上述目的，本发明采取了以下技术方案。
本发明提供了一种细胞固定化载体的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
将海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；其中，所述海藻酸钠(SA)和所述聚乙烯醇(PVA)的质量比为1：2～10；
向所述载体溶液中添加硅藻土，混合均匀，逐滴挤压所述凝胶混合液至持续搅拌状态的交联溶液中固化，形成凝珠，洗涤凝珠并于-25至-15℃温度下冷冻交联，解冻后即得到细胞固定化载体；其中，所述交联溶液为1.5～2.5％的氯化钙溶液。
在一些实施例中，所述冷冻交联的时间为12～20h。
在一些实施例中，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比为1：10。
在一些实施例中，所述交联溶液为2％的氯化钙溶液。
在一些实施例中，所述海藻酸钠溶液的浓度为2％。
在一些实施例中，向所述载体溶液中添加1.5％的硅藻土。
在一些实施例中，所述固化时间为1～6小时。
在一些实施例中，所述固化时间为2小时。
在一些实施例中，所述凝珠的直径为2mm。
本发明还提供一种假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，包括：
步骤一、将菌体细胞包埋至所述的细胞固定化载体中制得固定化细胞：
步骤二、将步骤一得到的固定化细胞接种至发酵培养基中发酵培养。
在一些实施例中，所述固定化细胞的制备步骤包括：
将海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；其中，所述海藻酸钠溶液的浓度为2％，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比为1：2～10；
将所述载体溶液与菌悬液混合，添加1.5％的硅藻土，混合均匀，得到凝胶混合液；其中，每毫升所述凝胶混合液中的包埋菌体量为6×107个；其中，所述载体溶液与所述菌悬液按照7：1的比例混合；
将所述凝胶混合液逐滴挤压至持续搅拌状态的交联溶液(2％的氯化钙溶液)中固化，固化时间为1～6小时，得到若干包埋菌体的凝胶小球，洗涤并于-25至-15℃温度下冷冻交联，解冻后即得到固定化细胞；其中所述凝胶小球的直径为2mm。
在一些实施例中，所述固化时间为2小时。
在一些实施例中，所述冷冻交联的时间为16h。
在一些实施例中，所述菌悬液的制备步骤包括：
选取假丝酵母(Candida bombicola)ATCC 22214菌株；
种子培养：将所述假丝酵母的菌种接种至种子培养基中，在转速为220rpm、培养温度为25℃条件下进行种子培养，种子培养48小时后，对发酵液进行离心得到菌体并用Tris-HCl缓冲液洗涤，将洗涤后的菌体配制成菌悬液，备用。
在一些实施例中，所述发酵培养的具体操作如下：
将所述固定化细胞接种至发酵培养基中，在转速为220rpm、培养温度为25℃条件下进行发酵培养72小时，得到产物槐糖脂。
在一些实施例中，所述种子培养基包含葡萄糖、玉米浆、(NH4)2SO4、KH2PO4和MgSO4·7H2O。
在一些实施例中，所述种子培养基包含：50g/L葡萄糖、10g/L玉米浆、4g/L(NH4)2SO4、1g/L KH2PO4和0.5g/L MgSO4·7H2O。
在一些实施例中，所述发酵培养基包含葡萄糖、玉米浆、(NH4)2SO4、KH2PO4和MgSO4·7H2O。
在一些实施例中，所述发酵培养基包含：150g/L葡萄糖、10g/L玉米浆、4g/L(NH4)2SO4、1g/L KH2PO4和0.5g/L MgSO4·7H2O。
本发明的有益效果在于：
本发明的细胞固定化载体，采用海藻酸钠-聚乙烯醇复合载体包埋菌体实现细胞的固定化，能够显著提升发酵产物槐糖脂的产量，并且载体中还添加无机材料硅藻土，使得载体的溶胀率、相对机械强度和相对传质都具有明显的提升，保证了固定化细胞对底物和氧气的利用以及产物的排出，缓解了发酵后期因发酵液中槐糖脂浓度过高而造成的产物抑制现象，进一步提升了槐糖脂的产量，效果显著。根据具体实施方法中的内容可知，本发明的菌体细胞载体的直径为2毫米、海藻酸钠和聚乙烯醇按照一定的比例复合、包埋量以及无机材料的添加量的共同条件下，槐糖脂产量达到了35.9g/L。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明试验例1中的电镜照片一，其中A为实施例1的载体电镜照片，B为对比例1中载体的电镜照片。
图2为本发明试验例1中的电镜照片二，其中C为实施例2中凝胶小球发酵72h后载体内部的电镜照片，D为对比例2中凝胶小球发酵72h后载体内部的电镜照片。
图3为本发明试验例3中载体的溶胀率、相对机械强度和相对传质的对比图。
图4为本发明试验例4中发酵参数数据图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本专利文档中，下文论述的附图以及用来描述本发明公开的原理的各实施例仅用于说明，而不应解释为限制本发明公开的范围。所属领域的技术人员将理解，本发明的原理可在任何适当布置的***中实施。
本发明实施例提供一种细胞固定化载体的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
将海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；
向所述载体溶液中添加硅藻土(Diatomite)，混合均匀，逐滴挤压所述凝胶混合液至持续搅拌状态的交联溶液中固化，形成凝珠，洗涤凝珠并于-25至-15℃温度下冷冻交联，后解冻即得到细胞固定化载体。
本发明中，所述海藻酸钠(SA)和所述聚乙烯醇(PVA)的质量比为1：2～10。例如，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比可以为1：2、1：3、1：5、1：8或1：10。
本发明中，所述交联溶液为1.5～2.5％的氯化钙溶液。例如，所述交联溶液为1.5％、2％或2.5％的氯化钙溶液。
本发明中，所述海藻酸钠溶液的浓度可以为2％。
本发明中，向所述载体溶液中添加1.5％的硅藻土。
本发明中，所述固化时间为1～6小时；例如，所述固化时间可以为1小时、2小时、3小时、4小时或6小时。
本发明中，所述凝珠的直径可以为2mm。
本发明中，所述冷冻交联的温度可以为-25℃、-23℃、-20℃、-18℃或-15℃。
本发明中，所述冷冻交联的时间为12～20h。例如，所述冷冻交联的时间可以12h、14h、16h、18h或20h。
本发明实施例还提供一种假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，所述方法包括：
步骤一、将菌体细胞包埋至上述的细胞固定化载体中制得固定化细胞；
步骤二、将步骤一得到的固定化细胞接种至发酵培养基中发酵培养。
具体地，所述固定化细胞的制备步骤包括：
将海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；其中，所述海藻酸钠溶液的浓度为2％，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比为1：2～10；
将所述载体溶液与菌悬液混合，添加1.5％的硅藻土，混合均匀，得到凝胶混合液；其中，每毫升所述凝胶混合液中的包埋菌体量为6×107个；其中，所述载体溶液与所述菌悬液按照7：1的比例混合；
用蠕动泵挤压将所述凝胶混合液逐滴滴入到持续搅拌状态的交联溶液(2％的氯化钙溶液)中固化，固化时间为1～6小时，得到若干包埋菌体的凝胶小球，洗涤并于-25至-15℃温度下冷冻交联，后解冻即得到固定化细胞；其中，所述凝胶小球的直径为2mm。
在一些实施例中，所述菌悬液的制备步骤包括：
选取假丝酵母(Candida bombicola)ATCC 22214菌株；
种子培养：将所述假丝酵母的菌种接种至种子培养基中，在转速为220rpm、培养温度为25℃条件下进行种子培养，种子培养48小时后，对发酵液进行离心得到菌体并用Tris-HCl缓冲液洗涤，将洗涤后的菌体配制成菌悬液，备用。
在一些实施例中，所述发酵培养的具体操作如下：将所述固定化细胞接种至发酵培养基中，在转速为220rpm、培养温度为25℃条件下进行发酵培养72小时，得到产物槐糖脂。
所述种子培养基包含葡萄糖、玉米浆、(NH4)2SO4、KH2PO4和MgSO4·7H2O。具体地，所述种子培养基包含：50g/L葡萄糖、10g/L玉米浆、4g/L(NH4)2SO4、1g/L KH2PO4和0.5g/LMgSO4·7H2O。
所述发酵培养基包含葡萄糖、玉米浆、(NH4)2SO4、KH2PO4和MgSO4·7H2O。具体地，所述发酵培养基包含：150g/L葡萄糖、10g/L玉米浆、4g/L(NH4)2SO4、1g/L KH2PO4和0.5g/LMgSO4·7H2O。
(1)所述细胞固定化载体性能的分析测定：
采用三个指标评价空载体的性能，分别是相对传质(RMT)、相对机械强度(RMS)和溶胀率(SR)：
①相对传质的测定步骤为：取一定质量制备好的空载体(凝珠)投入到装有初始浓度C0为80g/L的葡萄糖溶液的摇瓶中，放入摇床220rpm振荡1h，用SBA测出剩余葡萄糖浓度C。
相对传质的计算公式：RMT＝(C0-C)/C0×100％
②相对机械强度的测定步骤：将等质量的凝珠加入到注射器中，挤压至不能发生形变，记录刻度L，初始刻度为L0。
相对机械强度的计算公式：RMS＝L/L0×100％
③溶胀率：凝珠溶胀平衡时用滤纸吸干凝珠表面的水分并称重。
溶胀率的计算公式：SR＝(Mw-Ms)/Ms
Mw：溶胀平衡后凝胶球的质量(g)；Ms：干燥凝胶球的质量(g)。
④扫描电镜：将载体冷冻干燥后镀金用常温扫描电镜观察表面及内部结构。
(2)发酵过程参数的分析测定：
发酵过程的参数主要涉及到残糖、残油、槐糖脂及细胞干重。
残糖采用的DNS法测定。
残油和槐糖脂采用的是萃取法，分别用正己烷和乙酸乙酯对发酵液样品进行萃取。萃取后的样品用乙醇洗涤三次倒掉上清烘至恒重测定干重。
凝珠内的细胞干重测定是先将凝珠用柠檬酸钠溶液溶解，再离心烘至恒重。
实施例1：
一种细胞固定化载体的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
将2％的海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；其中，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比为1：10；
向所述载体溶液中添加1.5％的硅藻土，混合均匀，逐滴挤压所述凝胶混合液至持续搅拌状态的交联溶液中固化2小时，形成凝珠，洗涤凝珠并放入-20℃冰箱冷冻交联16h，解冻后即得到细胞固定化载体；其中，所述交联溶液为2％的氯化钙溶液；所述凝珠的直径为2mm。
实施例2：
一种假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，所述方法包括：
步骤一、将菌体细胞包埋至所述的细胞固定化载体中制得固定化细胞：
将2％的海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；其中，所述海藻酸钠溶液的浓度为；其中，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比为1：10；
将所述载体溶液与菌悬液按照7：1的比例混合混合均匀，添加1.5％的硅藻土，混合均匀得到凝胶混合液；其中，每毫升所述凝胶混合液中的包埋菌体量为6×107个；
将所述凝胶混合液逐滴挤压至持续搅拌状态的交联溶液(2％的氯化钙溶液)中固化，固化时间为2小时，得到若干包埋菌体的凝胶小球，洗涤并放入-20℃冰箱冷冻交联16h，解冻后即得到固定化细胞；其中，所述凝胶小球的直径为2mm；
步骤二、将步骤一得到的固定化细胞接种至发酵培养基中发酵培养：
将所述固定化细胞接种至发酵培养基中，在转速为220rpm、培养温度为25℃条件下进行发酵培养72小时，得到产物槐糖脂。
本实施例中，所述菌悬液的制备步骤包括：
选取假丝酵母(Candida bombicola)ATCC 22214菌株；
种子培养：将所述假丝酵母的菌种接种至种子培养基中，在转速为220rpm、培养温度为25℃条件下进行种子培养，种子培养48小时后，对发酵液进行离心得到菌体并用Tris-HCl缓冲液洗涤，将洗涤后的菌体配制成菌悬液，备用。
本实施例中，所述种子培养基包含：50g/L葡萄糖、10g/L玉米浆、4g/L(NH4)2SO4、1g/L KH2PO4和0.5g/L MgSO4·7H2O。所述发酵培养基包含：150g/L葡萄糖、10g/L玉米浆、4g/L(NH4)2SO4、1g/L KH2PO4和0.5g/L MgSO4·7H2O。
对比例1：
对比例1与实施例1相比，区别仅在于：对比例1的方法中不添加硅藻土，其他步骤与实施例1相同。
对比例2：
对比例2与实施例2相比，区别仅在于：对比例2的方法中不添加硅藻土，其他步骤与实施例2相同。
试验例1：
分别对实施例1和对比例1中的凝珠(即细胞固定化载体)、实施例2和对比例2中发酵72h后的包埋菌体的凝胶小球(即固定化细胞)进行电镜观察。
图1是添加硅藻土前后载体的电镜照片，其中图1中A为实施例1的载体电镜照片，图1中B为对比例1中载体的电镜照片。图1中A和B是观察载体的表面，可以看出添加了硅藻土的载体表面有很多细密的孔洞。
图2中C为实施例2中凝胶小球发酵72h后载体内部的电镜照片，图2中D为对比例2中凝胶小球发酵72h后载体内部的电镜照片。通过观察可知：C中载体内部有一些突起，推测是酵母被包埋在载体的内部；D是添加硅藻土发酵72h的载体内部，观察到酵母吸附在载体表面，也有一些嵌在载体的内部，肉眼可见酵母的数量比没有添加硅藻土的载体多。根据对比可以证明本发明载体可以有效固定细胞使其发酵效率更高，进而提升槐糖脂产量。
试验例2：
分别对实施例2和对比例2发酵生产的槐糖脂进行测定，可知实施例2中槐糖脂产量高达35.9g/L；而对比例2中的槐糖脂产量为27.3g/L，明显小于本发明实施例2中的槐糖脂产量。对比可知本发明的方法能够有效提升槐糖脂的产量，效果显著。
试验例3：
本试验例将实施例1中的空载体(PVA-SA-Diatomite)作为实验组，以对比例1中的不添加无机材料硅藻土的空载体(PVA-SA)为一个对照组，同时，以添加活性炭(PVA-SA-Activated carbon)、碳酸钙(PVA-SA-CaCO3)及疏水二氧化硅(PVA-SA-SiO2)三种无机材料的载体作为其他对照组，在相同的条件下对上述几种载体进行机械强度(RMS)、传质(RMT)和溶胀率(SR)的性能测定，记录实验结果，详见图3所示。
图3是加入无机材料后载体的溶胀率、相对机械强度和相对传质的对比图。
根据图3可知，添加活性炭的载体的相对机械强度和相对传质都有一个明显的上升，但是溶胀率也增大，高分子聚合物在溶剂中发生膨胀会导致机械强度降低，不利于固定化细胞的重复利用。碳酸钙及疏水二氧化硅对于载体的溶胀率都起到正向的效果，但是对于传质和机械性能与对照组无显著性差异。
而本发明中添加硅藻土既可以降低载体的溶胀率，又能够提高传质和机械性能，可见其对于载体的溶胀率、相对机械强度和相对传质三种性能都有一定的提升。溶胀性和机械强度是决定固定化细胞能否长期利用进行槐糖脂的生产，相对传质的高低影响着固定化细胞对底物和氧气的利用以及产物的排出。降低溶胀率还有利于提高凝珠利用时间。因此，本发明将硅藻土添加到复合包埋的载体中，能够保证细胞后期的发酵性能，进而提升产物槐糖脂的产量。
对比例3：
对比例3与对比例2相比，区别仅在于：对比例3的方法中的载体溶液仅利用海藻酸钠，不复合聚乙烯醇，其他步骤与对比例2相同。
试验例4：
将对比例2中海藻酸钠复合聚乙烯醇(PVA-SA复合包埋法)的载体溶液和菌悬液的混合液滴入到交联剂氯化钙中固化，再放入冰箱冷冻交联16h，解冻后接种至发酵培养基，发酵72h结束时发酵过程的各项参数，同时，以对比例3中的海藻酸钠(SA)包埋法作为对照组。试验结果详见如图4所示，图中，分别记录了细胞干重(DCW)、残油(Oil)、槐糖脂(SLs)等发酵参数。
试验结果：通过复合包埋法固定化细胞生产的槐糖脂产量高达21.5g/L，比海藻酸钠包埋法高了64.6％。
本发明中的海藻酸钠复合聚乙烯醇包埋细胞的槐糖脂产量明显优于常规方法中单一的海藻酸钠包埋法，可见本发明在微生物发酵中具有显著的有益效果。
综上所述，利用本发明的载体包埋菌体能够很好地固定细胞，保证了固定化细胞对底物和氧气的利用以及产物的排出，缓解了发酵后期因发酵液中槐糖脂浓度过高而造成的产物抑制现象，提升槐糖脂的产量且效果显著。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种细胞固定化载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
将海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；其中，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比为1：2～10；
向所述载体溶液中添加硅藻土，混合均匀，逐滴挤压所述凝胶混合液至持续搅拌状态的交联溶液中固化，形成凝珠，洗涤凝珠并于-25至-15℃温度下冷冻交联，解冻后即得到细胞固定化载体；其中，所述交联溶液为1.5～2.5％的氯化钙溶液。
2.根据权利要求1所述的细胞固定化载体的制备方法，其特征在于，所述海藻酸钠溶液的浓度为2％。
3.根据权利要求1或2所述的细胞固定化载体的制备方法，其特征在于，向所述载体溶液中添加1.5％的硅藻土。
4.根据权利要求1所述的细胞固定化载体的制备方法，其特征在于，所述固化时间为1～6小时。
5.根据权利要求1所述的细胞固定化载体的制备方法，其特征在于，所述凝珠的直径为2mm。
6.一种假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤一、将菌体细胞包埋至如权利要求1～5中任一项所述的细胞固定化载体中制得固定化细胞；
步骤二、将步骤一得到的固定化细胞接种至发酵培养基中发酵培养。
7.根据权利要求6所述的假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，其特征在于，所述固定化细胞的制备步骤包括：
将海藻酸钠溶液和聚乙烯醇混合均匀，得到载体溶液；其中，所述海藻酸钠溶液的浓度为2％，所述海藻酸钠和所述聚乙烯醇的质量比为1：2～10；
将所述载体溶液与菌悬液混合，添加1.5％的硅藻土，混合均匀，得到凝胶混合液；其中，每毫升所述凝胶混合液中的包埋菌体量为6×107个；其中，所述载体溶液与所述菌悬液按照7：1的比例混合；
将所述凝胶混合液逐滴挤压至持续搅拌状态的交联溶液(2％的氯化钙溶液)中固化，固化时间为1～6h，得到若干包埋菌体的凝胶小球，洗涤并于-25至-15℃温度下冷冻交联，解冻后即得到固定化细胞；其中所述凝胶小球的直径为2mm。
8.根据权利要求7所述的假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，其特征在于，所述菌悬液的制备步骤包括：
选取假丝酵母(Candida bombicola)ATCC 22214菌株；
种子培养：将所述假丝酵母的菌种接种至种子培养基中，在转速为220rpm、培养温度为25℃条件下进行种子培养，种子培养48小时后，对发酵液进行离心得到菌体并用Tris-HCl缓冲液洗涤，后将洗涤后的菌体配制成菌悬液，备用。
9.根据权利要求6或7所述的假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，其特征在于，所述发酵培养的具体操作如下：
将所述固定化细胞接种至发酵培养基中，在转速为220rpm、培养温度为25℃条件下进行发酵培养72小时，得到产物槐糖脂。
10.根据权利要求8所述的假丝酵母固定化发酵生产槐糖脂的方法，其特征在于，所述种子培养基包含葡萄糖、玉米浆、(NH4)2SO4、KH2PO4和MgSO4·7H2O；所述发酵培养基包含葡萄糖、玉米浆、(NH4)2SO4、KH2PO4和MgSO4·7H2O。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20210430 |